Droplet Digital TRAP (ddTRAP): Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

Mohammed  E. Sayed; Aaron  L. Slusher; Andrew  T. Ludlow

doi:10.3791/59550

מלכודת droplet דיגיטלית (ddTRAP): הסתגלות פרוטוקול Telomere חזרה הגברה על תגובת שרשרת התגובה של ר...

JoVE Journal
Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Cancer Research

Droplet Digital TRAP (ddTRAP): Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

מלכודת droplet דיגיטלית (ddTRAP): הסתגלות פרוטוקול Telomere חזרה הגברה על תגובת שרשרת התגובה של רביב דיגיטלי

Full Text

9,336 Views

06:38 min

May 3, 2019

DOI: 10.3791/59550-v

Mohammed E. Sayed¹, Aaron L. Slusher¹, Andrew T. Ludlow¹

¹School of Kinesiology,University of Michigan

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

הצלחנו להמיר בהצלחה את התקן טלומר חוזר פרוטוקול (מלכודת) האפשרות להיות מועסק בתגובות שרשרת droplet דיגיטלית פולימראז. שיטת הפעולה החדשה, הנקראת ddtrap, רגישה יותר וכמותית, ומאפשרת זיהוי טוב יותר וניתוח סטטיסטי של פעילות טלומראז בתוך תאים אנושיים שונים.

המבחן ddTRAP מספק את היכולת להשיג מדידה רגישה, חזקה, וכמותית מאוד של פעילות אנזימטית telomerase בתאים. היכולת לרוץ עד 96 דגימות לכל ריצה בצורה בתפוקה בינונית מציעה לנו יתרון גדול. אנחנו יכולים להפעיל את הפקדים והשכפולים לניתוח סטטיסטי נכון על הנתונים שנאספו.

מיד לפני lysing התא, להפשיר aliquot קפוא של מאגר תריס NP-40. לאחר הפשרה, מניחים את חיץ תיזה על קרח. הוסף מעכבי פרוטאז PMSF למאגר תות NP-40 כדי להגיע לריכוז סופי של 0.2 מילימולר.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos