Name: מחזיק מדגם All-in-one עבור קריסטלוגרפיה Macromolecular X-ray עם פיזור רקע מינימלי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-06T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: למד שימוש במחזיק מדגם חדשני לגידול גבישים ואיסוף נתוני עקיפת קרני X במצב קריסטלוגרפיה מקרומולקולרית. השיטה מאפשרת ניטור ואיסוף נתונים ללא מניפולציה בגבישים עדינים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות BESSY II, מופעל על ידי הלמהולץ-זנטרום ברלין על הגישה והתמיכה של הקרן, ואת המחלקות של איכות סביבה ועיצוב טכני לעזרתם עם עיצוב ובנייה וגישה למתקני מדפסת תלת-ממד.

התראה: בכל העבודה הבאה, חשוב מאוד שרדיד האלומיניום של הצבע הצהוב לא יגע באצבעות לא מוגנים, בגלל שזהום אפשריים למחזיק הדגימה. כמו כן, השימוש של מלקחיים מוגנים מומלץ מאוד.
1. מחזיק הדגימה
<ol><li>השתמש באחד משלושת הסוגים של מחזיק המדגם. הערה: שלוש גרסאות שונות של מחזיק המדגם החדש מוצגות באיור 1. כולם מכילים מבנה תמיכה פלסטיק שחור, coc אטום רדיד אלומיניום על החלק החיצוני, מיקרופור מובנית פוליאימיד רדיד אלומיניום בפנים. סוג 1 (איור 1A) מכיל טבעת פלסטיק חיצונית קבועה, ואילו עבור סוגים 2 ו-3 (איור 1a,1a) את הטבעת החיצונית ניתן לשבור את מכנית על נקודות הפסקה המתאימות לשימוש במערכות העברה לדוגמה אוטומטית (ראה אדום חיצים באיור 1B). העיצוב של מחזיקי מדגם מאפשר התקנה של טיפות התגבשות מרובות על רדיד האלומיניום הצהוב. היא אינה מסכנת את הניטור של ניסוי התגבשות, מכיוון שהחומר שקוף מאוד לאור נראה. The 21 יקרומטר עבה פוליאימיד רדיד אלומיניום גם תכונות 5 יקרומטר נקבוביות, אשר מאפשר מניפולציה קריסטל פשוטה על ידי הטבילה מאוחר יותר. מאז השידור של קרני רנטגן קרוב ל 1.0 בכל האנרגיה הנפוצה לאיסוף נתונים באמצעות macromolecular קריסטלוגרפיה, תרומת רדיד הנייר לפיזור הרקע בניסוי עקיפה הוא זניח28.</li>
</ol>2. הגדרת טיפות התגבשות
<ol><li>צור משטח נקי ונטול אבק בעזרת מטלית נטולת מוך. קח מחזיק דוגמה אחד מהקופסה שלו ובעדינות למקם אותו, רדיד צהוב כלפי מעלה, על משטח נקי כדי למנוע נזק או ניקוב לא רצוי של רדיד COC האחורי.</li>
	<li>הגדרת טיפות התגבשות עם נפח מומלץ מרבי של 2 μL על רדיד האלומיניום הצהוב כפי שהוא ייעשה על שקופיות כיסוי נפוץ. מניחים את הטיפות בעדינות כדי למנוע קרע או פירסינג של רדיד האלומיניום באמצעות פיפטה. על מחזיק מדגם מסוג 1 (איור 2A) עד שלוש טיפות ניתן להציב, ואילו על בעלי מדגם מסוג 2 ו 3 2 טיפות הם המקסימום המומלץ (איור 2a).</li>
	<li>הפוך את מחזיק המדגם מעל ומניחים אותו על חלל מראש משומן של צלחת לינברו בסגנון 24. השתמש בעזרי המיקום (ראה חיצים אדומים באיור 1 א) של מחזיק הדגימה כדי להנחות אותו למיקומו האופטימלי.</li>
	<li>להבטיח את המיקום הנכון של מחזיק המדגם כדי למנוע אידוי לא רצוי (איור 2A).</li>
</ol>3. התבוננות בצמיחת הגביש
<ol><li>על ידי הצבת לוחית התגבשות תחת מיקרוסקופ אור שידור, עם או בלי מקטרנים, לנטר את צמיחת הגביש ללא כל הפרעה של הניסוי (איור 4).</li>
	<li>בעת שימוש קטן יותר 18-mm בעלי המדגם של סוג 3 (איור 1C), אשר עוצבו לשימוש על לוחות הרגל sbs, להשתמש רובוט הדמיה מסוגל לטפל לוחות השטח sbs לפקח על צמיחת הגביש באופן אוטומטי יותר.</li>
</ol>4. מניפולציה גבישית
הערה: מומלץ לבצע את כל השלבים הבאים תחת מיקרוסקופ אור שידור.
