Name: מודל של העכבר של ואסיאני הטרוגרההשתלת הטחול ללמוד תא הטחול ביולוגיה וחסינות להשתלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: למד השתלת טחול וסקולרית הטרוטופית בעכברים כדי לחקור דינמיקת תאי הטחול במחלות דלקתיות ובחסינות להשתלות. פרוטוקול זה מאפשר מעקב אחר גורל ותפקוד תאים לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחברים תודה נורת'ווסט המרכז להשתלות מקיף ובית הספר פיינברג לחקר הרפואה תוכנית ליבות לתמיכה משאבים ומימון. במיוחד, הזרימה Cy, היסטולוגיה שירותים סופקו על-ידי האוניברסיטה הצפון מערבי זרימה Cy, מתקן ליבה המכון והיסטולוגיה העכבר המעבדה פנוטיפים, בהתאמה, שניהם נתמכים על ידי NCI P30-CA060553 הוענק רוברט H מרכז לוריא לסרטן מקיף. אנו מודים למר נייט אגספזה. על הגהה של כתב היד

כל ההליכים ואת השימוש בעלי חיים במחקר זה נערכו על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי האוניברסיטה הצפון מערבי טיפול בעלי חיים והוועדה השתמש (IACUC). במחקר זה, 8 כדי 10 שבוע בן זכר 45.2 CD ו-CD 45.1 עכברים (שניהם על רקע BALB/c, מ מעבדה ג'קסון) שימשו תורמים הטחול והנמענים, בהתאמה, כדי ליצור מודלים השתלת הטחול syngeneic. כל החיות שוכנו בסביבה סטרילית במתקני החי של אוניברסיטת נורת'ווסטרן. חומר הסיכה של העין הוחל על כל העכברים שלאחר ההרדמה כדי למנוע יובש.
1. הכנה כירורגית, הפחתות ומשטר כאבים
<ol><li>מניחים העטוף סטרילי חד פעמי (45.7 ס מ x 66 ס מ) על פלטפורמת כירורגית. בעדינות לתפוס את העכבר, להזריק קטמין (50 מ"ג/ק"ג) ו xylazine (10 מ"ג/ק"ג) intraperitoneally (i. p) עבור הרדמה, ולהזריק 0.05 mg/ק"ג בופרנורפין תת-עורי עבור כאבים.</li>
	<li>להבטיח את עומק ההרדמה על ידי הבוהן, לגלח את השיער באזור כל הבטן עם תער ולמקם את העכבר על פלטפורמת כירורגי סטרילי תחת מיקרוסקופ ההפעלה בהגדלה 6-10x.</li>
</ol>2. קציר הטחול התורם
<ol><li>לחטא את הבטן עם כרית הכנה לאלכוהול, לאבטח את הגפיים עם הקלטת כירורגית, ולעשות 3-4 ס מ העור באמצע חתך ביניים אנכי מהערווה לתהליך xiphoid עם מספריים.</li>
	<li>למשוך את קיר הבטן עם רטרקטורים סטרילי עשוי מחסניות. הזז את המעיים לאגף הימני של הבטן (שמאל של המנתח) בצד עם מנקי כותנה סטרילית כדי לחשוף את הטחול. לצרוב את הווריד הקיבה קצר מוצמד הטחול עם החום סטרילי נמוכה הטמפרטורה (איור 1A). מניחים פיסת גזה סטרילית ספוגה 37 ° c מלוחים מעל הטחול כדי לשמור אותו לח (איור 1B).</li>
	<li>להפריד ולהניע את הווריד של הפורטל מרקמת הלבלב (איור 1C) על ידי ליגדירוג הענפים וריד הפורטל (pancreaticoduodenal וריד מעולה וריד הקיבה); מניחים תפר סביב וריד השער מתוך הווריד הטחול (איור 1D).</li>
	<li>הפוך את הטחול לצד ימין כדי לחשוף את עורק העורקים והגזע הצ עם עורק הטחול (איור 1E). ניתוח והניוד של עורק אבי העורקים-בחלל-הטחול על-ידי ליגולי עורק הכבד ועורק הקיבה; מסביב לעורק הראשי (איור 1F-G).</li>
	<li>הכנס 100 יחידות בינלאומיות (IU) הפארין לתוך הבנה הריק הנחותים (IVC) כדי heparinize את הגוף כולו ולחכות 3 דקות כדי להבטיח את הפארין לקחת אפקטים. לישער את אבי העורקים הנמצא מתחת לעורק הבטן, מעבר לווריד השער, ולאחר מכן מבשם את הגוף כולו באמצעות 10 מ ל של heparinized קר (4 ° c) תמיסת מלח (10 מ ל/20 s) מהאבי העורקים הבטני הגזע צליאק רייניאק (איור 1h).</li>
	<li>לאסוף את השתל הטחול en בלוקים עם הקשורים האבי העורקים בקטע הטחול ואת הווריד הפורטל יחד עם קטע של וריד הטחול וחלק קטן של רקמת הלבלב. שמור על השתל ב 5 מ ל של 4 ° c מלוחים לפני ההשתלה. המתת החסד של העכבר על ידי פריקה צוואר הרחם.</li>
