Name: מודל ארנב של מחלה מימית לקויה עין יבש הנגרמת על ידי Concanavalin זריקה לתוך בלוטות לקטמאל: יישום ללימודי יעילות הסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: חקור מודל ארנב לאמידת יעילות תרופות בעין יבש באמצעות זריקת Concanavalin A מודרכת אולטרסאונד לבלוטות הדמע. שיטה זו מאפשרת מחקר מכני הדלקת ופיזיולוגיית מחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כל לימודי החיות הושלמו בהתאם ובציות לכל ההנחיות הרגולטוריות והמוסדיים הרלוונטיות. כל המחקרים אושרו על ידי מועצת הסקירה המוסדית של אוניברסיטת סטוני ברוק והופיעה בהתאם להצהרת ARVO לשימוש בעלי חיים במחקר אופטלמולוגי וחזון.
מחקרים אלה היו נתמכים בחלקו על ידי מענק הזדמנויות מחקר הצעות מבית הספר לרפואה של אוניברסיטת אבן ברוק (גרנט מספר 1149271-1-82502) ומענק מחקר של פרמצבטיקה, Inc., סיטאוקט, ניו יורק. המחברים מודים ליקלה מקטרנן. לתמיכה בעריכה

<ol><li>Paulsen, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+in+the+Beaver+Dam+Offspring+Study%3A+prevalence%2C+risk+factors%2C+and+health-related+quality+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Dry eye in the Beaver Dam Offspring Study: prevalence, risk factors, and health-related quality of life.</a> American Journal of Ophthalmology. 157 (4), 799-806 (2014).</li>
<li>Vehof, J., Kozareva, D., Hysi, P. G., Hammond, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+risk+factors+of+dry+eye+disease+in+a+British+female+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Prevalence and risk factors of dry eye disease in a British female cohort.</a> British Journal of Ophthalmology. 98 (12), 1712-1717 (2014).</li>
<li>Tan, L. L., Morgan, P., Cai, Z. Q., Straughan, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+and+risk+factors+for+symptomatic+dry+eye+disease+in+Singapore%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Optometry%22%5BJournal%5D)">Prevalence of and risk factors for symptomatic dry eye disease in Singapore.</a> Clinical and Experimental Optometry. 98 (1), 45-53 (2015).</li>
<li>Craig, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+Report+Executive+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II Report Executive Summary.</a> The Ocular Surface. 15 (4), 802-812 (2017).</li>
<li>Baudouin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+impact+of+inflammation+in+dry+eye+disease%3A+proceedings+of+the+ODISSEY+group+meeting%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica+%28Copenhagen%29%22%5BJournal%5D)">Clinical impact of inflammation in dry eye disease: proceedings of the ODISSEY group meeting.</a> Acta Ophthalmologica (Copenhagen). 96 (2), 111-119 (2018).</li>
<li>Calonge, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+disease+as+an+inflammatory+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Ocular+Immunology+and+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Dry eye disease as an inflammatory disorder.</a> Ocular Immunology and Inflammation. 18 (4), 244-253 (2010).</li>
<li>Pflugfelder, S. C., de Paiva, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Pathophysiology+of+Dry+Eye+Disease%3A+What+We+Know+and+Future+Directions+for+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">The Pathophysiology of Dry Eye Disease: What We Know and Future Directions for Research.</a> Ophthalmology. 124 (11S), S4-S13 (2017).</li>
<li>Buckley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+and+management+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28London%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Assessment and management of dry eye disease.</a> Eye (London, England). 32 (2), 200-203 (2018).</li>
<li>Clayton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+Eye%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dry Eye.</a> New England Journal of Medicine. 378 (23), 2212-2223 (2018).</li>
<li>Barabino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Archivos+de+la+Sociedad+Espa%C3%B1ola+de+Oftalmolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">Animal models of dry eye.</a> Archivos de la Sociedad Española de Oftalmología. 80 (12), 695-696 (2005).</li>
<li>Stern, M. E., Pflugfelder, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+We+Have+Learned+From+Animal+Models+of+Dry+Eye%5BTitle%5D)+AND+%22International+Ophthalmology+Clinics%22%5BJournal%5D)">What We Have Learned From Animal Models of Dry Eye.</a> International Ophthalmology Clinics. 57 (2), 109-118 (2017).</li>
<li>Chen, Z. Y., Liang, Q. F., Yu, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+rabbit+model+for+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Establishment of a rabbit model for keratoconjunctivitis sicca.</a> Cornea. 30 (9), 1024-1029 (2011).</li>
<li>Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Gray, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+rabbit+model+for+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A new rabbit model for keratoconjunctivitis sicca.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 28 (2), 225-228 (1987).</li>
<li>Guo, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+lacrimal-lymphoid+mixed-cell+reactions+induce+dacryoadenitis+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Experimenal+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Autologous lacrimal-lymphoid mixed-cell reactions induce dacryoadenitis in rabbits.</a> Experimenal Eye Research. 71 (1), 23-31 (2000).</li>
<li>Burgalassi, S., Panichi, L., Chetoni, P., Saettone, M. F., Boldrini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+simple+dry+eye+model+in+the+albino+rabbit+and+evaluation+of+some+tear+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a simple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tear substitutes.</a> Ophthalmic Research. 31 (3), 229-235 (1999).</li>
<li>Xiong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+dry+eye+model+induced+by+topical+medication+of+a+preservative+benzalkonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A rabbit dry eye model induced by topical medication of a preservative benzalkonium chloride.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 49 (5), 1850-1856 (2008).</li>
<li>Heymann, F., Hamesch, K., Weiskirchen, R., Tacke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+concanavalin+A+model+of+acute+hepatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">The concanavalin A model of acute hepatitis in mice.</a> Lab Animal. 49 (1 Suppl), 12-20 (2015).</li>
<li>Nagelhout, T. J., Gamache, D. A., Roberts, L., Brady, M. T., Yanni, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+tear+film+integrity+and+inhibition+of+corneal+injury+by+dexamethasone+in+a+rabbit+model+of+lacrimal+gland+inflammation-induced+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ocular+Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Preservation of tear film integrity and inhibition of corneal injury by dexamethasone in a rabbit model of lacrimal gland inflammation-induced dry eye.</a> Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 21 (2), 139-148 (2005).</li>
<li>Honkanen, R. A., Huang, L., Xie, G., Rigas, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphosulindac+is+efficacious+in+an+improved+concanavalin+A-based+rabbit+model+of+chronic+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Phosphosulindac is efficacious in an improved concanavalin A-based rabbit model of chronic dry eye disease.</a> Translational Research. 198, 58-72 (2018).</li>
<li>Huang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+phospho-non-steroidal+anti-inflammatory+drugs%2C+OXT-328%2C+MDC-22+and+MDC-917%2C+inhibit+adjuvant-induced+arthritis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The novel phospho-non-steroidal anti-inflammatory drugs, OXT-328, MDC-22 and MDC-917, inhibit adjuvant-induced arthritis in rats.</a> British Journal of Pharmacology. 162 (7), 1521-1533 (2011).</li>
<li>Mattheolabakis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topically+applied+phospho-sulindac+hydrogel+is+efficacious+and+safe+in+the+treatment+of+experimental+arthritis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Topically applied phospho-sulindac hydrogel is efficacious and safe in the treatment of experimental arthritis in rats.</a> Pharmaceutical Research. 30 (6), 1471-1482 (2013).</li>
<li>Osmalek, T., Froelich, A., Tasarek, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+gellan+gum+in+pharmacy+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Application of gellan gum in pharmacy and medicine.</a> International Journal of Pharmaceutics. 466 (1-2), 328-340 (2014).</li>
<li>Lemp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Report+of+the+National+Eye+Institute%2FIndustry+workshop+on+Clinical+Trials+in+Dry+Eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Lens+Association+of+Ophthalmologists+Journal%22%5BJournal%5D)">Report of the National Eye Institute/Industry workshop on Clinical Trials in Dry Eyes.</a> Contact Lens Association of Ophthalmologists Journal. 21 (4), 221-232 (1995).</li>
<li>Dal Piaz, F., Braca, A., Belisario, M. A., De Tommasi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioredoxin+system+modulation+by+plant+and+fungal+secondary+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Thioredoxin system modulation by plant and fungal secondary metabolites.</a> Current Medicinal Chemistry. 17 (5), 479-494 (2010).</li>
<li>Davis, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Anatomy+and+Histology+of+the+Eye+and+Orbit+of+the+Rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+American+Ophthalmological+Society%22%5BJournal%5D)">The Anatomy and Histology of the Eye and Orbit of the Rabbit.</a> Transactions of the American Ophthalmological Society. 27, 402-441 (1929).</li>
<li>Lima, L., Lange, R. R., Turner-Giannico, A., Montiani-Ferreira, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+standardized+endodontic+paper+point+tear+test+in+New+Zealand+white+rabbits+and+comparison+between+corneal+sensitivity+followed+tear+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of standardized endodontic paper point tear test in New Zealand white rabbits and comparison between corneal sensitivity followed tear tests.</a> Veterinary Ophthalmology. 18 (Suppl 1), 119-124 (2015).</li>
<li>Zheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+efficacy+of+fibroblast+growth+factor+10+in+a+rabbit+model+of+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Report%22%5BJournal%5D)">Therapeutic efficacy of fibroblast growth factor 10 in a rabbit model of dry eye.</a> Mol Med Report. 12 (5), 7344-7350 (2015).</li>
<li>Wiechmann, A. F., Summers, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+rhythms+in+the+eye%3A+the+physiological+significance+of+melatonin+receptors+in+ocular+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Circadian rhythms in the eye: the physiological significance of melatonin receptors in ocular tissues.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 27 (2), 137-160 (2008).</li>
</ol>