<ol><li>
הגנה מפני הקפאה
	<ol>
<li>נקב בעדינות את רדיד ה-COC החיצוני בעזרת צינורית עדינה. ודא שנייר הכסף הצהוב הפנימי נשאר ללא שינוי. הניקוב צריך להיות ממש ליד הירידה כי הוא להיות מניפולציות (איור 3A,3a).</li>
		<li>השתמש בפתיל נייר משובח והכנס אותו לתוך החור. דחפו בזהירות את הפתיל קדימה עד שהוא נוגע ברדיד האלומיניום הצהוב. שמור את הפתיל במגע עם רדיד מחורר. הפתיל יהיה לשאוב את כל הפתרון העודף. הזמן הנדרש להסרת נוזלים מלאה תלוי בצמיגות של הפתרונות והרכב האם משקאות (איור 3B).</li>
		<li>אחרי כל נוזל נשאב החוצה, בעדינות לבטל את הפתיל נייר. זכור את המיקום של הירידה, מאז זה לא יכול להיות גלוי לאחר הסרת משקה האם.</li>
		<li>קח את הצנרת הסטנדרטית כדי למרוח. כמות קטנה של תמיסה להגנה על המקפיא, מקס 3 μL, שימוש בקצה משתנה (לדוגמה, עצה לטעינת ג'ל) דרך אותו חור. , ברגע שהנוזל מושם. משכי את הקצה החלק של הרדיד הצהוב מאפשר דיפוזיה על פני נייר הכסף. הזמן להשיג הגנה על הקריסטלים מאוד תלוי בפתרון המועסקים וברכיביו.</li>
		<li>כדי לחתום מאטום את רדיד ה-COC של הריפוי העצמי, הנח בעדינות אצבע מוגנת על החור בערך 1 והחלק אותו לאורך הניקוב. הלחץ הקל בשילוב עם הטמפרטורה הגבוהה יקדם את האטימות של דקירות, שאינן גדולות מדי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ליגאט הערה: עודף אמא משקה ניתן להסיר לפני הטבילה. לשם כך, בצע את השלבים המתוארים ב-4.1.1 to 4.1.3.<ol>
<li>מתמוסס את הליטר לאם ליקר בריכוז הרצוי בצינור התגובה.</li>
		<li>ספין הפתרון עבור 10 דקות על 12,000 x g על מנת להסיר חלקיקים מסיסים. במידת הצורך, השתמש בצנטריפוגה מבוקרת טמפרטורה.</li>
		<li>הנח בעדינות נפח של מקסימום. 3 μl של ליגנד המכיל פתרון בפער בין רדיד coc לבין הסרט פוליאימיד באמצעות טיפ ארוך, הבלטת מחמד. . משכי את הקצה</li>
		<li>כדי לחתום מאטום את רדיד ה-COC של הריפוי העצמי, הנח בעדינות אצבע מוגנת על החור בערך 1 והחלק אותו על-פני הניקוב (ראה גם 4.1.5).</li>
		<li>מודדת את הניסוי לזמן מה כדי לאפשר דיפוזיה על פני הקרום. זמן הטבילה תלוי בצמיגות של פתרון הפיזור וברכיביו29.</li>
		<li>חזור על שלבים ה4.2.1 ל4.2.5 מספר פעמים כדי לטבול לאחר מכן בליחים שונים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. איסוף נתונים עקיפה באתרו בטמפרטורת הסביבה
הערה: כדי למזער את פיזור הממס, הסר את הפתרון העודף לפני איסוף הנתונים.
<ol><li>להבטיח לחות יציבה מבוקרת בסביבת beamline עם תנאים מראש נקבע30.</li>
	<li>הרם בעדינות את רדיד ה-COC השקוף בנקודה המיועדת באמצעות מלקחיים וקלף אותו כאילו אחד יסיר את המכסה מספל יוגורט ( איור 6B).</li>
	<li>הרימו בעדינות את מחזיק המדגם מחלל הריק שלו והכניסו אותו מיד לבסיס מגנטי מוכן מראש לדוגמה. אין צורך בהדבקה בשלב זה (איור 6B).</li>
	<li>החל לחץ עדין כדי להבטיח את המיקום הנכון של מחזיק המדגם בתוך הבסיס.</li>
	<li>הר את מחזיק המדגם על מדידת מד זווית ולהבטיח מיקום נכון של המחזיק. בהתאם לגיאומטריה מד זווית מחזיק המדגם יכול להיות מסובב על ידי עד 160 ° ללא גרימת הצללה במהלך ניסוי עקיפה.</li>
	<li>השתמש פתיל נייר ולגעת בעדינות פוליאימיד רדיד צהובה מאחור כדי להסיר משקה אם עודף. הינכם מתבקשים לשים לב כי בשלב זה, ליגולי הטבילה או הגנת ההקפאה ניתן לבצע בדיוק. המדגם מוכן כעת עבור איסוף נתונים של מרכוז ועקיפה.</li>
	<li>בשעת שימוש במחזיק מדגם עם טבעת חיצונית נשלפת, הפעילו לחץ עדין על ידי החזקת הטבעת החיצונית ושוברים אותו בנקודות ההפסקה המיועדות (איור 6C). המדגם מוכן כעת עבור איסוף נתונים של מרכוז ועקיפה.</li>
</ol>6. באיסוף נתונים עקיפה באתרו בטמפרטורת הקריוגניים
הערה: מומלץ להסיר שאריות משקאות אם מהמדגם על ידי ביצוע השלבים 4.1.1. ל4.1.3 לפני שתמשיך בשלבים הבאים כדי למזער את פיזור הממס. רוב הדגימות עשויים להיות מועברים לחנקן נוזלי ללא הגנה מוקדמת31. אם יש צורך בהגנה על ההקפאה, ראה צעדים 4.1.1. ל4.1.5
<ol><li>הרם בעדינות את רדיד ה-COC בנקודה המיועדת באמצעות מלקחיים וקלף אותו (ראה שלב 5.1.2) (איור 6A).</li>
	<li>קח את מחזיק הדגימה מהחלל והבהר אותו על בסיס מדגם מגנטי. ניתן להחיל לחץ עדין על מנת להבטיח התאמה נכונה והדוקה (ראה שלב 5.1.5, איור 6B). הערה: נקודות ההפסקה המיועדות באופן סימטרי מאפשרות הסרה פשוטה של הטבעת החיצונית של מחזיק המדגם על-ידי החלת לחץ עדין (ראה שלב 5.1.8., איור 6C). עכשיו, המחזיק דגימה מוכן יכול להיות צלל לתוך חנקן נוזלי. הגיאומטריה של המחזיק לדוגמה סוגים 2 ו-3 (איור 1B,1b) מאפשר העברה לתוך מבחנות סטנדרטי לדוגמה עמוד השדרה, אשר ניתן להשתמש עבור רובוט בסיוע הרכבה לדוגמה (איור 6d).</li>
</ol>

<ol><li>Berman, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Protein+Data+Bank%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">The Protein Data Bank.</a> Nucleic Acids Research. 28 (1), 235-242 (2000).</li>
<li>Mac Sweeney, A., D'Arcy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+rapid+method+for+mounting+protein+crystals+at+room+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">A simple and rapid method for mounting protein crystals at room temperature.</a> Journal of Applied Crystallography. 36 (1), 165-166 (2003).</li>
<li>Kalinin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+sample+mounting+technique+for+room-temperature+macromolecular+crystallography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">A new sample mounting technique for room-temperature macromolecular crystallography.</a> Journal of Applied Crystallography. 38 (2), 333-339 (2005).</li>
