Name: מסירת נוגדנים למוח מורנה באמצעות הסעה-משלוח משופר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: למד את שיטת ההסעה-משלוח המשופרת להעברת נוגדנים למוח עכברים. טכניקה זו מאפשרת מעקף של מחסום הדם-מוח תוך מזעור נזק לרקמה והגברת ספציפיות הטיפול במחלות נוירולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מענקים של אוניברסיטת ציריך (FK-15-057), קרן נוברטיס למחקר רפואי-ביולוגי (16c231) ומחקר הסרטן השוויצרי (kfs-3852-02-2016, kfs-4146-02-2017) כדי יוהנס הקיא Berg ו גשר הוכחת המושג (20b1-1 _ 177300) ללינדה שאלהאמר.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי המשרד הווטרינרי של שוויץ תחת רישיון מספר ZH246/15.
1. הכנת קטטרים הפסיעה
<ol><li>הכנת צינורות סיליקה התמזגו לשלב הקטטר
	<ol>
<li>חותכים התמזגו סיליקה קפילר עם קוטר פנימי של 0.1 מ"מ ועובי הקיר של 0.0325 מ"מ אבובים לאורך של 30 מ"מ.</li>
		<li>בדוק את אבובים עבור סדקים וחום להבריק את הקצוות באמצעות microforge ' כדי להבטיח פתחי אבובים יש משטח חלק.</li>
	</ol></li>
	<li>קיבוע הצינור הפנימי במחט מתכת
	<ol>
<li>הר a 27 המחט G על 10 μL מזרק ומניחים את המזרק ברובוט סטריאוטקטיקה.</li>
		<li>באמצעות הרובוט, להזיז את המזרק מעל משטח קשה ולגעת בו עם קצה המחט. מיקום זה יש לציין או להישמר בתוכנה, כי זה ישמש כמשטח התייחסות לקביעת אורך של שלב הקטטר.</li>
		<li>העלה את המחט כדי לאפשר מיקום של סיליקה מותך בתוך המחט</li>
		<li>מניחים את הקפילר התמזגו במחט כגון 20 מ"מ של נימי הוא בולט מן המחט.</li>
		<li>שימוש בפיפטה, התפשט באופן שווה 2 μL של הדבקה מופחתת בצמיגות גבוהה לאורך הקפילר, החל ממחט המתכת וגימור 10 מ"מ מעל לקצה התחתון של הנימים, כפי שמתואר באיור 2.</li>
		<li>באמצעות הרובוט סטריאוטקטיקה, הנמך את המחט עד קצה המחט המתכת היא 1 מ"מ מעל פני השטח ההפניה. בדרך זו את הנימי סיליקה התמזגו יהיה קבוע במחט המתכת ויהיה צעד 1 מ"מ מקצה מחט המתכת. הסר עודף דבק בסוף המחט מתכת כדי למנוע blunting את השלב.</li>
		<li>לחכות 15 דקות הדבק להרדן ולהסיר את המזרק עם הקטטר מן הרובוט סטריאוטקטיקה. ודא כי בשלב כל דבק עודף הוסר על ידי בדיקת קצה הקטטר מתחת למיקרוסקופ.</li>
	</ol></li>
	<li>בדיקת קטטר השלב באמצעות גוש של מעלה
	<ol>
<li>הכינו 0.6% הפתרון ב-PBS במגש ג'ל קונבנציונאלי והמתן עד שהוא מקרין. חותכים את agarose בערך 20 מ"מ x 20 מ"מ בלוקים. עד השימוש, לשמור את הבלוקים שקוע ב-PBS.</li>
		<li>באופן ידני למלא את המחט השלב מזרק עם 10 μL של 0.4% פתרון של טרימין כחול מסוננים.</li>
		<li>באמצעות הרובוט סטריאוטקטיקה, לוותר על 1 μL ב 0.2 μL/min כדי להעריך את האטימות של השלב של הקטטר במהלך הליך הקיבעון. הפתרון הכחול של טרימין צריך להיות גלוי אך ורק על קצה הצנתר. . נגב את זה עם רקמת נייר</li>
		<li>במקום לחסום את הצמח ברובוט סטריאוטקטיקה ולכייל את הרובוט כך קצה הקטטר מופנה נגד פני השטח של בלוק agarose.</li>
		<li>תכנת את פרמטרי ההזרקה ל-לח.<ol>
<li>עבור נפח ההזרקה של 5 μL, השתמש בצעדים הבאים: 1 μL ב-0.2 μL/min, ואז 2 μL ב-0.5 μL/min ו-2 μL ב-0.8 μL/min. כוונן את עוצמת הזריקה הסופית בהתאם לתוכנית הניסיונית הספציפית על-ידי שינוי פרופורציונלי של כל אחד מהשלבים.</li>
			<li>כדי להזריק את הפתרון לתוך מורטין מזונבת (סטריאטום), לבצע זריקה כגון במיקום 1 מ"מ חזיתית ו 1.5 – 2 מ"מ לרוחב מ bregma בעומק של 3.5 מ"מ.</li>
			<li>לאחר ההזרקה, להשאיר את הקטטר במקום 2 דקות ולאחר מכן לסגת ב 1 מ"מ/min כדי להבטיח פיזור תקין של הנוזל במוח ואיטום של מערכת ההזרקה במהלך הסרת קטטר. הערה: בהתאם לשימוש ברובוט הסטרטקטיקה הספציפי, ניתן לתכנת את כל הפרמטרים לסקריפט אחד. קובץ script לדוגמה זמין <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59675/CED_5_ul_striatum.txt" target="_blank">כחומר משלים.</a></li>
		</ol>
</li>
		<li>הפעל את ההליך מוכן והכנס 5 μL של פתרון כחול מטריא לבלוק הצמח.</li>
		<li>העריכו את הצורה של הענן של טריכמין כחול בתוך הצמח ודליפת הפוטנציאל לאורך מערכת הקטטר. טרילאן כחול צריך ליצור אליפסואיד או ענן עגול עם המרכז סביב קצה הקטטר וקוטר של לפחות 1 מ"מ. אין לראות גב גדול על קצה מחט המתכת צריך להיות גלוי.</li>
		<li>מקום לחסום agarose חדש ולהתחיל הזרקה שנייה של 1 μL ב 0.2 μL/min כדי להעריך את סתימת הקטטר עם הצמח. טרילאן כחול צריך שוב להתחיל להרכיב ענן מקצה הקטטר מיד לאחר תחילת הזריקה.</li>
		<li>העריכו אם אמצעי האחסון שנותר במזרק תואם ל-3 μL. כל וריאציות עשוי להצביע לכיוון דליפת נוזל דרך הרכבה קטטר או מזרק במזרק.</li>
		<li>אם כל זריקות הבדיקה מצליחים, הצנתר הוא אטום היטב, ישר לא טריכא פתרון כחול הוא נצפה ממקומות אחרים מאשר קצה הקטטר, לשטוף את הצנתר עם H2או (dH2o) עד אין עקבות של טריבין כחול גלויים ולאחר מכן לשטוף פי 10 כדלקמן: 70% אתנול ו 100% אתנול ואחריו שטיפה שוב עם 70% אתנול ומים נקי מיותר.</li>
		<li>אחסן את הקטטר. תחת תנאים יבשים</li>
	</ol></li>
</ol>2. הסעה-משלוח משופר של פתרון נוגדן למוח מוריין
הערה: בהתאם לתקנות רווחה בעלי חיים מקומיים, סוגים שונים של הרדמה, משככי כאבים ואנטיביוטיקה ניתן ליישם עבור הליך זה. פרוטוקול זה מתאר את השימוש בהרדמה להזרקה. ניתן להשתמש גם בהרדמה מלאה של הרדמה כגון isofלוריאן על-ידי הרכבה של מסכת אף על מסגרת הסטריאוטקטיקה. בנוסף, אנו ממליצים להוסיף אנטיביוטיקה למים השתייה עבור מניעה זיהום.
<ol><li>התקנה כירורגית
	<ol>
<li>הכינו פתרונות להרדמה ולנוגדן. עכברים יכולים להיות מורדם בבטחה באמצעות הרדמה שלושה רכיבים המכילים פנטניל (0.05 מ"ג/ק"ג), midazolam (5 מ"ג/ק"ג) ו medetomidine (0.5 מ"ג/ק"ג) מדולל ב-dH סטרילי2O. אנו מבצעים שני צעדים להתעורר הליך באמצעות שני פתרונות הנוגדן, אחד המכיל פלומאזניל (0.5 mg/ק"ג) ו בופרנורפין (0.1 מ"ג/ק"ג) ב-dH סטרילי2O (פתרון הנוגדן הראשון). השני מכיל אטיפיאזול (2.5 מ"ג/ק"ג) ב-dH מעוקר2O (פתרון הנוגדן השני).</li>
		<li>להכין פתרון כאבים המכילים carprofen (5.667 מ"ג/ק"ג) מדולל עם dH סטרילי2O.</li>
		<li>נקו את מסגרת הסטריאוטקטיקה, את משטח החימום והאלמנטים של הרובוט הסטרטקטיק. זכרו כי לא כל חלקי הרובוט ניתן לנקות ללא סיכון של נזק. עיין במדריך לרובוט לקבלת פרטים על ניקוי והכנה לשימוש.</li>
