Name: ברזולוציה גבוהה הדמיה של דינמיקה גרעינית בתאים חיים תחת מתיחה Uniaxial המתח (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: למדו שיטה לדימוי ברזולוציה גבוהה של דינמיקה גרעינית בתאים חיים תחת מתיחה מכנית חד-צירית. השיטה משתמשת בעדשת שמן 100x ומאפשרת ניתוח מפורט של תגובות תאיות למתח מכני בזמן אמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כל המחברים בהכרת תודה מימון תמיכה מתוך קרן המחקר הלאומי של סינגפור דרך הברית סינגפור-MIT למחקר וטכנולוגיה (SMART) BioSystems ו Micromechanics (BioSyM) קבוצת מחקר רב-תחומי. המחברים ד ר ג'יאלאסקה וד ר ואן ולליט גם מממנים בהכרת תודה ותמיכה מקרן סאקס-קאבוונוב. המחברים מודים לוויליאם אונג וד ר סינג יאנאן ללעוס מהאוניברסיטה הטכנולוגית של נניאנג, סינגפור, למתן תאים אוליגודנדרוציטים בחולדות לניסויים מסוימים המתוארים בעבודה זו, והמחברים מודים לד ר ג. ושואשאני מ מכון מכונאי, האוניברסיטה הלאומית של סינגפור, סינגפור, לדיונים על תנודות באזור הגרעיני.

<ol><li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+tension+produced+by+nerve+cells+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Mechanical tension produced by nerve cells in tissue culture.</a> Journal of Cell Science. 410, 391-410 (1979).</li>
<li>Bray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+growth+in+response+to+experimentally+applied+mechanical+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Axonal growth in response to experimentally applied mechanical tension.</a> Developmental Biology. 389, (1983).</li>
<li>Van Essen, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tension-based+theory+of+morphogenesis+and+compact+wiring+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A tension-based theory of morphogenesis and compact wiring in the central nervous system.</a> Nature. , (1997).</li>
<li>Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stretch+growth+of+integrated+axon+tracts%3A+Extremes+and+exploitations%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Stretch growth of integrated axon tracts: Extremes and exploitations.</a> Progress in Neurobiology. 89, 231-239 (2011).</li>
<li>Cullen, D. K., Simon, C. M., LaPlaca, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+rate-dependent+induction+of+reactive+astrogliosis+and+cell+death+in+three-dimensional+neuronal-astrocytic+co-cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Strain rate-dependent induction of reactive astrogliosis and cell death in three-dimensional neuronal-astrocytic co-cultures.</a> Brain Research. , 103-115 (2011).</li>
<li>Fisher, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+correlates+of+axonal+swelling+in+chronic+multiple+sclerosis+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Imaging correlates of axonal swelling in chronic multiple sclerosis brains.</a> Annals of Neurology. 2, 219-228 (2007).</li>
<li>Nikić, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reversible+form+of+axon+damage+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A reversible form of axon damage in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis.</a> Nature Medicine. 17, 495-500 (2011).</li>
<li>Payne, S. C., Bartlett, C. A., Harvey, A. R., Dunlop, S. A., Fitzgerald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+loss+during+chronic+secondary+degeneration+in+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Functional loss during chronic secondary degeneration in rat optic nerve.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53, (2018).</li>
<li>Zeiger, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Static+mechanical+strain+induces+capillary+endothelial+cell+cycle+re-entry+and+sprouting%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Biology%22%5BJournal%5D)">Static mechanical strain induces capillary endothelial cell cycle re-entry and sprouting.</a> Physical Biology. 13, 1-16 (2017).</li>
<li>Jagielska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+strain+promotes+oligodendrocyte+differentiation+by+global+changes+of+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanical strain promotes oligodendrocyte differentiation by global changes of gene expression.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 93(2017).</li>
<li>Pajerowski, J. D., Dahl, K. N., Zhong, F. L., Sammak, P. J., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+plasticity+of+the+nucleus+in+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Physical plasticity of the nucleus in stem cell differentiation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1, 0-5 (2007).</li>
<li>Talwar, S., Kumar, A., Rao, M., Menon, G. I., Shivashankar, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlated+spatio-temporal+fluctuations+in+chromatin+compaction+states+characterize+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Correlated spatio-temporal fluctuations in chromatin compaction states characterize stem cells.</a> Biophysical Journal. 104, 553-564 (2013).</li>
<li>Makhija, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+strain+alters+cellular+and+nuclear+dynamics+at+early+stages+of+oligodendrocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanical strain alters cellular and nuclear dynamics at early stages of oligodendrocyte differentiation.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 59(2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

