Name: כלבת נקרומה טכניקות בעלי חיים גדולים וקטנים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: למד טכניקות נקרומה בטוחות לאיסוף דגימות מוח מבעלי חיים גדולים וקטנים לבדיקת כלבת. שיטות אלה ממזערות ייצור אירוסולים ומסכנות זיהום לטכנאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה למשרד הבריאות של מדינת ניו-יורק מרכז וודסוורת ' על תמיכה בפרויקט זה. אנחנו גם רוצים להכיר את התמיכה של איימי וויליסי ופרנק בלזדל של המחלקה לבריאות מרכז וודסוורת ', ו-LL ראנץ ', אלטמונט, NY.

כל השיטות המתוארות אושרו על-ידי מרכז וודסוורת ', טיפול בבעלי חיים מוסדיים והוועדה לשימוש (IACUC).
1. הכנה
<ol><li>Don PPE, בהגנה על העין המינימלית (משקפיים או מגן פנים), כירורגי או N-95 מסכה, ו שאינם לאטקס כפפות.</li>
	<li>הכנת אזור עבודה, באופן אידיאלי ארון בטיחות ביולוגי (תואר ראשון), עם משטח עבודה חד-פעמי המכסה (למשל, נייר קראפט או רפידות סופג) ומכשירי נמק נקיים (איור 1).</li>
	<li>מניחים את הדגימה על משטח העבודה ומשתמשים בכלים כדי לתמרן אותו כדי להעריך את המצב של המדגם כולל ראיות של ריקבון, נזק לגולגולת, סיכונים פוטנציאליים (למשל, הקיפוד, להבי אזמל), ואת איכות עריפת הראש.</li>
</ol>2. שיטת הגחוני
הערה: כאשר הדגימה מערפת כהלכה על קו הלסת, הגנום הפורה והקונדילה העורפית ייחשפו. השיטה מסובכת פחות לאחזור המוח הקטן וגזע המוח.
<ol><li>הצב את הדגימה עם הצד הגחוני למעלה ולאף מכוון לעבר החלק האחורי של תואר ראשון.</li>
	<li>להחזיק פטיש אורטופדי/פטיש ביד ימין (אם יד ימין) ובאותו זמן להחזיק אזמל המועצה ביד שמאל.</li>
	<li>מקמו את האזמל בזווית 45 מעלות עם נקודת הפינה של האזמל, הבימוי בין הצד הימני של עצם הרקה לעצם העורף ומבצע פתיחת "V".</li>
	<li>הכה את החלק העליון של האזמל עם הפטיש עד ששתי העצמות נפרדות. הפוך את החתך לסמוך לעצם בסיסה.</li>
	<li>חזור על הצד השמאלי של עצם הרקה/עצם העורף (איור 2A).</li>
	<li>כופף את אזור ה-V של הגולגולת כלפי מטה עם האזמל. לחשוף את האזור כולו מעוכל cephalon של המוח (מוח המוח גזע) (איור 2B).</li>
	<li>להוציא את גזע המוח ואת המוח המוחי עם מספריים מלקחיים. להסיר את כל החלקים הנותרים מן הגולגולת אם גזע המוח המוח לא יצא בחתיכה אחת.</li>
</ol>3. שיטת השיטה
הערה: אם לדגימה יש עריפת ראש גרועה (מגנום שאינו נראה לעין) והצוואר לא יכול להיות מוסר בקלות במהלך נקרופסי או אם הנזק למוח הקטן הוא חשוד, יש לעשות שימוש בשיטת העורף.
<ol><li>הצב את הדגימה עם האף מכוון לעבר החלק האחורי של תואר ראשון.</li>