		<li>להרכיב את המזרק עם קטטר צעד ולשטוף אותו פעמים רבות עם dH2O, 70% אתנול ו 100% אתנול ואחריו השטיפה שוב עם 70% אתנול ו-dH2O. לבסוף, לשטוף את המזרק עם PBS או מאגרים אחרים לשמש להכנת הפתרון להזרקה בתוך גולגולתי, למשל נוזל מלאכותי שדרתי. הבוכנה של המזרק צריכה לנוע בצורה חלקה וחופשית במהלך כל התהליך.</li>
		<li>כיול את תוכנת הרובוט הסטרטקטיקה עם מסגרת הסטריאוטקטיקה.</li>
		<li>בדוק את התוכנה הסטריאוטקטיקה רובוט על ידי להבטיח כי זרועות הרובוט לנוע בחופשיות, כי משאבת ההזרקה מחובר כראוי והוא יכול לבצע את ההליך מבלי לעשות הפרעות. זה כולל בדיקת תנועה רובוט, הזרקה הזריקה, בדיקת 2 דקות המתנה צעד ואת המהירות של הנסיגה קטטר. כל הפרמטרים צריכים להתאים את ההליך המותכנת מראש מראש שמתואר בנקודה 1.3.5.</li>
		<li>הכנס את סיבית ההסתעפות להסתעפות. מומלץ לחטא את פיסות המקדחה לפני השימוש.</li>
		<li>הכן פתרון נוגדן באמצעות PBS או פתרונות מאגר אחרים כגון aCSF. 1 עד 20 μg של נוגדן ב 5 μL ניתן להזריק בהליך מוברג יחיד. יש לבדוק אמצעי אחסון אחרים וכמויות חלבונים לפני ביצוע הניסוי. שים לב כי באמצעות פתרונות צמיגות גבוהה עשוי להוביל סתימת קטטר.</li>
		<li>לטעון ידנית את המזרק עם הנוגדן מדולל.</li>
	</ol></li>
	<li>הזרקת נוגדן על ידי החדרת לסטריאטום
	<ol>
<li>שוקלים את העכבר ומזריקים את פתרון ההרדמה של שלושה רכיבים לתוך הצפק בהתאם למשקל הגוף. שים לב לזמן ההזרקה. להעביר את העכבר לכלוב נפרד מחומם עם כרית חימום.</li>
		<li>להתבונן בעכבר כדי לקבוע מתי הרגעה מתחיל. ברגע העכבר מפסיק לנוע, להחיל משחה אופטלמולוגית על העיניים כדי להגן על הקרנית מייבוש במהלך הניתוח. הרדמה מלאה מתחיל בדרך כלל 10 – 15 דקות מהזרקה של פתרון שלושה רכיבים הרדמה.</li>
		<li>בדוק תגובות כאב באמצעות בדיקת רפלקס לצבוט כדי להבטיח הרדמה מלאה של החיה.</li>
		<li>. תגלח את הראש בעזרת קוצץ שיער</li>
		<li>לחטא את העור עם מטליות כותנה ספוגה בתמיסת יוד. לקרצף את העור שלוש פעמים בהילוך מעגלי.</li>
		<li>באמצעות אזמל, לעשות חתך העור 10 מ"מ לאורך קו האמצע הגולגולת גימור על רמת העין.</li>
		<li>תקן את העכבר במסגרת הסטריאוטקטיקה באמצעות מהדק האף ופסי האוזן. ודא כי משטח הגולגולת הוא אופקי ומאובטח היטב. מלבד ניווט אנטומי נכון זה חיוני גם כדי למנוע הטיית הגולגולת במהלך הקידוח ואת ההליך לחות.</li>
		<li>הנח את המזרק ברובוט הסטרטקטיקה.</li>
		<li>סנכרן את סיבית ההסתעפות עם קצה הצנתר בנקודת התייחסות. חשוב שהקשר בין מיקום התרגיל למזרק נקבע בדיוק בתוכנה, כך שניתן לבצע את ההזרקה באזור האנטומי הרצוי של המוח.</li>
		<li>למשוך את העור באמצעות מלקחיים וברגמה לוקליזציה על פני הגולגולת.</li>
		<li>הפניה מרסגמה בתוכנה באמצעות קצה סיבית המקדחה.</li>
		<li>להעביר את התרגיל למיקום 1 מ"מ חזיתית ו 2 מ"מ לרוחב מתוך ברז ולקדוח חור בגולגולת. להיזהר לא לפגוע מאטר דורא.</li>
		<li>תזיז את המזרק. מעל חור הגולגולת</li>
		<li>מוותר 0.5 – 1 μL מן המזרק כדי להבטיח כי בועות אוויר לא נשארו בצנתר.</li>
		<li>הפעל את תוכנית ה-משופרת המתוארת בנקודה 1.3.5. שימו לב למשטח הגולגולת לכל עקבות של נוזל הזרמה מנקודת ההזרקה. . פקח על קצב הנשימה של החיה</li>
		<li>לאחר התוכנית שעברו למעלה והקטטר הוא נסוג מן המוח, להתחיל את המשאבה הזרקת ב 0.2 μL/min כדי לבדוק סתימת קטטר במהלך הבדיקה. אם לא התרחשה סתימת, אתה צריך מיד לראות droplet של ערבוב הזרקה מגיע קצה הקטטר.</li>
		<li>לפני שימוש חוזר או אחסון הקטטר, לבחון באופן חזותי את הצעד הקטטר עבור כל סימן של נזק או ללבוש תחת מיקרוסקופ ולנקות אותו כמו בשלב 1.3.10.</li>
	</ol></li>
	<li>מתעוררת הליך
	<ol>
<li>הסר בעדינות את העכבר ממסגרת הסטריאוטקטיקה.</li>
		<li>שטוף את אתר הניתוח. עם תמיסת מלח סטרילית</li>
		<li>באמצעות מלקחיים, למלא את חור הגולגולת עם שעווה העצם.</li>
		<li>סגור את העור עם מלקחיים דקים ולהחיל דבק כירורגי עם הצינורות 10 μL על החתך. לחכות 15-30 עבור הדבק כדי פולימלזציה.</li>
		<li>החלת תמיסת כאבים על ידי הזרקה תת עורית. . שים לב לזמן ההזרקה</li>
		<li>. החל את פתרון הנוגדן הראשון . שים לב לזמן ההזרקה</li>
		<li>להעביר את העכבר לכלוב נפרד עם כרית החימום ולפקח על החיה על רפלקסים מהבהיל.</li>
		<li>אם העכבר לא זכה בתודעה מלאה 15 דקות לאחר הממשל של פתרון הנוגדן הראשון, להחיל את פתרון הנוגדן השני על ידי הזרקה תת עורית.</li>
		<li>עקוב אחר בעלי חיים במהלך שלב ההחלמה.</li>
		<li>צ'ק 1 – 2 מאוחר יותר, כמו גם למחרת לסיבוכים שלאחר הניתוח. במקרה הצורך, החילו מחדש את השככי כאבים.</li>
		<li>לצורך זיהום מונע, להוסיף sulfadoxin (הריכוז הסופי 0.08% w/v) ו-ילדים (הריכוז הסופי 0.016% w/v) כדי לשתות מים שאליהם בעלי החיים יש גישה מודעה libitum למשך שבוע אחד לאחר הניתוח.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Scherrmann, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+via+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Drug delivery via the blood-brain barrier.</a> Vascular Pharmacology. 38 (6), 349-354 (2002).</li>
<li>Barua, N. U., Gill, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+drug+delivery%3A+prospects+for+glioblastoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Oncology%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced drug delivery: prospects for glioblastoma treatment.</a> CNS Oncology. 3 (5), 313-316 (2014).</li>
<li>Bobo, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+of+macromolecules+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery of macromolecules in the brain.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (6), 2076-2080 (1994).</li>
<li>Morrison, P. F., Laske, D. W., Bobo, H., Oldfield, E. H., Dedrick, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-flow+microinfusion%3A+tissue+penetration+and+pharmacodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">High-flow microinfusion: tissue penetration and pharmacodynamics.</a> American Journal of Physiology. 266 (1 Pt 2), R292-R305 (1994).</li>
