A In Vivo אסטרוגן מחסור בעכבר מודל עבור ההקרנה הטיפולים האסטרוגן אקסודוגני של בעיות לב וכלי דם אחרי גיל המעבר

מודלים מעבדה מעורבים עכברים לקוי אסטרוגן המציגים נתוני פונס טרשת עורקים חסרים. הליך זה מועיל במיוחד עבור הקרנת טיפולים אסטרוגן אקסוגני של תפקוד לקוי של הלב וכלי הדם לאחר גיל המעבר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי כריתת השחלות ללא חתך דורסולטרי כפול היא שיטה קלה יותר, פחות זמן רב זה מונע הידבקות חמורה בחלל הבטן ודלקת.

הדגמת ההליך תהיה יואה-ז'אנג יין, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה שלי. כדי לבצע כריתת השחלות הדו-צדדית בעכברי נוקאאוט APOE, תחילה לאשר חוסר תגובה לרפלקס הדוושה ולמקם את החיה במצב נוטה על כרית חימום. יש למרוח משחה על עיני החיה ולכסות את החיה בווילון כירורגי.

הפוך חתך של סנטימטר אחד לאורך קו האמצע, וס"מ אחד לצלעות costal, ולהשתמש מדפים כדי לנתח בבוטות את הרקמה התת עורית. באמצעות משקפי חיטוי, לזהות את רקמת השומן הלבן בחלל הבטן. באמצעות מיקרו מספריים ומדפים מיקרו, לעשות חתך 0.5-1 ס"מ דרך fascia, עד חלל הבטן הוא הגיע, ולהשתמש מדפים מיקרו כדי לחזור בעדינות את רקמת השומן הלבן.

השחלה ורודה בצורת תות, עטופה ברקמת שומן, יש לצפות בתוך חלל הבטן. השתמש תפר monofilament כדי לצרף את כלי פרוקסימלי 0.5-1 ס"מ וקרן הרחם, ולהשתמש מספריים מיקרו כדי לקצור את השחלה. מחזירים את הרקמה הנותרת לחלל הבטן, ולהשתמש תפרים monofilament בודדים כדי לסגור בנפרד את השריר ואת שכבות העור.

לאחר מכן לקצור את השחלה בצד הנגדי של החיה, כפי שהוכח רק, ולאפשר לעכבר להתאושש על כרית חימום עם ניטור, עד הגינות מלאה. פעם בשבוע, מהשבוע שלפני עד 12 שבועות לאחר הניתוח, למדוד את משקל הגוף של כל חיה מזויפת וניסיונית על איזון. עבור כולסטרול הכולל פלזמה ומדידת טריגליצרידים, בשבוע 12, להכין את אזור החזה הגחוני עם 70% אתנול, ולהכניס מחט 25 מד לתוך החדר הימני.

שאפו לאט, עד שמיליליטר אחד של דם יזרום למזרק, ויחלקו את הדגימה לצינור איסוף של 1.5 מיליליטר המכיל עשרה מיקרוליטרים של EDTA טוחן 0.5. להפוך את הצינור מספר פעמים ביסודיות כדי לערבב את EDTA לתוך הדם, ומיד למקם את הצינור על קרח. בתוך 30 דקות של איסוף, צנטריפוגה המדגם במשך 20 דקות ב 400 פעמים G וארבע מעלות צלזיוס.

בזהירות לאסוף את הפלזמה supernatant לאחסון במינוס 80 מעלות צלזיוס. כדי לבודד את אב הירך, בשבוע 12, לצרף מחט 25-מד למזרק 50 מיליליטר מלא PBS, ולהכניס את המחט לתוך החדר השמאלי של החיה הניסיונית. חותכים את ה אטריום הנכון כדי למנוע לחץ גבוה מן תדלוק, ולבלבל את רקמת הלב ב 05 כדי 08 מיליליטר של PBS לדקה קצב הזרימה.

לספוג את נוזל זלוב עם רקמות מעבדה ולהשתמש מספריים ומדפים כדי להסיר את הצלעות והריאות. פתח את חלל הבטן כדי להסיר את האיברים הפנימיים, לתצוגה טובה יותר של העורקים. לתפוס את הלב עם מאלץ מיקרו כדי לאפשר הפרדה של כאב הלב הגבי, מעמוד השדרה, עד bifurcation איליאק.

לאחר מכן לתקן את הלב ואת העורקים במשך 48 שעות ב 4% paraformaldehyde, לפני אחסון דגימת הרקמה מלוחים בטמפרטורת החדר או בשתיים עד שמונה מעלות צלזיוס במשך כמה שעות. לאחר שנים עשר שבועות של דיאטה גבוהה כולסטרול, עכברים ovariectomized להפגין עלייה יוצאת דופן כולסטרול הכולל פלזמה וריכוזי טריגליצרידים. עכברים Ovariectomized, לכל בעל פה מנוהל עם 17-בטא oestradiol, או PPD באמצעות התפשטות אגוזי לוז, התערוכה ריכוזי כולסטרול הכולל פלזמה נמוכה באופן משמעותי מאשר עכברים המופעלים על ידי זיוף.

רמות הטריגליצרידים פלזמה ירידה בעכברים ovariectomized, לכל בעל פה מנוהל עם 17-בטא oestradiol, אבל לא עם PPD. בעוד נטייה למשקל גוף מוגבר נצפתה בעכברים ovariectomized, לעומת עכברים המופעלים על ידי זיוף, אין שינויים משמעותיים במשקל הגוף נצפו באופן כללי, בין ארבע קבוצות של בעלי חיים. הפלאק המקסימלי של האורטה העולה גדל בעכברים ovariectomized, בהשוואה לכל הקבוצות האחרות, בשילוב עם ירידה כללית בתפקוד הלב, נצפתה בבעלי חיים אלה.

כמו כן, האחוז הממוצע של אזור הנגע בסבר, יחסית לאזור aortic כולו, גדל באופן משמעותי בעכברים ovariectomized. כצפוי, נוכחותם של נגעים אלה מצטמצם עם 17-בטא oestradiol, או טיפול PPD. הסיכון העיקרי לניתוח כריתת השחלות הוא קשירה בשופכה, שתוותה תמותה גבוהה.

זכור גם לחתוך עמוק ליד ענפי עורק הכליה, כדי למנוע נזק לאורטי.