	<li>באמצעות tenacula הגידול, לתפוס את שריר הרקה השמאלית עם השיניים של tenacula ולנעול על ידי לחיצת ידית.</li>
	<li>חותכים את השריר הזמני עד עצם עם סכין חיתוך חדה.</li>
	<li>לסובב את הדגם 180 ° עם tenacula וסכין (לא יד) ולחזור על התהליך על השריר הזמני הנגדי. . תחשוף את הגולגולת</li>
	<li>מקמו אזמל בזווית 45 ° עם נקודת הפינה של האזמל על מרכז הגולגולת בצומת של העצם הקודקודית והתוך-גולגולתי.</li>
	<li>הכה את החלק העליון של האזמל עם פטיש עד פתח אופקי נעשה על החלק העליון של הגולגולת על עצם הקודקוד.</li>
	<li>סובב את הדגימה 180 ° וחזור על התהליך בצד הנגדי.</li>
	<li>הכנס את נקודת האזמל לסוף חתוך 1 (איור 3A) וב90 ° הפתיחה האופקית. הכה עם הפטיש עד הפתיחה מגיע עצם העורף (כ 10 ס מ בהתאם לגודל של הדגימה).</li>
	<li>לגלגל את הדגימה ולחזור על הצד הנגדי בסוף לחתוך 2. הערה: עם הדגימה בגב ובאף ממוקם לעבר החלק האחורי של תואר ראשון, הפתחים בגולגולת דומים "U" הפוכה.</li>
	<li>הכנס את השיניים של הטאקולה לתוך הגולגולת בתחתית "U" ולחטט לכיוון עצמך. לחשוף את קצה caudal של המוח ואת המוח הדלי (איור 3B).</li>
	<li>להשתמש במספריים כסקופ ולהוציא את כל המוח החצי מתוך החלל.</li>
	<li>השתמש מלקחיים רקמה להקניט את גזע המוח מן האמן.</li>
</ol>4. שיטת בעלי חיים גדולה
<ol><li>הצב את הדגימה כך שהחלק החלק של הגולגולת הוא במגע עם משטח הנמק עם החלק caudal של הגולגולת ואת מגנום האמן מול הטכנאי.</li>
	<li>הכנס את סכין הפגיון שהשתנה לתוך מגנום foramen בין חוט השדרה ואת קרום השדרה עד כמה שאפשר.</li>
	<li>ציון סביב חוט השדרה כדי להפריד את הגזע המוח והמח מקרום שדרתי. לאחר הסכין מוכנס דרך מגנום האמן, בעדינות להטות את הסכין כדי לעקוב לאורך הגולגולת ככל האפשר.</li>
	<li>הכנס מרית כימיה או כפית דקה ומטופלת ארוכה לתוך החלל שבין הרקמה העצבית לבין קרום השדרה.</li>
	<li>בדיקה סביב חוט השדרה ואת המוח ההמח כדי להבטיח את הקשר עם קרום השדרה כבר נחתך.</li>
	<li>להחזיק את גזע המוח עם מלקחיים. מצד שני, מקדם את הכפית. לאחר מכן מדורסלי כדי לאסוף את המוח במקביל למשוך חזרה את גזע המוח עם מלקחיים ולהוציא את המוח המוחי באמצעות הכף. הערה: ייתכן שייקח יותר מניסיון אחד לשחזר מספיק מוח לבדיקת כלבת.</li>
</ol>5. פוסט נקרופסי
<ol><li>היפטר מכל החומרים החד-פעמיים (כפפות, רפידות, כיסויי שטח עבודה) ורקמות שאינן בשימוש בפסולת ביוסוכנת.</li>
	<li>נקה וחטא את כל המכשירים עם השיטה הזמינה (למשל, מדיח כלים תעשייתי, אוטוקלב, מחטא כימי, רתיחה).</li>
	<li>לנקות ולחטא את כל משטחי העבודה עם 20% אקונומיקה ו/או 70% אתנול.</li>
</ol>