<li>Basavappa, R., Petri, E. T., Tolbert, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+and+gentle+method+for+mounting+crystals+in+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">A quick and gentle method for mounting crystals in capillaries.</a> Journal of Applied Crystallography. 36 (5), 1297-1298 (2003).</li>
<li>Pflugrath, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+cryocrystallography-methods+for+cooling+and+mounting+protein+crystals+at+cryogenic+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Macromolecular cryocrystallography-methods for cooling and mounting protein crystals at cryogenic temperatures.</a> Methods. 34 (3), 415-423 (2004).</li>
<li>Garman, E. F., Schneider, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+Cryocrystallography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Macromolecular Cryocrystallography.</a> Journal of Applied Crystallography. 30 (3), 211-237 (1997).</li>
<li>Gavira, J. A., Toh, D., Lopéz-Jaramillo, J., García-Ruiz, J. M., Ng, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ab+initio+crystallographic+structure+determination+of+insulin+from+protein+to+electron+density+without+crystal+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Ab initio crystallographic structure determination of insulin from protein to electron density without crystal handling.</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 58 (7), 1147-1154 (2002).</li>
<li>Martínez-Rodríguez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystallization+and+preliminary+crystallographic+studies+of+an+active-site+mutant+hydantoin+racemase+from+Sinorhizobium+meliloti+CECT4114%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+F%3A+Structural+Biology+and+Crystallization+Communications%22%5BJournal%5D)">Crystallization and preliminary crystallographic studies of an active-site mutant hydantoin racemase from Sinorhizobium meliloti CECT4114.</a> Acta Crystallographica Section F: Structural Biology and Crystallization Communications. 64 (Pt 1), 50-53 (2007).</li>
<li>Hope, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryocrystallography+of+biological+macromolecules%3A+a+generally+applicable+method%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+B%3A+Structural+Science%22%5BJournal%5D)">Cryocrystallography of biological macromolecules: a generally applicable method.</a> Acta Crystallographica Section B: Structural Science. 44 (1), 22-26 (1988).</li>
<li>Teng, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mounting+of+crystals+for+macromolecular+crystallography+in+a+free-standing+thin+film%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Mounting of crystals for macromolecular crystallography in a free-standing thin film.</a> Journal of Applied Crystallography. 23 (5), 387-391 (1990).</li>
<li>Thorne, R. E., Stum, Z., Kmetko, J., O'Neill, K., Gillilan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfabricated+mounts+for+high-throughput+macromolecular+cryocrystallography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Microfabricated mounts for high-throughput macromolecular cryocrystallography.</a> Journal of Applied Crystallography. 36 (6), 1455-1460 (2003).</li>
<li>Jian-Xun, Q., Fan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+loopless+mounting+method+for+cryocrystallography%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Physics+B%22%5BJournal%5D)">An improved loopless mounting method for cryocrystallography.</a> Chinese Physics B. 19 (1), 010601(2010).</li>
<li>Kitatani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Technique+of+Manipulating+a+Protein+Crystal+Using+Adhesive+Material%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Physics+Express%22%5BJournal%5D)">New Technique of Manipulating a Protein Crystal Using Adhesive Material.</a> Applied Physics Express. 1 (3), 037002(2008).</li>
<li>Mazzorana, M., Sanchez-Weatherby, J., Sandy, J., Lobley, C. M. C., Sorensen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evaluation+of+adhesive+sample+holders+for+advanced+crystallographic+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">An evaluation of adhesive sample holders for advanced crystallographic experiments.</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 70 (Pt 9), 2390-2400 (2014).</li>
<li>Wierman, J. L., Alden, J. S., Kim, C. U., McEuen, P. L., Gruner, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graphene+as+a+protein+crystal+mounting+material+to+reduce+background+scatter%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Graphene as a protein crystal mounting material to reduce background scatter.</a> Journal of Applied Crystallography. 46 (5), 1501-1507 (2013).</li>
<li>Parkin, S., Hope, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+Cryocrystallography%3A+Cooling%2C+Mounting%2C+Storage+and+Transportation+of+Crystals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Macromolecular Cryocrystallography: Cooling, Mounting, Storage and Transportation of Crystals.</a> Journal of Applied Crystallography. 31 (6), 945-953 (1998).</li>
