Name: קביעת צפיפות צינור המרה בכבד העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-30T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: חקור שיטה לכימות צפיפות צינור המרה בכבד עכברים לחקר מחלות כבד. טכניקה זו מאפשרת הערכה ישירה ורגישה של השפעת גורמים גנטיים וסביבתיים על התפתחות מערכת המרה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מכירים את התמיכה של המכון הלאומי לבריאות (NIH) (R01 GM084135 ו R01 DK109982), פרס פיילוט/היתכנות ממרכז הרפואי של טקסס מרכז מחלת העיכול תחת NIH P30 DK56338, ופרס מאיץ של תסמונת אלג'אין . הקרן הרפואית

כל בעלי החיים שוכנו במתקן לבעלי חיים של המכשול בביילור קולג ' לרפואה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים והנחיות וועדות שימוש בפרוטוקולים בעלי חיים מאושרים.
1. אוסף של רקמת הכבד של העכבר
<ol><li>
הכנת העכבר לקציר הכבד
	<ol>
<li>המתת החסד של העכבר באמצעות isofלוריאן.</li>
		<li>לבצע נקע בצוואר הרחם של העכבר כדי להבטיח מוות.</li>
		<li>לעשות חתך רוחבי בערך סנטימטר אחד מתחת לכלוב הצלעות.</li>
		<li>לחשוף את כל המשטח. הגחוני של הכבד</li>
	</ol>
</li>
	<li>
אוסף של כבד העכבר
	<ol>
<li>בזהירות, עם מספריים קטנים, חותכים את הרצועות חיבור הכבד לאיברים אחרים בבטן.</li>
		<li>חותכים דרך BD המשותף כדי לנתק את הכבד מן המעי.</li>
		<li>בזהירות להסיר את הכבד על ידי החזקת על כיס המרה ומקום מיד בצינור 50 mL ממולא שלושה רבעים על-ידי 4% פאראפורמלדהיד (בתחתית).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. קיבוע והטבעה של הכבד בפרפין
<ol><li>
קיבעון
	<ol>
<li>תקן את רקמת הכבד עבור 48 h ב 4% בכיוון הכלפי מע ב -4 ° c.</li>
		<li>שטוף את הרקמה עם 70% אטוח בשעה 4 ° c.</li>
		<li>רוחצים את הרקמה פעמיים עם 95% אטוח עבור 1 כל אחד ב -4 ° c.</li>
		<li>רוחצים את הרקמה פעמיים עם 100% אטוח עבור 1 כל אחד ב -4 ° c.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ניקוי
	<ol>
<li>לשטוף את רקמת הכבד עם ניקוי הסוכן (טבלת חומרים) שלוש פעמים עבור 30 דקות כל אחד בטמפרטורת החדר. הערה: הכבד צריך להרגיש נוקשה. לאחר השטיפה השלישית</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הטבעה של פרפין
	<ol>
<li>מניחים את הקלטת רקמה בתבנית רקמה בשעווה פרפין עבור 3 שוטף, 30 דקות כל אחד. יש לחמם את השעווה עד 60 ° c.</li>
		<li>ממלאים את עובש הרקמה עם פרפין שעווה לגובה שלושה רבעים ולשמור על בלוק חימום ב 60 ° c.</li>
		<li>הניחו את הכבד בעובש עם הצד הגחוני הפונה כלפי מעלה.</li>
		<li>הסר בזהירות את העובש מבלוק החימום.</li>
		<li>הניחו את החלק העליון של הקסטה על העובש והחלק העליון עם פרפין נוזלי חם.</li>
		<li>הניחו לעובש ולחסום להתקרר לטמפרטורת החדר בלילה. הערה: בלוקי רקמות ניתן לאחסן כעת בטמפרטורת החדר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. רקמת כבד
<ol><li>
הכנת בלוק למכירה
	<ol>
<li>מניחים את העובש על הקרח 5 דקות לפני הסרת בלוק מן העובש.</li>
		<li>מניחים את הבלוק על הקרח עם נייר רקמת המעבדה הנוכחי בין בלוק וקרח.</li>
		<li>לשמור על הבלוק על הקרח כאשר לא לשים את התוצאות לחתוך את הרקמה הטובה ביותר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
מחסומי את גושי הכבד
	<ol>
<li>באמצעות מיקרוטומה, התחילו בכך שאתם מתחילים לעבור דרך הצד השטחית והשטחי של הכבד. סעיפים אמורים להיות 5 μm.</li>
		<li>בדקו את החלקים השטוליות שמתחת למיקרוסקופ הניתוח כדי להבטיח שהמקטעים לא יקופאו מקופלים.</li>
		<li>קח חלק של הכבד הכולל את האונה מזונבת. הערה: עבור בלוקים מסוימים, יהיה לך שמאל, המדיאלי, ימין ו מזונבת האונות על אותה פרוסה רקמה.</li>
		<li>עבור אלה בלוקים שבו כל ארבע האונות אינם נמצאים באותה שקופית, להמשיך לחתוך עד האונות השמאלית, המדיאלי והזכות נמצאים באותה שקופית.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. אימונוהיסטוכימיה עבור wsCK ו αSMA
<ol><li>
עיבוד שקופיות עבור אימונוהיסטוכימיה
	<ol>
<li>בחר שקופית אחת לכל סוג גנוזה כדי לעבור ניתוח.</li>
		<li>לשטוף את השקופית עבור 15 דקות ב קסילין, 100% אטוח, 95% אטואה ולבסוף 70% אטוח (3 x 5 דקות בכל פתרון).</li>
		<li>שטוף את השקופית במשך 5 דקות בשעהשתיים.</li>
		<li>לטבול את השקופית בפתרון אחזור אנטיגן (מבוסס טריס, גבוהה pH).</li>
		<li>חום תחת לחץ בסיר לחץ עבור 3 דקות ב 10 psi.</li>
		<li>אפשר לשקופית להתקרר לטמפרטורת החדר (כ-35 דקות).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
חסימת חתכי הרקמה
	<ol>
<li>באמצעות עט פאפ, יש לחלק את המקטעים בשקופית.</li>
		<li>החלת מלוחים מאגור פוספט (PBS) + 0.1% יצירת רצף כדי לכסות את המקטע פעמיים, 5 דקות כל אחד.</li>
		<li>הפוך את מאגר חסימת ידי ערבוב סרום עז רגיל (NGS) ב 1:50 ב-PBS + 0.3% טריטון. כדי להיות מספיק מאגר עבור חסימת ויישום הנוגדן העיקרי, 100 μL לסעיף מספיק.</li>
		<li>החל 100 μL של פתרון חסימה לכל מקטע.</li>
		<li>הגנה מפני השקופיות מכוסות בפתרון החסימה ב-4 ° c עבור 1 h.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
צביעת עבור wsCK ו αSMA
	<ol>
<li>לדלל נגד CK8 ונגד CK19 נוגדנים16 (מחקרים התפתחותיים יפידים בנק, troma-I ו TROMA-III, בהתאמה) 1:20 במאגר חסימת לכתם עבור wsCK. לדלל את הנוגדן anti-αSMA17 (הטבלה של חומרים) כדי 1:200 באותו מאגר.</li>
		<li>החל 100 μL של פתרון הנוגדן מדולל המכיל את כל שלושת הנוגדנים לכל מקטע.</li>
		<li>מודיית את השקופיות מכוסה פתרון נוגדן ב 4 ° c לילה.</li>
		<li>שטוף את השקופיות עם PBS + 0.1% טריטון שלוש פעמים, 5 דקות כל אחד.</li>
		<li>לדלל נוגדנים משניים (אנטי עכברוש-Alexa488 ונגד עכבר-Cy5) 1:200 ב-PBS + 0.3% טריטון.</li>
		<li>החל 100 μL של פתרון הנוגדן המשני המכיל את שני הנוגדנים המשניים לשקופיות.</li>
		<li>. בטמפרטורת החדר במשך 1 שעות</li>
	</ol>
</li>
	<li>
כתמים והרכבה גרעיניים של DAPI
	<ol>
<li>שטוף את השקופיות 3 פעמים, 5 דקות לכל אחד.</li>
		<li>החל 100 μL של DAPI (1:3000) לכל מקטע עבור 10 דקות.</li>
		<li>החל מדיום הרכבה Antifade (טבלה של חומרים) לשקופיות ומניחים שמיכות זכוכית על גבי סעיפים הרקמה. השאירו את השקופיות ב -4 ° c בלילה. . תסגור את השקופיות למחרת</li>