<li>Zhou, Z., Singh, R., Souweidane, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-Enhanced+Delivery+for+diffuse+intrinsic+pontine+glioma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Convection-Enhanced Delivery for diffuse intrinsic pontine glioma treatment.</a> Current Neuropharmacology. 15 (1), 116-128 (2017).</li>
<li>Barua, N. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrastriatal+convection-enhanced+delivery+results+in+widespread+perivascular+distribution+in+a+pre-clinical+model%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+and+Barriers+of+the+CNS%22%5BJournal%5D)">Intrastriatal convection-enhanced delivery results in widespread perivascular distribution in a pre-clinical model.</a> Fluids and Barriers of the CNS. 9 (1), 2(2012).</li>
<li>Shoji, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+convection-enhanced+delivery+of+an+anti-CD40+agonistic+monoclonal+antibody+induces+antitumor+effects+in+mouse+glioma+models%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Local convection-enhanced delivery of an anti-CD40 agonistic monoclonal antibody induces antitumor effects in mouse glioma models.</a> Neuro-Oncology. 18 (8), 1120-1128 (2016).</li>
<li>Souweidane, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+for+diffuse+intrinsic+pontine+glioma%3A+a+single-centre%2C+dose-escalation%2C+phase+1+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery for diffuse intrinsic pontine glioma: a single-centre, dose-escalation, phase 1 trial.</a> The Lancet Oncology. , (2018).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+immune+checkpoints+in+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Targeting immune checkpoints in malignant glioma.</a> Oncotarget. 8 (4), 7157-7174 (2017).</li>
<li>Barua, N. U., Gill, S. S., Love, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+drug+delivery+to+the+brain%3A+therapeutic+potential+and+neuropathological+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathology%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced drug delivery to the brain: therapeutic potential and neuropathological considerations.</a> Brain Pathology. 24 (2), 117-127 (2014).</li>
<li>Mehta, A. M., Sonabend, A. M., Bruce, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-Enhanced+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Convection-Enhanced Delivery.</a> Neurotherapeutics. 14 (2), 358-371 (2017).</li>
<li>Krauze, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflux-free+cannula+for+convection-enhanced+high-speed+delivery+of+therapeutic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Reflux-free cannula for convection-enhanced high-speed delivery of therapeutic agents.</a> Journal of Neurosurgery. 103 (5), 923-929 (2005).</li>
<li>Nash, K. R., Gordon, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection+Enhanced+Delivery+of+Recombinant+Adeno-associated+Virus+into+the+Mouse+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Convection Enhanced Delivery of Recombinant Adeno-associated Virus into the Mouse Brain.</a> Methods in Molecular Biology. 1382, 285-295 (2016).</li>
<li>Ohlfest, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+antiangiogenic+gene+therapy+by+nonviral+gene+transfer+using+the+sleeping+beauty+transposon+causes+tumor+regression+and+improves+survival+in+mice+bearing+intracranial+human+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Combinatorial antiangiogenic gene therapy by nonviral gene transfer using the sleeping beauty transposon causes tumor regression and improves survival in mice bearing intracranial human glioblastoma.</a> Molecular Therapy. 12 (5), 778-788 (2005).</li>
<li>Yin, D., Forsayeth, J., Bankiewicz, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+cannula+design+and+placement+for+convection-enhanced+delivery+in+rat+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized cannula design and placement for convection-enhanced delivery in rat striatum.</a> Journal of Neuroscience Methods. 187 (1), 46-51 (2010).</li>
<li>Mamot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+distribution+of+liposomes+in+rodent+brains+and+brain+tumors+following+convection-enhanced+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Extensive distribution of liposomes in rodent brains and brain tumors following convection-enhanced delivery.</a> Journal of Neuro-Oncology. 68 (1), 1-9 (2004).</li>
<li>Saito, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+affinity+of+the+infusate+affects+the+distribution+volume+during+convection-enhanced+delivery+into+rodent+brains%3A+implications+for+local+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Tissue affinity of the infusate affects the distribution volume during convection-enhanced delivery into rodent brains: implications for local drug delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 154 (1-2), 225-232 (2006).</li>
<li>Oh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+distribution+of+small+molecules+and+viral+vectors+in+the+murine+brain+using+a+hollow+fiber+catheter%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Improved distribution of small molecules and viral vectors in the murine brain using a hollow fiber catheter.</a> Journal of Neurosurgery. 107 (3), 568-577 (2007).</li>
<li>Barua, N. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+implantable+catheter+system+with+transcutaneous+port+for+intermittent+convection-enhanced+delivery+of+carboplatin+for+recurrent+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">A novel implantable catheter system with transcutaneous port for intermittent convection-enhanced delivery of carboplatin for recurrent glioblastoma.</a> Drug Delivery. 23 (1), 167-173 (2016).</li>