<ol><li>Centers for Disease Control and Prevention (CDC). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((West+Nile+virus+activity+-+United+States%2C+2009%5BTitle%5D)+AND+%22MMWR+Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">West Nile virus activity - United States, 2009.</a> MMWR Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (25), 769-772 (2010).</li>
<li>McDaniel, C. J., Cardwell, D. M., Moeller, R. B. Jr, Gray, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humans+and+cattle%3A+A+review+of+bovine+zoonoses%5BTitle%5D)+AND+%22Vector+Borne+and+Zoonotic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Humans and cattle: A review of bovine zoonoses.</a> Vector Borne and Zoonotic Diseases. 14 (1), 1-19 (2014).</li>
<li>Spickler, A. R. Zoonotic diseases. Merck Veterinary Manual. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases">https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases</a> (2019).</li>
<li>Wenner, L., Pauli, U., Summermatter, K., Gantenbein, H., Vidondo, B., Posthaus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aerosol+generation+during+bone-sawing+procedures+in+veterinary+autopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Aerosol generation during bone-sawing procedures in veterinary autopsies.</a> Veterinary Pathology. 54 (3), 425-436 (2017).</li>
<li>Green, F. H. Y., Yoshida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+aerosols+generated+during+autopsy+procedures+and+their+potential+role+as+carriers+of+infectious+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Occupational+and+Environmental+Hygiene%22%5BJournal%5D)">Characteristics of aerosols generated during autopsy procedures and their potential role as carriers of infectious agents.</a> Applied Occupational and Environmental Hygiene. 5 (12), 853-858 (1990).</li>
<li>Barrat, J. Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarrat%2C+J+%22Laboratory+techniques+in+Rabies+4th+Edition%22">Laboratory techniques in Rabies 4th Edition</a>. Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. , World Health Organization. 425-427 (1996).</li>
<li>Ness, S. L., Bain, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+perform+an+equine+field+necropsy%5BTitle%5D)+AND+%22American+Association+of+Equine+Practitioners%22%5BJournal%5D)">How to perform an equine field necropsy.</a> American Association of Equine Practitioners. 55, 313-316 (2009).</li>
<li>Animal & Plant Health Agency. Sample requirements for TSE testing and confirmation – EURL guidance. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://protect2.fireeye.com/url?k=09f00f8d-55d40ec4-09f2f6b8-0cc47aa8d394-3f805f032cc98df8&u=https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf">https://protect2.fireeye.com/url?k=09f00f8d-55d40ec4-09f2f6b8-0cc47aa8d394-3f805f032cc98df8&u=https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf</a> (2019).</li>
<li>New York State Department of Health, Wadsworth Center. Rabies reports. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports">https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports</a> (2019).</li>
<li>CDC. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019).</li>
<li>Miller, L. D., Davis, A. J., Jenny, A. L., Fekadu, M., Whitfield, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+for+lesions+of+bovine+spongiform+encephalopathy+in+U.S.+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Developments+in+Biological+Standardizations%22%5BJournal%5D)">Surveillance for lesions of bovine spongiform encephalopathy in U.S. cattle.</a> Developments in Biological Standardizations. 80, 119-121 (1993).</li>
<li>Andrews, C., Gerdin, J., Patterson, J., Buckles, E. L., Fitzgerald, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eastern+equine+encephalitis+in+puppies+in+Michigan+and+New+York+states%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Diagnostic+Investigation%22%5BJournal%5D)">Eastern equine encephalitis in puppies in Michigan and New York states.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 30 (4), 633-636 (2018).</li>
<li>Appler, K., Brunt, S., Jarvis, J. A., Davis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clarifying+indeterminate+results+on+the+rabies+direct+fluorescent+antibody+test+using+real-time+reverse+transcriptase+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Health+Reports%22%5BJournal%5D)">Clarifying indeterminate results on the rabies direct fluorescent antibody test using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction.</a> Public Health Reports. 134 (1), 57-62 (2019).</li>
<li>Chapter 7. Brain removal. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Laboratory+techniques+in+Rabies+5th+Edition%22">Laboratory techniques in Rabies 5th Edition</a>. Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. , World Health Organization. 67-72 (2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