		<li>אחסן את השקופיות ב-4 ° צ' ותמונה בתוך שבוע אחד של הרכבה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. דימות וקוונפיקציה של BDs
<ol><li>
מקטעי בכבד הדמיה
	<ol>
<li>לפני הדמיה, לעוור את עצמך את גנוטיפ של המדגם עם עזרה של חבר במעבדה. ודא שכל קבצי ההדמיה אינם מסוג גנוטיפ או מידע מזהה ספציפי אחר, מלבד מספר בעל חיים/דוגמה.</li>
		<li>באמצעות מיקרוסקופ פלורסנט, לקחת תמונות 20x בזום 1x של כל מקטע ולהבטיח כי כל PV על פני הכבד הוא התמונה. כלול את האונות השמאלית, המדיאלי, ימין, מזונבת. הערה: אנחנו בדרך כלל מוצאים 60-90 הפורטל משתנה לכל חיה בהתאם לגודל של הכבד.</li>
		<li>כדי לזהות את PVs, לחפש αSMA ועוד wsCK כתמים. מבנים שהם αSMA חיוביים אך חוסר כתמים wsCK אינם מבני הפורטל.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
זיהוי וספירה של BDs
	<ol>
<li>צור גיליון אלקטרוני עם העמודות הבאות: בעלי חיים/מספר לדוגמה, מספר תמונה, מספר PVs ומספר BDs.</li>
		<li>מעבר לכל תמונה, מזהה ומקליט את מספר ה-PVs לכל תמונה.</li>
		<li>זיהוי BDs פטנטים בכל תמונה על ידי נוכחות של המרה (wsCK +) סביב לומן מהגדרה. מבנים צריכים להיות ברורים ומופרדים על ידי מזנכימה מתאים אחרים wsck +.</li>
		<li>הרוזן כל BD מפטנטים ומקום באותה עמודה כמו מספר התמונה.</li>
		<li>בצע פעולה זו עבור כל תמונה שצולמה ב-PV.</li>
		<li>לחשב את הסכום של כל PVs כל BDs בדגימת הכבד.</li>
		<li>חשב את היחס BD ל-PV עבור דגימת הכבד.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+controls+liver+development+by+regulating+biliary+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Notch signaling controls liver development by regulating biliary differentiation.</a> Development. 136 (10), 1727-1739 (2009).</li>
<li>Clotman, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+liver+cell+fate+decision+by+a+gradient+of+TGF%CE%B2+signaling+modulated+by+Onecut+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Control of liver cell fate decision by a gradient of TGFβ signaling modulated by Onecut transcription factors.</a> Genes & Development. 19 (16), 1849-1854 (2005).</li>
<li>Karpen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+the+etiologies+and+management+of+neonatal+cholestasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Update on the etiologies and management of neonatal cholestasis.</a> Clin Perinatol. 29 (1), 159-180 (2002).</li>
<li>Roskams, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nomenclature+of+the+finer+branches+of+the+biliary+tree%3A+canals%2C+ductules%2C+and+ductular+reactions+in+human+livers%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Nomenclature of the finer branches of the biliary tree: canals, ductules, and ductular reactions in human livers.</a> Hepatology. 39 (6), 1739-1745 (2004).</li>
<li>Oda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+the+human+Jagged1+gene+are+responsible+for+Alagille+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mutations in the human Jagged1 gene are responsible for Alagille syndrome.</a> Nature Genetics. 16 (3), 235(1997).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alagille+syndrome+is+caused+by+mutations+in+human+Jagged1%2C+which+encodes+a+ligand+for+Notch1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Alagille syndrome is caused by mutations in human Jagged1, which encodes a ligand for Notch1.</a> Nature Genetics. 16 (3), 243(1997).</li>
<li>Xue, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+lethality+and+vascular+defects+in+mice+lacking+the+Notch+ligand+Jagged1%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Embryonic lethality and vascular defects in mice lacking the Notch ligand Jagged1.</a> Human Molecular Genetics. 8 (5), 723-730 (1999).</li>
<li>Thakurdas, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged1+heterozygosity+in+mice+results+in+a+congenital+cholangiopathy+which+is+reversed+by+concomitant+deletion+of+one+copy+of+Poglut1+%28Rumi%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Jagged1 heterozygosity in mice results in a congenital cholangiopathy which is reversed by concomitant deletion of one copy of Poglut1 (Rumi).</a> Hepatology. 63 (2), 550-565 (2016).</li>
<li>Hadchouel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paucity+of+interlobular+bile+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Diagnostic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Paucity of interlobular bile ducts.</a> Seminars in Diagnostic Pathology. 9 (1), 24-30 (1992).</li>
<li>Emerick, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+Alagille+syndrome+in+92+patients%3A+frequency+and+relation+to+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Features of Alagille syndrome in 92 patients: frequency and relation to prognosis.</a> Hepatology. 29 (3), 822-829 (1999).</li>
<li>Poncy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcription+factors+SOX4+and+SOX9+cooperatively+control+development+of+bile+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Transcription factors SOX4 and SOX9 cooperatively control development of bile ducts.</a> Dev Biol. 404 (2), 136-148 (2015).</li>
<li>Hofmann, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged1+in+the+portal+vein+mesenchyme+regulates+intrahepatic+bile+duct+development%3A+insights+into+Alagille+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Jagged1 in the portal vein mesenchyme regulates intrahepatic bile duct development: insights into Alagille syndrome.</a> Development. 137 (23), 4061-4072 (2010).</li>