</ol>3. כריתת טחול המטופל השתל השרשה
<ol><li>מניחים משטח חימום על הרציף הכירורגי ומתאימים את הטמפרטורה ל-37 ° c. מניחים את העטוף סטרילי (45.7 ס"מ x 66 ס מ) על גבי משטח החימום כדי ליצור פלטפורמה כירורגית סטרילית. חזור על שלבים 2.1 ו-2.2 להכנה כירורגית ולהרדמה. לעשות חתך 3-4 ס מ באמצע החיתוך ולמשוך את קיר הבטן כמתואר בשלב 2.1 צעד 2.2.</li>
	<li>בזהירות להעביר את המעי בצד ימין של העכבר עם מנקי כותנה סטרילית כדי לחשוף את הטחול של המטופל. . ולהסיר את הטחול</li>
	<li>בזהירות להעביר את המעי בצד שמאל של העכבר ולכסות את המעיים עם גזה רטוב (ספוגה עם סטרילי 37 מלוחים צלזיוס). מנתחים ומשערים את ענפי המותניים של העורקים המותני ואת האגודה העברית; באמצעות שני מלחציים מיקרוכלי-דם של 4 מ"מ.</li>
	<li>מניחים 11-0 ניילון תפר דרך העורקים למטה (עובי מלא) ולבטל כדי ליצור aortotomy אליפטי על ידי חתך אחד עם מיקרו מספריים (האורך צריך להתאים את קוטר העורקים של התורם, איור 2A). לנקב את ה-IVC באמצעות מחט של 30 גרם כדי ליצור בנייה אליפטית ולהאריך את הפתיחה לתוך וריד הפורטל תורם אורך בהתאמה באמצעות מיקרו מספריים (איור 2A).</li>
	<li>נקה את דם intraluminal או קריש דם (ב העורקים ו-IVC) עם 500 μL של מלוחים heparinized (10 יחידות/mL).</li>
	<li>מניחים את שתל הטחול באגף הימני של הבטן העכבר המטופל; זהות בזהירות את השרוול של אבי העורקים של התורם ואת וריד השער של התורם. לאחר שהבטיח כי כלי הדם אינם מעוותים, לכסות את שתל הטחול עם גזה ספוגה קר (4 ° c) תמיסת מלח.</li>
	<li>חבר את השרוול של אבי העורקים של התורם האבותיים והמרוחק של aortaotomy של המטופל עם שני תפרים להישאר (11-0 ניילון תפר, כמו להלן) (איור 2B, ג). הפוך השקה עם 2-3 עקיצות של התפרים ברציפות של 11-0 ניילון בין השרוול של אבי העורקים של התורם לבין aortaotomy של המטופל (הקיר הקדמי) (איור 2D). הפוך את שתל הטחול לצד השמאלי של הנמען; להפוך את החיבור בין השרוול אבי העורקים של התורם לבין הaortotomy של המטופל (הקיר האחורי) (איור 2E).</li>
	<li>בצעו השקה כדי לחבר את וריד הפורטל של התורם לקיר האחורי של המטופל, באמצעות 4 עד 5 עקיצות של תפרים מתמשכים בחלק הפנימי של ה-IVC ולאחר מכן סגרו את התפר בצד החיצוני של ה-IVC (איור 2F, G).</li>
	<li>שחררו את התפסים והשתמשו בספוגית כותנה סטרילית עד לדימום בטמפונאדה עד לשחזור צבע הטחול (איור 2H).</li>
	<li>סגרו את הבטן בעזרת מ5-0. סגור את שכבת העור עם תפר ניילון 5-0 בדפוס קטוע. הערה: עבור השלבים 4.7-4.8, לחילופין, לבצע השקה בין וריד הפורטל של התורם לבין IVC של המטופל תחילה (שלב 4.8); לאחר מכן השתמש בחיבור בין השרוול אבי העורקים של התורם לבין הקיר האחורי של הaortotomy, תוך שימוש ב -2 עד 3 תפרים רציפים בתוך החלק הפנימי של אבי העורקים ולסגור את התפר בחלק החיצוני של אבי העורקים.</li>
</ol>4. שחזור בעלי חיים
<ol><li>הכנס 1 מ ל של תת-עורי מלוחים חמים דרך 4 מיקומים נפרדים (0.25 mL/מיקום) לאחר סגירת הבטן.</li>
	<li>שמור את העכבר בחממה מבוקרת טמפרטורה (30 ° c) עבור השעות הראשונות שלאחר הפעולה, לפקח על העכבר עד שהוא חזר להכרה מספקת, ולאחר מכן להעביר את העכבר לכלוב נקי חדש עם מזון רגיל ומים, עם משטח חימום (30 ° c ) מתחת לכלוב. לשמור על העכבר לאחר הניתוח בכלוב נפרד.</li>
</ol>5. ניתוח לאחר כירורגי הכאב
<ol><li>הכנס 0.05 mg/ק"ג בופרנורפין תת-עורי 24 h ו 48 h לאחר ניתוח כדי לשמור על משטר כאבים.</li>
</ol>