המכשיר בעבר1 תוכנן עבור היישום של מתיחה לחילוץ מאמץ על תאים חסיד. העיצוב של שכבת המשנה polydiמתיל siloxane בעבודה הזאת היה מספיק עבור ביוכימיים, כמו גם הדמיה ברזולוציה נמוכה של תאים נמתח. בעבודה זו, עוצב מחדש שכבת המשנה, ותצורה של הדמיה מקורית המסייעת להדמיית תאים משנית ברזולוציה גבוהה. היתרונות של מערכת זו הם רבים: זה יכול להיבנות במעבדה באמצעות רכיבים פשוטים, זה זול לעומת התקנים מסחריים מסחרי (500 USD לכל תא התקן מאמץ), והוא קטן מספיק כדי להתאים בתוך מחממות התרבות רקמות, כמו גם על מיקרוסקופים. י...

תאים ורקמות בגוף חשופים רמזים מכניים שונים, כולל זנים מתיחה. עם זאת, ההשפעות של רמזים אלה על ביולוגיה של תאים עצביים עדיין לא נחקרו בהרחבה והבינו באופן מלא. במערכת העצבים המרכזית, מקורות זן מכני כוללים צמיחה התפתחותית1,2,3,4, תהליכים פיזיולוגיים כגון כיפוף חוט השדרה, דם ונוזל שדרתי ומצבים פתולוגיים כגון טראומה, הנפיחות אקסון, הצטלקות גליה, או צמיחה הגידול5,6,7,8. כדאי לחקור כיצד זן מתיחה משפיע על הבידול של oligodendrocytes הפוך ואת מיאלואידית הבאים של אקסונים, שהוא תהליך קריטי במערכת העצבים המרכזית של בעלי החוליות. באמצעות מותאם אישית מעוצב המכשיר מאמץ ולוחיות אלסטומרים multiwell, העבודות הקודמות9,10 הראו כי זן סטטי של היחידה יכול להגדיל בידול באמצעות שינויים גלובליים ביטוי גנטי 10. כדי להשיג הבנה נוספת של המנגנונים של מנגנון הלחץ בתאים אלה, המנגנון הנסיוני הקודם חייב להיות מחדש כמתואר כאן, כדי לאפשר הדמיה ברזולוציה גבוהה של קרינה פלואורסצנטית של דינמיקה גרעינית בחיים תאים תחת לחץ. באופן ספציפי, צלחת בודדת polydiמתיל siloxane מפותחת, ואת התצורה הדמיה מחדש כדי לאפשר את הדמיה בזמן לפקיעה של תאים חיים תחת זן באמצעות עדשת השמן 100x טבילה. כדי לחסל את ההשפעות האופטיות השליליות של polydiמתיל siloxane במסלול האור, התאים הם התמונה לא דרך הצלחת polydiמתיל siloxane, אבל בתנוחה הפוכה, דרך הזכוכית לכסות כיסוי תא התא. באמצעות עיצוב זה הדמיה חדשה, מאות ברזולוציה גבוהה הזמן לפקיעה סרטים נרשמות, של גרעיני תא בודדים בתוך תאים חסיד שלמים, שם כרומטין מתויג על ידי תיוג היסטון H2B לחלבון פלורסנט ירוק. סרטים אלה מדגימים כי זן מתיחה גורם שינויים מבנה כרומטין ודינמיקה כי הם עקביים עם ההתקדמות של אוליגודנדרוציטים בידול.
הדמיה של תאים חיים תחת זן שימושית היא מאתגרת טכנית ודורש עיצוב המכשיר תואם את מערכת המיקרוסקופ. העיצוב המותאם אישית המתואר כאן מציג חלופה זולה לפתרונות מסחריים. מימדים שלה לאפשר ההתקנה שלה על שלבי מיקרוסקופ לחיות הדמיה של התא ברזולוציה מרחבית גבוהה במהלך מאמץ להחיל. ההתקנה הדמיה נועד להקל על הדמיית תאים חיים באמצעות עדשת השמן 100x טבילה עם הבהירות הגבוהה ביותר, דרך זכוכית העטיפה, לא דרך השכבה של צלחת polydiמתיל siloxane אשר אחרת מקטין את איכות התמונה נפוצה ביותר כיוונוני הדמיה תחת לחץ. המכשיר, עם צלחת רכוב המכיל תאים, ניתן גם לאחסן בקלות בחממה. התקן זה נועד להחיל זן uniaxial כדי שכבות להקל על תרבות התא מחסיד ולשמור על מאמץ יציב ואחיד על פני ימים מרובים. ההתקנה המתוארת כאן יכולה לשמש עבור הדמיה ברזולוציה גבוהה של סוגי תאים שונים החסיד מתחת ללחץ, מה שהופך אותו לרלוונטי ללימודי מכניזציה בתחומים רבים של תא מכניאוביולוגיה.

