מסירת נוגדנים למוח מורנה באמצעות הסעה-משלוח משופר

פרוטוקול זה יכול לשמש לביצוע מסירה משופרת הסעה מכרסמים קטנים באמצעות מערכת קטטר צעד עבור חיסון אחיד מתכוונן של אזורי המוח היעד. היתרון של משלוח משופר הסעה הוא שזה מאפשר משלוח של חומרים לאזור העניין לעקוף את מחסום הדם - מוח עם נזק לרקמות קטנות או reflux. טכניקה זו שימושית בעיקר לאספקת חומרים טיפוליים כגון נוגדנים למוח.

ולכן ניתן להשתמש בו כדי למקד תנאים נוירולוגיים רבים. להדגים את ההליך תהיה מיכל בפנר, פוסט-דוקטורט מהמעבדה שלי. התחל על ידי חיתוך חתיכת צינורות נימי סיליקה התמזגו עם קוטר פנימי של 0.1 מילימטר ועובי קיר של 0.325 מילימטר לאורך של 30 מילימטרים.

לאחר בחינת הצינורות לסדקים השתמש microforge כדי לחמם את הקצוות כדי להבטיח את פתחי צינורות יש משטח חלק. לאחר מכן, הר מחט 27-מד על מזרק 10 מיקרו ליטר והצב את המזרק ברובוט סטראוטקטי. השתמש ברובוט כדי להזיז את המזרק על משטח קשה ולגעת על פני השטח עם קצה המחט.

לאחר שנומק עמדה זו לרומם את המחט כדי לאפשר מיקום של נימי סיליקה התמזגו בתוך המחט, כך 20 מילימטרים של הבלט נימי מן המחט. השתמש פיפטה כדי להפיץ באופן שווה שני microliters של צמיגות גבוהה cyanoacrylate דבק מעל נימי החל מחט מתכת וסיים עשרה מילימטרים מעל הקצה התחתון של נימי. השתמש ברובוט הסטראוטקטי כדי להוריד את מחט המתכת עד קצה המחט הוא מילימטר אחד מעל משטח הייחוס כדי לתקן את נימי סיליקה התמזגו במחט המתכת להרכיב צעד מילימטר אחד מה קצה מחט המתכת.

הסר כל דבק עודף להרכיב בסוף מחט מתכת, כדי למנוע שתילת הצעד קטטר. בדוק את הקצה תחת מיקרוסקופ כדי לאשר כי כל הדבק העודף הוסר. לאחר מכן המתן 15 דקות עד שהדבק יתקשה ויסיר את המזרק עם הקטטר מהרובוט.

לבדיקות קטטר שלב לחתוך מוצק 0.6% ג'ל agarose לתוך 20 על ידי בלוקים 20 מילימטר ולמלא באופן ידני את מזרק קטטר צעד עם 10 microliters של פתרון כחול מסוננים 0.4%trypan. באמצעות הרובוט הסטריאוטקטי, מחלקים מיקרוליטר אחד של צבע ב 0.2 ליטר לדקה כדי להעריך את האיטום של הצעד של הקטטר במהלך הליך הקיבוע. הפתרון הכחול trypan צריך להיות גלוי אך ורק על קצה הקטטר.

מנגבים את הצבע בעזרת רקמת נייר ומ מניחים בלוק אגרוז ברובוט הסטריאוטקטי. כיול הרובוט אמר כי קצה הקטטר הוא התייחס על פני השטח של בלוק אגרוז. הגדר רצף פרופורציה של נפחי הזרקה בהתאם לתוכנית הניסוי הספציפית.

כדי להזריק את הפתרון לתוך putamen caudate murine, להגדיר את הזריקה מילימטר אחד חזיתי ואחד וחצי עד שני מילימטרים משני תמקום bregma בעומק של 3.5 מילימטרים. כאשר המחט נמצאת בעמדה להתחיל את הליך המסירה משופרת הסעה ולהזריק חמישה microliters של פתרון כחול trypan לתוך בלוק אגרוז. להעריך את הצורה של הענן הכחול trypan ב agarose ועל דליפה פוטנציאלית לאורך דרכי קטטר.