<li>Papp, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+compact+and+precise+sample+holder+for+macromolecular+crystallography%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Structural+Biology%22%5BJournal%5D)">Towards a compact and precise sample holder for macromolecular crystallography.</a> Acta Crystallographica Section D: Structural Biology. 73 (10), 829-840 (2017).</li>
<li>Roedig, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+micro-patterned+silicon+chip+as+sample+holder+for+macromolecular+crystallography+experiments+with+minimal+background+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A micro-patterned silicon chip as sample holder for macromolecular crystallography experiments with minimal background scattering.</a> Scientific Reports. 5, 10451(2015).</li>
<li>Roedig, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Room-temperature+macromolecular+crystallography+using+a+micro-patterned+silicon+chip+with+minimal+background+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Room-temperature macromolecular crystallography using a micro-patterned silicon chip with minimal background scattering.</a> Journal of Applied Crystallography. 49 (3), 968-975 (2016).</li>
<li>Zarrine-Afsar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystallography+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Crystallography on a chip.</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 68 (3), 321-323 (2012).</li>
<li>Mueller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixed+target+matrix+for+femtosecond+time-resolved+and+in+situ+serial+micro-crystallography%5BTitle%5D)+AND+%22Structural+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Fixed target matrix for femtosecond time-resolved and in situ serial micro-crystallography.</a> Structural Dynamics. 2 (5), 054302(2015).</li>
<li>Feld, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-Z+polymer+sample+supports+for+fixed-target+serial+femtosecond+X-ray+crystallography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Low-Z polymer sample supports for fixed-target serial femtosecond X-ray crystallography.</a> Journal of Applied Crystallography. 48 (4), 1072-1079 (2015).</li>
<li>le Maire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-plate+protein+crystallization%2C+in+situ+ligand+soaking+and+X-ray+diffraction%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">In-plate protein crystallization, in situ ligand soaking and X-ray diffraction.</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 67 (9), 747-755 (2011).</li>
<li>Soliman, A. S. M., Warkentin, M., Apker, B., Thorne, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+high-performance+X-ray+transparent+crystallization+plates+for+in+situ+protein+crystal+screening+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Development of high-performance X-ray transparent crystallization plates for in situ protein crystal screening and analysis.</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 67 (7), 646-656 (2011).</li>
<li>Aller, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+in+situ+diffraction+in+high-throughput+structure+determination+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology+%28Clifton%2C+N.J.%29%22%5BJournal%5D)">Application of in situ diffraction in high-throughput structure determination platforms.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 1261, 233-253 (2015).</li>
<li>Cipriani, F., Röwer, M., Landret, C., Zander, U., Felisaz, F., Márquez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CrystalDirect%3A+a+new+method+for+automated+crystal+harvesting+based+on+laser-induced+photoablation+of+thin+films%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica.+Section+D%2C+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">CrystalDirect: a new method for automated crystal harvesting based on laser-induced photoablation of thin films.</a> Acta Crystallographica. Section D, Biological Crystallography. 68 (Pt 10), 1393-1399 (2012).</li>
<li>Zander, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+harvesting+and+processing+of+protein+crystals+through+laser+photoablation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Structural+Biology%22%5BJournal%5D)">Automated harvesting and processing of protein crystals through laser photoablation.</a> Acta Crystallographica Section D: Structural Biology. 72 (4), 454-466 (2016).</li>
<li>Antimonov, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-area+Kapton+x-ray+windows%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+X-Ray%2FEUV+Optics+and+Components+X%22%5BJournal%5D)">Large-area Kapton x-ray windows.</a> Advances in X-Ray/EUV Optics and Components X. 9588, 95880F(2015).</li>
<li>McPherson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetration+of+dyes+into+protein+crystals%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+F%3A+Structural+Biology+Communications%22%5BJournal%5D)">Penetration of dyes into protein crystals.</a> Acta Crystallographica Section F: Structural Biology Communications. 75 (2), 132-140 (2019).</li>