<table><tbody><tr><td><תאים חזקים>ראשוניים</חזקים></td><td></td><td></td><td>תאי אב ראשוניים של אוליגודנדרוציטים שבודדו מחולדות יילודים סופקו על ידי המעבדה של ד"ר ס.י. צ'ו באוניברסיטה הטכנולוגית של נאניאנג</td></tr><tr><td>Media</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM גבוה&nbsp; גלוקוז</td><td>Gibco</td><td>11996-065-500 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>עט/סטרפטוקוקוס</td><td>Gibco</td><td>15070-063-100ml</td><td></td></tr><tr><td>FGF</td><td>Prospec</td><td>CYT-608-50ug</td><td></td></tr><tr><td>PDGF</td><td>Prospec</td><td>CYT-776-10ug</td><td></td></tr><tr><td>Media רכיבי מלאי</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A9418-10G</td><td></td></tr><tr><td>פרוגסטרון</td><td>Sigma</td><td>P8783-1G</td><td></td></tr><tr><td>Putrescine</td><td>Sigma</td><td>P5780-5G</td><td></td></tr><tr><td>נתרן סלניט</td><td>סיגמא</td><td>S5261-10G</td><td></td></tr><tr><td>Tri-iodothyronine</td><td>Sigma</td><td>T6397-100MG</td><td></td></tr><tr><td>תירוקסין</td><td></td><td>T1775-100MG</td><td></td></tr><tr><td>הולו-טרנספרין</td><td>סיגמא</td><td>T0665-500MG</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>Sigma</td><td>I9278</td><td></td></tr><tr><td>עובש וצלחת</td><td></td><td></td><td></td>PDMS</tr><tr><td>PDMS - Dow Corning Sylgard 184</td><td>Ellsworth</td><td>184 SIL ELAST KIT 0.5 ק"ג</td><td></td></tr><tr><td>תבנית - פלסטיק</td><td>נוזלי חלק יצוק</td><td>חלק 310 -</td> ציפוי <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>מצע</td></tr> בגודל שביל <tr><td>פולי-D-ליזין</td><td>סיגמא</td><td>P6407-5MG</td><td></td></tr><tr><td>פיברונקטין</td><td>סיגמא</td><td>F1141-2MG</td><td></td></tr><<tr><td>חזק>צביעת היסטון</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellLigt H2B-GFP BacMam</td><td>בדיקות מולקולריות</td><td>C10594</td><td></td></tr><tr><td><חזק>פונקציונליזציה של פני השטח</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>APTES</td><td>סיגמא</td><td>A3648-100 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>BS3</td><td>Covachem</td><td>13306-100 מ"ג</td><td></td></tr><tr><td>חוצץ HEPES pH 8.0</td><td>אלפא Aesar</td><td>J63578-AK-250ml</td><td></td></tr><tr><td><חזק> ניתוק תאים</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Invitrogen</td><td>A1110501-100 מ"ל</td><td></td></tr></tbody></table>