<li>McCright, B., Lozier, J., Gridley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+Alagille+syndrome%3A+Notch2+as+a+genetic+modifier+of+Jag1+haploinsufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A mouse model of Alagille syndrome: Notch2 as a genetic modifier of Jag1 haploinsufficiency.</a> Development. 129 (4), 1075-1082 (2002).</li>
<li>Andersson, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Model+of+Alagille+Syndrome+and+Mechanisms+of+Jagged1+Missense+Mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Mouse Model of Alagille Syndrome and Mechanisms of Jagged1 Missense Mutations.</a> Gastroenterology. 154 (4), 1080-1095 (2018).</li>
<li>Loomes, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+duct+proliferation+in+liver-specific+Jag1+conditional+knockout+mice%3A+effects+of+gene+dosage%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Bile duct proliferation in liver-specific Jag1 conditional knockout mice: effects of gene dosage.</a> Hepatology. 45 (2), 323-330 (2007).</li>
<li>Brulet, P., Babinet, C., Kemler, R., Jacob, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+against+trophectoderm-specific+markers+during+mouse+blastocyst+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies against trophectoderm-specific markers during mouse blastocyst formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 77 (7), 4113-4117 (1980).</li>
<li>Skalli, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+monoclonal+antibody+against+alpha-smooth+muscle+actin%3A+a+new+probe+for+smooth+muscle+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A monoclonal antibody against alpha-smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation.</a> J Cell Biol. 103 (6 Pt 2), 2787-2796 (1986).</li>
<li>Kamath, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+to+identify+laboratory+predictors+of+liver+disease+outcome+in+Alagille+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Gastroenterology+and+Nutrition%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study to identify laboratory predictors of liver disease outcome in Alagille syndrome.</a> Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 50 (5), 526(2010).</li>
<li>Mouzaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+life+predictive+markers+of+liver+disease+outcome+in+an+International%2C+Multicentre+Cohort+of+children+with+Alagille+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Early life predictive markers of liver disease outcome in an International, Multicentre Cohort of children with Alagille syndrome.</a> Liver International. 36 (5), 755-760 (2016).</li>
<li>Shiojiri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+differentiation+of+bile+ducts+in+the+mammalian+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Development and differentiation of bile ducts in the mammalian liver.</a> Microsc Res Tech. 39 (4), 328-335 (1997).</li>
<li>Crawford, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+intrahepatic+biliary+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Development of the intrahepatic biliary tree.</a> Semin Liver Dis. 22 (3), 213-226 (2002).</li>
<li>Kaneko, K., Kamimoto, K., Miyajima, A., Itoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+remodeling+of+the+biliary+architecture+underlies+liver+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Adaptive remodeling of the biliary architecture underlies liver homeostasis.</a> Hepatology. 61 (6), 2056-2066 (2015).</li>
<li>Schaub, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+formation+of+the+biliary+system+by+TGFbeta-mediated+hepatocyte+transdifferentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">De novo formation of the biliary system by TGFbeta-mediated hepatocyte transdifferentiation.</a> Nature. 557 (7704), 247-251 (2018).</li>
<li>Sparks, E. E., Huppert, K. A., Brown, M. A., Washington, M. K., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+regulates+formation+of+the+three-dimensional+architecture+of+intrahepatic+bile+ducts+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice.</a> Hepatology. 51 (4), 1391-1400 (2010).</li>
<li>Tanimizu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrahepatic+bile+ducts+are+developed+through+formation+of+homogeneous+continuous+luminal+network+and+its+dynamic+rearrangement+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement in mice.</a> Hepatology. 64 (1), 175-188 (2016).</li>
<li>Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-dimensional+resin+casting+and+imaging+of+mouse+portal+vein+or+intrahepatic+bile+duct+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">3-dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system.</a> J Vis Exp. (68), e4272(2012).</li>
<li>Popper, H., Kent, G., Stein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ductular+cell+reaction+in+the+liver+in+hepatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mt+Sinai+Hosp+N+Y%22%5BJournal%5D)">Ductular cell reaction in the liver in hepatic injury.</a> J Mt Sinai Hosp N Y. 24 (5), 551-556 (1957).</li>
<li>Yimlamai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippo+pathway+activity+influences+liver+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hippo pathway activity influences liver cell fate.</a> Cell. 157 (6), 1324-1338 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין ניגוד אינטרסים.