דגימות שהוגשו לנקרופה של כלבת יש לעיתים קרובות היסטוריה של סימנים קליניים התואמים למחלה נוירולוגית. נוכחות של מחלה קלינית עשויה להיות קשורה למגוון של הפרעות, כולל מחלות zoonotic, הגדלת הסיכון לצוות של זיהום נרכש מעבדה. כדי להפחית את הסיכונים הללו, השיטות יושמו הפחתת טיפול ותפעול של דגימות.
השיטות הפגינו מייצגות אירוע נקרואני כדי להסיר את הרקמות הרצויות מבעל חיים יחיד. מספר רב יותר של דגימות בדרך כלל מעובדים משמרת וטיפול נדרש כדי להבטיח שום זיהום החוצה בין דגימות. משטח עבודה נקי (נייר קראפט או ...

העבודה על הרצפה הנקרובית של מעבדת כלבת היא מסוכנת מיסודו. לעיתים, דגימות מגיעות עם הקיפוד מוטבע, חפצים זרים כולל חיצים/כדורים/כדורי או רסיסי עצם חשופים שעלולים לחדור את עטיפת המשלוח המגן. אריזות לא תקין יכול לגרום דליפה, מסכן אנשים שמפרוק דגימות. בנוסף לפציעה פיזית, מטכנאים נקרוסטים מסתכנים בחשיפה לzoonotic לא ידועים של גורמים זיהומיות מתוך הגוף הפיזי ומנוזלי גופו של הדגימות. בנוסף, ectopאראטאתרים שנשאו הדגימה עשויים לשדר מחלות zoonotic אחרות, כמו פרעושים וקרציות נראים בדרך כלל על בעלי חיים שהוגשו. בהתאם למיקום הגיאוגרפי ומינים המעורבים המחלות נחשף משתנה. Arboviruses כגון וירוס קרום המוח המזרחי של הסוסים (EEEV) או וירוס הנילוס המערבי (WNV), שנתות מחלות המועברות כולל מחלת ליים או tularemia חיידקים גרימת קדחת Q או שחפת, ו prions זיהומיות שם מספר קטן של הסכנות האפשריות1 , מיכל השני , 3. שלוש.
מטרת שיטות אלו היא להפגין טכניקות בטוחות ויעילות של נקרופסי באמצעות מכשירים הממחישים את הפוטנציאל של aerosolization בניגוד לכלי הכוח או מסורים4,5. בדרך כלל, נמק של בעלי חיים קטנים במעבדת הכלבת דורש לחתוך את שרירי הגולגולת ולהשתמש בפטיש ובאזמל כדי לפתוח את החלק הקודל של הקלוארינום6. הסרת אזור זה של חילונית חושף את המוח האחוריות, כולל גזע כולו המוח הגולגולתית. טכניקות נקרופסי שהשתנו ניתן לבצע על החלק הגחוני של הגולגולת, הימנעות שרירי הגולגולת גדול ואזורים עבים של הגולגולת. עם זאת, אלה שונה שיטות נקרופסי אפשריים רק כאשר הדגימה היא ללא חוליות צוואר הרחם.
באופן דומה, רקמת המוח בבעלי חיים גדולים ניתן להסיר על ידי הפרדת שרירי הגולגולת ופתיחת החלק של caudal של הגולגולת7. מאמץ רב נדרש כדי לחשוף את הגזע המוח הגדול ביותר כמו גולגולות של בעלי חיים גדולים הם בדרך כלל עבים יותר. כדי להימנע מחדירה לגולגולת, ראשו של בעל חיים גדול מוצב כך שהחלק של הגולגולת של הגוטרו-קאואל עומד בפני הטכנאי. באמצעות מכשירים ששונו, המוח המוח והגזע מוסרים דרך מגנום foramen. הדבר דומה לשיטת הרכישה לדוגמה המומלצת על-ידי המעבדה הפניית האיחוד האירופי של TSE עבור דבקות ספונגיפורם אנצפלופתיה (TSE) חקירות8. חוליות הגולגולת יש להסיר מראש כדי לספק גישה מגנום foramen.
יישום טכניקות אלה מועיל לטכנאים מאומנים כראוי במעבדות כלבת. כאשר מעבדת הכלבת מקבלת דגימות של גדלים שונים, מעטלפים קטינים ועד לסוסי טיוטה מבוגרים9, לטכנאי יש מספר שיטות לבחירה בהתאם לנסיבות הבודדות. השיטה הוכיחה לבעל חיים גדול מתאימה גם לוטרינרים המבצעים בשטח נקרופיזים, שכן המשלוח ראש גדול של בעל חיים לבדיקת כלבת הוא מסורבל ויקר. יישום כל הטכניקות הללו ישפר את הבטיחות על ידי הפחתת הפוטנציאל של ייצור התרסיס, להפחית את הטיפול של הדגימה ולחסוך זמן עיבוד. עם זאת, כאשר השדה אינו מכיל את אותם יתרונות כמו מעבדה להגדיר ספציפי לבדיקת כלבת, זה חיוני כי כל השינויים שבוצעו בהליכים אלה להתמקד בבטיחות, במיוחד את השימוש בציוד הגנה אישית (PPE).