המחברים לא מצהירים על אינטרסים מתחרים פרט ל-BR שיש לו מעמד השקעות בפרמצבטיקה, Inc. ו-Api Therapeutics, LLC; ו LH, עובד של תרופות מדיקה, Inc. עם מיקום ההון Api Therapeutics, LLC.

ארנבים הם מאוד אטרקטיביים למחקר של DED. הקרנית שלהם לחמית יש אזור פני השטח קרוב יותר לזה של בני אדם לעומת עכברים וחולדות; שלהם המשלים של התרופה מטבריזציה של אנזימים כגון מוחק, ו היסטולוגיה של בלוטות הlacrimal שלהם דומים לאלה של בני אדם, ועיניהם הם גדולים מספיק למחקרים הפרמקוקינטיים אינפורמטיבי. לעומת חזירים וקופים, שאיתם הם חולקים תכונות דומות, הם עולים פחות והמניפולציה הניסיונית שלהם קלה יותר. אם מחקרים מכניסטיים הם שקל, חיסרון יחסי של הארנב, לעומת עכברים, הוא כי פחות ריאגנטים (למשל, נוגדנים חד שבטיים) זמינים. מצד שני, הארנב הוא הרבה יותר מעולה על עכברים עבור מחקרים פרמקוקינטיים והפצה משום שרקמות בודדות הן בקלות לגזור ובמידה מספקת עבור עבודה אנליטית, הימנעות "מדגם הצירוף."
פרמטר כללי קריטי הוא תקופת הסתגלות של הארנבים. בעלי החיים נשלחים מהספק בתנאים שלעיתים קרובות אינם מבטיחים סביבת תחבורה של הטמפרטורה או הלחות המתאימים. ייתכן שחיות מסוימות כבר פיתחו עין יבשה עם הגעתם. מומלץ להתרגל לתקופה של שבועיים. חשוב באותה מידה הוא תשומת לב קפדנית הלחות והטמפרטורה של החלל שבו ארנבות המחקר שוכנו vivarium. סטיות בכל מצב יכול לגרום וריאציות ענק במצב העין שלהם. יש לגבות מכשירי האדים ולנקות את האדים בהישג יד. אם המערכת המרכזית נכשלת, פעל במהירות כדי לשחזר את לחות הסביבה באמצעות ציוד הגיבוי. זכרו שהתפתחויות כה מצערות נפוצות יותר בחודשי הקיץ. שלושת השלבים הקריטיים ביותר, עם זאת, עבור בהצלחה לגרימת DED בארנבים הם: 1) השימוש מיומנת של הדמיה בארה ב כדי לזהות את ILG ולהפנות ולאשר הזרקה של קון A; 2) הבטחת הזרקה של ה-ILG והן את שני החלקים של SLG; ו-3) אמין ומתוכע באופן שאומר את הפרמטרים של DED.
פיתוח המיומנות הניסיונית הנדרשת אינה טריוויאלית, אך לא צריך להרתיע כל חוקר רציני. צפה שעקומת הלמידה תושלם בתוך חמש איטראציות. מערכת הדמיה של ארה ב באיכות סבירה היא חיונית. הכרה של סימנים אנטומיים על ידי ארה ב חשוב, לכן, החוקר צריך לבדוק את אנטומיה הארנב. תיאור מצוין של אנטומיה של הארנב על ידי דיוויס25, קלאסי, יכול להיות מועיל מאוד. גם לזכור את הווריאציה בגודל של ILG. הסקנה לכך היא כי ההצלחה של קון A חייב תמיד להיות מאושר עם המשך הדמיה. וריאציות בתגובה קון A בקבוצה של ארנבים הוא בדרך כלל בשל טכניקת ההזרקה (הזרקה מוצלחת או באופן חלקי מוצלח) או כדי להתעלם מהיכולת של רקמות בלוטת לקטמאל שיורית כדי לפצות על ייצור יתר של דמעות. לאלו המעוניינים לשלוט בטכניקת ההזרקה, הזרקת מתילן כחול ואחריו בקשה לניתוח אנאטומי יכול להועיל; הדמיה מושגת אם הוא מגיע לבלוטת הלקמל או נשפך על הרקמות השכנות. עד כה, שיטת הזרקה זו בוצעה על 270 פעמים על-ידי המחברים ללא סיבוך אחד.
לומר את חמשת הפרמטרים של DED הציג לעיל יכול להיות מסובך כמו הנחישות שלהם בפרקטיקה הקלינית. אף על פי שווריאציות מעגליות עדיין לא תועדו רשמית באף אחת מהן, יש מספיק ראיות ברקע לתופעות כאלה בעין28 שהן צריכות להיות מועדות באותו זמן ביום (± 1 h), במיוחד כאשר החזרה על הספר מבוצעת ומושוות זה לזה. העקביות בביצוע מאמר זה חיונית. . צוות של שניים נדרש ארבעה חוקרים או יותר באותו חדר השתתפות בחני יכול להיות מפריעה, בהתחשב בכך כמה צעדים דורשים תזמון קפדני. תיעוד מתאים לצילום באיכות גבוהה, שצוין במקום, חשוב.
מודל זה מתאים באופן אידיאלי ללימודי פיתוח סמים. שליטה של מודל בעלי חיים וטכניקות שיטת הביטחון מובטחת מצוינות מעולה19 של יעילות ומחקרי בטיחות.
זוהי גישה ניסיונית רבת עוצמה משום שהיא מבטלת את השינויים המייסדים של דגמים קודמים, יש לחזק את המודל של בעלי חיים ומתוקננת למעשה מתוך לומר את חמשת הפרמטרים של DED. היישום המוצלח של מודל זה למחקר של סוכן מועמד טיפולית אישר את השירות המעשי שלה כמודל חיה אינפורמטיבי למחלה בצורך נואש של סוכנים חדשניים והבנה עמוקה יותר של הפתוגנזה שלה.