<li>Rosenbluth, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+an+in-dwelling+cannula+for+convection-enhanced+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Design of an in-dwelling cannula for convection-enhanced delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 196 (1), 118-123 (2011).</li>
<li>Debinski, W., Tatter, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+for+the+treatment+of+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery for the treatment of brain tumors.</a> Expert Review of Neurotherapeutics. 9 (10), 1519-1527 (2009).</li>
<li>MacKay, J. A., Deen, D. F., Szoka, F. C. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+in+brain+of+liposomes+after+convection+enhanced+delivery%3B+modulation+by+particle+charge%2C+particle+diameter%2C+and+presence+of+steric+coating%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Distribution in brain of liposomes after convection enhanced delivery; modulation by particle charge, particle diameter, and presence of steric coating.</a> Brain Research. 1035 (2), 139-153 (2005).</li>
<li>Chen, Z. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+realistic+brain+tissue+phantom+for+intraparenchymal+infusion+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">A realistic brain tissue phantom for intraparenchymal infusion studies.</a> Journal of Neurosurgery. 101 (2), 314-322 (2004).</li>
<li>Sampson, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poor+drug+distribution+as+a+possible+explanation+for+the+results+of+the+PRECISE+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Poor drug distribution as a possible explanation for the results of the PRECISE trial.</a> Journal of Neurosurgery. 113 (2), 301-309 (2010).</li>
<li>Wick, W., Weller, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trabedersen+to+target+transforming+growth+factor-beta%3A+when+the+journey+is+not+the+reward%2C+in+reference+to+Bogdahn+et+al.+%28Neuro-Oncology+2011%3B13%3A132-142%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Trabedersen to target transforming growth factor-beta: when the journey is not the reward, in reference to Bogdahn et al. (Neuro-Oncology 2011;13:132-142).</a> Neuro-Oncology. 13 (5), author reply 561-552 559-560 (2011).</li>
<li>Saito, R., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convection-enhanced+delivery+of+therapeutics+for+malignant+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neurologia+Medico-Chirurgica%22%5BJournal%5D)">Convection-enhanced delivery of therapeutics for malignant gliomas.</a> Neurologia Medico-Chirurgica. 57 (1), 8-16 (2017).</li>
<li>Bedussi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clearance+from+the+mouse+brain+by+convection+of+interstitial+fluid+towards+the+ventricular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">Clearance from the mouse brain by convection of interstitial fluid towards the ventricular system.</a> Fluids Barriers CNS. 12, 23(2015).</li>
<li>Noroxe, D. S., Poulsen, H. S., Lassen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+glioblastoma%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22ESMO+Open%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of glioblastoma: a systematic review.</a> ESMO Open. 1 (6), e000144(2016).</li>
<li>Boucher, Y., Salehi, H., Witwer, B., Harsh, G. R. t, Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+fluid+pressure+in+intracranial+tumours+in+patients+and+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Interstitial fluid pressure in intracranial tumours in patients and in rodents.</a> British Journal of Cancer. 75 (6), 829-836 (1997).</li>
<li>Glushakova, O. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+clinical+biomarkers+of+caspase-mediated+apoptosis+associated+with+neuronal+and+neurovascular+damage+following+stroke+and+other+severe+brain+injuries%3A+Implications+for+chronic+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Circulation%22%5BJournal%5D)">Prospective clinical biomarkers of caspase-mediated apoptosis associated with neuronal and neurovascular damage following stroke and other severe brain injuries: Implications for chronic neurodegeneration.</a> Brain Circulation. 3 (2), 87-108 (2017).</li>
<li>Vom Berg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+IL-12%2FIL-23+signaling+reduces+Alzheimer%27s+disease-like+pathology+and+cognitive+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inhibition of IL-12/IL-23 signaling reduces Alzheimer's disease-like pathology and cognitive decline.</a> Nature Medicine. 18 (12), 1812-1819 (2012).</li>
<li>Vom Berg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratumoral+IL-12+combined+with+CTLA-4+blockade+elicits+T+cell-mediated+glioma+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intratumoral IL-12 combined with CTLA-4 blockade elicits T cell-mediated glioma rejection.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (13), 2803-2811 (2013).</li>
<li>Kurdi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+administration+of+the+mTORC1+inhibitor+everolimus+induces+tolerance+and+decreases+autophagy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Continuous administration of the mTORC1 inhibitor everolimus induces tolerance and decreases autophagy in mice.</a> British Journal of Pharmacology. 173 (23), 3359-3371 (2016).</li>
</ol>