אין זרימה אחורית גדולה מעל קצה מחט המתכת צריך להיות גלוי. לאחר ההזרקה להשאיר את קטטר במקום במשך שתי דקות לפני נסיגת המחט במילימטר אחד לדקה כדי להבטיח פיזור נאות של הנוזל לתוך המוח איטום של דרכי ההזרקה במהלך ההסרה. מניחים בלוק אגרוז חדש לתוך הרובוט ולהתחיל זריקה שנייה של microliter אחד ב 0.2 ליטר לדקה כדי להעריך סתימת הקטטר בתוך אגרוז.

כחול trypan צריך שוב ליצור ענן מה קצה הקטטר מיד לאחר תחילת ההזרקה. לאחר מכן להעריך אם נפח שאריות המזרק מתאים 3 microliters כמו כל וריאציות עשוי להצביע על דליפה של נוזל דרך הרכבה קטטר או בוכנה מזרק. להזרקת נוגדנים לסטריאטום המורין מאשרים חוסר תגובה לצביטת העור בעכבר מורדם ומגולחים את הראש עם גוזם שיער.

לחטא את העור עם צמר גפן ספוג בתספור יוד. השתמש אזמל לעשות חתך בעור 10 מילימטר לאורך קו האמצע הגולגולתי גימור ברמת העיניים. תקן את העכבר במסגרת הסטריאוטטית באמצעות מהדק האף ופסי האוזן, תוך טיפול היטב כי משטח הגולגולת אופקי ומאובטח היטב.

מניחים את המזרק ברובוט הסטריאוטקטי ומסנכרנים את מעט המקדחה עם קצה הקטטר בנקודת התייחסות. השתמש במקלות כדי לסגת את העור ולמקם ברגמה על פני הגולגולת. התייחסות bregma בתוכנה באמצעות קצה של קצת מקדחה ולהזיז את המקדחה לחזית מילימטר אחד ושני מילימטרים משני מילימטרים משני הצדדי מעמדת bregma.

לקדוח חור בר דואג לא לפגוע דורה מאטר ולהזיז את המזרק מעל חור בר. מחלקים 0.5 למיקרוליטר אחד מהמזרק כדי להבטיח שלא יישארו בועות אוויר בקטטר. התחל את המסירה משופרת הסעה כפי שהודגם, התבוננות משטח הגולגולת עבור כל עקבות של זרימת נוזלים מהמקום הזרקה.

בסוף המסירה והסרת קטטר להתחיל את משאבת ההזרקה ב 0.2 ליטר לדקה כדי לבדוק ראיות של סתימת קטטר במהלך ההזרקה. אם לא התרחש סתימת טיפה של תערובת הזרקה יש לראות מיד מגיע קצה קטטר. בתמונה זו של ענן של כחול trypan להרכיב לאחר הזריקה של microliter אחד של צבע ב 0.5 מיקרו ליטר לדקה באמצעות קטטר משופר הסעה כפי שהוכח, שום ריפלוקס לאורך דרכי המחט לא נראה בתחילת שלב הקטטר.

והענן המפוזר יצר צורה כדורית רצויה. בתמונה זו באמצעות מחט קצה קהה עם זאת, reflux משמעותי ניתן לראות. יש לציין, משלוח משופר הסעה מאפשר זיקוק של כמויות גדולות לתוך המוח מורין באופן אחיד ופחות רקמות מזיקות לעומת הזרקה קונבנציונלית.

בשני סוגי המסירה קיים פרופיל הפצה טיפוסי של חלקיקי נוגדנים ודקסטרן מעל כפיסת הקורפוס. עם זאת, פרופיל הפיזור של הנוגדן מוזרק הוא מפוזר יותר מאשר נצפתה עבור dextran משקל מולקולרי גבוה לאחר הסעה משופרת משלוח, המדגים הבדלים בהפצה בין חליטות שונות. כמו קטטר יכול לסתום במהלך עירוי המוח, חשוב לבדוק את זה מיד לאחר על ידי חלוקת לאט נפח קטן של עירוי.

הליך זה יכול לשמש כדרך לספק תרכובות פעילות פרמקולוגית למוח, צריך להיות ואחריו ניטור הדוק של תסמיני המחלה ותופעות לוואי צפויות. טכניקה זו מאפשרת עירוי של אזור מוח מדויק עם טיפולים כולל נוגדנים, פתיחת אפשרויות חדשות להתפתחות של מערכת העצבים המרכזית טיפולים ממוקדים.