<li>Bowler, M. G., Bowler, D. R., Bowler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raoult%27s+law+revisited%3A+accurately+predicting+equilibrium+relative+humidity+points+for+humidity+control+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Raoult's law revisited: accurately predicting equilibrium relative humidity points for humidity control experiments.</a> Journal of Applied Crystallography. 50 (2), 631-638 (2017).</li>
<li>Pellegrini, E., Piano, D., Bowler, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+cryocooling+of+naked+crystals%3A+are+cryoprotection+agents+always+necessary%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+Section+D%3A+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Direct cryocooling of naked crystals: are cryoprotection agents always necessary?</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 67 (10), 902-906 (2011).</li>
<li>Mueller, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macromolecular+crystallography+beamlines+at+BESSY+II+of+the+Helmholtz-Zentrum+Berlin%3A+Current+status+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Physical+Journal+Plus%22%5BJournal%5D)">The macromolecular crystallography beamlines at BESSY II of the Helmholtz-Zentrum Berlin: Current status and perspectives.</a> The European Physical Journal Plus. 130 (7), 141(2015).</li>
<li>Bowler, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automation+and+Experience+of+Controlled+Crystal+Dehydration%3A+Results+from+the+European+Synchrotron+HC1+Collaboration%5BTitle%5D)+AND+%22Crystal+Growth+%26+Design%22%5BJournal%5D)">Automation and Experience of Controlled Crystal Dehydration: Results from the European Synchrotron HC1 Collaboration.</a> Crystal Growth & Design. 15 (3), 1043-1054 (2015).</li>
<li>Yano, O., Yamaoka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryogenic+properties+of+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Cryogenic properties of polymers.</a> Progress in Polymer Science. 20 (4), 585-613 (1995).</li>
<li>Zander, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MeshAndCollect%3A+an+automated+multi-crystal+data-collection+workflow+for+synchrotron+macromolecular+crystallography+beamlines%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica.+Section+D%2C+Biological+Crystallography%22%5BJournal%5D)">MeshAndCollect: an automated multi-crystal data-collection workflow for synchrotron macromolecular crystallography beamlines.</a> Acta Crystallographica. Section D, Biological Crystallography. 71 (Pt 11), 2328-2343 (2015).</li>
</ol>

בקשות לפטנטים לגבי מחזיק המדגם דיווחו הוגשו על ידי הלמהולץ-זנטרום ברלין עם מספרי הרישום הבאים ותאריכי רישום עם הפטנט הגרמני משרד סימני מסחר: DE 10 2018 129 125.6, תאריך רישום נובמבר 20 th, 2018; DE 10 2018 125 129.7, תאריך רישום אוקטובר 11, 2018; DE 10 2017 129 761.8, תאריך הרשמה דצמבר13, 2017. יישום הפטנטים הבינלאומי הבאים באמצעות תוואי PCT, באמצעות העדיפות של DE 10 2017 129 761.8 כבר הוגשה, PCT/DE2018/101007. רישום של מודל כלי השירות עם מספר DE 20 2018 106 955.1 הוגשה ב 6דצמבר, 2018. מחזיק המדגם נעשה זמין מסחרית תחת שמות המסחר XtalTool ו XtalTool/HT על ידי יינה Bioscience, יינה, גרמניה.

התאמה לניסויי התגבשות. מחזיקי מדגם חדש ניתן להשתמש עבור תקן התגבשות שחרור תלוי ניסויים באמצעות 24-היטב לינברו סוג לוחות (סוגים 1 ו 2), או 24-ובכן לוחות טביעת רגל SBS שבו כל טוב יש קוטר של 18 מ"מ (סוג 3). ניתן להשתמש בהם במקום פתקי הכיסוי הסטנדרטיים של המיקרוסקופ. רדיד האלומיניום האמורגיים מבטיח את התכווצות האוויר של המערכת. הניטור של ניסוי התגבשות אפשרי באמצעות מיקרוסקופ אור שידור, בגלל השימוש ברחפות בהירות גבוהה. למיטב ידיעתנו, לא קיימים בעלי מדגם אחרים עבור לוחות התגבשות 24 שעות, אשר יאפשרו מניפולציה קריסטל או ניסויים עקיפה, ללא הסרת מכנית את הגביש מהטיפה, שבה הוא גדל. זה חשוב במיוחד, מאז חוקרים רבים בתחום עדיין להסתמך על צלחות כאלה עבור מיטוב גביש, בשל העובדה שניתן להשתמש באמצעי אחסון גדולים יותר לעומת 96-היטב לוחיות-שחרור. עם כרכים אלה טיפה גדולים יותר, ניתן להשיג קריסטלים גדולים יותר.
התאמה לטיפול בקריסטלים. בשל תכונות הריפוי העצמי של רדיד COC החיצוני והמבנה המיקרונקבובי של רדיד האלומיניום הצהוב הפנימי, הסביבה הגבישית נגישה וניתן לתמרן את הקריסטלים ללא העברתו מכנית לגורמים אחרים. זה הופך את בעלי הדגימה לנוחים מאוד. המערכת היחידה היחידה שאנו מכירים, המאפשרת גישה עקיפה ועדינה זו לגביש, היא מערכת CrystalDirect26. עם זאת, CrystalDirect הוא גמיש פחות מאז 96 מיוחד-לוחיות התגבשות היטב יש להשתמש. נייר הכסף, עליו גדלים הגבישים, הוא אותו החותם על ניסוי התגבשות והוא אינו מרפא את עצמו. משמעות הדבר היא כי הצמצם כי כבר מנוקב לתוך הנייר על ידי אבלציה לייזר עבור ליגנד או מסירה להגנה ההקפאה לקריסטלים יישאר פתוח, הגדלת הסיכוי לאידוי נוזלי. זה בניגוד לעיצוב שלנו, שם גבישים לא יהיו חשופים ישירות לסביבה גם אם רדיד COC מקבל פירסינג מספר פעמים.
התאמה לניסויים עקיפה באתרו בטמפרטורת הסביבה. מחזיק המדגם ניתן להסיר מלוחית התגבשות באופן ישר קדימה, תקוע על בסיס מגנטי ולשים על goniometer beamline. לניסוי עקיפה בטמפרטורת החדר, מומלץ להכניס את המדגם לזרם אוויר של לחות מוגדרת33. ליקר אמא סביב הגביש ניתן להסיר לפני לשים את מחזיק המדגם על מד זווית כדי להפחית את פיזור הרקע. מערכת כזו יציבה. במשך שעות
התאמת החומר המשמש לתפעול ואחסון ב 100 K. לא החומר המשמש לייצור מחזיק המדגם או הסרט פוליאימיד מושפעים לרעה על ידי קירור אותם לטמפרטורה נמוכה34. לפיכך, עבודה עם מחזיק המדגם בטמפרטורה נמוכה (g., 100 K) אינו מהווה בעיה רצינית.