<table><tbody><tr><td>כפית כימיה</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיונז מעוקלים, חדים-קהים</td><td>Sklar</td><td>14-2055</td><td>מספריים להפעלה Sklar 5-1/2 אינץ' פרימיום או כיתה נירוסטה ידית טבעת אצבע מעוקלת חדה / קהה</td></tr><tr><td>סכין גילוף גדולה וחדה באיכות מסעדה</td><td>דקסטר</td><td>P94848</td><td>8 אינץ' סכין שירות מסולסלת, ידית לבנה</td></tr><tr><td>נעילת גידול-טנקולה</td><td>יהלום מדעי ו כירורגים</td><td>N/A</td><td>Czerny Tenaculum Forcep</td></tr><tr><td>סכין סטילטו שונה (סכין גילוף להב באורך 6.5 אינץ' טחון לרוחב 0.5 אינץ')</td> <td>דקסטר</td><td>P94848</td><td>שונה 8 אינץ' סכין שירות מסולסלת, ידית לבנה</td></tr><tr><td>פטיש פטיש אורטופדי</td><td>Mortech</td><td>N/A</td><td>פטיש לאחר המוות עם וו</td></tr><tr><td>איש מועצה חד אזמל עצם אורטופדי</td><td>שנדון</td><td>60-5</td><td>להב אזמל של חבר המועצה: 2 אינץ' x 2.25 אינץ' סטנדרטי 7</td></tr><tr><td>בכף מושחזת או כף אחרת עם ידית ארוכה</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לתחבושת רקמות חלקות ללא שיניים</td><td>שנדון</td><td>63-03</td><td>Shandon Broad Point חבישה מלקחיים אגודל</td></tr><tr><td>כפפות ללא אבקה ללא לטקס</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>משקפי בטיחות, משקפי מגן או מגן פנים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ניתוח או מסכת N-95</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נייר קראפט, נייר קצבים, כרית סופגת וכו'</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

כלבת נקרומה טכניקות בעלי חיים גדולים וקטנים

Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals

מחלקת הבריאות של ניו יורק (NYSDOH) מעבדת הכלבת מקבלת בין 6,000 ל-9,000 דגימות מדי שנה ומבצעת בדיקת כלבת למדינה כולה, פרט לעיר ניו יורק. מעבדת הכלבת מהווה מגוון בעלי חיים הנעים בגודלם מעטלפים ועד bovids. רוב הדגימות הן בעלי חיים המציגות סימנים נוירולוגיים, עם זאת, פחות מ 10% בעצם לבדוק חיובי עבור כלבת; רומז טראומה, נגעים או סוכנים זיהומיות אחרים כגורם לתסמינים אלה. בשל הסיכון לשימוש בחומרים מדבקים לא מאובחנים, מעבדת הכלבת אינה משתמשת בכלי הכוח או במסורים. שלוש טכניקות נמק יוצגו עבור בעלי חיים אשר גולגלות שלהם בלתי חדיר עם מספריים. המעבדה מיישמת טכניקות אלה כדי להקטין את החשיפה הפוטנציאלית לסוכנים זיהומיות, לסלק מניפולציה מיותרת של הדגימה ולהפחית את זמן העיבוד. היתרונות של טכניקה מועדפת המתנגדים לאחר כפוף עיבוד האדם המיומן הדגימה.

כל הדגימות היבשתי שהוגשו עם גולגולות בין 31 בינואר 2019 ו -28 בפברואר, 2019 היה מידע בנוגע לנוכחות של צוואר ושיטת נקרופסי שנאספו. במהלך הזמן הזה, 170 ראשים היו נקרופסיב 18 מינים מיוצגים. 52% (89/170) הערויו כהלכה. הנותרים לפחות חוליה אחת מחוברת כולל שלושה דגימות גוף שלמות. השיטה הגגייתי שימש 75% (128/170) של הזמן, של אלה, הצוואר היו נוכחים על 49. דגימות שהוגשו עם צוואר יהיה להסיר אותו בזמן נמק כדי לאפשר את השיטה הגגבית ככל האפשר. שלוש בעלי חיים גדולים (פרה, צבי, חזיר) הוגשו ובשני מקרים הש...

המטרה של פרוטוקול זה היא להפגין שיטות נמק בטוח בבעלי חיים קטנים וגדולים כדי להשיג דגימות רקמה מספקת עבור בדיקת כלבת.