<ol><li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+structure%2C+function%2C+and+histology+of+the+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Normal structure, function, and histology of the spleen.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).</li>
<li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+the+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li>
<li>Misiakos, E. P., Bagias, G., Liakakos, T., Machairas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+splenectomy%3A+Current+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic splenectomy: Current concepts.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 9 (9), 428-437 (2017).</li>
<li>Kristinsson, S. Y., Gridley, G., Hoover, R. N., Check, D., Landgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+risks+after+splenectomy+among+8%2C149+cancer-free+American+veterans%3A+a+cohort+study+with+up+to+27+years+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Long-term risks after splenectomy among 8,149 cancer-free American veterans: a cohort study with up to 27 years follow-up.</a> Haematologica. 99 (2), 392-398 (2014).</li>
<li>Thai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+complications+of+splenectomy+in+adult+immune+thrombocytopenia%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Long-term complications of splenectomy in adult immune thrombocytopenia.</a> Medicine (Baltimore). 95 (48), e5098(2016).</li>
<li>Sinwar, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overwhelming+post+splenectomy+infection+syndrome+-+review+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Overwhelming post splenectomy infection syndrome - review study.</a> International Journal of Surgery. 12 (12), 1314-1316 (2014).</li>
<li>Rorholt, M., Ghanima, W., Farkas, D. K., Norgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+cardiovascular+events+and+pulmonary+hypertension+following+splenectomy+-+a+Danish+population-based+cohort+study+from+1996-2012%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Risk of cardiovascular events and pulmonary hypertension following splenectomy - a Danish population-based cohort study from 1996-2012.</a> Haematologica. 102 (8), 1333-1341 (2017).</li>
<li>Crary, S. E., Buchanan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+complications+after+splenectomy+for+hematologic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Vascular complications after splenectomy for hematologic disorders.</a> Blood. 114 (14), 2861-2868 (2009).</li>
<li>Di Carlo, I., Pulvirenti, E., Toro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+spleen+autotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Innovation%22%5BJournal%5D)">A new technique for spleen autotransplantation.</a> Surgical Innovation. 19 (2), 156-161 (2012).</li>
<li>Holdsworth, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+the+spleen+and+splenic+autotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Regeneration of the spleen and splenic autotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 78 (3), 270-278 (1991).</li>
<li>Tzoracoleftherakis, E., Alivizatos, V., Kalfarentzos, F., Androulakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+splenic+tissue+reimplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Royal+College+of+Surgeons+of+England%22%5BJournal%5D)">Complications of splenic tissue reimplantation.</a> Annals of the Royal College of Surgeons of England. 73 (2), 83-86 (1991).</li>
<li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+spleen%3A+effect+of+splenic+allograft+in+human+multivisceral+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the spleen: effect of splenic allograft in human multivisceral transplantation.</a> Annals of Surgery. 246 (3), discussion 445-436 436-444 (2007).</li>
<li>Aronovich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+hemophilia+as+a+proof+of+concept+for+treatment+of+monogenic+diseases+by+fetal+spleen+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Correction of hemophilia as a proof of concept for treatment of monogenic diseases by fetal spleen transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (50), 19075-19080 (2006).</li>
<li>Cohen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splenosis%3B+review+and+report+of+subcutaneous+splenic+implant%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+surgery%22%5BJournal%5D)">Splenosis; review and report of subcutaneous splenic implant.</a> Archives of surgery. 69 (6), 777-784 (1954).</li>
<li>Coburn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Spleen transplantation in the rat.</a> Transplantation. 8 (1), 86-88 (1969).</li>
<li>Lee, S., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+splenic+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for splenic transplantation in the rat.</a> Surgery. 65 (3), 436-439 (1969).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325 (5940), 612-616 (2009).</li>
<li>Hsiao, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li>
<li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C%28high%29+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li>
<li>Kim, E., Yang, J., Beltran, C. D., Cho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+spleen-derived+monocytes%2Fmacrophages+in+acute+ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Role of spleen-derived monocytes/macrophages in acute ischemic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 34 (8), 1411-1419 (2014).</li>
<li>Bronte, V., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spleen+in+local+and+systemic+regulation+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The spleen in local and systemic regulation of immunity.</a> Immunity. 39 (5), 806-818 (2013).</li>
<li>Wang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recruitment+of+macrophages+from+the+spleen+contributes+to+myocardial+fibrosis+and+hypertension+induced+by+angiotensin+II%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Renin-Angiotensin-Aldosterone+System%22%5BJournal%5D)">Recruitment of macrophages from the spleen contributes to myocardial fibrosis and hypertension induced by angiotensin II.</a> Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone System. 18 (2), 1470320317706653(2017).</li>
<li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spleen+contributes+importantly+to+myocardial+infarct+exacerbation+during+post-ischemic+reperfusion+in+mice+via+signaling+between+cardiac+HMGB1+and+splenic+RAGE%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The spleen contributes importantly to myocardial infarct exacerbation during post-ischemic reperfusion in mice via signaling between cardiac HMGB1 and splenic RAGE.</a> Basic Research in Cardiology. 111 (6), 62(2016).</li>
<li>Jang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+Edge%3A+Check+Your+Mice-A+Point+Mutation+in+the+Ncr1+Locus+Identified+in+CD45.1+Congenic+Mice+with+Consequences+in+Mouse+Susceptibility+to+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cutting Edge: Check Your Mice-A Point Mutation in the Ncr1 Locus Identified in CD45.1 Congenic Mice with Consequences in Mouse Susceptibility to Infection.</a> Journal of Immunology. 200 (6), 1982-1987 (2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