מחלת עיניים יבשות (DED) היא מצב כרוני עם שכיחות גבוהה ותחלואה1,2,3,4. דלקת ממלאת תפקיד מרכזי בפתוגנזה שלה5,6. הפתופסולוגיה של DED הוא המשכן כנובע או תחת הייצור או מעל אידוי של דמעות; הראשון ידוע גם בשם מימית לקויה7. תסמונת sjגרייגרן, הגורם הנרחב לחקור באופן מקיף של DED, משפיע בעיקר על בלוטות lacrimal (LGs) והוא דוגמה מרשימה של החשיבות שלהם בפתוגנזה של DED. DED מטופלים לעתים קרובות עם דמעות מלאכותיות המספקות הקלה זמנית, או עם ציקלוספורן או lifitegrast, שניהם מדכאים את הדלקת העינית. אף אחד הטיפולים הזמינים עבור DED הם אופטימליים, המחייב פיתוח של סוכנים חדשים8,9.
החיפוש אחר הסוכנים הטיפוליים החדשים ב-DED מושפע משלושה אתגרים עיקריים: חוסר היעד הdruggable מוכר, אשר עשוי להיות חמקמק בהינתן המורכבות הפתופסולוגית של DED; הצלעות של סוכנים מבטיחים; והעדר מודלים של בעלי חיים, אשר לכידה של תכונות מפתח של DED.
כמו ברוב המאמצים לפיתוח סמים, מודלים בעלי חיים אינפורמטיביים של DED הם כלי חקירה מכריע, על אף ההצהרה אקסיומתי כי לא מודל בעלי חיים לחלוטין לכידה של מחלה אנושית. עכבר, עכברוש, ומודלים ארנבת של DED הם הנפוצים ביותר בעוד כלבים ופרימטים משמשים לעתים רחוקות10,11. רוב מודלים של יותר 12 הארנב המפורסם דיווחו על תאריך ניסיון להפחית את ייצור הדמעות על ידי הסרת lgs או על ידי הרחקת הפונקציה שלהם12,13,14,15,16. גישות כאלה כוללות כריתה כירורגית של ILG; סגירת צינור הפרשות; והפגיעה בפונקציה LG על ידי הקרנה או הזרקה של אחד הבאים: לימפוציטים הופעל, mitogens, בוטולינום טוקסין, אטרופין, או benzalklonium. המגבלות המרכזיות של שיטות אלה הן חוסר העקביות שלהם ואת הדיכוי החלקי התדיר של ייצור הדמעה.
קונקאנאבאלין A (קון A), מקור הצמח, מהווה מערכות המשנה החזקות של תא T-cell, ושימש במודלים ניסיוניים של צהבת מדגם17 ו-18מודגש. המודל המקורי של ה-Con הראשון נמסר להציע יתרונות משמעותיים, כולל הפשטות היחסית שלה; תא דלקתי זרם ב-LGs, מחקה מחלות כגון של סג'וגרן; גירוי של ציטוקינים proinflammatory IL-1β, IL-8, ו TGF-β1; מופחתת בתפקוד הדמעה על ידי מדידת הסיווג מדמיע fluorescein ולשבור את הזמן (TBUT); ותגובתיות התרופה המוצגת לסטרואידים אנטי דלקתיות.
כאשר מיושם שיטה מבטיחה זו, בנוסף ליתרונותיה, זוהו מגבלות המחייב את התיקון הכולל והשיפורים הדרסטיים שלה. שלושה חסרונות קריטיים של השיטה מתועדים. ראשית, המודל היה חד; ה-DED המושרה נרגע לאחר כשבוע אחד. שנית, תגובת החיות. לא הייתה עקבית כפי שמתואר, ב "עיוור" זריקות הטרנסעורית LG הנחות (ILG), קון A נמסר רק באופן אקראי בלוטת ממוקדות. מחקר מפורט של האנטומיה של ILG גילה כי הגודל שלה יכול להשתנות ככל האפשר 4-קיפול19 ביצוע זריקות כאלה "פגע או להחמיץ" מאמצים. לבסוף, גם כאשר ILG הוזרק, LG מעולה (SLG) מפוצה לעתים קרובות עבור זרימת דמעה מופחתת, מה שהופך את המודל בעייתי.
מגבלות מפתח אלה התגברו על ידי החדרת שלושה שינויים לשיטה, יצירת דגם בעל חיים מעולה של DED. ראשית, ההזרקה של קון A לתוך ILG בוצעה תחת אולטרסאונד (ארה ב) הדרכה, להבטיח כי קון A נכנס בלוטת. הצלחת הזריקה אושרה על ידי קבלת תמונה שלאחר הזרקה של ארה ב, כפי שמוצג באיור 1. שנית, כדי להסיר את תרומת הפיצוי לקרוע של SLG, הן palpebral ומסלולית חלקים של בלוטה זו הוזרקו עם קון A. לבסוף, זה מודל אקוטי של DED הוסב לאחד כרוני על ידי זריקות חוזרות של קון A כל 7-10 ימים. המשך של 2 חודשים מושגת בקלות בארנבים אלה. הצלחת גישה זו הייתה מתועדת באופן מאוד מוצלח ב-19.
כפי שהוזכר כבר, יישום חשוב של מודלים בעלי חיים של DED הוא לקבוע את היעילות והבטיחות של סוכנים טיפוליים מועמד. השירות של מודל זה הוכח על ידי המחקר של פוספהוזולינדאק (oxt-328), מולקולה הרומן אנטי דלקתי קטן20, 21 מנוהל כמו טיפות עיניים. יעילותה הוכח מבוסס על פאנל של פרמטרים DED19. הפשטות היחסית והאופי האינפורמטיבי של מודל זה מותרים גם זה לצד זה השוואה של פוספוסלינדאק לשני תרופות ה-FDA אישר עבור DED, cyclosporine ו lifitegrast, הדגמת עליונות חזקה קדם קלינית שלה.