יוהנס הקיא Berg מוזכר בתור ממציא על יישום פטנט (PCT/EP2012/070088) של אוניברסיטת ציריך. מיכל בפפינגר, לינדה שלהמר ויוהנס ואום ברג מוזכרים כממציאים ביישום פטנטים (EP19166231) של אוניברסיטת ציריך. למחברים אין אינטרסים פיננסיים נוספים.

הסעה-משלוח משופר, או הלחץ בתיווך עירוי התרופה לתוך המוח, הוצע לראשונה בתחילת 19903. גישה זו מבטיחה הפרזיה של כמויות גדולות של מוח מאחורי מחסום מוח הדם באופן מבוקר2. עם זאת, עד כה, רק כמה ניסויים קליניים בוצעו באמצעות גישה זו, חלקית בגלל שהיה מעובד קליני הראה באופן טכני תובענית24,25. ההתפתחויות האחרונות בעיצוב קטטר ותוכניות אינפוזיה נראה להתגבר על הקשיים הטכניים האלה8,<sup class="xr...

מחסום מוח הדם (BBB) יוצר גבול חדיר למחצה המפריד בין מערכת העצבים המרכזית (CN) לבין מחזור הדם. להגיע לתוך ה-CN עם therapeutics הוא הכרחי עם זאת בהקשר של מחלות שונות, כמו גידולים במוח, מחלת אלצהיימר (AD) או מחלת פרקינסון (PD) בין האחרים1. זה הופך חשוב בפיתוח של טיפולים חדשים, במיוחד אם התרופה נבדק מציג חדירות bbb המסכן או חשיפה מערכתית שלה יכול להוביל רעילות מסוכנת1,2. חלק מהנוגדנים המשמשים קלינית להציג את שתי תכונות אלה. פתרון לבעיה זו יהיה להעביר את הtherapeutics ישירות מאחורי BBB.
הסעה משופרת (משלוח) היא טכניקה נוירוכירורגית המאפשרת הפריה אפקטיבית של כמויות גדולות של מוח. זה מושגת על ידי התקנת כירורגית אחד או יותר קטטרים באזור המטרה. במהלך יישום התרופה, הדרגתי לחץ נוצר בפתיחת הצנתר, אשר הופך את הכוח המניע של הפיזור infusate ברקמה3,4. לפיכך, משך העירוי אינו מקדמי הדיפוזיה הקובעים את טווח הפרפיוז2,4,5. זה מספק משלוח אחיד של האינפופוסט מעל נפח המוח הרבה יותר גדול לעומת קונבנציונאלי, דיפוזיה מבוסס גרם הזרקת שיטות2,6. באותו זמן, מודאליות זו מסירה יש סיכון נמוך יותר של נזק לרקמות2. בהתאם לכך, מותר להפעיל מינהל בטוח ואפקטיבי של chemotherapeutics קונבנציונאלי לטיפול בגידולים של מערכת העיכול, כמו גם מסירה של מתווכים אימונומודולטוריים או אגניים ונוגדנים אנטדיוניים בהמון הפרעות אחרות בתחומי העיכול2 ,7,8,9. לח הוא נבדק כעת טיפולים של מחלת פרקינסון, מחלת אלצהיימר, כמו גם בדרגה גבוהה glioma2,7,8,10,11.
העיצוב קטטר ואת משטר ההזרקה הם בין הגורמים החשובים ביותר המשפיעים על התוצאה של שלח 10,12,13,14,15,16. יתרה מזאת, היא מחייבת תכונות פיזיוכימיות מסוימות של האינפופוסט, כולל גודל מתון של החלקיקים, מטען אנייוני, ואהדה לרקמות נמוכות 10,17. כל אחד מהפרמטרים הללו צריך להיות מותאם בהתאם לתכונות היסטולוגית של אזור המוח כדי להיות ממוקד2,10,17.
כאן אנו מתארים מתודולוגיה לביצוע ביצוע של פתרון נוגדן לתוך putamen הזנב (סטריאטום) של עכברים. יתר על כן, הפרוטוקול כולל הכנת קטטרים השלב בתוך הגדרת מעבדה, בדיקות אותם בתוך מבחנה וביצוע של לח.
ישנם מספר עיצובים קטטר זמין בספרות, שונות על ידי צורת הצינורית, החומרים המשמשים ואת מספר הפתחים קטטר12,15,18,19,20 ,21,22. אנחנו משתמשים קטטר צעד עשוי סיליקה מותך בולטות 1 מ"מ ממחט מתכת בקצה קהה. זה עיצוב קטטר יכול להיות מיוצר בקלות במעבדת מחקר ומגלה מעניקה תוצאות משופרת טוב כאשר נבדק בתוך מבחנה עם בלוקים agarose עם פרמטרים פיזיים דמוי המוח בתוך כימוסמה ב vivo23.
יתר על כן, אנו ליישם משטר השיא עבור אספקת 5 μL של infusate ב vivo. בפרוטוקול כזה שיעור ההזרקה גדל מ 0.2 μL/min ל מקסימום של 0.8 μL/min, ובכך למזער את הסיכויים של ריפלוקס לאורך הקטטר, כמו גם הסיכון של נזק לרקמות16. באמצעות פרוטוקול זה, יש לנו בהצלחה מנוהל עכברים עם עד 20 μg של נוגדן ב 5 μL של PBS במהלך 11 דקות 30 s.
הפרוטוקול יכול להיות מותאם בקלות עבור אמצעי אינפוזיה אחרים או להזרקת חומרים אחרים שונים, לדוגמה chemotherapeutics, ציטוקינים, חלקיקים נגיפי או ליפוזומים2,10,14,18 ,22 במקרה של שימוש בחוסר השימוש בתכונות פיזיקליות שונות באופן דרסטי בהשוואה לתמיסת מלח (PBS) או לתמיסה מלאכותית (aCSF) של נוגדנים, מומלץ לבצע פעולות אימות נוספות. עבור הרכבה קטטר, ואלידציה-מדיה, אנו מתארים את כל השלבים באמצעות רובוט סטריאוטקטיקה עם מקדחה ויחידת הזרקה רכוב על מסגרת סטריאוטקטיקה רגילה. ניתן לבצע הליך זה גם עם מסגרת סטריאוטקטיקה ידנית המחוברת למשאבת מיקרו-אינפוזיה ניתנת לתכנות שיכולה לנהוג במיקרו מזרקים מזכוכית שתוארו.