ראיות משכנעות עולה כי הטחול נגזר מונוציטים לשחק תפקיד חשוב בתהליכים דלקתיים סטרילי כגון טרשת עורקים19, המוח האיסכמי חריפה20 או פציעה בריאה18, כמו גם שריר הלב I/R פציעה . שיפוץ21,22,23 דוחות אלה להדגיש את תפקיד תחת הכרה של הטחול במחלות כרוניות רבות, אשר מחלות לב וכלי דם היא אחת חשובה (במיוחד בהתחשב בכך הוא הרוצח מספר אחד ברחבי העולם). מודל העכבר של השתלת הטחו...

הטחול הוא איבר הלימפה המשני הגדול ביותר בגוף, והוא קריטי במערכות החיסונית המטפאות. הפונקציות שלה מתבצעות בעיקר על ידי שני תאים ברורים מורפולוגית, את הציפה האדומה ואת עיסת לבן1. הציפה האדומה היא עבודה תלת ממדית של הסינוסים ורידים ומיתרי הטחול המורכבים מסיבים רשתית, תאי רשתית ומקרופאגים משויכים. זה מבנה ייחודי מאפשר עיסת אדום לפעול כמסנן דם אפקטיבי המסירה חומרים זרים או הישן או ניזוק אריתרופוציטים. הזולה הלבנה כוללת זקיקי, אזור שולי, ומעילי הלימפה periarteriolar (ידידי) והוא אתר חשוב להשמנה ועיבוד אנטיגן, ביות לימפוציטים, טרנספורמציה, התפשטות והתבגרות2. עם זאת, הטחול בדרך כלל נחשב כאיבר מותר כי איברים לימפתיים אחרים, כגון בלוטות הלימפה, יכול גם לבצע כמה פונקציות שלה ואת אובדן הטחול לא בדרך כלל להוביל למוות. כריתת טחול התבצע אפוא באופן נרחב כשיטה טיפולית עבור חולים עם פציעה הטחול או מחלות המטקולוגיות שפיר3. עם זאת, חולים עם כריתת טחול הפנים מספר סיבוכים ארוכי טווח. זיהומים חיידקיים הם הסיבוכים המוכרים ביותר של כריתת טחול4,5. לאחרונה הכירו את אלח-הדם המכריע שלאחר הטחול, כסיבוך אינטנסיבי של כריתת טחול הקשורה לתמותה גבוהה6. יתר על כן, מחקרים אפידמיולוגיים האחרונות מצביעים על כך שניתוח הטחול עשוי להיות קשור להתרחשות של מחלות לב וכלי דם, הרומז כי פונקציות פיזיולוגיות נוספות של הטחול נותרו לחקור7,8.
שניהם השתלת הטחול autotransplantation שתלת טחול השתמשו במרפאה. כיום, הטחול השתלת אוטומטית על ידי שתילת חלקים של רקמת הטחול לתוך שקיות שנוצרו במנטום הגדול נחשב האפשרות היחידה לשימור תפקוד הטחול לאחר כריתת טחול טראומטי9,10. עם זאת, את היעילות של ניתוח זה הוא במחלוקת כמו לאחר הניתוח סיבוכים כמו נמק אספטי של רקמת הטחול ואת חסימת המעי הקטן עקב הידקויות לאחר הניתוח יכול להתרחש11. השתלת הטחול מעורבת. בהשתלה מרובת הקרביים12 ראיות קליניות מפני השתלת מרובת הקרביים מציע כי השתלת הטחול עשוי לשחק תפקיד המגן דחייה קטנה אלוגרפט המעי ללא גרימת השתל-מול-מארחים מחלה (gvhd)12. עם זאת, ספרות לגבי ההשפעה המועילה של השתלת הטחול כרכיב של השתלת רב הקרביים עדיין מוגבל והמנגנונים הבסיסיים נשארים להיות מוגדרים. בשנת 2006, יאיר רייזנר ואח ' דיווחו כי שתילת רקמת הטחול מתחלקים חזיר כי אין תאי T לעכברים יכול לרפא המופיליה A, מחלה גנטית מבלי לגרום GVHD13, תמיכה השתלת הטחול מחזיקה הבטחה טיפולית מחלות מסוימות. לכן, יש צורך בחקירות נוספות על הפוטנציאל הטיפולי של השתלת הטחול.
מודלים של בעלי חיים של השתלת הטחול הם יקרי ערך כדי לחקור את תפקוד לא מוערך של תאים החיסון נגזר הטחול בהתקדמות המחלה, כמו גם כדי לבדוק את ההשפעה הטיפולית הפוטנציאלית של השתלת הטחול. השתלת הטחול המלא הדגמים תועדו מאז תחילת 1900, כפי שנבדקו על ידי כהן14. בשנת 1969, קובורן ריצ'רד ג'יי ולי ואח ' מפורטים הטכניקה של השתלת הטחול בחולדות15,16. לאחרונה, מסוויסקי FK אל. תיאר מודל העכבר של השתלת טחול17. לעומת מודלים חולדה, העכבר מודלים של השתלת הטחול הם אטרקטיביים יותר בשל היתרונות הטבועים שלה מספר. לדוגמה, על ידי ניצול מודל העכבר, אנחנו יכולים לגשת למגוון רחב של ריאגנטים לא זמין זה של מודלים חולדה. יתר על כן, באמצעות עכברים הקונגניים (למשל, עכברים עם CD 45.1/CD 45.2 רקע), השתלת הטחול syngeneic מאפשר לעקוב אחר הגורל, אריכות-החיים, ותפקוד של הטחול18. בהתבסס על העבודה על ידי מערבולות FK et al.17, הקמנו את הפרוטוקול הזה פשוט ומשופר של השתלת הטחול בעכברים. הפרוטוקול המתואר להלן משלב אמינות והיתכנות באופן מתוקננת ויכול להיות מנוצל ככלי למחקר ביולוגיה הטחול וחסינות השתלת.

