Name: לכידת תקשורת מולקולה קטנה בין רקמות ותאים באמצעות הדמיה ספקטרומטר מסה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: למד שיטה ללכידת תקשורת מולקולות קטנות בין רקמות ותאים באמצעות הדמיה ספקטרומטר מסה ללא תיוג. השיטה מיושמת במחקר סרטן השחלות לזיהוי מטרות טיפוליות חדשות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מימון סופק על ידי האיחוד ביו שיקגו עם תמיכה מקרנות סרל ב שיקגו הקהילה הקרן (C-076) (L.M.S.); אוניברסיטת אילינוי בשיקגו הפעלה קרנות (L.M.S.); מענק 543296 של הברית הקרן לחקר סרטן השחלות (רופאה); UG3 ES029073 (J.E.B.), על ידי המרכז הלאומי עבור קידום Translational מדעי, המכון הלאומי לבריאות, דרך גרנט UL1TR002003 (ג'ב & LMS).

כל ההליכים בבעלי חיים היו בהתאם מוסדות לאומיים של בריאות להנחיות על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה, אושרה על ידי הוועדה על עצמך (IACUC) ושימוש חיה מוסדיים ב אוניברסיטת אילינוי בשיקגו.
1. הכנת נוגדנים
<ol><li>לשמור על תאים אפיתל מאתר oviductal (מו) ב 37° C עם 5% CO2 ב חממה humidified בתקשורת אלפא מינימום הכרחי בינוני (αMEM), בתוספת 10% סרום שור עוברית (FBS), 2 מ מגלוטמין, אינסולין 10 מ"ג/מ"ל, transferrin, סלניום (ITS) , 1.8 ng/mL גורם הגדילה באפידרמיס (EGF), 100 U/mL פניצילין-סטרפטומיצין gentamycin 1 מ"ג/מ"ל, אסטרדיול 18.2 ng/mL-17β. . תעביר את התאים כל 3-4 ימים, הבטחת שישנם מספיק תאים באותו יום העכברים יוקרב.</li>
	<li>להכין 2% agarose על ידי ערבוב 1g של התכה נמוכה agarose עם 50 מ ל מים מזוקקים. אוטוקלב agarose, להתקרר ולאחר מכן aliquot (1 מ"ל) ב- 2 mL צינורות (ראה טבלה של חומרים) לפני עפור agarose. Agarose ניתן לאחסן ב-20 ° C ללא הגבלת זמן.</li>
	<li>להכין לפחות 2 מ"ל של מדיה בינוני (DMEM) שונה הנשר של Dulbecco x 1.</li>
	<li>עבור המטריצה עבור MALDI-TOF MS, להכין 10 מ"ל של 5 מ"ג/מ"ל חומצה אלפא-cyano-4-hyroxycinnamic 1:1 (CHCA): חומצה dihydroxybenzoic (DHB) (ראה טבלה של חומרים) 90:10 ACN:H2O + 0.1% חומצה trifluoroacetic (TFA). Sonicate פתרון עד מטריקס היא התפרקה.</li>
</ol>2. עכבר המושבה והסרה השחלה
<ol><li>לשמור על זוגות של עכברים CD-1 באמצעות הליכים דיור סטנדרטית. ליד מיום parturition, לבדוק אם העכברים כל יום כך גיל הגורים ידוע.</li>
	<li>המתת חסד הגורים 16 – 18 ימים של גיל באמצעות אינהלציה2 CO לפי הנחיות NIH. לספק CO2 (100%) זרם בשיעור של 10% – 20% קאמרית נפח לדקה, במשך שתי דקות. אחרי נשימה נפסק. לאשר המתת חסד מאת נקע בצוואר הרחם.</li>
	<li>לחטא כל הציוד הכירורגי על ידי השוקע 70% אתנול. לחמם את המדיה L-15 של ליבוביץ עם פניצילין 1 x-סטרפטומיצין כדי 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>פני השטח בטן עם 70% אתנול לחטא את האזור ולצמצם זיהום עם שיער רטוב. תפיסתו העור המכסה את דופן הבטן באמצעות מספריים כירורגיים בוטה מלקחיים והשימוש כדי להפוך גדול V-צורה לחתוך העור, דופן הבטן, לחשוף את האיברים הפנימיים.</li>
	<li>העבר האיברים הפנימיים בצד באמצעות מלקחיים. בנפרד לתפוס כל קרן הרחם עם מלקחיים בסדר והרם מעט.</li>
	<li>אתר השחלה, אשר יהיה בסוף הקרן הרחם, מיד מתחת הכליה. השתמש מספריים כירורגיים כדי לנתח את השחלה חינם של רקמת חיבור. לאחר מכן, לחצי הקרן השחלות.</li>
	<li>להזיז את השחלה, oviduct ואחד כ חצי של כל קרן הרחם למדיה L-15 של ליבוביץ ומחוממת מראש.</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ ויבתר להעביר בזהירות כל השחלה בורסה שמסביב, פינוי זה את oviduct, בורסה, כל רקמת שומן. להעביר את השחלה כל תבשיל חדש של התקשורת L-15 של ליבוביץ.</li>
	<li>לחצי כל השחלה axially. לשמור את החלקים השחלות (נקרא עכשיו explants) שמרו ב 37 ° C עד ציפוי של agarose.</li>
</ol>3. הגדרת ו המקננת השקופית שטופלו איטו עבור Cocultures
<ol><li>
Cocultures המלאה
	<ol>
<li>' נזילות ' את agarose-70 מעלות צלזיוס על פלטה חמה.</li>
		<li>מקם את המפריד 8-ובכן מעל tinoxide אינדיום (ITO)-מטופלים שקופית (איור 1 א'). לתחתית גומי על המחיצה מסייע אדהזיה לשקופית, אך הקפד להחיל רציפה לחץ כלפי מטה בעדינות במהלך agarose יופיצ כדי להבטיח לא דולף או ערבוב בין בארות.</li>
		<li>איסוף תאים צינור חרוטי 15 מ"ל, צנטריפוגה (5 דקות במהירות של 800 סל ד), resuspend ל 50k תאים לכל µL 150 בתקשורת x DMEM 1. אם צפיפות התאים היא אופטימלית, ודא כי בשלב זה הוא התליה תא 2 x צפיפות הסופי הרצוי (למשל, עבור ריכוז סופי של 50,000 תאים ב- 300 µL, צפיפות התאים בשלב זה הוא 50,000 תאים 150 µL).</li>
		<li>לפני ציפוי תרבית תאים, להוסיף explant השחלות למרכז באר (איור 1B).</li>
		<li>להוסיף agarose לכל תרבית תאים בודדים mL 2 צינורות לפני ציפוי. כל טוב, לשלב µL 200 של השעיה תא ו- 200 µL של agarose נזיל צינור 2 מ"ל. לדוגמה, עבור מארבע בארות לשלב 800 µL של השעיה תא µL 800 של 2% agarose. תערובת יישאר, אבל גורם הכרחי מעט יותר מונע בועות אוויר במהלך pipetting.<ol>