<table><tbody><tr><td>10 &mu; מזרק L</td><td>המילטון</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>27 גרם מחט קצה קהה</td><td>המילטון</td><td>7762-01</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Promega</td><td>V3121</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezol</td><td>Janssen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שעוות עצם</td><td>בראון</td><td>1029754</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>אינדיביור שוויץ AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>פייזר AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקדחים דנטליים, פלדה, גודל ISO 009</td><td>Hager & Meisinger</td><td>1RF009</td><td></td></tr><tr><td>אתנול 100%</td> <td>Reuss-Chemie AG</td><td>179-VL03K-/1</td><td></td></tr><tr><td>Fentanyl</td><td>Helvepharm AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FITC-Dextran, 2000 kDa</td><td>Sigma Aldrich</td><td>FD2000S</td><td></td></tr><tr><td>Flumazenil</td><td>Labatec Pharma AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פורמלדהיד</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>F8775-500ML</td><td></td></tr><tr><td>צמיגות גבוהה דבק ציאנואקרילט</td><td>תמיסת יוד מיגרוס</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Mundipharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medetomidin</td><td>Orion Pharma AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microforge</td><td>Narishige</td><td>MF-900</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Roche Pharma AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים</td><td>Bausch + Lomb</td><td>ויטמין A Blache</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן IgG נגד חולדות (H+L) פוליקלונלי בשילוב עם Alexa Fluor 647</td><td>Jackson Immuno</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scalpels</td><td>Braun</td><td>BB518</td><td></td></tr><tr><td>צינורות סיליקה קוטר פנימי 0.1 מ"מ, עובי דופן של 0.0325 מ"מ</td><td>Postnova</td><td>Z-FSS-100165</td><td></td></tr><tr><td>מסגרת סטריאוטקטית לעכברים</td><td>Stoelting</td><td>51615</td><td></td></tr><tr><td>רובוט סטריאוטקטי</td><td>Neurostar</td><td>מקדחה והזרקה רובוט</td><td></td></tr><tr><td>Succrose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0389-500G</td><td></td></tr><tr><td>דבק רקמות מקומי</td><td>Zoetis</td><td>GLUture</td><td></td></tr><tr><td>Trypan כחול</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Water</td><td>Bichsel</td><td>1000004</td><td></td></tr></tbody></table>