<table><tbody><tr><td>קטמין</td><td>וויית'</td><td>206205-01</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>139-236</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת הפרין</td><td>Abraxis Pharmaceutical Products</td><td>504031</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח רגילה בדרגת הזרקה</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>מוצרי פארמקו בע"מ</td><td></td><td></td>111000140</tr><tr><td>מערכת טיפול נמרץ לבעלי חיים קטנים</td><td>Thermocare, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adson מלקחיים</td><td>Roboz מכשירים כירורגיים</td><td>RS-5230</td><td></td></tr><tr><td>Derf מחזיק מחט</td><td>Roboz מכשירים כירורגיים</td><td>RS-7822</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרו חיתוך עדינים במיוחד</td><td>Roboz מכשירים כירורגיים</td><td>RS-5881</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-קליפ</td><td>Roboz מכשירים כירורגיים</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>7-0 משי</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S 103</td><td></td></tr><tr><td>11-0 ניילון על מחט 4 מ"מ (3/8)</td><td>Sharpoint DR4</td><td>AK-2119</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD45.2 נוגדן</td><td>BD Bioscience</td><td>553772</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD45.1 נוגדן</td><td>BD Bioscience</td><td>553776</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD11b נוגדן</td><td>BD Bioscience</td><td>557657</td><td></td></tr><tr><td>Ms B220 נוגדן</td><td>BD Bioscience</td><td>553089</td><td></td></tr><tr><td>Ms Ly6C נוגדן</td><td>eBioscience</td><td>48-5932-80</td><td></td></tr><tr><td>Ms Ly6G נוגדן</td><td>BD Bioscience</td><td>561236</td><td></td></tr><tr><td>Ms F4/80 נוגדן</td><td>BD Bioscience</td><td>565614</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן MS CD11c BD</td><td>Bioscience</td><td>558079</td><td></td></tr><tr><td>MS CD3 נוגדן</td><td>eBioscience</td><td>48-0032-82</td><td></td></tr><tr><td>Ms CD4 נוגדן</td><td>BD Bioscience</td><td>552051</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן Ms CD8</td><td>BD Bioscience</td><td>563786</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD&TRADE; ערכת כתמי תאים מתים סגולים הניתנת לתיקון</td><td>Thermo Fisher</td><td>L34955</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל של העכבר של ואסיאני הטרוגרההשתלת הטחול ללמוד תא הטחול ביולוגיה וחסינות להשתלות