The New York State Department of Health (NYSDOH) Rabies Laboratory receives between 6,000 to 9,000 specimens annually and performs rabies testing for the ...

איסוף רקמות לבדיקות כלבת יש סכנות ברורות ולא מעוררות עין. על הטכנאי להשתמש בשיטות הבטוחות ביותר הזמינות וללבוש ציוד מגן אישי מתאים. פרוטוקולים אלה מספקים טכניקות נקרופסיה בטוחות ללא שימוש בכלים חשמליים או מסורים, תוך מזעור הייצור של אירוסולים.ניתן לבצע את הפרוטוקול הגדול של בעלי חיים גם בשטח. שימוש בשיטת אחזור דגימת בעלי חיים גדולה בתחום מבטל את האתגר של הובלת ראש בעל חיים במשקל של למעלה מ -45 ק"ג למעבדה. השיטה החייתית הגדולה דומה לפרוטוקול האירופי לאחזור דגימת אנצפלופתיה ספונטית transmissible והוא יכול לשמש לכל חקירה באמצעות גזע המוח והמוח הקטן.כדי לאחזר את המוח הקטן ואת גזע המוח על ידי השיטה הגחונית, למקם את הצד הגחוני דגימה כלפי מעלה עם האף מכוון distally לכיוון החלק האחורי של ארון biosafety. מחזיק פטיש אורתופדי ביד הדומיננטית ואזמל חבר מועצה ביד השנייה, למקם את ה אזמל בזווית של 45 מעלות עם נקודת הפינה אל הפתח בצורת V בין הצד הימני של עצמות הזמן העורף. הכה את החלק העליון של ה אזמל עם הפטיש עד שתי העצמות נפרדות.ולעשות חתך סמוך לעצם הבסיס. הפרד את עצמות הזמן וה העורף בצד שמאל של הדגימה כפי שהודגם זה הרגע. ולהשתמש ב אזמל לכופף את אזור V של הגולגולת כלפי מטה כדי לחשוף את כל אזור rhombencephalon של המוח.לאחר מכן, השתמש במספריים ומדפים כדי לגרוף את גזע המוח ואת המוח הקטן, הסרת כל חתיכות רקמה שנותרו מהגולגולת לפי הצורך. אם הדגימה אינה מאפשרת מיקום אחזור גחוני המדגם הגבי, כאשר האף מופנה באופן דיסטרי לכיוון החלק האחורי של ארון ה-biosafety. ולהשתמש טנקולה גידול לתפוס את שריר הזמן השמאלי עם השיניים של טנקולה.לסחוט את הידית כדי לנעול את השיניים סביב הרקמה ולהשתמש בסכין גילוף חדה לחתוך את שריר הזמן עד העצם. לסובב את הדגימה 180 מעלות עם טנקולה והסכין ולחזור על החתך על שריר הזמן הנגדי כדי לחשוף את הגולגולת. מחזירים את הראש לכיוון המקורי ומ מניחים את ה אזמל בזווית של 45 מעלות עם נקודת הפינה לאזמל במרכז הגולגולת בצומת העצמות הקודקודיות והאינטרפריטליות.ולהכה את החלק העליון של ה אזמל עם הפטיש עד פתח אופקי נעשה על החצי העליון של הגולגולת בעצםקודית. לסובב את הדגימה 180 מעלות ולעשות פתח בצד הנגדי של הגולגולת כפי שהודגם רק. מקם את הראש לפי הצורך כדי להכניס את נקודת ה אזמל לתוך סוף החתך הראשון בזווית של 90 מעלות לפתיחה האופקית ולכה את ה אזמל עד הפתח מגיע לעצם העורפית.מגלגלים את הדגימה כדי לפתוח את העצם העורפית הנגדית באותו אופן. הפתחים בגולגולת צריכים להידמות הפוך U.Insert השיניים של tenacula לתוך הגולגולת בתחתית לך ולמשוך את העצם לאחור כדי לחשוף את הקצה caudal של המוח הקטן ואת המוח הקטן. לאחר מכן השתמש במספריים כסקופ כדי להוציא את כל המוח הקטן מתוך החלל.ולהשתמש במטלפסי רקמות כדי להקניט את גזע המוח מהתופסים. עבור המוח הקטן של בעלי חיים גדולים ואחזור גזע המוח, למקם את הדגימה, כך החלק הגבי של הגולגולת הוא במגע עם פני השטח נקרופסיה. עם החלק הקדום של הגולגולת ומגנום foramen מול החלק הקדמי של ארון biosafety.לתפוס את גזע המוח עם מדפים. הכנס סכין סטילטו שונה לתוך מגנום foramen בין חוט השדרה ואת קרום המוח בעמוד השדרה ככל האפשר לסרוק סביב חוט השדרה כדי להפריד את המוח הקטן ואת גזע המוח מן קרום המוח בעמוד השדרה. לאחר מכן, משוך את הגבעול מתוך foramen עם מדפים.כאשר הסכין הוכנסה דרך מגנום foramen, בעדינות זווית הלהב לעקוב לאורך הגולגולת ככל האפשר ולהכניס מרית מתכת או סכין עם ידית מספיק ארוכה כדי להגיע מתחת למוח לתוך החלל בין הרקמה העצבית ואת קרום המוח בעמוד השדרה. בדיקה סביב המוח הקטן כדי להבטיח כי הקשרים קרום המוח בעמוד השדרה נותו. כאשר קרום המוח נותק לחלוטין לקדם את המרית rostrally ו dorsally כדי לגרוף את המוח הקטן.ואז לגרוף את המוח הקטן עם המרית. כל הדגימות הארציות שהוגשו עם גולגולות בין ה-31 בינואר 2019 ל-28 בפברואר 2019 היו מידע על נוכחות צוואר ושיטת הנמק שנאספה. במהלך תקופה זו, 170 ראשים היו necropsied עם 18 מינים מיוצגים.52% נערפו כראוי. הנותרים היו לפחות חוליות אחד מחובר כולל שלוש דגימות גוף שלמות. נעשה שימוש בשיטת הגחון ב- 75% מהזמן.מתוך אלה, צווארים היו נוכחים על 49. שלושה בעלי חיים גדולים הוגשו, בשני מקרים נעשה שימוש בפרוטוקול הגדול של בעלי החיים. סנאי אחד הוגש עם גולגולת מרוסקת ופשוט חותך את העור חשף את רקמת המוח כך שאף אחת מהשיטות המודגמת לא שימשה.הרקמות המשמשות לצילום מיקרוסקופיה או מופקות משיטות מולקולריות בעת עיבוד בעלי חיים מרובים נמנעות מזיהום צולב באמצעות מכשירי כפפות חדשים ואזור עבודה נקי. להיות זהיר בעת ביצוע פרוטוקולים אלה כמו הדגימות עשוי להיות נגוע בנגיף כלבת או מחלות זואונוטיות אחרות. שים לב שאובייקטים חדים עשויים להיות נוכחים גם בתוך הדגימות.