<li>להוסיף agarose תרביות תאים בודדים מיד לפני ציפוי הזה תרבית תאים. Agarose מגניב בתוך פחות מדקה, וכדאי להתכונן צלחת במהירות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>מיד להוסיף 300 µL של תערובת תא/agarose כל טוב (איור 1C). איור 1C מציג שלושה תנאים התא ובכל תנאי מדיה אחד, שכל אחד מצופה עם ובלי שחלה.</li>
		<li>דגירה שקופיות-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 ב חממה humidified.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cocultures חצויה.
	<ol>
<li>חותכים חוצצים מפלסטיק דק, חלקה (איור 2 א). הערה: הניסוי הזה משתמש את הצדדים של אגן מדיה חד פעמי סטרילי כי הם שטוחים ודקים. חותכים אותם רחב מספיק כדי להתאים בקלות לכף היתר של הבאר (~ 13 מ מ).</li>
		<li>' נזילות ' את agarose-70 מעלות צלזיוס על פלטה חמה.</li>
		<li>מקם את המפריד 8-טוב על גבי השקופית שטופלו איטו (איור 2B). לתחתית גומי על המחיצה מסייע אדהזיה לשקופית, אך הקפד להחיל רציפה לחץ כלפי מטה בעדינות במהלך agarose יופיצ כדי להבטיח לא דולף או ערבוב בין בארות.</li>
		<li>איסוף תאים צינור חרוטי 15 מ"ל, צנטריפוגה (5 דקות במהירות של 800 סל ד), resuspend ל 50k תאים לכל µL 150 בתקשורת x DMEM 1. אם צפיפות התאים הוא אופטימלי, ודא כי בשלב זה התליה תא 2 x צפיפות הסופי הרצוי (למשל עבור ריכוז סופי של 50,000 תאים 300 µL, צפיפות התאים בשלב זה הוא 50,000 תאים 150 µL).</li>
		<li>הכנס חוצצים פלסטיק באלכסון וולס (איור 2C).</li>
		<li>להוסיף agarose כל השעיה תא אחד בכל פעם לפני ציפוי. כל טוב, לשלב 100 µL תא השעיה, µL 100 של agarose נזיל צינור 2 מ"ל. לדוגמה, עבור מארבע בארות לשלב µL 400 של תרבית תאים µL 400 של 2% agarose. תערובת תא/agarose יישאר אבל גורם הכרחי מעט יותר מונע בועות אוויר במהלך pipetting.<ol>
<li>להוסיף agarose תרביות תאים בודדים מיד לפני ציפוי הזה תרבית תאים. Agarose מגניב בתוך פחות מדקה, וכדאי להתכונן צלחת במהירות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>בצד אחד של המחיצה, צלחת 150 µL תערובת תא/agarose. לאפשר agarose מגניב, לחזק (בערך דקה אחת), אז הסרה של הקו המפריד (איור דו-ממדי).</li>
		<li>מקום explant השחלה במרכז החצי הריקה של הבאר. במקום 150 µL תערובת מדיה/agarose מעל של השחלה, ולא רק על הצד הנכון של הבאר (2E איור).</li>
		<li>דגירה שקופיות-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 ב חממה humidified.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ייבוש שקופית והכנת MALDI-TOF MS
<ol><li>אחרי ארבעה ימים (או בכל נקודת זמן מועדף), הסר את המפריד קאמרית השתלים agarose, השקופית (איור 1D). בעדינות לנתק את צידי agarose מן החדר עם מרית שטוחה ומשוך בעדינות את התא כלפי מעלה, נזהר לא לזוז כל אטמי agarose. אם הם יזוזו בעדינות מיקום אותם כך הם לא נוגעים אחד בשני.</li>
	<li>מקם את השקופית בתנור 37 מעלות צלזיוס במשך כ- 4 שעות, סיבוב 90 מעלות כל h. הערה: הסיבוב של השקופית חשוב להבטיח הפצה חימום לאורך כל המדגם.</li>
	<li>לאחר יבש, להסיר את השקופית מן התנור (איור 1E).</li>
	<li>להחיל מטריקס פתרון באמצעות המרסס (איור 1F), עם הפרמטרים הבאים: טמפרטורת = 30 ° C, קצב הזרימה = 0.2 מ ל/דקה, מספר עובר = 8, כיוון = CC, ו זרבובית מרחק = 40 מ מ. הערה: במקום ריסוס מטריקס, מברשת אמנותית אוויר יכול לשמש כדי להחיל מטריקס נוזלי. הפתרון מטריקס אותו יכול לשמש כדי לרסס, אך כ פתרון כפול נדרש. כאשר השקופית כשכרטיס כך זה נתקע אנכית, לרסס את השקופית מזווית 90° מ כ רגל אחת משם (Adapted הופמן15) עד המטריקס שכבה מוצגת.</li>
	<li>להוסיף 1 µL של calibrant (זרחן אדום עבור מטרות < דא 500, תערובת פפטיד (ראה טבלה של חומרים) עבור מטרות < 5,000 Da) ברור ספוט בשקופית. זרחן אדום מחייב כל ערבוב עם מטריקס, אך התערובת פפטיד דורש תערובת 1:1 עם מטריקס לסייע יינון. חכו calibrant יבש.</li>
	<li>לצייר X באמצעות סמן קבוע בכל פינה של השקופית וקח תמונה אופטי באמצעות מצלמה או סורק ברזולוציה של 1200 dpi.</li>
</ol>5. הדמיה ספקטרומטר מסה קירור והקפאה
<ol><li>פתח רצף חדש על תוכנת ניתוח נתוני IMS (ראה טבלה של חומרים). הגדר את רוחב רסטר הרזולוציה המרחבית הרצויה, לפחות 50 מיקרומטר.</li>
	<li>להעלות את התמונה האופטי של השקופית לתוכנה ניתוח וללמד קבע שלוש נקודות בעזרת של צמתים ב האיקסים נמשך בכל פינה.</li>
	<li>לייעד אזורי עניין עבור הדמיה בתוכנה רכישה ותנו שם אותם בהתאם.</li>
	<li>לכייל את המכשיר באמצעות התוכנה רכישת נתונים (ראה טבלה של חומרים) בתוך 5 ppm שגיאה.</li>
	<li>להציל את שיטת אופטימיזציה ולהתחיל לרוץ. הניסוי הזה מיטבי בפרמטרים הבאים: קוטביות = חיובי, גלאי = Reflectron, לייזר גודל = 2, עוצמת הלייזר = 50%, המשקף רווח גלאי מצב = 3 x.</li>
</ol>6. עיבוד נתוני IMS
<ol><li>ייבוא קובץ .mis לתוך תוכנה סטטיסטית (ראה טבלה של חומרים) לצורך ניתוח של משמעות.</li>
</ol>