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

הטחול הוא איבר הלימפה ייחודי המשחק תפקיד קריטי הומאוסטזיס של המערכת החיסונית המטתית. מטופלים שעברו כריתת טחול ללא קשר לגורמים מאיצים נוטים לפתח זיהום מוחץ לאחר כריתת הטחול וניסיון מוגבר של פקקת ורידים עמוקים וממאירות. לאחרונה, מחקרים אפידמיולוגיים ציין כי כריתת טחול עשוי להיות קשור להתרחשות של מחלות לב וכלי דם, הרומז כי פונקציות פיזיולוגיות של הטחול עדיין לא הכירו במלואו. כאן, אנו מציגים מודל העכבר של השתלת הטחול הטרולייום, אשר לא רק יכול להיות מנוצל כדי ללמוד את הפונקציה ואת פעילות התנהגותית של קבוצות החיסון של תאים חיסוניים הטחול בתהליכים יולוגי שונים, אבל גם יכול להיות כלי רב עוצמה כדי לבדוק הפוטנציאל הטיפולי של השתלת הטחול במחלות מסוימות. השלבים העיקריים כירורגי של מודל זה כוללים הקציר הטחול התורם, הסרת טחול יליד הנמען, ו הטחול השתל revascularization. באמצעות זני העכבר הקונגניים (למשל, עכברים עם 45.1 CD/CD 45.2 רקעים), הבחנו כי לאחר השתלת syngeneic, הן לימפוציטים הטחול הנגזר שניהם, התאים מיאלואיד היגרו מתוך השתל מוקדם כמו יום שלאחר הניתוח 1, במקביל עם זרם של סוגים מרובים של תאים הנמען, ובכך לייצר כמירה ייחודית.  למרות טכניקות מאתגרות יחסית, הליך זה ניתן לבצע עם > 90% שיעור הצלחה. מודל זה מאפשר מעקב אחר גורל, אריכות ימים, ותפקוד של הטחול במהלך המצב היציב בקביעת המחלה בעקבות השתלת הטחול, ובכך מציע הזדמנות גדולה לגלות את התפקיד הייחודי עבור תאים חיסוניים הנגזרים הטחול ב תהליכי מחלה שונים.

ההליך כולו של השתלת הטחול העכבר ניתן להשלים בתוך 90 דקות על ידי מיקרו מנתחים מנוסים. המעבדה שלנו הופיעה על 100 השתלות הטחול בעכברים. שיעור ההצלחה הוא מעל 90%, כפי שהוגדר על ידי ההישרדות של שני העכבר הנמען ואת שתל הטחול ליום לאחר הניתוח (POD) 1 או POD 7 (נקודת הקצה של המחקר שלנו). ההישרדות של שתל הטחול אושרה על ידי המראה המקסקופי והזרימה cy, לנסות ניתוח של הטחול. בהתבסס על הניסיון שלנו, הזרימה cy, לנסות ניתוח (הכדאיות חי/מת תאים) הוא רגיש מאוד כדי לקבוע אם שתל הטחול הוא שרד, כמו רוב התאים ...

פרוטוקול זה מפרט את הצעדים הכירורגית של מודל העכבר של השתלת הטחול הטרולפית, מודל מאתגר מבחינה טכנית שיכול לשמש כלי רב עוצמה בחקר הגורל ואריכות החיים של תאי הטחול, מנגנונים של טחול ברורים אוכלוסיות תאים בהתקדמות המחלה, וחסינות להשתלה.