ניתוח של פיתוח BD ותיקון בעכברים הוא כלי חשוב בלימוד פתוגנזה ומנגנון של הפרעות כיס הולסטטי. בנוסף, התפתחות הטיפולים החדשים תלויה בקביעת הפנוטיפים ובהתאם לתהליך המדידה. פנוטיפ הנוכחי במודלים העכבר כרוך בדרך כלל סרום כימיה, היסטולוגיה בכבד וכתמים חיסוני עבור מסוג תא סמנים ספציפיים. למרות טכניקות אלה לייצר מידע חשוב על מבנה ותפקוד של מערכת המרה, הם לא מספקים מדד ישיר של ההשפעות של מניפולציה גנטית נתונה על מספר BDs. בפתולוגיה אנאטומית, BD דלות בחולים אנושיים נקבעת באמצעות ניתוח של BD כדי PV יחס בסעיף ביופסיה<sup class="xref"...

עץ המרה הוא חלק מכריע בכבד היונקים, ומאפשר למעבר המרה מהפטציטים לבטן. תעלות המרה בתוך הכבד (BDs) נוצרות על ידי המרה, אשר מבדילים בין הפוטנציאל הפוטנציאלי באמצעות חריץ וTGFβ איתות1,2. המפרט הנכון והמחויבות של המרה וההרכבה שלהם לתוך BDs בוגרת הם קריטיים לפיתוח עץ המרה הפנימי של הדלקת הכבד. כמו הכבד גדל במהלך הפיתוח או על התחדשות איברים, מערכת המרה צריך להתפתח לאורך הכבד כדי להבטיח ניקוז המרה תקין. יתר על כן, מספר מחלות syndromic ושאינם סינכדרומית התוצאה בפאולסיטי של BDs3. בנוסף, מספר מחלות הכבד חריפה וכרוניות להצמיח תגובות ductular כביכול בכבד, אשר מוגדרים כנוכחות של מספר משמעותי של תאים המבטאים סמנים המרה אך לא בהכרח נובעים תאי המרה או טופס פטנט BDs4. בתסמונת הפרעת המערכת הולטיסיסטים (algs), הפלוייתת של החריץ ליגjagged1 (JAG1) התוצאות במערך BD עני וכולאוסטזיס5,6. המעבדה שלנו הוכיחה לאחרונה כי שנוצר בעבר Jag1 heterozygous קו7 הוא מודל חיה של BD דלות ב algs8. במודל העכבר הזה של ALGS, האלאנגיוציטים עדיין נוכחים. עם זאת, הם נכשלים להתחייב להתאגדות לתוך בוגרת, פטנט BDs8. לכן, ניתוח של הכבד במודל של BD דלות דורש יותר מאשר נוכחות לכאורה או העדר המרה. חשוב להעריך במדויק את המידה שבה BDs בוגרים נמצאים בכבד.
בפתולוגיה אנאטומית, ישנן שיטות כמותיים מקובלות להערכת האם ה-BD דלות קיים9. לדוגמה, מחקרים על algs בחולים אנושיים לעתים קרובות לכמת את BD כדי וריד הפורטל (PV) יחס על ידי ניתוח לפחות 10 כלי הפורטל לכל כבד ביופסיה9,10. ניתוח של הצורה ואת הנוכחות הכללית או העדר פטנטים BDs, בשילוב עם כימיה סרום, יכול לספק מידע רב ערך על התפתחות BD בעכברים11,12,13. עם זאת, עכברים יכולים לאבד מספר משמעותי של BDs עם עלייה צנועה רק סרום בילירובין רמה8. לפיכך, שיטה כמותית המוערכת את מספר BDs הנוכחי לכל PV יכול לספק מידה ישירה יותר של המידה של BD דלות בעכברים. בדו ח האחרונות, אנו ככמת את מספר BDs לכל PV בכל האונות בכבד ודיווח ירידה משמעותית ביחס BD ל-PV ב Jag1 +/– בעלי חיים8. במהלך הניתוח שלנו, הבחנו כי למרות וריאציה משמעותית בדרגת תגובה דלקתית ותגובות ductular, BD ליחס PV לא להראות ההבדלים הרבה8. יתר על כן, הקוונפיקציה של BD ליחס PV מותר לנו להדגים כי הסרת עותק אחד של הגליסישיאז גן Poglut1 ב Jag1 +/– בעלי חיים יכולים לשפר באופן משמעותי את שלהם BD דלות8. ברקע Jag1 +/+ , אובדן מותנה של Poglut1 בתאי שריר וסקולריים החלקה תוצאות עלייה מתקדמת במספרי BD, אשר צנוע (20-30%) ב-P7 אבל הופך להיות בולט במבוגרים8. שוב, טכניקה זו אפשרה לנו להראות כי אפילו ב P7, הגידול בצפיפות BD בבעלי חיים אלה הוא משמעותי מבחינה סטטיסטית. של הערה, את צפיפות ה-BD מוגברת ב-גנוטיפ זה בגיל ארבעה חודשים היה מאומת באמצעות ניתוח שחקנים שרף גם. 8 תצפיות אלה ודוחות אחרים שנמדדו צפיפות BD במודלים algs עכבר שונים14,15 בקשה לנו לשלב את השיטה הזו לתוך האסטרטגיה הכוללת שלנו לנתח פגמים במרה במוטציות שונות ועכברים טרנסגניים.
כאן, אנו פירוט טכניקה פשוטה אשר ניתן להשתמש בה כדי לבחון את מידת ה-BD דלות בדגמי העכבר של מחלת הכבד (איור 1). בשיטה זו, שיתוף בשילוב עם סמנים הכולאנציט (CK) 8 ו CK19 (להלן הספקטרום הרחב CK, wsCK) משמש כדי להמחיש BDs ו המרה משולבת בכבד העכבר. נוגדן נגד אקטין שריר החלקה אלפא (αSMA) מתווסף לצביעת כלי התוויות. ניתוח שיטתי של BD ל-PV יחס בסעיף המכסה את כל האונות בכבד מבטיח כי מספר גדול של PVs מנותח עבור כל גנוטיפ. מאז השיטה שלנו מסתמך על ככמת BDs ו PVs ב-2D תמונות, זה לא מתאים ללמוד את ההשפעות של מוטציה נתונה על המבנה התלת-ממדי של עץ המרה או שלמות של תעלות המרה הקטן. עם זאת, הוא מספק אסטרטגיה פשוטה ואובייקטיבית עבור חוקרים להעריך את פיתוח המרה בעכבר.