<ol><li>Paine, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+Reproductive+System+Non-Negative+Matrix+Factorization+Mass+Spectrometry+Imaging+of+an+Early-Stage+Ovarian+Cancer+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Whole Reproductive System Non-Negative Matrix Factorization Mass Spectrometry Imaging of an Early-Stage Ovarian Cancer Mouse Model.</a> PLoS One. 11 (5), e0154837(2016).</li>
<li>Yang, Y. L., Xu, Y., Straight, P., Dorrestein, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+Metabolic+Exchange+with+Imaging+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Translating Metabolic Exchange with Imaging Mass Spectrometry.</a> Nature Chemical Biology. 5 (12), 885-887 (2009).</li>
<li>Li, H., Hummon, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Spectrometry+of+Three-Dimensional+Cell+Culture+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Spectrometry of Three-Dimensional Cell Culture Systems.</a> Analytical Chemistry. 83 (22), 8794-8801 (2011).</li>
<li>Yang, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+on+Agar-Based+Microbial+Imaging+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Primer on Agar-Based Microbial Imaging Mass Spectrometry.</a> Journal of Bacteriology. 194 (22), 6023-6028 (2012).</li>
<li>Coscia, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+Proteomic+Profiling+of+Ovarian+Cancer+Cell+Lines+Reveals+Precursor+Cell+Associated+Proteins+and+Functional+Status%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Integrative Proteomic Profiling of Ovarian Cancer Cell Lines Reveals Precursor Cell Associated Proteins and Functional Status.</a> Nature Communications. 7, 12645(2016).</li>
<li>Labidi-Galy, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Grade+Serous+Ovarian+Carcinomas+Originate+in+the+Fallopian+Tube%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">High Grade Serous Ovarian Carcinomas Originate in the Fallopian Tube.</a> Nature Communications. 8 (1), (2018).</li>
<li>Klinkebiel, D., Zhang, W., Akers, S. N., Odunsi, K., Karpf, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+Methylome+Analyses+Implicate+Fallopian+Tube+Epithelia+as+the+Origin+for+High-Grade+Serous+Ovarian+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">DNA Methylome Analyses Implicate Fallopian Tube Epithelia as the Origin for High-Grade Serous Ovarian Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 14 (9), 787-794 (2016).</li>
<li>Falconer, H., Yin, L., Gronberg, H., Altman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+Cancer+Risk+After+Salpingectomy%3A+A+Nationwide+Population-Based+Study%5BTitle%5D)+AND+%22JNCI+Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Ovarian Cancer Risk After Salpingectomy: A Nationwide Population-Based Study.</a> JNCI Journal of the National Cancer Institute. 107 (2), dju410(2015).</li>
<li>Dean, M., Davis, D. A., Burdette, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activin+A+Stimulates+Migration+of+the+Fallopian+Tube+Epithelium%2C+an+Origin+of+High-Grade+Serous+Ovarian+Cancer%2C+through+Non-Canonical+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Activin A Stimulates Migration of the Fallopian Tube Epithelium, an Origin of High-Grade Serous Ovarian Cancer, through Non-Canonical Signaling.</a> Cancer Letters. 391, 114-124 (2017).</li>
<li>King, S. M., Burdette, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+Progenitor+Cells+of+Ovarian+Cancer%3A+Analysis+of+Current+Animal+Models%5BTitle%5D)+AND+%22BMB+Reports%22%5BJournal%5D)">Evaluating the Progenitor Cells of Ovarian Cancer: Analysis of Current Animal Models.</a> BMB Reports. 44 (7), 435(2011).</li>
<li>Reznik, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Landscape+of+Metabolic+Variation+across+Tumor+Types%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Systems%22%5BJournal%5D)">Landscape of Metabolic Variation across Tumor Types.</a> Cell Systems. 6 (3), 301-313 (2018).</li>
<li>Watkins, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Impact+of+Selective+and+Nonselective+Beta-Blockers+on+Survival+in+Patients+with+Ovarian+Cancer%3A+Beta-Blockers+and+Ovarian+Cancer+Survival%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Clinical Impact of Selective and Nonselective Beta-Blockers on Survival in Patients with Ovarian Cancer: Beta-Blockers and Ovarian Cancer Survival.</a> Cancer. 121 (19), 3444-3451 (2015).</li>
<li>Lutgendorf, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-Related+Mediators+Stimulate+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Secretion+by+Two+Ovarian+Cancer+Cell+Lines%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Stress-Related Mediators Stimulate Vascular Endothelial Growth Factor Secretion by Two Ovarian Cancer Cell Lines.</a> Clinical Cancer Research. 9 (12), 4514-4521 (2003).</li>
<li>Sood, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+Hormone-Mediated+Invasion+of+Ovarian+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Stress Hormone-Mediated Invasion of Ovarian Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 12 (2), 369-375 (2006).</li>
<li>Hoffmann, T., Dorrestein, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homogeneous+Matrix+Deposition+on+Dried+Agar+for+MALDI+Imaging+Mass+Spectrometry+of+Microbial+Cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+The+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Homogeneous Matrix Deposition on Dried Agar for MALDI Imaging Mass Spectrometry of Microbial Cultures.</a> Journal of The American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1959-1962 (2015).</li>
<li>Zink, K. E., Dean, M., Burdette, J. E., Sanchez, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Spectrometry+Reveals+Crosstalk+between+the+Fallopian+Tube+and+the+Ovary+That+Drives+Primary+Metastasis+of+Ovarian+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Central+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Spectrometry Reveals Crosstalk between the Fallopian Tube and the Ovary That Drives Primary Metastasis of Ovarian Cancer.</a> ACS Central Science. 4 (10), 1360-1370 (2018).</li>
<li>Armaiz-Pena, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Src+Activation+by+%CE%B2-Adrenoreceptors+Is+a+Key+Switch+for+Tumour+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Src Activation by β-Adrenoreceptors Is a Key Switch for Tumour Metastasis.</a> Nature Communications. 4, 1403(2013).</li>
<li>Choi, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HTERT+Mediates+Norepinephrine-Induced+Slug+Expression+and+Ovarian+Cancer+Aggressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">HTERT Mediates Norepinephrine-Induced Slug Expression and Ovarian Cancer Aggressiveness.</a> Oncogene. 34 (26), 3402(2015).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף

יש גופה הגוברת של ראיות שמסבך את התפקיד של נוראדרנלין HGSOC12,17,18, טכניקה זו תרמה מכניסטית יותר מידע. עם תנאים ביולוגית לפחות שמונה קיים על השקופית אותו, השיטה יכולה להתחשב ביולוגית פקדים כגון ג'ין, ירידה לפרטים תא, כמו גם הפקדים מדיה IMS יחיד להפעיל. בעוד השיטה היה מותאם להעריך החליפו מולקולות קטנות במודל של גרורות הראשי ב HGSOC, תא כלשהו או סוג הרקמה ניתן להציב אותם agarose. הרבה כדי לנתח מגוון רחב של שאלות ביולוגיות ועם מצב...

הדמיה ספקטרומטר מסה (IMS) מוטבה כדי לאפיין את התפוצה המרחבית של תכונות מולקולרית ב שלושה יישומים בשימוש נרחב: פרוסות רקמות, spheroids ומושבות חיידקים1,2,3. פרוסות רקמות ניתן להעריך הלוקליזציה של מטבוליטים בהקשר של תנאי ביולוגי מחשב מארח, ממוקד או untargeted בתוך טווח מסוים המוני. עם זאת, הבדלים בין התכונות מולקולרית הם הכי משמעותי, ברור כאשר רקמה בריאה לעומת מצב חולני, לדוגמה, גידול. גישה זו IMS הוא מותאם במיוחד זיהוי סמנים למחלת, עם זאת, רכישת דגימות רקמה בשלבים דיסקרטית בהתקדמות המחלה (כגון ציונים הגידול) מונע זיהוי אותות יכול להיות חשוב לטקס החניכה של המחלה. חילופי מידע דרך החלל הוא תכונה בכל מקום של מערכות ביולוגיות רבות, רקמות פרוסות אינה יכולה ללכוד את ממסר כימי דינמי. טכניקה אחת המסוגלת להמחיש כימי exchange ודיפוזיה היא IMS של מושבות חיידקים גדל על פלטות אגר; מולקולות קטנות מסוגלים לנטרל את דרך ומעבר של אגר, ניתן ללכוד באמצעות ספקטרומטר מסה לייזר בסיוע מטריקס desorption/יינון (MALDI-TOF)4. תוכנית התקנה זו הצמיחה יכול לשמש כדי לזהות מולקולות המוחלפות בין ישויות ביולוגיות דיסקרטית (מושבות), באפשרותך גם לקבוע כיוון מטבוליט הייצור. פלטפורמת תוכנן במקור לצמיחה מושבת חיידקים הותאם לחקור את חילוף החומרים העיקרי של רקמות explants גדל עם בתרבית של תאים, IMS שימש כדי להעריך את ההחלפה כימי דינמי במערכת יונקים במבחנה.
מספר השנים האחרונות, הוא הפך ברור כי ציון גבוה סרטן שחלות נסיובי (HGSOC) לעיתים קרובות מהכנסותיהן האפיתל החצוצרה (FTE) ואז מתפשט השחלה במהלך בתחילת המחלה פיתוח5,6, 7 , 8. הסיבה tumorigenic FTE תאים התפשט אל השחלה, איפה גידולים גדולים בסופו של דבר יוצרים, גרורות נוספות, ברור כעת. מחקרים קודמים התמקדה התפקיד של חלבונים השחלות ב ראשי גרורות אל השחלה; עם זאת, זה לאחרונה הוכח כי המעבר בריאה טישו tumorigenic גורמת הרס גדול של חילוף החומרים הסלולר ומשנה את הייצור של מולקולות קטנות9,10,11. לכן, אנחנו שיערו כי מולקולות קטנות המוחלפות בין FTE את השחלה עשויים להיות אחראים חלקית גרורות העיקרי של HGSOC.
באמצעות הליך IMS פיתח שלנו, יש לנו נחוש כי coculture של tumorigenic FTE ורקמות השחלות בריא גורם הייצור של נוראדרנלין מן השחלה. עם זאת, תאים נורמליים FTE או סוגי תאים אחרים לא זכה אפקט זה. יתרון יוצאת דופן של שיטה זו הוא כי ניתן לאבחן את הייצור המולקולרי ואת חילופי אותות המייצגים מולקולות אמיתי, כך גם ב- coculture זה אפשרי לקבוע את מקור האות. נמצא יתרון על פני ניתוח דוגמאות הומוגני, כל המידע המרחבי אבוד. במערכת מודל שלנו, היינו יכולים להקצות באופן ברור את הייצור של נוראדרנלין השחלה. נוראדרנלין נקשר גרורה של chemoresistance של סרטן השחלות, שלנו זיהוי של מולקולה זו אומתה כי השיטה IMS הרומן יכול לחשוף מולקולות ביולוגית רלוונטית12,13, 14. אימות זה מאפשר לנו להציע כי היישום החדש הזה של IMS יכול להיות שימושי במיוחד למחקר קבוצות אשר מנסים לזהות מולקולות קטנות בסביבות coculture, כדי להבין בתחילת האירועים המשפיעים על טרנספורמציה תא גרורות. המטרה הכוללת של שיטה זו היא להבהיר את הזהות ואת התפוצה המרחבית של מולקולות קטנות במהלך חילופים בין רקמות ואיברים, המיוצג על-ידי במבחנה תרביות תאים תלת-ממד או רקמות ex-vivo .