rabies-necropsy-techniques-in-large-and-small-animals

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מאמר זה מתאר את ההליכים לביצוע בדיקה שלאחר המוות הבסיסי של עכבר או חולדה, ואת אוסף של איברים בסיסיים, כמו גם סוגי המדגם מאתגר יותר מ להערכה היסטולוגית, מיקרוביולוגית, ו-PCR.

Necropsy לאבחון רקמות אוסף נבחר מדגם של חולדות ועכברים

סרטון זה מדגים צביעה אימונוהיסטוכימית לזיהוי אנטיגן של נגיף הכלבת ברקמת מוח עכבר נגועה. התהליך כולל דה-פרפיניזציה וטיפול באלכוהול, ולאחר מכן טיפול פרוטאוליטי לשיפור נגישות האנטיגן. צביעה אימונוהיסטוכימית מגלה משקעים אדומים, המאשרים את נוכחותם של אנטיגנים כלבת בסעיף הרקמות.

מכתים אימונוהיסטוכימיים לזיהוי אנטיגנים של נגיף הכלבת

פרוטוקול זה מספק סקירה של נוהלי בידוד של RNA עבור פרופיל transcriptomic של הצומת לימפה רקמות חיות גדולות, כולל צעדים זיהוי, כריתה של בלוטות הלימפה של חיות המשק וחיות, דגימה גישות כדי לספק עקביות על-פני מספר בעלי חיים, שיקולים בתוספת תוצאות נציג פוסט אוסף שימור ועיבוד לניתוח RNA.