<table><tbody><tr><td>איזותזיה (איזופלורן)</td><td>הנרי שיין</td><td>11695-6776-2</td><td></td></tr><tr><td>מייבש</td><td>בל-ארט</td><td>16-800-552</td><td></td></tr><tr><td>10% PFA</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית מדעי</td><td>15712</td><td></td></tr><tr><td>שפופרת 50 מ"ל</td><td>ThermoScientific</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>דקון מעבדות</td><td>2401</td><td></td></tr><tr><td>95% אתנול</td><td>דקון מעבדות</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>100% אתנול</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>HistoChoice</td><td>VWR Life Sciences</td><td>H103-4L</td><td>סוכן סליקה</td></tr><tr><td>Omnisette Tissue Cassette</td><td>Fisher HealthCare</td><td>15-197-710E</td><td></td></tr><tr><td>Macrosette</td><td>Simport</td><td>M512</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast X-TRA</td><td>McCormick Scientific</td><td>39503002</td><td>עובש רקמות פראפין</td></tr><tr><td></td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>62528-32</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטום</td><td>מיקרום</td><td>HM 325</td><td></td></tr><tr><td>סופרפרוסט פלוס מיקרוסקופ שקופיות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>C8H10</td><td></td></tr><tr><td>מעבדות וקטור אחזור אנטיגן מבוססות טריס</td><td></td><td>H-3301</td><td></td></tr><tr><td>לחץ סיר</td><td>מיידי סיר</td><td>לוקס מיני</td><td></td></tr><tr><td>מיני פאפ</td><td>עט Life Technologies</td><td>8877</td><td></td></tr><tr><td>פוליאוקסיאתילן 20 סורביטן מונולאורט (Tween-20)</td> <td>J.T. Baker</td><td>X251-07</td><td></td></tr><tr><td>אוקטיל פנול אתוקסילט (Triton-X-100)</td> <td>J.T. Baker</td><td>X198-07</td><td></td></tr><tr><td>סרום עיזים רגיל</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>005-000-121</td><td></td></tr><tr><td>anti-CK8</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה</td><td>מזהה רישום נוגדנים</td><td>TROMA-I</td> AB531826</tr><tr><td>anti-CK19</td><td>מחקרים התפתחותיים בנק היברידומה</td><td>מזהה רישום נוגדנים</td><td>TROMA-III</td> AB2133570</tr><tr><td>אנטי-&אלפא;SMA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2547, Clone 1A4</td><td></td></tr><tr><td>anti-rat-Alexa488</td><td>ThermoFisher</td><td>A21208</td><td></td></tr><tr><td>anti-mouse-Cy5</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>715-175-151</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>22 x 50 מ"מ2 מיקרו כיסוי זכוכית</td><td>VWR Life Sciences</td><td>48393 059</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>Leica</td><td>DMI6000 B</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech Science</td><td>05511</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1000</td><td>מדיום הרכבה נגד דהייה</td></tr></tbody></table>