<table><tbody><tr><td>צינורות פלקון 15 מ"ל</td><td>דנוויל</td><td>C1017-O</td><td>לאיסוף תאים</td></tr><tr><td>תא 8 בארות (תא שקופיות Millipore EZ)</td><td>Millipore</td><td>PEZGS0816</td><td>ייעוד מחדש משקופית תא Millipore Millicell EZ-slide</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34998-4L</td><td>ממס למטריצה מרוססת</td></tr><tr><td>אלפא מינימום מדיום חיוני (ואלפא; MEM)</td> <td>פישר</td><td>10-022-CV</td><td>מדיה תרבית תאים</td></tr><tr><td>מהירות Autoflex MALDI-TOF LRF</td><td>Bruker</td><td></td><td>לניתוח נתוני IMS</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R</td><td>לאיסוף תאים והסרת</td></tr><tr><td>מטריצת CHCA</td><td>Bruker Daltonic 8201344</td><td></td><td>מטריקס מרוסס על שקופית מיובשת</td></tr><tr><td>מטריצת DHB Bruker</td><td>Daltonic 8201346</td><td></td><td>מרוססת על שקופית</td></tr><tr><td>מיובשת אזמל חד פעמי</td><td>פישר</td><td>22-079-707</td><td>להסרת השחלות</td></tr><tr><td>מספריים לכריתת</td><td>פישר</td><td>13-804-6</td><td>להסרת השחלות</td></tr><tr><td>DMEM Media</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td>מדיה מעורבבת עם</td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמלי</td> אגרוז <td>Peprotech Inc.</td><td>100-15</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>צינורות אפנדורף</td><td>Genesee Scientific</td><td>22-282</td><td>עבור agarose aliquots</td></tr><tr><td>Estradiol-17 &beta;</td><td>Simga-Aldrich</td><td>E2758</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>דנוויל</td><td>fb5001</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>FlexControl 3.4</td><td>Bruker Daltonic</td><td></td><td>IMS תוכנת רכישת נתונים</td></tr><tr><td>FlexImaging 4.1</td><td>Bruker Daltonic</td><td></td><td>תוכנת ניתוח נתונים IMS</td></tr><tr><td>מלקחיים (בסדר)</td> <td>Fsiher</td><td>22-327379</td><td>להסרת שחלות</td></tr><tr><td>Gentamycin</td><td>Cellgro</td><td>30-005-CR</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>אינסולין, טרנספרין, סלניום (ITS)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>11074547001</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>שקופית מצופה ITO</td><td>Bruker</td><td>8237001</td><td>פלטפורמה לדגירה</td></tr> משותפת <tr><td>L-15 Medium</td><td>Gibco</td><td>11415064</td> Media של לייבוביץ <td>בשימוש במהלך הרקמה דיסקציה</td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td>תוסף מדיה לתרבית תאים</td></tr><tr><td>אגרוז נמס</td><td>נמוך Sigma-Aldrich</td><td>A9414-10G</td><td>מעורבב עם מדיה לציפוי</td></tr><tr><td>אגן מדיה</td><td>Corning</td><td>4870</td><td>משמש לחיתוך מחיצות פלסטיק לתאים מחולקים</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>תוסף</td></tr> <tr><td>מדיה לתרבית תאיםכיול פפטיד סטנדרטי</td><td>Bruker Daltonic</td><td>8206195</td><td>קליבר לטווח מסה בינוני</td></tr><tr><td>Phophorus red</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>343-242-5G</td><td>Calibrant לטווח מסה נמוך</td></tr><tr><td>SCiLS Lab 2015</td><td>Bruker Daltonic</td><td></td><td>נתוני IMS ניתוח סטטיסטי</td></tr><tr><td>מלקחיים כירורגיים (קהים)</td> <td>פישר</td><td>08-875-8B</td><td>להסרת השחלות</td></tr><tr><td>TFA</td><td>פישר טכנולוגיות</td><td>A116-50</td><td>נוספו לפתרון מטריצה</td></tr><tr><td>TM מרסס</td><td>HTX טכנולוגיות</td><td></td><td>ליישום מטריצה</td></tr></tbody></table>