<table><tbody><tr><td>עדשת מאקרו 100 מ"מ</td><td>Canon EF 100 מ"מ f/2.8L IS USM</td><td>3554B002</td><td></td></tr><tr><td>26 מחטים (5/8)</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ</td><td>305115</td><td>מחטים להזרקת ConA לבלוטות הדמעות</td></tr><tr><td>27 מחטים מד (5/8)</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ</td><td>305921</td><td>מחטים להזרקת ConA לבלוטות הדמעות</td></tr><tr><td>Aceproinj (acepromazine)</td><td>הנרי שיין בריאות בעלי חיים, דבלין, אוהיו</td><td>NDC11695-0079-8</td><td>0.1 מ"ל/ק"ג הזרקה תת עורית להרגעת ארנב</td></tr><tr><td>וופורייזר הרדמה</td><td>VetEquip, פלזנטון, קליפורניה</td><td>פריט #911103</td><td></td></tr><tr><td>בישוף הרמון מלקחיים</td><td>באוש ולומב (סטורץ), ברידג'ווטר, ניו ג'רזי</td><td>E1500-C</td><td>מלקחיים רקמות</td></tr><tr><td>קליפר</td><td>באוש ולומב (סטורץ), ברידג'ווטר, ניו ג'רזי</td><td>E-2404</td><td>קליפר המשמש למדידת אורך המחט במהלך הזרקת ConA</td></tr><tr><td>Concanavalin A</td><td>Sigma, סנט לואיס, MO</td><td>C2010</td><td>הכינו 5 מ"ג/מ"ל ב-PBS להזרקה לבלוטות דמעות ארנב</td></tr><tr><td>מצלמת DSLR</td><td>Canon EOS 7D DSLR</td><td>3814B004</td><td>מצלמת רפלקס דיגיטלית עם עדשה אחת</td></tr><tr><td>פלואורסצאין</td><td>AKRON, Lake Forest, IL</td><td>NDC17478-253</td><td>יש לדלל ל-0.2% עם PBS למדידת TBUT</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>הנרי שיין, מלוויל, ניו יורק</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>ערכת לקטופרין ELISA</td><td>MyBiosource, סן דייגו, קליפורניה</td><td>MBS032049</td><td>למדוד את רמת הלקטופרין ללידוקאין</td></tr><tr><td></td><td>סיגמה, סנט לואיס, MO</td><td>L5647</td><td>1% ב- PBS לחומר הרדמה</td></tr><tr><td>מאקרו / פלאש טבעת</td><td>Canon Macro Ring Lite MR-14EXII</td><td>9389B002AA</td><td></td></tr><tr><td>טיפים לאוסמולריות</td><td>TearLab Corp., סן דייגו, קליפורניה</td><td>#100003 REV R</td><td>מדידת אוסמולריות דמעות</td></tr><tr><td>PBS (מי מלח חוצץ פוספט)</td><td>Mediatech, Inc. Manassas, VA</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>ארנב, ניו זילנד לבן או הולנדי חגור (כמתואר בטקסט)</td><td>מעבדות צ'ארלס ריבר, וולת'אם, MA</td><td>2-3 ק"ג</td><td>חיות מחקר</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Amcon Laboratories Inc., St. Louis, MO</td><td>NDC51801-004-40</td><td>1% ב-PBS, מכתים את פני העין</td></tr><tr><td>שירמר רצועות</td><td>מוצרי Eaglevision, Katena. דנוויל, ניו ג'רזי</td><td>AX13613</td><td>למדוד ייצור קרעים</td></tr><tr><td>זכוכית כירורגית +1.50</td><td>עיצובים לראייה, בוהמיה, ניו יורק</td><td>פריט מיוחד</td><td>לספק פאר של משטח העין תוך התבוננות בפירוק דמעות וביצוע זריקות Concanavalin A.</td></tr><tr><td>TearLab אוסמומטר</td><td>TearLab Corp., סן דייגו, קליפורניה</td><td>דגם #200000W REV A</td><td>מדידת אוסמולריות דמעות</td></tr><tr><td>בדיקת אולטרסאונד</td><td>VisualSonics טורונטו, Ont</td><td>MX 550 S</td><td>Untrasonography-guide Con A הזרקה לבלוטת דמעות תחתונה</td></tr></tbody></table>

מודל ארנב של מחלה מימית לקויה עין יבש הנגרמת על ידי concanavalin זריקה לתוך בלוטות לקטמאל: יישום ללימודי יעילות הסמים

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

מחלות עיניים יבשות (DED), מחלה דלקתית רב עצרת של המשטח העינית, משפיע על 1 ב 6 בני אדם ברחבי העולם עם השלכות מדהימות על איכות החיים והבריאות עלויות. העדר מודלים אינפורמטיביים בעלי חיים כי לכידה התכונות העיקריות שלה מעכבת את החיפוש אחר סוכנים טיפוליים חדשים עבור DED. הדגמים הזמינים בעלי חיים בעלי מוגבלות ויעילות מוגבלת. מודל מוצג כאן שבו DED הוא המושרה על ידי הזרקת concanavalin מיכל A (קון A) לתוך הבלוטות מסלולית של ארנבים. היבטים חדשניים של מודל זה הם השימוש אולטרסאונד (ארה ב) הדרכה כדי להבטיח הזרקה אופטימלית ולהפוך של קון A לתוך בלוטת לקטמל הנחות; הזרקה של קון A לתוך כל בלוטות לקטמאל מסלולית המגביל את ייצור הפיצוי של דמעות; ושימוש בזריקות חוזרות תקופתיות של קון א ההאריך את מצב הפעולה של DED. מודגש והתגובה שלו לסוכני הבדיקה מנוטרים עם פאנל של פרמטרים העריכו את הייצור דמעה, את היציבות של הסרט דמעה, ואת מעמדם של הקרנית ואת רירית הלחמית. הם כוללים מאוסמלי דמעה, זמן הפסקה מדמיע, מבחן הדמעות של שיימר, מכתים בנגלי, ולקרוע רמות לקטופרין. האינדוקציה של DED וניטור הפרמטרים שלה מתוארים בפרוטרוט. מודל זה הוא פשוט, עמיד, להיות מ, ואינפורמטיבי. מודל זה בעלי חיים מתאים לחקר הפיזיולוגיה דמעה של הפתופסולוגיה של DED, כמו גם להערכת היעילות והבטיחות של סוכני המועמדים לטיפול ב-DED.