ברזולוציה גבוהה הדמיה של דינמיקה גרעינית בתאים חיים תחת מתיחה uniaxial המתח

High-resolution Imaging of Nuclear Dynamics in Live Cells under Uniaxial Tensile Strain

זן מכני מכניים ידוע לעורר תגובות פנוטיות תאים והוא בעל רלוונטיות פיזיולוגית במספר מערכות רקמה. כדי ללכוד את ההשפעה של מאמץ מתיחה שימושית הלחץ על אוכלוסיות תאים בתוך מבחנה באמצעות ביוכימיים הביוכימי, המכשיר תוכנן בעבר אשר יכול להיות מפוברק פשוט הוא קטן מספיק כדי להתאים בתוך מחממות התרבות רקמות, כמו גם על גבי שלבי המיקרוסקופ. עם זאת, העיצוב הקודם של שכבת המשנה polydiמתיל siloxane לא אפשרו הדמיה משנית ברזולוציה גבוהה באמצעות מטרות טבילה בשמן. עבודה זו מתארת את הגיאומטריה המחודש של שכבת המשנה polydiמתיל siloxane ואת הגדרת הדמיה מותאמת אישית כי ביחד יכול להקל על הדמיה משנית ברזולוציה גבוהה של תאים חיים בעוד תחת לחץ מוחל. ניתן להשתמש ברובד משנה זה עם אותו התקן מעוצב מוקדם יותר, ומכאן, יש יתרונות זהים לאלה המפורטים לעיל, בנוסף להתרת הדמיה אופטית ברזולוציה גבוהה. העיצוב של שכבת המשנה polydiמתיל siloxane ניתן לשפר על ידי שילוב של רשת אשר להקל על מעקב אחר אותו תא לפני ואחרי היישום של זן. תוצאות הנציג להפגין ברזולוציה גבוהה לפקיעה זמן הדמיה של גרעיני בעלי תווית בתוך תאים מתוחים שנתפסו באמצעות השיטה המתוארת כאן. נתונים אלה הדינמיקה הגרעינית לתת תובנות לתוך המנגנון שבו לחץ מתיחה להחיל מקדם הבידול של תאים אוליגודנדרוציטים קדמון.

העבודה האחרונה שמטרתה לחקור את ההשפעה של זן מתיחה על oligodendrocytes הפוך10 הראה כי 10% זן מתיחה uniaxial מקדם את הבידול של תאים אוליגודנדרוציטים קדמון על ידי שינויים גלובליים ביטוי הגנים. המנגנון מאחורי שינויים אלה ביטוי הגנים ניתן לנחקר באמצעות הדמיה של פרמטרים subcellular, כגון מבנה השלד, לוקליזציה גורם שעתוק, דינמיקה גרעינית, וארגון כרומטין. עם זאת, הגיאומטריה הקודמת של שכבת המשנה של פולימתיל סילאוקאן לא איפשרה הדמיה של תא יחיד ברזולוציה גבוהה. כפי שמתואר בעבו...

באמצעות התקן שתוכנן בעבר כדי להחיל זן מכני לתאים חסיד, נייר זה מתאר גיאומטריה תת שכבה מחדש מכשיר מותאם אישית עבור ברזולוציה גבוהה תא יחיד הדמיה של תאים מתוחים עם המטרה טבילה 100x שמן.

ברזולוציה גבוהה הדמיה של דינמיקה גרעינית בתאים חיים תחת מתיחה Uniaxial המתח

Extracellular mechanical strain is known to elicit cell phenotypic responses and has physiological relevance in several tissue systems. To capture the ...