מסירת נוגדנים למוח מורנה באמצעות הסעה-משלוח משופר

Delivery of Antibodies into the Murine Brain via Convection-enhanced Delivery

הסעה משופרת (למעלה) היא טכניקה נוירוכירורגית המאפשרת הפריה אפקטיבית של כמויות גדולות של המוח באמצעות מערכת קטטר. גישה כזו מספקת שיטת מסירה בטוחה על ידי-העברת מחסום מוח הדם (BBB), ובכך לאפשר טיפול עם therapeutics עם העניים BBB-חדירות או אלה שעבורם חשיפה מערכתית אינה רצויה, למשל, בשל רעילות. משופרת דורש אופטימיזציה של העיצוב קטטר, פרוטוקול הזרקה, ומאפיינים של האינפופוסט. עם פרוטוקול זה אנו מתארים כיצד לבצע את הפתרון המכיל עד 20 μg של נוגדן לתוך putamen העכבר של עכברים. הוא מתאר את הכנת קטטרים הפסיעה, בוחן אותם בתוך מבחנה וביצוע השימוש בעכברים באמצעות תוכנית הזרקה משופרת. הפרוטוקול יכול להיות מותאם בקלות עבור אמצעי אינפוזיה אחרים וניתן להשתמש בהם להזרקת משתמשים שונים או חומרים פעילים מבחינה פרמקולוגית או לא פעילים, כולל chemotherapeutics, ציטוקינים, חלקיקים נגיפי, וליפוזומים.

פרוטוקול זה מאפשר הכנה של קטבי שלב (איור 1) לשימוש בהליך מתקדם בסביבת מעבדה. כדי לשלוט על הקטטרים עבור דליפה, ריפלוקס לאורך מערכת המחט וסתימת, אנו ממליצים ביצוע זריקות של צבע, למשל, טרימין כחול פתרון, לתוך בלוק agarose. איור 3 מתאר ענן של טרימין כחול ויוצרים לאחר ההזרקה של 1 μl ב 0.5 μl/דקה באמצעות צנתר מתקדם (איור 3a). הריפלוקס לאורך מערכת המחט היה גלוי בתחילת שלב הקטטר. יתרה מזאת, הענן המפוזר יצר צורה כדורית מבוקשת. זה לעומת זאת ע...

הסעה משופרת (משלוח) היא שיטה המאפשרת אספקה אפקטיבית של therapeutics למוח על ידי הפרזיה ישירה של כרכים רקמות גדולות. ההליך מחייב שימוש בקטטרים ובהליך הזרקה ממוטב. פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה עבור הודעת הנוגדן למוח העכבר.

Convection-enhanced delivery (CED) is a neurosurgical technique enabling effective perfusion of large brain volumes using a catheter system. Such an ...

פרוטוקול זה יכול לשמש לביצוע מסירה משופרת הסעה מכרסמים קטנים באמצעות מערכת קטטר צעד עבור חיסון אחיד מתכוונן של אזורי המוח היעד. היתרון של משלוח משופר הסעה הוא שזה מאפשר משלוח של חומרים לאזור העניין לעקוף את מחסום הדם - מוח עם נזק לרקמות קטנות או reflux. טכניקה זו שימושית בעיקר לאספקת חומרים טיפוליים כגון נוגדנים למוח.ולכן ניתן להשתמש בו כדי למקד תנאים נוירולוגיים רבים. להדגים את ההליך תהיה מיכל בפנר, פוסט-דוקטורט מהמעבדה שלי. התחל על ידי חיתוך חתיכת צינורות נימי סיליקה התמזגו עם קוטר פנימי של 0.1 מילימטר ועובי קיר של 0.325 מילימטר לאורך של 30 מילימטרים.לאחר בחינת הצינורות לסדקים השתמש microforge כדי לחמם את הקצוות כדי להבטיח את פתחי צינורות יש משטח חלק. לאחר מכן, הר מחט 27-מד על מזרק 10 מיקרו ליטר והצב את המזרק ברובוט סטראוטקטי. השתמש ברובוט כדי להזיז את המזרק על משטח קשה ולגעת על פני השטח עם קצה המחט.לאחר שנומק עמדה זו לרומם את המחט כדי לאפשר מיקום של נימי סיליקה התמזגו בתוך המחט, כך 20 מילימטרים של הבלט נימי מן המחט. השתמש פיפטה כדי להפיץ באופן שווה שני microliters של צמיגות גבוהה cyanoacrylate דבק מעל נימי החל מחט מתכת וסיים עשרה מילימטרים מעל הקצה התחתון של נימי. השתמש ברובוט הסטראוטקטי כדי להוריד את מחט המתכת עד קצה המחט הוא מילימטר אחד מעל משטח הייחוס כדי לתקן את נימי סיליקה

delivery-antibodies-into-murine-brain-via-convection-enhanced

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בדיקות פרה יסודית של תרופות הפועלות על מערכת העצבים המרכזית כרוך לעתים קרובות בהערכת השוואת biodistribution התרופה בשיתוף עם מסלולים ספציפיים של הממשל. הנה שלוש שיטות נפוצות של משלוח מערכתית (תוך ורידי, intraperitoneal, ובעל פה), כמו גם שיטה למסירה מקומית (הסעה משופרת משלוח) הם הוכיחו בעכברים.