Con הזריקות המושרה תגובה דלקתית חזקה בלוטות הלקמל המאופיינת לימפוציטית צפופה חדירה (איור 13), מלווה בייצור דמעה ירד. כל פרמטרי הדמעה שונו במידה ניכרת (טבלה 1 ושולחן 2). בנוסף, רמות לקטופרין שדוכאו (שליטה = 3.1 ± 0.45 vs. Con A מוזרק = 2.7 ± 0.02 ng/mg חלבון (כלומר ± SEM); p &lt; 0.03). התוצאה הסופית היתה הקרנית בסיכון האפיתל ואת הלחמית, המעידים על ידי מוגברת רוז בנגלי מכתים (איור 6).
הזרקה של שלושת הרקמות המסלולית LG הפיק מדינה עקבית ואחידה בניגוד למדינות שהושגו על ידי שיטות קודמות18,27. התורמים המרכזיים לתוצאה זו היו הזרקה של ה-ILG וההזרקה של OSLG. טבלה 1 מסכמת את התוצאות הבולטות של שיטה זו. כל השינויים תואמים ל-DED בצורה חמורה.
קבוצה אחת של הזרקות Con A מייצרת DED מתמשך כשבוע 1; כל הפרמטרים הקליניים לנרמל לפי יום 10 (טבלה 2). שבוע סדרתי הזרקת כשבוע בנפרד הרחבת המשך של DED בהתאם. לדוגמה, הסט השני של הזריקות Con A ביום 7 מתחזק במשך שבועיים וכדומה. לאחר כ 5 סטים של זריקות, המדינה DED לעתים קרובות הופך קבוע ללא צורך בזריקות נוספות.
כאשר הארנבים עם Con A-המושרה DED טופלו עם הסוכן הרומן פוספוסוינדאק, זה דיכא במידה ניכרת את המחלה. לדוגמה, לאחר טיפול של שבוע עם זה הסוכן TBUT גדל באופן מוגדל לעומת בעלי חיים שטופלו ברכב (43.6 ± 4.0 vs. 12.2 ± 2.8 s; p &lt; 0.001; מתכוון ± SEM בהתאמה, עבור ערכים אלה והבאים) בעוד האוסמלריות דמעה היה מנורמל (294 ± 4.6 vs. 311 ± 2.0 mOsm Sm מכונאי, פוספופולילינדאק ירד רמות של שני interleukins קריטי, IL-1β (8.4 ± 1.2 vs 21.2 ± 6.6 pg/mg חלבון; p &lt; 0.03) ו-IL-8 (4.9 ± 1.7 vs. 13.5 ± 5.0 pg/mg חלבון; p &lt; 0.05)19.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig1a.jpg"> איור 1: תמונת אולטרסאונד של בלוטת התחתית לקטמאל. הלוח העליון: ILG כפי שהוא נע עמוק יותר במסלול לשכב מתחת לקשת הזיגובטית. הקו המקווקו מייצג את השורה על העור שעליה מטאטאת הבדיקה הארה ב. לוחות הביניים: בזמן שעבודת היד נסחפת על הקו הזה, הבודק מחפש אובדן של הד עצם הזיגותני שנמצא בתמונה השמאלית (חץ) ונעלם מימין. לוחות תחתונים: תמונות של ILG שצולמו לפני (משמאל) ואחרי (ימין) הזרקה של קון a. פיתוח של מרחב סיסטיק גדול בתוך הבלוטה מאשרת מסירה נכונה. הודפסה מודפס בהרשאה19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig1alarge.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig02.jpg"> איור 2: הרגעה למסיכת גז. התמונה הזאת מראה את מסיכת הגז. שמספקת הרדמה מתונה עם איזוofלאנה <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig3a.jpg"> איור 3: הסרת הממברנה הניגמית. (א) הזרקת לידוקאין/אפינפרין. (ב) חיתוך של קרום הניקגטינג בבסיסו עם מספריים של ווסטקוט. (ג) המשטח העינית דמיינו בקלות רבה יותר לאחר הסרת הקרום ניקוטיטינג. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig03.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig4a.jpg"> איור 4: מדידת זמן הפרידה מדמעה. (א) מראה ממדים ירוק הסרט דמעה של משטח הקרנית תחת אור כחול מיד לאחר היישום של טיפות fluorescein. (ב) משטח הקרנית שכבר עבר מסומן לשבור את העדות על ידי עיגולים כהים מרובים פסים ליניארי בתוך fluorescein. זמן ההפסקה נרשם ברגע שהנקודה או הקו האפל הראשון מתפתח. שני עיגולים כחולים בהירים הם השתקפויות של מקור האור מתוך הקרנית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig04large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig5a.jpg"> איור 5: מבחן הדמעות של שמימר. (A) את המיקום הנכון של הספוג weck-Cel ב הנמוך ביותר כדי להסיר את כל פתרון לידוקאין אקטואלי ודמעות הבסיסית. על ידי הצבת הקצה האחורי של ספוג משולש מתחת לשולי המכסה התחתון, ניתן לשמור על טכניקה אחידה מאוד כדי לייבש את המשטח העינית לפני הצבת רצועות הדמעות. (ב) רצועת דמעה הממוקמת כראוי באמצע המיקום של המכסה התחתון בין הגלובוס והמכסה התחתון (palpebral לחמית). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig05large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig06.jpg"> איור 6: רוז כתמים בנגלי. עליונים: . תמונות של משטח הקרניות שמאל: אין כתמים בנגלי ורדים נוכח לפני הטיפול עם קון A. מימין: לפזר כתמים הקרנית ולחאך הוא נראה ברביע האף העליון שלאחר ההזרקה (הימנית העליונה). נמוך יותר: התרשמות מהלחמית מהבר העליון לחמית. שמאל: בתאי גביע רבים נמצאים לפני הטיפול. מימין: תאים אפיתל הם נוכחים אבל בתאי גביע נעדרים לאחר הטיפול. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig06large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig7a.jpg"> איור 7: הכנת הארנב לקונקנאלין. זריקות (A) מזמרה קטנה משמשים כדי להסיר פרווה, המאפשר הדמיה קלה יותר של ציוני דרך לזהות את הבלוטה העליונה מסלולית לקטמאל. (ב) משמש להסרת שיער שנשאר לאחר ההטיה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig07.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig8a.jpg"> איור 8: הזרקת של בלוטת palpebral lacrimal. (א) בלוטת palpebral lacrimal, המופיעה כגובה בולבוסי בחלק הזמני האחורי של המכסה העליון. דמעות נראים הזרמת מהמשטח של בלוטה זו לאחר החלת טיפה של 2% fluorescein. (ב) בלוטת palpebral lacrimal מוזרק בזמן הארנב הוא מקבל הרגעה מתונה. חוקר אחד מופרע הזה בו את העפעף, מייעל את החשיפה של בלוטת, ומאבטח את המסיכה בעוד החוקר השני מזריק את הבלוטה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig08large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig09.jpg"> איור 9: לוקליזציה של בלוטת המלך העליונה מסלולית. שינויים בקווי המתאר של העור מציינים את המיקום של OSLG כפי שהוא בולט דרך incisure האחורי. לחץ המדיאלי מתחלפים על הגלובוס (חץ גדול) גורם בלוטת מסלולית מעולה כדי לשגות, אשר נראה כגובה קטן בעור. גובה זה יגדל בגודל בכל פעם שהלחץ מוחל (חיצים קטנים). המיקום של בלוטה זו הוא בדרך כלל בקנה אחד עם השפה הסלולית האחורי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig09large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig10a.jpg"> איור 10: הזרקת הבלוטה העליונה מסלולית. (א) יישום של לחץ עדין על הגולגולת עם מלקחיים בעלי שיניים משובחות באזור אשר הפרו כמו באיור 9. פתיחה דקה בגולגולת. יכולה לpalpated השארת סימן קטן עם מלקחיים מאוד עוזר מיקום המחט במהלך ההזרקה. (ב) המחט מוכנס ניצב דרך incisure. אם מניחים שגוי, המעבר שלו נעצר על-ידי הגולגולת הגרמית. (ג) המחט היא בעמדה הסופי בזווית לכיוון canthus לרוחב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig10.