פרוטוקול מאמץ משתק כרוני לגרימת התנהגות של דיכאון כמו עכברים
15 במאי 2019
מאמר זה מספק פרוטוקול פשוט ומתוקננת עבור השראה של התנהגות כמו דיכאון בעכברים כרוניים מקיבוע באמצעות הרסן. בנוסף, התנהגות וטכניקות פיסיולוגיים כדי לוודא אינדוקציה של דיכאון מוסברים.
התחל על ידי הגדרת החדר לאור ב 200 לוקס באמצעות מד לוקס דיגיטלי. האוס את העכבר בכלוב נפרד לפחות שבוע לפני הבדיקה, והצב את העכבר בחדר הבדיקה לפחות 30 דקות לפני הניסוי. החזק בעדינות את זנב העכבר כדי להימנע מתיחת העכבר, ולאחר מכן בזהירות למקם אותו על משטח מחוספס.
מכסים את המרסן במגבת לבנה קטנה ולאחר מכן מניחים בעדינות את העכבר בפתיחת המרסן, כך שהעכבר נכנס לרסן בהתנדבות. לאחר מכן, מניחים את הסגירה כדי לרסן את העכבר חזק ככל האפשר, נזהרים כדי למנוע נזק לגוף, כגון זנב, רגליים, אשכים. לבסוף, במהלך החשיפה לרסן, למדוד את משקל הגוף ואת צריכת המזון כל 48 שעות.
לפני הבדיקה, הרגל את העכברים לנוכחות של שני בקבוקי שתייה, אחד המכיל 0.1 סוכרוז טוחנת והשני המכיל מים רגילים במשך 48 שעות. החלף את המיקומים של שני הבקבוקים לאחר 24 שעות כדי להפחית את כל ההתבלבלות המיוצרת על ידי הטיה צדדית. ביום השלישי לשלול את העכברים של מים במשך 24 שעות.
ואז ביום הניסוי לחשוף את העכברים לשני בקבוקי שתייה במשך שש שעות. לאחר שלוש שעות, החלף את המיקום של בקבוקי המים. תקליט את הנפח במיליליטר של תות תות תפוקת סוכרוז ומים שנצרכו, ולאחר מכן חשב את זיקה החיה לסוגרוז.
לבסוף, לחשב העדפת סוכרוז כאחוז מנפח צריכת סוכרוז על פני צריכת הנוזלים הכוללת במהלך הבדיקה. התחל על ידי הבאת מתח הריסון הכרוני המושרה עכברים לחדר הבדיקה לפחות 30 דקות לפני תחילת הבדיקה השעיית הזנב. הגדר את החדר אור לתנאים עמומים ב 50 לוקס.
לאחר מכן, הנח את המצלמה על 40 ס"מ מהעכבר. השהה את העכבר בחוזקה מהבר האופקי באמצעות סרט הדבקה. לאחר העכבר ממוקם באמצע תיבת ההשעיה להתחיל להקליט, ולצפות בשינויים התנהגותיים ברציפות במשך שש דקות.
אם העכבר מנסה לטפס על הזנב שלו להשתמש במקל או לטפס פקק כדי למנוע ממנו לעשות זאת. בסוף הניסוי להעביר את העכבר לכלוב הבית שלה בזהירות להסיר את הקלטת תכלתו. לבסוף, השתמש בתוכנת מעקב וידאו כדי לנתח את הזמן המצטבר של תקופות חסרות תנועה.