תרופות משלוח מערכתית מקומי לטיפול במחלות של מערכת העצבים המרכזית מודלים מכרסמים

מאמר זה מדגים שתי שיטות שונות של הזרקת מאוד: 1) לתוך המוח (intracerebroventricular) ו 2) מערכתית (תוך ורידי) כדי להציג את סוכני טיפולית לתוך מערכת העצבים המרכזית של עכברים הילוד.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

התרופה אנקפסולציה משפר את הספציפיות של תאי הגידול ומפחית רעילות עצבית.

העברה משופרת של ליפוזומים טעונים מצופים פוליאתילן גליקול לתוך גידול במוח של חולדה

מקור: Zamboni, M., et al., אינדוקציה של שינוי תאי לפטומנינגיאלי באמצעות הזרקה תוך-ציסטרנלית. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים את ההליך של העברת תרופה משרה לבור המים של עכבר מורדם. ההזרקה גורמת באופן סלקטיבי לביטוי סמן פלואורסצנטי בתאי פני המוח הנגישים באמצעות נוזל מוחי שדרתי, שאושר על ידי הדמיה פלואורסצנטית.

מתן תרופות ממוקד במודל עכבר באמצעות הזרקת Cisterna Magna

סרטון זה מדגים טכניקת העברה משופרת הסעה (CED) להעברת נוגדנים למוח העכבר. גולגולתו של עכבר מורדם נחשפת, ונוצר חור בור באזור היעד למסירת נוגדנים. צנתר שלב המכיל נוגדנים מוחדר לאתר המטרה, ובאמצעות משאבת עירוי נוצר שיפוע לחץ המספק נוגדנים בקצב מבוקר.

העברה משופרת של נוגדנים למוח עכבר

סרטון זה מדגים הליך של אספקת נוגדנים בסיוע אולטרסאונד במודל עכבר. מיקרו-בועות המוזרקות רטרו מתנודדות תחת אולטרסאונד, יוצרות הפרעה חולפת במחסום הדם-מוח, ומאפשרות לנוגדנים המסומנים להיכנס למוח.

משלוח נוגדנים בסיוע אולטרסאונד במודל עכבר

מקור: Leda, A. R., et al. טכניקת עירוי מיקרו-כירורגיה של עכבר להעברת חומרים ממוקדים למערכת העצבים המרכזית דרך עורק הצוואר הפנימי. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים הליך מיקרו-כירורגי שנועד להקל על עירוי ממוקד של חומר בדיקה למוח דרך עורק הצוואר הפנימי (ICA). ההליך כולל תפירה מדויקת ומניפולציה של כלי הדם כדי להגביל זמנית את זרימת הדם, מה שמבטיח אספקה מבוקרת. צינור נימי מוחדר לעורק הצוואר החיצוני (ECA) ומתקדם לכיוון ההתפצלות. עם העירוי, החומר עוקף את זרימת הדם המערכתית, חוצה את מחסום הדם-מוח ומשיג...

העברת חומרים ממוקדים למוח העכבר באמצעות עירוי לעורק הצוואר הפנימי

מודל עכבר של שיקום בסיס גולגולת אנדוסקופית האנושי פותח שיוצר ממשק semipermeable בין המוח והאף באמצעות שתלי רירית האף. שיטה זו מאפשרת לחוקרים ללמוד מסירה למערכת העצבים המרכזית של הרפוי משקל מולקולרי גבוהה שאינם נכללים אחרת על ידי מחסום דם המוח, כאשר באופן מערכתי.

Heterotopic הרירי Engrafting נוהל העברת תרופות ישיר למוח בעכברים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקת עירוי מיקרו-כירורגית של עכבר, המעבירה ביעילות חומרים ישירות למוח דרך עורק הצוואר הפנימי.

טכניקה אינפוזיה Microsurgery עכבר למשלוח ואלכוהול ממוקד לתוך מערכת העצבים המרכזית דרך עורק התרדמה הפנימי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול באמצעות התקן מיקום העכבר המאפשר את המיקום המתאים של עכברים עבור המינהל intranasal של המוח מיקוד פפטיד-siRNA המאפשר גנים יעילים השתקה במערכת העצבים המרכזית.

מתקן מיקום להצבת עכברים במהלך המסירה Intranasal siRNA למערכת העצבים המרכזית

מוצג כאן פרוטוקול כדי לפתוח באופן חולף את מחסום הדם - מוח (BBB) או במוקד או בכל מוח העכבר כדי לספק נוגדנים בעלי תווית פלואורסצנטית ולהפעיל מיקרוגליה. כמו כן מוצגת שיטה לזהות את המסירה של נוגדנים והפעלת מיקרוגליה על ידי היסטולוגיה.

העברת נוגדנים למוח באמצעות אולטרסאונד סריקה ממוקדת

למד את שיטת ההסעה-משלוח המשופרת להעברת נוגדנים למוח עכברים. טכניקה זו מאפשרת מעקף של מחסום הדם-מוח תוך מזעור נזק לרקמה והגברת ספציפיות הטיפול במחלות נוירולוגיות.

מסירת נוגדנים למוח מורנה באמצעות הסעה-משלוח משופר

גלה סרטונים נוספים