התאמה לניסויים עקיפה באתרו ב-100 K. עבור איסוף נתונים ב 100 K בזרם חנקן, מחזיק המדגם צריך להיות מוסר מלוחית התגבשות כמו בפסקה הקודמת, תקוע על בסיס מגנטי ולשים לתוך זרם חנקן גז ב 100 K על goniometer בעלות. במקרה הצורך, המדגם עשוי להיות גם מוגן באמצעות ההקפאה, למרות שסביר להניח כי עבור דגימות עירום זה לא יהיה הכרחי ברוב המקרים31. לניסויים ב 100 K, מחזיקי המדגם סוג 2 ו 3 מתאימים יותר כי טבעת פלסטיק חיצונית ניתן להסיר. מכאן, הם בגודל קטן יותר, ולכן צריך להיות פחות נוטה לציפוי. עם זאת, ניתן להשתמש גם במחזיק לדוגמה מסוג 1. בהינתן לחות לא גבוהה מדי בהאטץ ' הניסיוני והציפוי הישר מערכת ההקפאה מיושר למחזיק הוא לא באמת בעיה.
מגבלות. הגיאומטריה של בעל המדגם מתיר איסוף נתונים עקיפה ללא הצורך על ידי שיטת סיבוב על טווח סיבוב הכולל של 160 °. זה מספיק כך שערכות נתונים עקיפה מלאה ניתן להשיג עבור רוב המערכות גביש. במקרים שבהם לא ניתן לעשות זאת, יש צורך למזג נתונים מיותר מגביש ביחד. כאשר הקריסטלים מגודלים יחד, ייתכן שניתן יהיה להתאים את גודל קרן הרנטגן של האירוע כך שרק חלקים מקריסטלים בודדים ייחשפו. במקרים קיצוניים, ייתכן שיהיה צורך לפנות לאסטרטגיית איסוף המידע הדומה ל35 הגישההראשונה. לסיכום, בעוד יש מגבלות מסוימות הקשורות מחזיקי המדגם, אלה יכולים להיות להתגבר ברוב המקרים. כמובן, זה תמיד אפשרי שנתקלים במצבים שבהם שום דבר מזה אינו אפשרי. במקרים כאלה, ייתכן שיהיה צורך לאתר שיטות אחרות להרכבת קריסטלים.
תיארנו סוג הרומן של מחזיק לדוגמה עבור קריסטלוגרפיה macromolecular והדגמנו את ההתאמה של מחזיקי מדגם עבור יישומים שונים. לוקח בחשבון את הטיפול פשוט להתגלות של גבישי חלבון, כמו גם את המאפיינים הייחודיים של מחזיקי מדגם, אנו מאמינים כי אלה מחזיקי לדוגמה תוכיח להיות תוספת רבת ערך לארסנל של מחזיקי מדגם עבור macromolecular קריסטלוגרפיה.

הידע של המבנה התלת-מימדי של הקרו הביולוגי מהווה אבן פינה חשובה בכל המחקרים הביולוגיים, הביוכימיים והביו-רפואיים הבסיסיים. זה אפילו משתרע על היבטים טרנסלבותית מסוימים של מחקר כזה, כמו למשל גילוי סמים. בין כל השיטות להשגת מידע תלת-מימדי כזה בקריסטלוגרפיה באמצעות רנטגן ברזולוציה אטומית הוא החזק ביותר והבולט ביותר כפי שמעידים העובדה כי 90% מהמידע המבני הזמין נתרם על-ידי רנטגן קריסטלוגרפיה1. הדרישה העיקרית של קריסטלוגרפיה רנטגן, אשר באותו זמן המגבלה העיקרית שלה, היא כי קריסטלים באיכות עקיפה צריך להיות מיוצר ומוכן לניסוי עקיפה. שלב זה עדיין מהווה את אחד מצווארי הקבוק העיקריים של השיטה.
מבחינה היסטורית, נתוני עקיפה מגבישי החלבון נאספו בטמפרטורת הסביבה. גבישים בודדים הועברו בקפידה לתוך נימים זכוכית או קוורץ לפני איסוף הנתונים, אמא משקאות התווסף נימים כך הקריסטלים לא להתייבש ואת נימים היו חתומים2,3, ד. מאז שנות ה-80, זה נעשה יותר ויותר ברור כי בשל תכונות מייננת של קרינת X ורגישות הקרינה הקרובה של קריסטלים macromolecular, איסוף נתונים בטמפרטורת הסביבה מהווה הגבלות חמורות על השיטה. אפוא, גישות פותחו כדי להקל על השפעות נזק לקרינה על ידי קירור macromolecular קריסטלים למטה כדי 100 K ולאסוף נתונים עקיפה בטמפרטורה נמוכה כזאת5,6. עבור עבודה בטמפרטורות נמוכות, ההרכבה של דגימות בנימים הפך מעשי בשל שיעור נמוך של העברת חום. למרות זאת, ישנם מאמצים שוטפים גם להשתמש נימים, במיוחד מפני ניסויים התגבשות נגד דיפוזיה, עבור עבודה עקיפה בטמפרטורה נמוכה7,8, אבל, בלי קשר לזה, זה הפך להיות סטנדרטי גישה ב macromolecular קריסטלוגרפיה להר macromolecular קריסטלים שהוחזקו על ידי סרט דק של ליקר אמא בתוך לולאה קווית דק9,10. למרות שכמה שיפורים (למשל, הקדמה של ליטוגרפיה ומבנים דומים11) נעשו לאורך זמן להרכבה זו מבוססת לולאה, העקרונות הבסיסיים שפותחו בתחילת שנות ה-90 עדיין בשימוש היום. זה יכול להיות בטוח כי אוספי נתונים עקיפה ביותר על קריסטלים macromolecular כיום עדיין להסתמך על גישה זו5.