לכידת תקשורת מולקולה קטנה בין רקמות ותאים באמצעות הדמיה ספקטרומטר מסה

Capturing Small Molecule Communication Between Tissues and Cells Using Imaging Mass Spectrometry

הדמיה ספקטרומטר מסה (IMS) באופן שגרתי הוחלה על שלושה סוגים של דוגמאות: מקטעי רקמת spheroids, מושבות חיידקים. סוגי דגימה אלה יש נותחו באמצעות לייזר בסיוע מטריקס (MALDI-TOF MS) ספקטרומטר מסה זמן-של-טיסה desorption/יינון להמחיש את ההפצה של חלבונים, ליפידים ו מטבוליטים מעבר הדגימה הביולוגי של עניין. פיתחנו שיטה הכנה מדגם רומן המשלב את נקודות החוזק של היישומים הקודמת שלוש לפנות בגישה כשתפסעו לצורך זיהוי תקשורת כימית ב סרטן, על ידי זריעה בתרבית של תאים מהונדסים לתוך agarose ב coculture עם רקמות בריא ואחריו לייבוש של המדגם. בתרבית של רקמות ותאים cocultured בסמיכות המאפשר תקשורת כימית באמצעות דיפוזיה בין רקמת תאים. בנקודות זמן מסוימות, המדגם מבוססי agarose הוא מיובש באותו אופן כמו מושבות חיידקים מוכן לניתוח IMS. השיטה שלנו פותחה על מודל התקשורת בין סרטן השחלות הצפק כיתה גבוהה, נגזר החצוצרה כמו זה מקיים אינטראקציה עם השחלה במהלך גרורות. אופטימיזציה של הכנת המדגם הביאו הזיהוי של נוראדרנלין בתור מרכיב כימי מפתח microenvironment השחלות. פיתח שיטה זו ניתן ליישם מערכות ביולוגיות אחרות הדורשות הבנה של תקשורת כימית בין תאים סמוכים או רקמות.

שקופית מיובשים בצורה אופטימלית איטו תגרום מדגם מיובש שטוח עם מינימלי אין קמטים על פני השטח של agarose ושל חלקים agarose לשמור על הפרדה מרחבית על השקופית (איור 3). איור 3A מראה ייבוש אופטימלית, בעוד דמות 3B מראה הקמטים שיש להימנע. מיטוב זה דורש זהירות ניטור של השקופית בתנור, כמו באותו הזמן יכול להשתנות בהתאם ללחות יחסית. בעוד קמטים מעט יכול להשפיע על הגובה, ולכן דיוק מסת השמ אותות, קמטים קלים לא תשפיע...

שיטה של הכנת הדוגמא פותחה כדי להתאים coculture תאים ורקמות לזהות מולקולה קטנה exchange באמצעות ספקטרומטר מסה הדמיה.

Imaging mass spectrometry (IMS) has routinely been applied to three types of samples: tissue sections, spheroids, and microbial colonies. These sample ...