קביעת צפיפות צינור המרה בכבד העכבר

Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

העכבר משמש באופן נרחב כאורגניזם מודל ללמוד מחלות המרה. כדי להעריך את התפתחות ותפקוד של מערכת המרה, טכניקות שונות משמשות, כולל סרום כימיה, ניתוח היסטולוגית, וכתמים חיסוני עבור סמנים ספציפיים. למרות טכניקות אלה יכול לספק מידע חשוב על מערכת המרה, הם לעתים קרובות לא מציגים תמונה מלאה של צינור המרה (BD) מומים התפתחותיים על פני הכבד כולו. זה חלק בשל היכולת האיתנה של כבד העכבר כדי לנקז את המרה אפילו בבעלי חיים עם ליקוי משמעותי בפיתוח המרה. כאן אנו מציגים שיטה פשוטה כדי לחשב את המספר הממוצע של BDs המשויכים כל וריד הפורטל (PV) בסעיפים המכסים את כל האונות של עכברים מוטציה/טרנסגניים. בשיטה זו, כבדים מורכבים ומנות בצורה סטריאוטימית כדי להקל על השוואה בין גנוטיפים שונים ותנאים ניסיוניים. BDs מזוהים באמצעות מיקרוסקופ קל של מיקרוקרטין ויטראז ', ולאחר מכן נספר ומחולק על ידי המספר הכולל של PVs להציג באזור הכבד. לדוגמה, אנו מראים כיצד שיטה זו יכולה להבחין בבירור בין עכברים מסוג פראי לבין מודל עכבר של תסמונת אלאלאין. השיטה המוצגת כאן אינה יכולה להיות מחליפה לטכניקות המבראות את המבנה התלת-מימדי של עץ המרה. עם זאת, הוא מציע דרך קלה וישירה כדי לאמוד את פיתוח BD להעריך את מידת היווצרות התגובה ductular בעכברים.

בעבר תועדו פגמים המרה ב Jag1 +/– בעלי חיים, מודל העכבר של algs8. כדי לקבוע את היחס BD ל-PV, שP30 מנות כבדי העכבר ומוכתמות במשותף עבור CK8 ו CK19 (wsCK) יחד עם סמן כלי הדם αSMA. לאחר מכן אנו מ, לאחר מכן את כל PVs כל האונות בכבד. כפי שמוצג באיור 2A, הגדרתי pvs כמו כלי αSMA-ויטראז ' בעלי כתמים wsCK סמוכים (ראשי חץ). המבנים הαSMA והמוכתמת ללא wsCK היו ורידים מרכזיים ואין לכלול אותם בניתוח (חץ).
<p class="jove_content" fo:keep-...

אנו מציגים שיטה פשוטה למדי ורגיש לקוונפיקציה מדויקת של צפיפות צינור המרה בכבד העכבר. שיטה זו יכולה לסייע בקביעת ההשפעות של מכפילי גנטי וסביבתי ואת האפקטיביות של טיפולים פוטנציאליים מודלים העכבר של מחלות המרה.

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

פרוטוקול זה מאפשר לחוקר לכמת פיתוח צינור המרה במודלים של עכברים של מחלת כבד. זה גם מאפשר להעריך את ההשפעות של מגבילים גנטיים על התפתחות צינור המרה. היתרון של טכניקה זו הוא שזו שיטה פשוטה, רגישה וכמותית להערכה ישירה של פיתוח צינור המרה.כדי להתחיל, עם העור מוחזק מתוח על ידי מטלאים, להשתמש במספריים קטנים כדי להפוך חתך רוחבי כ סנטימטר אחד מתחת לכלוב הצלעות של עכבר המתת דם. לחשוף את כל פני הגחון של הכבד. השתמש מספריים קטנים לחתוך בזהירות דרך הרצועות המחברות את הכבד לאיברים אחרים בבטן.לאחר מכן, לחתוך דרך צינור המרה המשותף כדי לנתק את הכבד מהמעי. להחזיק את כיס המרה בזהירות להסיר את הכבד. מיד מניחים אותו בצינור 50 מיליליטר מלא שלושה רבעים עם 4% paraformaldehyde.כדי לתקן את רקמת הכבד, הדגירה אותו ב 4% PFA בארבע מעלות צלזיוס במשך 48 שעות. לאחר סדרה של שטיפות אתנול, לשטוף את הכבד עם סוכן ניקוי שלוש פעמים במשך 30 דקות כל אחד בטמפרטורת החדר. כדי להתחיל להטביע, לשטוף קלטת רקמה בתבנית רקמה שלוש פעמים במשך 30 דקות שעווה פרפין שחומם מראש ל 60 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, למלא את עובש הרקמה עם שעווה פרפין לגובה שלושה רבעים ולשמור אותו על בלוק חימום ב 60 מעלות צלזיוס. מניחים את הכבד בתבנית עם הצד הגחון פונה כלפי מעלה. לאחר הסרת התבנית בזהירות מבלוק החימום, מניחים את החלק העליון של הקלטת על התבנית.למעלה עם פרפין נוזלי חם ולאפשר לו להתקרר לטמפרטורת החדר לילה. לאחר הסרת בלוק הכבד מהתבנית, השתמש במיקרוטום כדי להתחיל לחיתוך דרך הצד הגבי השטחי של הכבד, מה שהופך חמישה מקטעי מיקרומטר. בדוק את החלקים השטחיים תחת מיקרוסקופ ניתוח כדי לוודא שהקטעים אינם מקופלים או מקופלים.כדי לעבד שקופיות עבור אימונוהיסטוכימיה, בחר שקופית אחת לכל גנוטיפ כדי לנתח ולשטוף אותו במשך 15 דקות ב xylene, 100%אתנול, 95%אתנול ולבסוף, 70%אתנול. לאחר שטיפת המגלשה במים היונים, טובלים אותה בתווית אחזור אנטיגן גבוהה מבוססת טריס. לאחר מכן, מחממים אותו תחת לחץ בתוך סיר לחץ במשך שלוש דקות ב 10 ק"ג לאינץ 'מרובע.לאחר מתן אפשרות לשקופית להתקרר לטמפרטורת החדר, השתמש בעט PAP כדי לחלק לרמות את המקטעים בשקופית. לאחר שטיפה עם PBS Tween, לחסום את חלקי הרקמה על ידי הוספת 100 microliters של פתרון חסימה לכל סעיף דגירה מכוסה בארבע מעלות צלזיוס במשך שעה אחת. החל 100 microliters של פתרון נוגדנים מדולל המכיל את כל שלושת הנוגדנים העיקריים לכל סעיף וולדגר אותם בארבע מעלות צלזיוס לילה.לאחר שטיפת המגלשות, מוסיפים 100 מיקרוליטרים של תותר הנוגדנים המשני המכיל נוגדנים משניים ודגירה למשך שעה בטמפרטורת החדר. לבסוף, החל מדיום הרכבה וכיסוי על השקופיות. השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצלם תמונות 20x בזום 1x של כל מקטע.ודא כי כל וריד פורטל על פני הכבד הוא בתמונה. צור גיליון אלקטרוני עם העמודות הבאות:מספר בעלי חיים/מדגם, מספר תמונה, מספר ורידי הפורטל ומספר צינורות המרה. זהה ורשם את מספר ורידי הפורטל לתמונה עבור כל תמונה.לאחר מכן, לזהות צינורות מרה פטנט בכל תמונה, על ידי נוכחות של cholangiocytes המקיף לומן מוגדר. מבנים אלה צריכים להיות מובחנים ומופרדים על ידי mesenchyme מתאים אחרים ספקטרום רחב cytokeratin חיובי. אחד האתגרים העיקריים של טכניקה זו הוא בזיהוי תעלות מרה פטנט.קביעת מהו צינור פטנט דורשת ניתוח של צורת הצינור והתאים המקיפים את הלומן. ספור כל צינור מרה של פטנט והצב אותו באותה עמודה כמו מספר התמונה וחזור על הפעולה עבור כל תמונת וריד פורטל. לבסוף, לחשב את הסכום של כל ורידים פורטל וכל צינורות המרה בדגימה הכבד ולחשב את צינור המרה יחס וריד הפורטל עבור דגימת הכבד.כבדי עכבר P30 נותקו והוכתימו במשותף עבור CK8 ו- CK19 יחד עם סמן כלי הדם, אלפא-SMA, כדי לקבוע את יחס BD ל- PV. כאשר כל ורידי הפורטל בכל אונת כבד הם בתמונה, ורידים פורטל הוגדרו כלי מוכתמים אלפא-SMA כי יש סמוך ספקטרום רחב כתם cytokeratin. מבני הכתמים אלפא-SMA ללא ציטוקראטין ספקטרום רחב היו ורידים מרכזיים אשר הוצאו מהניתוח.תעלות פטנט יש לומן מוגדר בבירור כי הוא מוקף ציטוקרטין ספקטרום רחב חיובי cholangioctyes והם מופרדים בדרך כלל מן התעלות הסמוכות או cholangiocytes על ידי mesenchyme. תאים חיוביים cytokeratin ספקטרום רחב כי אין לומן מוגדר, אינם נספרים לקראת המספר הכולל של צינורות מרה. קטע כבד מבעל חיים מסוג בר מראה וריד פורטל הקשורים צינור פטנט מלא יחד עם מספר תאים מאוגדים.קטע כבד נציג מבעל חיים הטרוזיגוס JAG1 מראה שאין תעלות מרה פטנט נמצאים סביב שלושת ורידים פורטל. כל התאים החיוביים של ציטוקרטין בספקטרום רחב כאן אינם מאוגדים ולכן אין לספור אותם. ניתוח יחס BD ל- PV עבור שלושה סוגים פראיים ושלושה בעלי חיים הטרוזיגים JAG1 מראה כיצד ניתן להבדיל בין שני הגנוטיפים בקלות בהתבסס על ספירת צינור המרה.חשוב להעריך את כל כלי הפורטל עבור צינורות מרה. זה קריטי במיוחד לקביעת צפיפות צינור המרה אם יש שונות פנוטיפית על פני הכבד. טכניקה זו שימשה לזיהוי מדכא גנטי של פנוטיפ המרה במודל העכבר של הלגסון.לכן, זה עשוי להיות שימושי בהערכת מודלים טיפוליים של מודלים של בעלי חיים של מחלת מרה.

determining-bile-duct-density-in-the-mouse-liver

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

סרטון זה מתאר את הליך יציקת שרף מערכת המרה, להבנת ארכיטקטורת מרה תלת ממדית. טכניקה זו מספקת תובנות לגבי הקוטר הפנימי וקישוריות הרשת של מערכת המרה, אשר יכולה לשמש לניתוח התחדשות הכבד.