במשך הזמן, היו כמה התפתחויות חדשות מעניינות ושינויים של שיטת הרכבה מבוססת לולאה, אבל גישות אלה עד כה לא היו מאומצים באופן נרחב בקהילה. האחד הוא ההרכבה הפחות לולאה של קריסטלים, שפותחה כדי להשיג את פיזור הרקע התחתון12,13,14. עוד אחד הוא השימוש בנרתיקים גראפן כדי לעטוף את דגימות גבישי כדי להגן עליהם מפני ייבוש. גראפן הוא חומר מתאים היטב בהקשר זה בגלל שלה נמוך מאוד קרני רנטגן הרקע שלה15.
לאחרונה, התפתחויות בתחום של מדגם טעינות התמקדו בעיקר בסטנדרטיזציה של הטעינות במטרה להגדיל את תפוקת המדגם16 או על עיצוב טעינות, אשר יכול להכיל יותר ממדגם אחד17, כגון למשל ממברנות על מסגרת סיליקון, אשר מסוגלים להחזיק מאות קריסטלים קטנים בעיקר בתחום של קריסטלוגרפיה טורית18,19,20,21,22.
כל שיטות ההרכבה לדוגמה שנדונו עד כה דורשות מידה מסוימת של התערבות ידנית, כלומר יש סכנה הטבועה בגרימת נזק מכני למדגם. לכן, גישות הרומן מבוקשים על ידי הנדסה הסביבה לדוגמה, כך הנתונים עקיפה של גבישים ניתן לאסוף בתוך סביבת הצמיחה שלהם. אחת שיטה כזאת נקראת באתרו או צלחת-הקרנה23,24 וזה כבר מיושם במספר macromolecular קריסטלוגרפיה beamlines במקורות סינכרוטרון שונים ברחבי העולם25. עם זאת, השימוש בשיטה זו מוגבל על-ידי הפרמטרים הגיאומטריים של צלחת הקריסטל והמרחב הזמין סביב נקודת הדגימה של המכשיר.
עוד גישה ממומשת במערכת CrystalDirect26. כאן, טיפות התגבשות שלמות נקצרו באופן אוטומטי. הרחפות שעליהן גדלו הקריסטלים מותאמות אישית באמצעות לייזר ומשמשות ישירות כמחזיק הדגימה27.
בעבודה המתוארת כאן, המטרה הייתה לפתח מחזיק מדגם, שיאפשר למשתמש להעביר את הדגימה הגבישית מחדר הצמיחה שלו אל התקן איסוף הנתונים מבלי לגעת בו ושיאפשר למשתמש לטפל במדגם בקלות. מאז חוקרים רבים בתחום של קריסטלוגרפיה macromolecular עדיין משתמש בפורמט 24-התגבשות היטב עבור אופטימיזציה של צמיחה קריסטל על ידי שינוי התנאים שזוהו בקמפיינים הקרנה גדול, המחזיק המדגם החדש נועד להיות תואם לתבנית זו. בדוגמה הבאה, העיצוב של בעל המדגם החדש יתואר ואת הטיפול ואת הביצועים של מחזיק המדגם עבור איסוף נתונים באתרו ו ליגיום הטבילה יווכחו. לבסוף, ההתאמה של מחזיק מדגם חדש, כמו גם מגבלותיו עבור שלבי העבודה השונים יידונו.