הפרוטוקול שלנו יכול למפות תקשורת כימית מולקולה קטנה בין תאים ורקמות, ויש לנו במיוחד להחיל את זה כדי לחקור מולקולות קטנות במטאתזה סרטן השחלות. היתרון העיקרי של הטכניקה שלנו הוא היכולת למדוד מולקולות קטנות באופן ללא תווית תוך שמירה על השלמות המרחבית של תאים ורקמות ב- 2D. טכניקה זו אפשרה לנו לחקור את תרומתן של מולקולות קטנות גרורות סרטן השחלות באופן לא מפושט.זה יכול לחשוף מטרות טיפוליות חדשות ומסלולים כי בעבר התעלמו. מתודולוגיה זו יכולה בקלות להיות מורחבת סרטן אחרים שניתן לגדל אגרוז וכל מחלה אחרת שבה מרכיב מרחבי עשוי להיות חשוב עבור פנוטיפ הסלולר וכתוצאה מכך. הקפדה על כך שכל התאים והרכיבים נמצאים בהישג יד וסבלנות לתהליך הייבוש חיונית לפרוטוקול זה.צעד ייעוד מהיר יכול לעתים קרובות להוביל נתוני ספקטרומטריית מסה באיכות ירודה. הדגמה חזותית של שיטה זו מסייעת בהבנת ההכנה שלנו לדוגמה וצעדי ייעוד, גם כאשר אלה חורגים במידה רבה מניסויים ספקטרומטריים טיפוסיים במסת הדמיה המשתמשים ברקמות או במיקרואורגניזמים על אגר. כדי להתחיל, להניב את agarose ב 70 מעלות צלזיוס על צלחת חמה.מקם את המפריד בן שמונה התבונים מעל השקופית שטופלה ב- ITO. באמצעות טיפול טריפסין סטנדרטי, לאסוף תאי MOE בצינור חרוט 15 מיליליטר, צנטריפוגה, ולהוסיף פעם אחת מדיה DMEM כדי resuspend כדי לקבל ריכוז של 50, 000 תאים לכל 150 microliters, שהוא פעמיים את הצפיפות הסופית הרצויה. עבור cocultures מחולק, להשתמש במטליות כדי להוסיף explant השחלות למרכז ארבע בארות.ממש לפני הציפוי, לשלב 200 microliters של השעיית תאים ו 200 microliters של אגרוז נודאלי בצינורות בודדים שני מיליליטר. הימנע בועות אוויר במהלך צינורות. מיד, מוסיפים 300 מיקרוליטרים של תערובת התא-agarose לכל באר, ולהחיל לחץ עדין מתמשך כלפי מטה על המפריד כדי להבטיח לא דולף או ערבוב בין בארות.ודא שאין בועות אוויר ואת השחלה נשאר במרכז הבירה. אם הצנרת הפריעה לשחלה, השתמש בעדינות בקצה הפיפיטים כדי למרכז אותה לפני שהתעוררותה תתקרר. לאחר מכן, להדגים את המגלשה ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני באינקובטור לח.לחולקים מחולקים, חותכים את המפרידים מפלסטיק דק וחלק. נעשה שימוש בצידי אגן תקשורת סטרילי וחד פעמי. חותכים אותם רק רחב מספיק כדי להתאים בנוחות לתוך תת לחץ דם של באר.מניחים את המפריד בעל שמונה התביונות מעל השקופית שטופלה ב- ITO, והכניסו מחיצות פלסטיק באלכסון לתוך בארות. הכינו תרבות תאים כפי שנעשה בעבר, ושלבו 100 מיקרוליטרים של השעיית תאים ו-100 מיקרוליטרים של אגרוז נמרץ בצינור של שני מיליליטר. מיד, צלחת 150 microliters של תערובת תא-agarose בצד אחד של המפריד תוך שמירה על לחץ כלפי מטה על המפריד.אפשר אגרוז להתקרר ולחזק במשך כדקה אחת, ולאחר מכן להסיר את המפריד. השתמש מדפים למקם explant השחלה במרכז החצי הריק של באר. מוסיפים 150 מיקרוליטרים של תערובת אגרוז תאים מעל השחלה.להדגים את המגלשה ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני באינקובטור לח. לאחר ארבעה ימים, להסיר את מחלק התא מן התקעים agarose. עם מרית שטוחה, לנתק את הצדדים של agarose מהתא, בעדינות למשוך את התא כלפי מעלה.אם כל תקעים agarose מועברים, בעדינות למקם אותם כך שהם לא נוגעים זה בזה. מניחים את השקופית בתנור 37 מעלות צלזיוס במשך כארבע שעות, ומסובבים 90 מעלות בכל שעה כדי להבטיח חלוקת חום אחידה לאורך המדגם. השקופית חייבת להיות מיובשת לחלוטין.אחרת, זה יכול להוביל לפיצוץ של המדגם בסביבת ואקום גבוהה של ספקטרומטר מסה MALDI-TOF. ייבוש השקופית וניטור ההתקדמות הוא הצעד הקריטי ביותר להשגת רזולוציה מרחבית גבוהה וספקטרום מסה איכותי. אם מתרחשים מתקלפים או קמטים מוגזמים, איננו ממליצים לאסוף את נתוני ספקטרומטריית המסה.כאשר הפרמטרים מוגדרים על מרסס המטריצה, החל פתרון מטריצה על השקופית. כדי להשתמש באדום זרחן כמכויל, הוסף מיקרוליטר אחד של זרחן אדום לנקודה ברורה בשקופית. כדי להשתמש בתערובת הפפטיד כמכוילת, ערבבו אותה עם מטריצה על Parafilm ביחס של אחד לאחד כדי לסייע ליינון, ומקום 0.5 למיקרוליטר אחד על השקופית.המתן עד שהכיול יתייבש לפני הדמיה של נתוני ספקטרומטריית מסה. צייר X באמצעות סמן קבוע בכל פינה של השקופית וצלם תמונה אופטית באמצעות מצלמה או סורק ב- 1200 dpi. בניסוי זה, ניטור זהיר של השקופית בתנור חיוני כדי להבטיח מגלשת ITO מיובשת אופטימלית, וכתוצאה מכך מדגם מיובש שטוח עם מינימום עד ללא קמטים על פני השטח של האגוז.איור זה מראה את הקמטים שיש להימנע מהם. קמטים יכולים להשפיע מעט על הגובה ולכן דיוק המסה של אותות ספקטרומטריית מסת ההדמיה. קמטים קלים לא ישפיעו על איכות הנתונים.רקמה הממוקמת בצורה אופטימלית צריכה להיות קרובה ככל האפשר למרכז. הרקמה המשמשת צריכה להיות במרכז באר אם היא מחולקת או במרכז חצי המשולש אם היא מחולקת כך שרכישת נתוני IMS אינה מזוהמת בהשפעות קצה. רקמה ממוקמת רע, כאשר בתמונה, עלול לגרום אותות מסה שווא מן אפקטי הקצה.תמונת השקופית המיובשת משמשת כדי ללמד את ספקטרומטר המסה MALDI-TOF אילו אזורים דימוי. אזורים קטנים סביב רקמת השחלות נבחרו עבור IMS ב 50 מיקרומטר. תמונה מייצגת של אות m-over-z מוצגת עבור cocultures מחולק, כמו גם עבור הגדרת תא מחולק.הדבר החשוב ביותר שיש לזכור הוא שהנתונים המתקבלים טובים רק כמו הכנת המדגם. שימו לב במיוחד לתהליך הייבוש. ההיבט המרגש ביותר הוא אימות המולקולות הקטנות שהתגלו בדרך זו באמצעות ניסויים אחרים, כגון מסיאי פלישה או מתנסה קולוניזציה, כדי ליידע על הריכוז היעיל ולתרגם לביולוגיה האנושית.אנו מצפים כי זה יפתח את הדלת כדי לגלות מסלולים חדשים של מטרות טיפוליות פוטנציאליות לסרטן השחלות על ידי הבנה טובה יותר של התהליכים במטאתזה העיקרית של סרטן השחלות.

capturing-small-molecule-communication-between-tissues-cells-using

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

Desorption electrospray יינון ספקטרומטריית מסה (דסי-MS) היא שיטה שבאמצעותו דגימות סביבה, כולל רקמות ביולוגיות, יכולות להיות צילמו עם הכנת מדגם מינימאלית. על ידי rastering המדגם מתחת לחללית היינון, טכניקה מבוססת ספריי זה מספקת רזולוציה מרחבית מספיק כדי להבחין במאפיינים מולקולריים של עניין בתוך סעיפי רקמות.