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

מודל העכבר של השתלת טחול מציע הזדמנות מצוינת לחשוף את התפקיד של תאי טחול בוויסות של תגובות חיסוניות מקומיות ומערכתיות במחלות דלקתיות. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא כי באמצעות עכברים חביבים, השתלת טחול מאפשרת לבדוק את גורלם, אריכות ימים, ותפקוד של תאי טחול. לפני תחילת ההליך, מניחים וילון חד פעמי סטרילי מעל הפלטפורמה הכירורגית ומאשרים את חוסר התגובה לצביטת בוהן בעכבר התורם הרדמה.גילחו את השיער מכל אזור הבטן והמקמים את העכבר על פלטפורמה כירורגית סטרילית תחת מיקרוסקופ הפעלה בהגדלה של פי 6 עד 10. לעקר את העור החשוף עם כרית הכנת אלכוהול ולאבטח את הגפיים עם סרט כירורגי. הזן את הבטן באמצעות חתך עור אנכי של שלושה עד ארבעה סנטימטרים מהעווית לתהליך הקסיפואיד.לצרוב את כלי העור ולהרחיב את החתך לבטן הצדדית משני הצדדים כדי להשיג חשיפה טובה יותר. באמצעות צמר גפן סטרילי, להעביר את המעיים לאגף הימני של הבטן כדי לחשוף את הטחול ולהשתמש צרוב טמפרטורה נמוכה סטרילית כדי לצרוב את וריד הקיבה הקצר המחובר לטחול. מניחים חתיכת גזה סטרילית ספוגה מלוחים 37 מעלות צלזיוס מעל הטחול כדי לשמור אותו לח ונפרד ולגייס את וריד הפורטל מרקמת הלבלב.Ligate הענפים של וריד הפורטל כפי שהוכח. מניחים תפר סביב דיסטל וריד הפורטל מן וריד הטחול ולהפוך את הטחול לצד ימין כדי לחשוף את אבי העורקים ואת העורק הטחול על גזע הצליאק. לנתח ולגייס את העורקים הטחול של הצליאק האורטי ולה מניחים תפר סביב העורקים proximal אל עורק הצליאק.להזריק 100 יחידות בינלאומיות של הפרין לתוך ונה קאווה נחות או IVC כדי heparinize את כל הגוף. לאחר שלוש דקות, ליגטה את עורקי הלחץ והקיבה ב- aorta proximal לעורק הצליאק. חוצים את וריד הפורטל ומבלבלים את כל הגוף עם 10 מיליליטר של מלוחים בעלי 4 מעלות צלזיוס מאבי העורקים בבטן דיסטלי לתא המטען של הצליאק.לאסוף את שתל הטחול ולחסום עם קטע הצליאק האורטי הקשורים בווריד הפורטל יחד עם קטע של וריד הטחול וחלק קטן של רקמת הלבלב. ואז לשמר את השתל בחמישה מיליליטר של ארבע מעלות צלזיוס מלוחים. הזן את הבטן המטופל באמצעות חתך קו האמצע לאחר האזור הכירורגי מוכן כפי שהוא עבור התורם ולהסיר טחול יליד המטופל על ידי קשירה של וריד הטחול ואת העורק.מכסים את רקמות המעי עם גזה ספוגה 37 מעלות צלזיוס בזהירות להעביר את המעי לצד שמאל. לנתח וללקט את הענפים המותניים של האב העורקים המסגרתיים ב- IVC ולהצליב את האב העורקים המסגרתיים ב- IVC עם שני מלחציים מיקרו-וסקולריים ארבעה מיליליטר. מניחים תפר ניילון 11-0 דרך ביתן infrarenal ולמשוך את הכלי כדי לאפשר יצירה של aortotomy אליפטי עם מיקרו-סיסורים.השתמש מחט מד 30 לנקב את IVC כדי ליצור venotomy אליפטי ולהרחיב את הפתח לאורך וריד פורטל התורם. לשטוף את העורקים ו- IVC עם 500 microliters של מלוחים heparinized כדי לנקות את הדם התוך-תאי או קרישי דם מכלי הדם ולהמקם את שתל הטחול התורם לתוך האגף הימני של הבטן המטופל. זהה בזהירות את שרוול אבי המין התורם ואת וריד הפורטל.לאחר אישור כי כלי הדם אינם מעוותים, לכסות את שתל הטחול עם גזה ספוגה מלוחים ארבע מעלות צלזיוס. באמצעות שני תפרים שהייה 11-0, לחבר את האזיק אבי האאורטיק התורם לשיא proximal ודיסטלי של אבי האאורטוטומיה המטופל ולעשות anastomosis עם שתיים עד שלוש ביסים של תפרים רציפים 11-0 ניילון בין שרוול אבי האאורטיק התורם ואת הקיר האחורי של aortotomy הנמען. סובבו את שתל הטחול לצד שמאל של המטופל והפכו את האנטומוזיס בין שרוול אבי העורקים התורם לקיר האחורי של אבי העורקים של המטופל.בצע את האנטומיה הווריד בין וריד פורטל התורם לבין IVC הנמען עם ארבע עד חמש ביסים של תפרים רציפים בכל צד. תפר תחילה את הקיר האחורי בתוך כלי השיט ולאחר מכן סגור את הקיר האחורי באמצעות אותו תפר. להשלים את האנטומיה עם קשר ממוקם בפינה התחתונה מחוץ IVC.עכשיו לשחרר את מהדקי כלי ולהשתמש ספוגית כותנה סטרילית כדי טמפונדה הדימום עד צבע הטחול הוא התאושש. סגור את הבטן עם תפר Vicryl סינטטי 5-0 נספג בתבנית רציפה ולסגור את שכבת העור עם תפר ניילון 5-0 בתבנית מופרעת. ואז להזריק 250 microliters של מלוחים חמים תת עורית לארבעה מקומות נפרדים לחמם את העכבר באינקובטור מבוקר טמפרטורה 30 מעלות צלזיוס במשך השעות הראשונות לאחר הפעולה עם ניטור עד החיה חזרה להכרה מספקת להעברה לכלוב הבית.Hematoxylin ו- eosin של טחול isografts ימים אחד ושבע לאחר ההשתלה מגלה כי הארכיטקטורה של isografts הטחול נשאר שלם במהלך השבוע שלאחר הניתוח הראשון. ניתוח ציטומטרי זרימה כדי לחקור את הגירת תאי הטחול התורם לאחר ההשתלה מראה כי כ -50% מתאי הטחול נגזרים ביום אחד לאחר ההשתלה וכ -46% נגזרים. שבעה ימים לאחר ההשתלה, לויקוציטים נגזר התורם מהווים כ 32% מכלל תאי הטחול בעוד התאים הנגזרים הנמען גדל עד כ 53% לויקוציטים טחול התורם גם היגרו לתוך בלוטות הלימפה, דם, ומח העצם כבר ביום הראשון ומתוחזקים לפחות יום שבע יצירת כימרה ייחודי יקר עבור מחקר סחר splenocyte.שימוש בעכברים מהונדסים גנטית כתורמים טחול יאפשר את חקירת התפקידים של מתווכים שמקורם בתא הטחול או מסלולי איתות מרכזיים בתהליכי מחלה. מודל זה יכול להיות כלי רב עוצמה לחקר המנגנונים של אוכלוסיות תאי הטחול בתגובה לפתוגנים, פציעה, דלקת או דחיית השתלה.