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 11" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig11a.jpg"> איור 11: לוקליזציה של בלוטת התחתית לקטמאל. (א) הגדולה של החלק השטייתי של ilg לראות דרך המכסה התחתון. סימן העט הקטן מציין את המיקום התחתון של הבלוטה. הקו האנכי, מתחת לימבוס האף, מציין את המיקום המשוער שבו מעברי ה-ILG למצב עמוק יותר בתוך המסלול ומשמש כהפניה חזותית לארה ב. (ב) לנו יד-פיסת מטאטא על פני השטח של הקו האנכי; צג ארה ב יראה איפה העצם הזיגובטית מסתיימת, שם מעברים ILG והיכן הזרקת Con A יש להינתן ("אתר הזרקה"). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig11large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 12" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig12.jpg"> איור 12: הזרקת הבלוטה הנחותה. הזרקת ה-ILG מתבצעת במיקום שזוהה על ידי ארה ב. עומק ההזרקה מחושב כמתואר בטקסט (שלב 5.8.6). קליפרס (ראה מאחורי המחט) להבטיח כי המחט ממוקם בעומק הנכון לפני ההזרקה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig12large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 13" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59631/59631fig13.jpg"> איור 13: היסטולוגיה של בלוטות הלקמל. הרקמה חלקים של בלוטת הנחותים לקטמאל רגיל עם מבנה tubulo אופייני מכתשי (א) ולאחר ההזרקה של קון a (ב), מראה לימפוציטית ל, מסומן לחדור מבנה של המבנה. מחלחל דלקתי דומה נראים בלוטות לקטמאל מעולה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59631/59631fig13large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td rowspan="3">שיטת הזרקה</td>
			<td colspan="2">TBUT שניה</td>
			<td colspan="2">אוסמליות קריעה, Osm/L</td>
			<td colspan="2">STT, ממ</td>
		</tr>
<tr>
<td>בסיסית</td>
			<td>לאחר הזרקה</td>
			<td>בסיסית</td>
			<td>לאחר הזרקה</td>
			<td>בסיסית</td>
			<td>לאחר הזרקה</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">פירושו ± SEM,% שינוי</td>
		</tr>
<tr>
<td>ILG ללא הדרכה בארה ב</td>
			<td rowspan="3">58.5 ± 1.5</td>
			<td>44.5 ± 7.7</td>
			<td rowspan="3">297 ± 4.9</td>
			<td>300 ± 3.8</td>
			<td rowspan="3">15.2 ± 0.9</td>
			<td>12.9 ± 2.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>% שינוי</td>
			<td>23</td>
			<td>1</td>
			<td>15</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>p = 0.05</td>
			<td>p = 0.36</td>
			<td>p = 0.21</td>
		</tr>
<tr>
<td>US-מונחה הדרכה + PSLG</td>
			<td rowspan="3">59.4 ± 0.6</td>
			<td>11.4 ± 4.2</td>
			<td rowspan="3">296 ± 4.7</td>
			<td>326 ± 3.7</td>
			<td rowspan="3">15.1 ± 1.3</td>
			<td>10.7 ± 1.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>% שינוי</td>
			<td>-81%</td>
			<td>10</td>
			<td>29</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>p &lt; 0.0001</td>
			<td>p &lt; 0.0001</td>
			<td>p &lt; 0.03</td>
		</tr>
<tr>
<td>US-ILG מונחה + PSLG + OSLG</td>
			<td rowspan="3">60 ± 0.0</td>
			<td>6.2 ± 1.3</td>
			<td rowspan="3">299 ± 2.9</td>
			<td>309 ± 2.8</td>
			<td rowspan="3">14.6 ± 0.9</td>
			<td>9.9 ± 1.3</td>
		</tr>
<tr>
<td>% שינוי</td>
			<td>-90%</td>
			<td>3</td>
			<td>-32%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>p &lt; 0.0001</td>
			<td>p &lt; 0.008</td>
			<td>p &lt; 0.002</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="7">כל הערכים נמדדו ביום 6 בעקבות זריקה אחת של קון A לתוך הבלוטות המפורטות. . כל ההשוואות נעשו לבסיס * ILG, הנחותה בלוטת הנפילה; PSLG, palpebral חלק של בלוטת מעולה לקטמאל; OSLG, חלק מסלולית של בלוטת מעולה לקטמאל; . אנחנו, אולטרה סאונד</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: אפקט של טכניקת הזרקה ומספר אתרי הזרקה על חומרת העין יבש.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td rowspan="2"></td>
			<td rowspan="2">בסיסית</td>
			<td>. היום השישי</td>
			<td>. היום ה -13</td>
			<td>. היום ה -21</td>
		</tr>
<tr>
<td>1 הזרקה</td>
			<td>2 זריקות המשך</td>
			<td>3 הזריקות</td>
		</tr>
<tr>
<td>TBUT שניה</td>
			<td rowspan="3">58.5 ± 1.5</td>
			<td>44.5 ± 7.7</td>
			<td>29.2 ± 7.8</td>
			<td>12.8 ± 3.9</td>
		</tr>
<tr>
<td>% שינוי</td>
			<td>24</td>
			<td>-50%</td>
			<td>-78%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>p = 0.17</td>
			<td>p = 0.001</td>
			<td>p &lt; 0.0001</td>
		</tr>
<tr>
<td>TOsm, Osm/L</td>
			<td rowspan="3">297 ± 4.9</td>
			<td>300 ± 3.9</td>
			<td>308 ± 4.9</td>
			<td>313 ± 2.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>% שינוי</td>
			<td>1</td>
			<td>4</td>
			<td>5%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>p = 0.36</td>
			<td>p = 0.04</td>
			<td>p = 0.003</td>
		</tr>
<tr>
<td>STT, ממ</td>
			<td rowspan="3">15.2 ± 0.9</td>
			<td>9.3 ± 1.6</td>
			<td>12.9 ± 1.6</td>
			<td>7.4 ± 1.1</td>
		</tr>
<tr>
<td>% שינוי</td>
			<td>-39%</td>
			<td>15</td>
			<td>-51%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>p = 0.17</td>
			<td>p = 0.13</td>
			<td>p = 0.008</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">. השוואות נעשו לבסיס</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 2: ההשפעה של הזרקת קון A חוזרות לתוך ILG במשך של DED.