הדמיה של רקמות ביולוגיות על ידי Desorption electrospray יינון המוני ספקטרומטריית

כאן, אנו מציגים פרוטוקולים לביצוע הדמיית ספקטרומטריית מסה סביבתית (MSI) של רקמות וניתוח MS של תא יחיד (SCMS) באתרו באמצעות בדיקה יחידה, שהיא מכשיר רב תכליתי ממוזער לניתוח טרשת נפוצה.

יישומים של-הבדיקה הבודדה: הדמיה ספקטרומטריית מסה וניתוח תא יחיד בתנאי הסביבה

פלטפורמת מניפולציה משולבת תא מפותחת לשימוש בשילוב עם התקנה בודדת המסה בדיקה מאסיבית עבור ניתוח מקוון של תאים ההשעיה בודדים תחת תנאי הסביבה.

משולב תאים מניפולציה פלטפורמה ביחד עם יחיד-בדיקה עבור ניתוח ספקטרומטר המסה של תרופות מטבוליטים בתאים ההשעיה יחיד

מטרת פרוטוקול זה היא לספק הדרכה מפורטת על הכנת המדגם בעת תכנון ניסויים באמצעות MALDI MSI כדי למקסם זיהוי מטבולי ומולקולרי בדגימות ביולוגיות.

הכנה לדוגמה ליצירת פרופיל מטבולי באמצעות הדמיית ספקטרומטריית מסה MALDI

בעידן האימונותרפיה של הסרטן, העניין בהבהרת הדינמיקה של מיקרו-סביבה של הגידול גדל באופן בולט. פרוטוקול זה מפרט טכניקת הדמיה של ספקטרומטריית מסה ביחס לשלבי הצביעה וההדמיה שלה, המאפשרים אנליזה מרחבית מרובבת מאוד.

הרחבת ההבנה של המיקרו-סביבה של הגידול באמצעות הדמיית ספקטרומטריית מסה של דגימות רקמה קבועות פורמלין ומשובצות פרפין

שיטת הכנת דגימות חדשנית מודגמת לניתוח של מקרוקולוניות חיידקים מבוססות אגר באמצעות ספקטרומטריית מסה של הדמיית ספיחה / יינון בלייזר בסיוע מטריצה.

חקירת שיתוף פעולה מיקרוביאלי באמצעות ניתוח ספקטרומטריית מסות הדמיה של מושבות חיידקים הגדלות על אגר וברקמות במהלך זיהום

פותחה שיטה מתקדמת להדמיית ספקטרומטריית מסה (MSI) של אורגנואידים במוח המאפשרת מיפוי התפלגות מטבוליט בתוך מודלים אלה. טכנולוגיה זו מציעה תובנות לגבי מסלולים מטבוליים במוח וחתימות מטבוליטים במהלך התפתחות מוקדמת ובמחלות, ומבטיחה הבנה מעמיקה יותר של תפקוד המוח האנושי.

הדמיה מולקולרית של אורגנואידים במוח האנושי באמצעות ספקטרומטריית מסה 

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיקרוMS לספקטרומטריית מסה MALDI-2 חד-תאית מונחית פלואורסצנטית, המאפשרת פרופיל מולקולרי משופר של תאי עצב ראשוניים של חולדות.

ספיגה/יינון לייזר בסיוע מטריצה פלואורסצנטית עם ספקטרומטריית מסה פוסטיוניזציה המושרה בלייזר של תאים עצביים בודדים של חולדה

פרוטוקול זה נועד לשמר מטבוליטים של תאים עבור ספקטרומטריית מסה של תא בודד (SCMS) על ידי שילוב של שטיפת תמיסת מלח נדיפה, מרווה חנקן נוזלי מהיר, ייבוש בהקפאה ואחסון של -8 מעלות צלזיוס. הוא מדגים כי כיבוי חנקן נוזלי חיוני לשמירה על פרופילי מטבוליטים, בעוד שיש למזער אחסון קר ממושך כדי למנוע שינויים מטבוליים.

הכנת מדגם למחקרי מטבולומיקה של ספקטרומטריית מסה של תא בודד: שטיפת תאים משולבת, מרווה, ייבוש ואחסון

פרוטוקול זה מתאר הדמיית ספקטרומטריית מסה חד-תאית של תאי OVCAR-8 באמצעות יינון אלקטרוספריי דספורפציה המחובר לספקטרומטרי מסה Orbitrap לניתוח מטבולומי ברזולוציה מרחבית גבוהה.

הדמיית ספקטרומטריית מסה חד-תאית באמצעות יינון אלקטרוספריי בדסורפציה המשולבת לספקטרומטרי מסה של Orbitrap

למד שיטה ללכידת תקשורת מולקולות קטנות בין רקמות ותאים באמצעות הדמיה ספקטרומטר מסה ללא תיוג. השיטה מיושמת במחקר סרטן השחלות לזיהוי מטרות טיפוליות חדשות.

לכידת תקשורת מולקולה קטנה בין רקמות ותאים באמצעות הדמיה ספקטרומטר מסה

גלה סרטונים נוספים