עיצבנו בעבר מכשיר כדי להחיל זן מכני על תאים חסידים. בעבודה הנוכחית, עיצבנו מחדש את הגיאומטריה של תת-המצע והתאמנו אישית את ההתקנה להדמיה ברזולוציה גבוהה של תאי זן אלה. היתרון העיקרי של מערכת זו מתיחת תאים היא שהיא מספקת הדמיה תת תאית ברזולוציה גבוהה ב 100x של תאי המתח.הפגנת ייצור התת-סטרטום תהיה ויקי, עוזרת מחקר מהמעבדה שלי. התחל בתכנון תבנית פולי דימימתילסילוקסאן באורך של באר אחת על-ידי ביצוע בפרוטוקול הטקסט הנלווה. לאחר מכן, מערבבים 20 חלקים של בסיס polydimethylsiloxane עם חלק אחד ריפוי סוכן ב חד פעמית.לאחר ערבוב, מניחים את תערובת polydimethylsiloxane בוואקום de-gasser ב 0.8 בר במשך 30 דקות כדי להסיר את הבועות מן התערובת. לאחר מכן, יוצקים את תערובת polydimethylsiloxane לתוך התבנית ואת המנה. הסר את כל בועות נוספות בשלב זה על ידי de-gassing אותו שוב ב 0.8 בר ואקום במשך 30 דקות.כאשר ביטול הגזים הושלם, אופים את הדגימות ב 80 מעלות צלזיוס על שולחן פילינג במשך שעתיים. לאחר מכן, להסיר בזהירות את הדגימות מהתנור ולתת להם להתקרר לטמפרטורת החדר. חותכים את הקצוות עם להב בעדינות לקלף את polydimethylsiloxane נרפא.על פולידימתילסילוקסאן בקוטר 150 מילימטר, צייר רשת של שני סנטימטרים בשני סנטימטרים עם סמן. בתוך כל ריבוע, לצייר סנטימטר אחד על ידי ריבוע סנטימטר אחד, משאיר מרווח של 0.5 ס"מ מכל הצדדים. ה

high-resolution-imaging-nuclear-dynamics-live-cells-under-uniaxial

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

אנו מציגים שתי עצמאית, מיקרוסקופ מבוססי כלים למדידת דפורמציות גרעיני cytoskeletal המושרה, תאים בודדים חיים חסיד בתגובה לבקשה מאמץ עולמי או מקומי. טכניקות אלו משמשות כדי לקבוע קשיחות גרעיני (כלומר, deformability) וכן לחקור העברת כוח תאיים בין הגרעין לבין cytoskeleton.

מבחני Biophysical לחקור את תכונות מכניות של גרעין התא שלבי הביניים: מסננים תשתית יישומים מניפולציה Microneedle

הסרטון מדגים שיטה להערכת כוחות קולטן המופעלים על ידי תאי מערכת החיסון באמצעות ננו-חלקיקי זהב מעוגני פוליאתילן גליקול ובדיקות מתח של סיכות שיער DNA. אינטראקציות תאי T חיוביים ל- CD8 מעוררות התפתחות בדיקה, פולטות פלואורסצנטיות בעוד שגדילי נעילה מקיימים את האות לכימות הכוחות המופעלים על ידי תאי מערכת החיסון.

שימוש בבדיקות מתח מבוססות DNA כדי להעריך את כוחות הקולטן המופעלים על ידי תאי מערכת החיסון

אנו מציגים במאמר זה פלטפורמה חדשני מתיחה שיכול לשמש כדי לחקור את תגובות תא בודדות לעיוות מכאנית biaxial איזוטרופי מורכב ולכמת את התכונות מכאניות של רקמות ביולוגיות.