איסוף ועיבוד של בלוטות הלימפה של חיות גדולות לניתוח RNA: הכנת ללימודי Transcriptomic הלימפה של מיני בעלי חיים גדולים

רומן, חיסוני התאמה לניקוי רקמות הרקמה כמו הדמיה 3D האולטימטיבי של איברים הממס נקי לאפשר הדמיה 3D של זיהום המוח וירוס כלבת הסביבה הסלולרית המורכבת שלה. עבה, נוגדן מתויג פרוסות רקמת המוח נעשים שקופים להגדיל את עומק ההדמיה כדי לאפשר ניתוח תלת-ממד על ידי המיקרוסקופיה סריקת לייזר מיקרוסקופ.

ברזולוציה גבוהה 3D הדמיה של זיהום וירוס כלבת ברקמת המוח נקי ממס

מבחן אימונוהיסטוכימיה מהירה ישירה (DRIT) מציע ארגון עולמי לבריאות בעלי חיים וארגון הבריאות העולמי (OIE/מי) המזוהה נגד נוגדן פלורסנט ישירה (DFA) מבחן לאבחון כלבת. בדיקה זו מאפשרת יישומים מבוססי שדה שניתן לבצע בתוך כ 1 שעות על רשמים במוח באמצעות מיקרוסקופ אור.

מעקב משופר כלבת באמצעות מבחן אימונוהיסטוכימיה ישירה מהירה

פרוטוקול זה מציג נוהל הפעלה מעבדה סטנדרטית עבור בדיקות אבחון של אנטיגנים lyssavirus ירוס בעטלפים בטייוואן.

נוהל הפעלה רגיל של מעקב וירוס של אוכלוסיית העטלף בטייוואן

פאן-lyssavirus וירוס שעתוק הפוכה התגובה שרשרת פותחה כדי לזהות במיוחד את כל lyssavirus ידוע. אימות באמצעות דגימות מוח של כלבת ממינים שונים של בעלי חיים הראו כי שיטה זו יש רגישות וספציפיות שוות ערך לבדיקת נוגדן הפלורסנט הסטנדרטית וניתן להשתמש בה לאבחון כלבת שגרתית.

הערכה של מקונן אוניברסלי הפוכה תגובת שרשרת פולימראז לאיתור של Lyssaviruses

אנו מציגים פרוטוקול מלאה לאבחון שלאחר המוות של כלבת בעלי חיים תחת תנאי שדה באמצעות מבחן חיסוני מהיר האבחון (RIDT), מן הבדיקה ביופסיה המוח לפרשנות הסופי. אנו גם לתאר יישומים נוספים באמצעות המכשיר לניתוח מולקולרי הגנוזות ויראלי.

שדה הנתיחה לאחר המוות חיסוני מהיר מבחן אבחון עבור הגדרות מוגבלות משאב עם יישומים מולקולריים נוספים

פרוטוקול זה מציג גישה מבוססת qRT-PCR לקביעת מספר עותק הגן נוקלאופרוטאין (N) של וירוס הכלבת בתוך מבנים אנטומיים שונים במוח שור באמצעות שעתוק במבחנה.

כמויות של וירוס כלבת במבני מוח שור שונים

פרוטוקול זה מדגים את בדיקת תגובת שרשרת פולימראז (RT-PCR) בזמן אמת של pan-lyssavirus LN34 מאיסוף רקמות ועד לפירוש התוצאה, כולל עדכונים לרצפי פריימר ותכשירים לשיפור ביצועי הבדיקה עבור כמה נגיפי ליסה ולגומורפים שאינם כלבת. אנו גם מדגימים את מערך הבדיקה עבור פורמט LN34 מרובב (LN34M) בעל באר אחת.

אבחון לאחר המוות של כלבת בבעלי חיים על ידי מבחן תגובת שרשרת פולימראז LN34 המעודכן והמרובה בזמן אמת

למד טכניקות נקרומה בטוחות לאיסוף דגימות מוח מבעלי חיים גדולים וקטנים לבדיקת כלבת. שיטות אלה ממזערות ייצור אירוסולים ומסכנות זיהום לטכנאים.

כלבת נקרומה טכניקות בעלי חיים גדולים וקטנים

גלה סרטונים נוספים