יציקת שרף מערכת המרה: טכניקה לניתוח ארכיטקטורה תלת ממדית של מערכת המרה במודל מורין באמצעות הזרקת שרף רדיופאק

הפרעה בזרימת המרה גורמת לפגיעה דלקתית חמורה בכבד כולסטטי עם רצף אופייני תלוי זמן של שינויים מורפולוגיים. כאן אנו מציגים פרוטוקול לקשירה כירורגית של צינור המרה המשותף בעכברים המאפשר לגרום לתגובה פיברוטית חזקה לאחר 21 עד 28 יום.

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

כלים לאבחן ספיגה של חומצות מרה למדוד תחבורה חומצות מרה in vivo מוגבלים. גישה חדשנית בבעלי חיים מתוארת אשר מנצלת פרוטון משולב (1 H) בתוספת פלואור (19 F) תהודה מגנטית; יש שיטה חדשנית זו פוטנציאל translational למסך ספיגה של חומצות מרה בפרקטיקה הקלינית.

שימוש רב-פלואור מרת חומצות<em&gt; In vivo</em&gt; דימות תהודה מגנטית כדי למדוד חומצות מרה התחבורה

כאן, אנו מציגים את צינור המרה חלקית מצדו כמודל כירורגי של פגיעה בכבד והתחדשות בחולדות.

צינור המרה חלקית מצדו העכבר: מודל מבוקרת של מקומי חסימתית לחסימת מרה תוך כבדית

מאמר זה מתאר בפירוט שיטה המבוססת על סילבר חלקיקים עבור ameliorating בהכנת בכיס המרה תסמונת במודל עכבר ניסיוני בהכנת בכיס המרה. הבנה עמוקה של תהליך הכנה ריאגנט ואת טכניקת ההזרקה neonatal העכבר יסייע להכיר חוקרים השיטה שבה נעשה שימוש במחקרים דגם העכבר neonatal.

שיטת ננו-חלקיק כסף Ameliorating בהכנת בכיס המרה תסמונת בעכברים

אנו מציגים שיטה חזקה, חסכונית, וגמיש למדידת שינויים במספר hepatocyte ובכלי הנשק הגרעיני בתוך קבוע/הקפאה דגימות רקמות שאינו דורש זרימה cy, try. הגישה שלנו מספקת חתימה רבת עוצמה לדוגמה של ציטולוגיה בכבד עבור מעקב אחר ההתקדמות של פגיעה בכבד ומחלות.

תפוקה גבוהה בשיטת באתרו להערכת הפטציט הגרעיני בעכברים

טומגוגרפיה מיקרו-ממוחשבת עם שרף כפול מאפשרת הדמיה, דיגיטציה וסגמנטציה של שתי מערכות צינוריות בו זמנית כדי להקל על ניתוח תלת-ממדי של ארכיטקטורת איברים. DUCT משלב הזרקת ex vivo של שני שרפים radiopaque ואחריו סריקת טומוגרפיה מיקרו ממוחשבת פילוח של הנתונים טומוגרפיים.

צינור: יציקת שרף כפול ואחריו טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת לניתוח כבד תלת-ממדי

לתצפית על הפרעות בצינור המרה של מורין, נדרש צינור מרה שלם והכנה יעילה. לכן, גישה חדשה לבידוד כל מערכת צינורות המרה החוץ-כבדיים ביילודים מורין פותחה בהצלחה תוך שמירה על שלמות צינור המרה.

דיסקציה של צינור המרה החוץ-כבדי וכיס המרה בניודים של עכברים בני תשעה ימים

הקמנו מודל עכברי של פיברוזיס כרוני בכבד, המספק מודל חייתי מתאים למחקר המכניסטי של אפיברוזיס כבד המושרה על ידי וירוסים של אטרזיה מרה (BA) ופלטפורמה לטיפולי BA עתידיים.

מודל עכברי של פיברוזיס כרוני בכבד לחקר אטרזיה של המרה

כאן, אנו מתארים פרוטוקול פשוט וחסכוני לביצוע כימות בלתי משוחד של צפיפות כלי הדם הריאתיים עבור רקמת ריאה של עכברים שלמים באמצעות צביעה יחידה של איזולקטין B4.

כימות צפיפות כלי הדם הריאתיים בעכברים על פני אונות

חקור שיטה לכימות צפיפות צינור המרה בכבד עכברים לחקר מחלות כבד. טכניקה זו מאפשרת הערכה ישירה ורגישה של השפעת גורמים גנטיים וסביבתיים על התפתחות מערכת המרה.

קביעת צפיפות צינור המרה בכבד העכבר

גלה סרטונים נוספים