התוצאות מצביעות על ירידה במשקל הגוף של קבוצת חבר העמים ופחות צריכת מזון באופן משמעותי ביום הרביעי. בהשוואה לפקדים, הוצגה ירידה בהעדפת סוכרוז בקבוצת חבר העמים, בעוד שבזמן חוסר התנועה ובקורטיקוסטרון חלה עלייה משמעותית בזמן חוסר התנועה ובקורטיקוסטרון. כמו כן, גלוטמין בתוספת דיאטה ameliorates דיכאוני כמו התנהגויות, כפי שמוצג עבור משקל הגוף, צריכת מזון, העדפת סוכרוז, חוסר תנועה, קורטיקוסטרון.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מאמר זה מספק פרוטוקול סטנדרטי להשראת התנהגות דמוית-דיכאון בעכברים תחת immobilization כרוני באמצעות כלי ריסון. הוא מפרט טכניקות התנהגותיות ופיזיולוגיות לאימות השראת הדיכאון.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- מדעי המוח
- מדעי ההתנהגות
- מודלים של בעלי חיים לדיכאון
רקע
- דיכאון הוא בעיה משמעותית בתחום בריאות הנפש.
- מודלים של בעלי חיים חיוניים לחקר מנגנוני דיכאון.
- קיבוע כרוני הוא שיטה נפוצה להשראת התנהגות דמוית-דיכאון.
- פרוטוקולים סטנדרטיים משפרים את השחזוריות ואמינות התוצאות.
מטרת המחקר
- מתן פרוטוקול ברור להשראת התנהגות דמוית-דיכאון בעכברים.
- פירוט שיטות לאימות השראת הדיכאון.
- סיוע למחקר בתחום הדיכאון באמצעות מודלים של בעלי חיים.
שיטות שהשתמשו בהן
- הגדרת סביבת הבדיקה לתאורה של 200 lux.
- דיור נפרד של העכברים לצורך אקלימטיזציה.
- שימוש במכשיר קיבוע (restrainer) להשראת אימוביליזציה.
- ניטור משקל הגוף וצריכת המזון בכל 48 שעות.
תוצאות עיקריות
- השראה מוצלחת של התנהגות דמוית-דיכאון בעכברים.
- שינויים התנהגותיים שנצפו במהלך תקופת הקיבוע.
- מדידות פיזיולוגיות שההיו במתאם עם תוצאות התנהגותיות.
- הפרוטוקול הדגים הדירות לאורך ניסויים שונים.
מסקנות
- הפרוטוקול יעיל להשראה של התנהגות דמוית-דיכאון.
- טכניקות התנהגותיות ופיזיולוגיות תוקפו עבור מחקר על דיכאון.
- מחקר זה תורם להבנת הדיכאון במודלים של בעלי חיים.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
סטרס של קיבוע כרוני (CIS) מספק מודל בר-הרחבה ומבוסס מכניסטית להשראה של פנוטיפים דמויי-דיכאון בעכברים, התומך בתיקוף מטרות בתהליכי גילוי תרופות נוירופסיכיאטריות. באמצעות שילוב של מדדים התנהגותיים (העדפת סוכרוז, תליית זנב) עם סממנים ביולוגיים פיזיולוגיים (קורטיקוסטרון), הפרוטוקול מאפשר הפחתת סיכונים מכניסטית של מטרות במערכת העצבים המרכזית (CNS) באמצעות סריקה פנוטיפית במערכת רלוונטית למחלה. גישה זו מגבירה את הביטחון החזוי בשלבי הגילוי המוקדמים על ידי קישור התערבויות מולקולריות לתוצרי התנהגותיים ונוירואנדוקריניים מתוקפים.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח ביו-פרמצבטיים
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- ערך מדעי: מאפשר בחינה של היפותזות טיפוליות הקשורות לוויסות נתיבי סטרס ותסמיני דיכאון.
- ערך תפעולי: תומך בתיקוף של מטרות פונקציונליות באמצעות שינויים מדידים בהעדפה לסוכרוז ובהתנהגות של חוסר תנועה.
- ערך חיזוי: מסייע במיון תיקי תרופות על ידי הצלבה של השפעות התרכובות עם היפוך של ליקויים התנהגותיים ופיזיולוגיים המושרים על ידי CIS.