פלטפורמה חדשני מתיחה עבור יישומים בתאים והרקמות mechanobiology

פרוטוקול הדמיה חדשני פותח באמצעות מפעיל מכני מונע מנוע מותאם אישית כדי לאפשר מדידה של תגובות בזמן אמת למתח מכני בתאים חיים. רלוונטית למכניוביולוגיה, המערכת יכולה ליישם זנים של עד 20% תוך שהיא מאפשרת הדמיה כמעט בזמן אמת עם מיקרוסקופ כוח קונפוקלי או אטומי.

הדמיה של תא חי במהלך מכאני למתוח

ב פרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה micropipette ישירות להחיל כוח מבוקר את הגרעין בתא החי. Assay הזה מאפשר חקירת תכונות מכניות הגרעין בתא חי, חסיד.

בדיקה ישירה כוח למדידת מכני אינטגרציה בין הגרעין של שלד התא

בידול שרירי השלד הוא תהליך דינמי מאוד, אשר נשענת בעיקר על מיקום הגרעין. כאן, אנו מתארים שיטה כדי לעקוב אחר תנועות גרעינים על ידי הדמיה תא בשידור חי במהלך התמיינות myoblast היווצרות myotube וכדי לבצע אפיון כמותי של גרעינים dynamics על-ידי חילוץ מידע מעקב אוטומטי אחר.

ניצול הדמיה בשידור חי על המסלול גרעינים במהלך התמיינות Myoblast, פיוז'ן

כאן, אנו מציגים הדמיה תא חי שהיא שיטת מיקרוסקופ לא רעיל המאפשר לחוקרים ללמוד התנהגות החלבון הדינמיקה הגרעינית בתוך חי ביקוע תאים שמרים במהלך מיטוזיס ו meiosis.

בחינת Mitotic ומיוטיק ביקוע הדינמיקה הגרעינית על ידי הזריחה לחיות-מיקרוסקופ התא

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקור את התכונות המכניות התאיות של תאי זברה עובריים מבודדים בכליאה תלת מימדית עם מדידת כוח ישירה על ידי מלכודת אופטית.

מדידות כוח ישירות של מכניקה תת-תאית בכליאה באמצעות פינצטה אופטית

כאן, אנו מציגים מכשיר מתיחה שווה צירי רב-תכליתי המופעל פניאומטית ותואם למיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה.

מכשיר מתיחה שווה צירי למיקרוסקופיה פלואורסצנטית קונפוקלית של תאים חיים בהגדלה גבוהה

כאן אנו מציגים מכשיר חדשני שמיישם גלי עיוות איזוטרופיים וחד-ציריים על תאים, תוך תמיכה בתרבות על תת-קרקעיות עם קשיחות מכווננת ומטריצות חלבון מותאמת אישית. פלטפורמה פשוטה וחסכונית זו מאפשרת לחוקרים לחקור כיצד רמזים מכניים מווסתים את תפקוד התאים הן במחקרים בסיסיים והן בהקשרים רלוונטיים למחלות.

פלטפורמה חדשנית למתיחות והדמיה תאית חובנית

תהליך זה עושה שימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית בשילוב עם גרעין מסומן פלואורסצנטי וקו סמן כרומטין ב-Arabidopsis thaliana כדי לתעד בו-זמנית את דינמיקת הגרעין והכרומטין בשורשי הערבידופסיס ולחקור שינויים בדינמיקה אלו בתגובה לרמזים התפתחותיים וסביבתיים.

הדמיה כמותית של תאים חיים של צורת גרעין ודינמיקת כרומטין במהלך ההתפתחות ולחץ סביבתי בשורש Arabidopsis thaliana

למדו שיטה לדימוי ברזולוציה גבוהה של דינמיקה גרעינית בתאים חיים תחת מתיחה מכנית חד-צירית. השיטה משתמשת בעדשת שמן 100x ומאפשרת ניתוח מפורט של תגובות תאיות למתח מכני בזמן אמת.

ברזולוציה גבוהה הדמיה של דינמיקה גרעינית בתאים חיים תחת מתיחה Uniaxial המתח

גלה סרטונים נוספים