מאמר זה מתאר את ההתפתחות של שיטה לגרום למחלת עיניים חריפה או כרונית בארנבים על ידי הזרקת concanavalin A לכל החלקים של מערכת בלוטת מסלולית לקטמאל. שיטה זו, מעולה לאלה שכבר דיווחו, יוצר מודל מותאם, יציב של עין יבשה מתאים לחקר של סוכני תרופתי.

מודל ארנב של מחלה מימית לקויה עין יבש הנגרמת על ידי Concanavalin זריקה לתוך בלוטות לקטמאל: יישום ללימודי יעילות הסמים

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...

השיטה שלנו מספקת את המודל החייתי האמין החסר של מחלת עיניים יבשה אשר יכול להיות חריף או כרוני הודות לשיטה שלנו להזריק את כל בלוטות lacrimal וזריקות חוזרות. טכניקה זו מספקת באופן אמין Concanavalin A בלוטת הדמעות נחות באמצעות הדרכה אולטרסאונד לבלוטות של גדלים משתנים נרחבים עד בלוטת lacrimal מעולה מה שהופך שיטה זו גישה מלאה. מודל זה מספק אמצעים פשוטים, ממוטבים ולא כירורגיים כדי לגרום למחלת עיניים יבשה לקויה מים.זה מתאים היטב ללמוד יעילות סמים ופתופיזיולוגיה של מחלות. זיהוי חתך אחורי וניצול לוקליזציה אולטרסאונד יכול להיות מאתגר בהתחלה. הסרת כל הפרווה היא קריטית כדי לסייע לוקליזציה אולטרסאונד עבור שני שלבים אלה.הדגמת ההליך תהיה וואי הואנג, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה שלי. לאחר אישור הרגעה קלה על ידי התבוננות בתנוחת ראש רגועה עם אונות האוזן כבר לא זקוף לחלוטין, להשתמש micropipette להחיל 25 microliters של לידוקאין ללא חומרים משמרים על העין הראשונה ולהמקם ספקולום מכסה חוט גמיש בין העפעפיים. באמצעות מדחפים 0.3, לתפוס את קרום nictating בשיאו ולהרחיב אותו על הקרנית.באמצעות מחט חדה 26 מד, להזריק לידוקאין 1%עם 1:100, 000 אפינפרין subconjuctivally לתוך הבסיס של קרום nictating. פעמה מתונה צריכה להיווצר מעל הממברנה. לאחר מכן להסיר את הספקולום ולעשות זריקה זהה לתוך קרום nictating השמאלי.לאחר כחמש דקות, מניחים את ספקולום המכסה בחזרה לתוך העין הבחור ולהשתמש 0.3 מדפים כדי לחזור בו קרום nictating בשיאו. בעזרת המספריים של ווסטקוט, חותכים את הממברנה החיתוך בבסיסה ומסירים את הספקולום. ואז למקם משחה אנטיביוטית אקטואלי על העין.עבור החלקה palpebral של הזרקת בלוטת lacrimal מעולה, לאחר אישור הרדמה, לגטה את הפרווה באזור טרום מסלולית וקרקפת ולהשתמש קרם depilatory כדי להסיר לחלוטין כל פרווה שיורית. לאחר שתי דקות להסיר את השמנת ולהחיל 25 microliters של 1% לידוקאין ללא חומרים משמרים על העין המתאימה. אוורט העפעף העליון ולהחיל לחץ המדיאלי עדין על שפת המסלול האחורי עד protuberance סימון החלק palpebral של הבלוטה נראה.באמצעות מדפים דקים ומזרק שחפת המצויד במחט 27 מד, לחדור ישירות את הבלוטה באמצעות גישה transconjunctival קידום המחט שני מילימטרים לתוך הרקמה ולהזריק 100 microliters של פתרון 500 מיקרוגרם של Concanavalin A או Con A.מיד לאחר ההזרקה, להחיל לחץ המדיאלי על כדור הארץ כדי לגרום בלוטת lacrimal מעולה מסלולית לבלוט מן החותך האחורי. באמצעות מדפים מעוגלים סגורים, להסיט את האזור עד הפתיחה הגרמי בגולגולת מורגש ולהחיל לחץ צנוע נוסף עם מדפים להשאיר חריץ בעור כדי לשמש ציון דרך עבור מיקום המחט. הכנס מזרק tuberculin מצויד מחט 27 מד בניצב לעור מעל סימן הכניסה כרבע אינץ 'לתוך החתך להפנות את המחט אחורית וחיצונית לכיוון canthus הצדדי מכוון לנקודת האמצע בין אתר ההזרקה ואת השפה מסלולית גרמית.לאחר הרכזת של המחט הוא הגיע, לאט להזריק 0.2 מיליליטר של 1, 000 פתרון מיקרוגרם של Con A.For ILG הזרקה, להציג את החיה מהצד כדי לאתר את בולטות ILG לאורך החלק התחתון של המסלול. השתמש בעט סימון כירורגי כדי לצייר קו אנכי על העור שבו החלק השטחי של בלוטת ILG עובר ממקום מנוחתו השטחי על העצם הזיגומטית למיקומו המדיאלי יותר במסלול. לטאטא בדיקה אולטרסאונד מוחזק אנכית על פני הקו על העור כדי לזהות את קצה העצם זיגומטי.המעבר ILG מתרחשת כאשר התמונה של הבלוטה משתנה קו hyperechoic מוגבל אחד ללא גבול המדיה לזיהוי. המיקום היחסי של היד לקו שצויר על העור כאשר שינוי זה נצפה יהיה אתר ההזרקה. כדי למקם קון A לתוך בלוטה בנקודה רק מתווך לעצם הקשת זיגומטי, להגדיר את העומק הרצוי של הזרקה כעומק האות ההיפר-פסיכוטי עצם זיגומטי בתוספת מילימטר אחד פחות האורך הידוע של המחט.הכנס את המחט על 12 מילימטרים לתוך הבלוטה באתר ההזרקה לפני נסיגה איטית עד אורך המחט החשופה מחוץ לגוף שווה את ההבדל המחושב. ואז להזריק 0.2 מיליליטר של 1, 000 מיקרוגרם של פתרון קון A ולאשר את ההצלחה של הזריקה על ידי אולטרסאונד. ILG צריך להפגין מרחב היפרכוטי אופייני.קון A זריקות לגרום לתגובה דלקתית חזקה בלוטת lacrimal מאופיין חדירה לימפוציטית צפופה המלווה ייצור דמעה ירד. רמות לקטופרין דמעה מדוכאים וכתוצאה מכך קרנית פרוצה אפיתל הלחמית וכתם בנגל ורדים מוגברת. הזרקת שלוש רקמות LG מסלולית מייצרת מצב עקבי ואחיד של מחלת עיניים יבשה.קבוצה אחת של זריקות קון A מייצרת מחלת עיניים יבשה נמשך כשבוע עם כל הפרמטרים הקליניים נרמול על ידי יום 10. רצף קון A זריקות כשבוע זה מזה להאריך את משך מחלת העין היבשה בהתאם. לאחר כחמישה סטים של זריקות, מצב מחלת העין היבשה הופך לעתים קרובות קבוע ללא צורך בזריקות נוספות.לוקליזציה אופטימלית של מבני בלוטת הדמעות היא החשובה ביותר. היכרות עם אנטומיה גולגולתית ותשומת לב לפרטים הקטנים כולל הסרת הפרווה יחד עם מיומנות באמצעות אולטרסאונד כל לשפר את התוצאות. כמו טכניקה פשוטה זו דורשים שימוש חדים, החקירה צריכה לנקוט אמצעי זהירות נאותים כדי למנוע פציעות מקל מחט.