סריקה ופיתוח בדיקות
- מוכנות הבדיקה: הכנת מערכות ביולוגיות שעברו ולידציה לסריקת תרכובות בהמשך התהליך, באמצעות השראה סטנדרטית של עקה.
- תוצרים כמותיים: יצירת תוצאות רב-מודאליות (התנהגותיות, הורמונליות) הניתנות לשחזור ומתאימות לסטנדרטיזציה של הבדיקה.
- יכולת הרחבה: תמיכה בשימוש חוזר בפלטפורמה בתוכניות לגילוי תרופות למערכת העצבים המרכזית (CNS), בשל דרישות מינימליות לציוד ונקודות סיום ברורות.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- רלוונטיות למחלה: מדמה מבנים דמויי דיכאון עם תוקף פנים באמצעות אנחדוניה (העדפה מופחתת לסוכרוז) וייאוש התנהגותי (עלייה בחוסר ניידות).
- המשכיות תרגומית: מקשרת בין מודולציה של מטרות בשלב הגילוי לבין תיקוף פרה-קליני באמצעות ביומרקרים שמורים של תגובת דחק.
- החלטות מותאמות סיכון: מאפשרת קביעת קריטריונים של המשך או הפסקת הניסוי (go/no-go) על בסיס נורמליזציה של corticosterone ונקודות קצה התנהגותיות.
שילוב תהליכי עבודה וצנרת עיבוד (Pipeline)
פרוטוקול ה-CIS משתלב ברצף הגילוי, החל מבדיקת השערות לגבי מטרה, דרך זיהוי מובילים (lead identification) ועד להערכת יעילות פרה-קלינית, במיוחד עבור תרכובות המשפיעות על ה-CNS.
- ביולוגיה של הגילוי: תומכת בבדיקת השערות לגבי תרכובות נוירו-אקטיביות על ידי השראה של פנוטיפ סטרס שניתן לשחזור.
- סריקה: מאפשרת מוכנות של בדיקות באמצעות קיבוע סטנדרטי וביסוס קו בסיס עקבי.
- אנליטיקה: מספקת משתנים תלויים כמותיים (sucrose preference %, משך חוסר תנועה, corticosterone ng/mL) להשוואה בין קבוצות.
- מחקר תרגומי: תואמת תיקוף פרה-קליני באמצעות היפוך מדיד של ביומארקרים והתנהגויות המושרים על ידי סטרס.
- שימוש חוזר ארגוני: משמשת כפלטפורמה פנוטיפית רב-שימושית עבור מחלקות מטרה מרובות במחקר על דיכאון.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון בחיזוי על ידי הפחתת העמימות המכניסטית במעורבות של מטרות במערכת העצבים המרכזית (CNS).
- ערך תפעולי: מספק סטנדרטיזציה והדירות בין מעבדות באמצעות חשיפה מוגדרת לעקה ומרווחי מדידה קבועים.
- ערך אסטרטגי: משפר את יעילות ההון על ידי מתן אפשרות להפחתת סיכונים מוקדמת של מטרות נוירופסיכיאטריות.
- השפעה על הפורטפוליו: תומך בתיעדוף מותאם-סיכונים המבוסס על פרופילי הצלה התנהגותיים ופיזיולוגיים.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות בטיפול במכרסמים, בבדיקות התנהגותיות ובפיזיולוגיה של סטרס.
- תלוי בציוד לניטור lux, מעקב וידאו, ו-ELISA או שיטה שוות-ערך לזיהוי corticosterone.
- מחייב סטנדרטיזציה בין צוותים בשימוש במכשירי ריסון, במיקום הבקבוקים ובתזמון הבדיקות כדי להפחית שונות.
- כולל שיקולי התאמה בעת מעבר לזני עכברים שונים או למשכי סטרס שונים.
- מגבלות מעשיות כוללות שונות ברגישות לסטרס והצורך בביקורות הרגלה כדי לבודד את השפעות הקיבוע.