a-mouse-model-vascularized-heterotopic-spleen-transplantation-for

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

הסרטון מדגים שיטה כירורגית ליצירת מודל עכבר של השתלת טחול הטרוטופית וסקולרית. חלל הבטן של עכבר תורם מורדם נפתח בניתוח להסרת הטחול. הווריד הנבוב התחתון ואבי העורקים האינפרא כלייתי מזוהים, ענפיהם המותניים קשורים, ופתחים נעשים להשתלה הטרוטופית של טחול מעכבר תורם קונגני. עם השלמת אנסטומוזה וסקולרית והחזרת זרימת הדם לטחול המושתל, החתך נסגר, והעכבר מנוטר להתאוששות.

מודל עכברי להשתלת טחול הטרוטופי וסקולרי

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת מודל עכבר כפול אנושי עם מערכת חיסון אנושית ותאי כבד. היא כרוכה בהשתלת תאי כבד אנושיים ותאי גזע ואב המטופויטיים בעכבר מהונדס מדוכאי חיסון באמצעות הזרקה תוך ספלנית, מה שמוביל לקליטת תאי כבד והתפתחות תאי חיסון אנושיים.

פיתוח מודל עכבר אנושי עם תאי כבד אנושיים ותאי חיסון

מודל פרה קליני, עכברי של גרורות בכבד מבוצע באמצעות טכניקת הזרקת hemispleen.

דגם Murine פרה של גרורות כבדית

אנו מתארים פרוטוקול להשתלת אינטרפוזיציה של אבי העורקים בעכברים. מטרת הפרוטוקול היא לספק מודל שבאמצעותו ניתן לחקור תהליכים פתולוגיים ואסטרטגיות טיפוליות הרלוונטיות לתגובות אלואימוניות בעורקים ולשינויים העורקיים הנובעים מכך התורמים לכישלון השתלת איברים.

עכבר דגם של דחיית כלי דם הנוצרת על-Alloimmune וטרשת עורקים להשתלות

כדי לחקור השתלה משולבת של איברים מוצקים וכלי דם, אנו מתארים מודל חדש של השתלת דופן חזה הטרוטופית, בלוטת התימוס ולב בעכברים באמצעות טכניקת שרוול צוואר הרחם ללא תפרים.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

מודל הרומן הזה להשתלה הגפיים האחוריות orthotopic בתוך העכבר, החלת טכניקה השרוול הלא תפר עבור השקה סופר-כלי הדם, מספק כלי רב עוצמה עבור מחקר אימונולוגי מכניסטית in vivo הקשורים אלוגרפט מרוכבים vascularized (VCA).

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

מאמר זה מתאר פרוטוקול לצבירה ומעטפת של תאי טחול בתוך מטריצת קרום מרתף מוצקה למחצה. מבני מטריצת קרום מרתף יכולים לשמש בתרבית תלת ממדית לחקר התפתחות אורגנואידים, או למחקרי השתלות in vivo והתחדשות רקמות.

מטריצת קרום מרתף צבירת תאים עטופה לחקר היווצרות רקמת טחול מורין

אנו מציגים מודל עכבר שניתן לשחזור של אלוטרנסלנטציה מורכבת של גפיים אחוריות לצוואר הטרוטופית. פרוטוקול סופר-מיקרוכירורגי זה, הכולל אנסטומוזות כלי דם בקוטר 0.3-0.5 מ"מ, משלב הנחיית חוטי ניילון ושרוול ורידי. הוא מספק פלטפורמה אמינה למחקרים תרגומיים על סבילות, פגיעות איסכמיה-רפווזיה, ומנגנונים אימונולוגיים באלוטרנסרפלנטציה של כלי דם מרוכב.

השתלת גפה אחורית לצוואר הטרוטופית בעכבר: מודל סופר-מיקרוכירורגי של אלוטרנספלינצ'נציה מורכבת וסקולרית

פרוטוקול זה מציג טכניקת אנסטומוזה פשוטה מקצה לצד להשתלת לב צוואר הרחם בעכברים, ומספק מודל חזק וניתן לשחזור ללימוד אימונולוגיה של השתלות.

השתלת לב עכבר הטרוטופית צווארית באמצעות טכניקת אנסטומוזה מקצה לצד לחקר אימונולוגיה של השתלות

למד השתלת טחול וסקולרית הטרוטופית בעכברים כדי לחקור דינמיקת תאי הטחול במחלות דלקתיות ובחסינות להשתלות. פרוטוקול זה מאפשר מעקב אחר גורל ותפקוד תאים לאורך זמן.

מודל של העכבר של ואסיאני הטרוגרההשתלת הטחול ללמוד תא הטחול ביולוגיה וחסינות להשתלות

גלה סרטונים נוספים