a-rabbit-model-aqueous-deficient-dry-eye-disease-induced-concanavalin

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מתאר את ההליך הכירורגי להסרת שני החלקים: מישוש ואורביטל של בלוטת הדמעות העליונה מארנב ליצירת מודל של מחלת עין יבשה. מודל ארנב זה מתאים למחקרים של הומאוסטזיס משטח העין, פתופיזיולוגיה וטיפולי עיניים.

הסרת בלוטת הדמעות העליונה: טכניקה כירורגית להסרת החלקים המישושיים והמסלוליים של בלוטת הדמעות העליונה ממודל ארנב

בסרטון זה אנו מתארים הליך כירורגי להסרת בלוטת הדמעות הגדולה והנחותה ממודל ארנב כדי ללמוד את ההשפעה על ייצור הדמעות בחיה.

הסרת בלוטת דמעות נחותה ממודל ארנב: הליך כירורגי להסרת בלוטת הדמעות התחתונה הגדולה יותר ממסלול עין הארנב

בסרטון זה, אנו מראים הליך לגרימת מחלת עין יבשה חסרת מים במודל ארנב על ידי הזרקת החלק המישושי של בלוטת הדמעות העליונה עם Concanavalin A. מודל זה שימושי עבור בדיקות פרמקוקינטיות והפצה ביולוגית של תרופות לטיפול במחלת עין יבשה.

ביצוע הזרקה לחלק המישוש של בלוטת הדמעות העליונה: טכניקה לגרימת מחלת עין יבשה במודל ארנב

סרטון זה מתאר את ההליך לגרימת מחלת עין יבשה במודל ארנב באמצעות הזרקה של Concanavalin A לאונה המסלולית של בלוטת הדמעות העליונה. המודל שפותח שימושי לחקר יעילותן של תרופות שונות לטיפול במחלת העין היבשה.

ביצוע הזרקה לאונה אורביטלית של בלוטת הדמעות העליונה: טכניקה לגרימת מחלת עין יבשה במודל ארנב

בסרטון זה, אנו מדגימים את החיסון של Concanavalin A, מיטוגן לימפוציטים, לתוך בלוטת הדמעות הנחותה של עין ארנב כדי לגרום למחלת עין יבשה. תמונות אולטרסאונד או סונוגרמה משמשות כדי להנחות את המיקום המדויק של אתר ההזרקה וגם כדי לאשר את הצלחת החיסון.

Concanavalin מונחה אולטרסאונד זריקה לתוך בלוטת הדמעות התחתונה: טכניקה לחסן בלוטת דמעות נחותה עם Concanavalin A כדי לגרום למחלת עין יבשה במודל ארנב

דוח זה מתאר שיטה להניע עין כרונית ניסויית אוטואימונית יבשה בחולדות לואיס באמצעות חיסון עם תחליב של תמצית בלוטת חולדות עכברוש, ovalbumin, adjuvant מלאה של פרוינד, ואחריו הזרקה של תמצית בלוטת דרכי ו ovalbumin לתוך subconjunctiva תת-עורית ו בלוטות דרכי שישה שבועות לאחר מכן.

כרוני אוטואימונית יבש עין עכברוש דגם עם הגדלת זיכרון תאי זיכרון T ב Eyeball רקמות

הגישה הרומן מוצגת כדי לגרום כרונית מחלת עיניים יבשות בארנבים על ידי הסרת בניתוח כל בלוטות מסלולית לקטמאל. שיטה זו, ברורה מאלה שדווחו בעבר, מייצרת מודל יציבה, מובחנות של עין יבשה לקויה מימית מתאים היטב לחקור את הפיזיולוגיה של הקרע ו פתופסיולוגיה therapeutics עינית.

הקמת מודל העין יבש קשה באמצעות השלמת דקרייוקטומיה בארנבונים

כאן, אנו מבססים מודל חולדה של תפקוד לקוי של בלוטת הדמעות כדי לספק בסיס לחקר עין יבשה חסרת מים.

מודל עין יבשה של חולדה עם תפקוד לקוי של בלוטת הדמעות המושרה על ידי סקופולמין

כאן, אנו מציגים שיטה לבסס מודל עכברי של עין יבשה חסרה מימית על ידי כריתת בלוטות הדמעות החוץ-אורביטליות והאינפרא-אורביטליות ולהעריך את השינויים במשטח העין בעין יבשה חסרה במימית.

הקמת מודל עכבר של עין יבשה במחסור מימי

יצירת הפרדות רשתית ניסיונית עם גובה לשעתק ומתמשך של ניתוק, וללא דימום subretinal, היא חשובה ללימוד הפתופיזיולוגיה של אובדן תאי קולטי אור ברשתית מחלה והערכה של התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. כאן אנו מדווחים שיטה כזו בפירוט.

רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

חקור מודל ארנב לאמידת יעילות תרופות בעין יבש באמצעות זריקת Concanavalin A מודרכת אולטרסאונד לבלוטות הדמע. שיטה זו מאפשרת מחקר מכני הדלקת ופיזיולוגיית מחלה.

מודל ארנב של מחלה מימית לקויה עין יבש הנגרמת על ידי Concanavalin זריקה לתוך בלוטות לקטמאל: יישום ללימודי יעילות הסמים

גלה סרטונים נוספים