<table><tbody><tr><td>AF Satetiss</td><td>RS רכיבי</td><td>101-5738</td><td>נייר נטול מוך, קמעונאי מרובה</td></tr><tr><td>Cannula</td><td>Dispomed Neoject</td><td>25 G 5/8 אינץ' 0.5 x 16, Ref: 10026</td><td>קמעונאי מרובה</td></tr><tr><td>רדיד COC</td><td>HJ-Bioanalytik GmbH</td><td>900360</td><td></td></tr><tr><td>ComboPlate</td><td>Greiner Bio-one / Jena Bioscience</td><td>662050 / CPL-131</td><td>צלחת משומנת מראש, קמעונאי מרובה</td></tr><tr><td>Cryo בקבוקונים</td><td>Jena Bioscience</td><td>CV-100</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research Plus&nbsp;</td><td>אפנדורף</td><td>3123000012</td><td>0.1 - 2.5 ומיקרו; L נפח</td></tr><tr><td>צינורות אפנדורף</td><td>Eppendorf</td><td>30125150</td><td>1.5 מ"ל g-Safe Eppendorf איכות, מספר סימוכין יצרן</td></tr><tr><td>מלקחיים Usbeck</td><td>FisherScientific</td><td>10750313</td><td></td></tr><tr><td>GELoader Eppendorf איכות</td><td>Eppendorf</td><td>30001222</td><td>שחול&nbsp; טיפים (0.2 - 20 & micro; L), מספר סימוכין יצרן</td></tr><tr><td>CryoVials</td><td>מגנטי ממד מולקולרי</td><td>MD7-402</td><td></td></tr><tr><td>Microfuge Thermo</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>R21</td><td></td></tr><tr><td>פתילות נייר</td><td>dental2000</td><td>64460</td><td>סט פתיליות נייר, קמעונאי מרובה</td></tr><tr><td>Rotiprotect Nitril-eco&nbsp;</td><td>Carl Roth</td><td>TC14.1</td><td>ללא אבקה, קמעונאי מרובה</td></tr><tr><td>צלחות SuperClear Jena</td><td>Bioscience</td><td>CPL-132</td><td>צלחת משומנת מראש</td></tr><tr><td>UHU סופר דבק</td><td>UHU GmbH & Co KG</td><td>45545</td><td>מספר סימוכין יצרן, מספר קמעונאי מרובה</td></tr><tr><td>VeroBlackPlus</td><td>Alphacam</td><td>OBJ-40963</td><td>מספר סימוכין יצרן</td></tr><tr><td>XtalTool&nbsp;</td><td>Jena Bioscience</td><td>X-XT-101</td><td>סט מחזיק מדגם</td></tr><tr><td>XtalTool HT</td><td>Jena Bioscience</td><td>X-XT-103 / X-XT-104</td><td>סט מחזיק מדגם תואם SPINE</td></tr><tr><td>XtalToolBases</td><td>Jena Bioscience</td><td>X-XT-105</td><td>סט בסיסי מחזיק מדגם מגנטי</td></tr></tbody></table>

מחזיק מדגם all-in-one עבור קריסטלוגרפיה macromolecular x-ray עם פיזור רקע מינימלי

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

קריסטלוגרפיה באמצעות Macromolecular X-ray (MX) היא השיטה הבולטת ביותר להשגת ידע תלת מימדי ברזולוציה גבוהה של קרו ביולוגי. תנאי מוקדם לשיטה הוא כי הדגימה הגבישית המסודרת צריך לגדול ממקרומולקולה ללמוד, אשר לאחר מכן צריך להיות מוכן לניסוי עקיפה. הליך ההכנה הזה כרוך בדרך כלל בהסרת הגביש מהפתרון, בו הוא גדל, מספוג את הגביש בתמיסת התמיסה או הגנה על החומרים ולאחר מכן משתק את הגביש על הר המתאים לניסוי. בעיה רצינית לנוהל זה היא שקריסטלים macromolecular מאוד לא יציבים ושבריריים למדי. כתוצאה מכך, הטיפול בקריסטלים כה שבריריים יכול להפוך בקלות לצוואר בקבוק בניסיון לקביעת מבנה. כל כוח מכני המוחל על גבישים עדינים כאלה עלול להפריע לאריזת המולקולות הרגילה ועלול לגרום לאובדן כוח עקיפה של הקריסטלים. כאן, אנו מציגים מחזיק מדגם כל אחד ב-one, אשר פותחה על מנת למזער את צעדי הטיפול של קריסטלים ומכאן כדי למקסם את שיעור ההצלחה של הניסוי בקביעת המבנה. המחזיק לדוגמה תומך ההתקנה של טיפות קריסטל על ידי החלפת מיקרוסקופ בשימוש נפוץ לכסות תעודות. יתר על כן, הוא מאפשר מניפולציה גבישים במקום כגון ליגיום, הגנה ההקפאה והיווצרות מורכבים ללא כל פתיחה של חלל התגבשות וללא טיפול בקריסטלים. לבסוף, מחזיק המדגם תוכנן על מנת לאפשר את האוסף של נתוני עקיפה באתרו של קרני רנטגן בשני הצדדים, טמפרטורת הסביבה והקריוגניים. באמצעות מחזיק מדגם זה, הסיכוי לפגוע בגביש בדרכו מהתגבשות לאיסוף נתונים עקיפה מופחת במידה ניכרת מאז טיפול בגביש ישיר אינו נדרש עוד.

סוג המחזיק לדוגמה 1 תוכנן כך שהוא יתאים לבאר של לוח בסגנון לינברו באורך 24 שעות. כל מחזיק לדוגמה מכיל עזרי מיצוב משני צדי השפה החיצונית כדי להבטיח מיקום אופטימלי על שפת הבאר (איור 1a, איור 2a). עד שלושה טיפות התגבשות בודדות של נפח מירבי 2 μL כל ניתן למקם על הנייר הצהוב הפולני (איור 2B). עבור מחזיקי לדוגמה של סוגים 2 ו-3, מומלץ להגדיר מקסימום 2 טיפות של נפח מירבי 2 μL כל. 24 מחזיקי מדגם ניתן להתאים על 1 24-היטב לינברו צלחת (איור 3D).
ניסוי התגבשות על צלחת לינברו באורך 24 שעות, באמצעות סוג מחזיק המדגם 1 הוגדר. 1 μl של תרנגולת ביצה-לבן הפתרון ליזוזים (15 מ"ג/mL) היה מעורבב עם 1 μl של אמא-משקה המורכב 50 mM naac pH 4.7, 500 mm הנאקל ו -25% (w/v) יתד-6000 על רדיד האלומיניום הצהוב על מחזיק המדגם (שולחן 1). הירידה היתה מעורפלת ב 293 K נגד 500 μl של אמא ליקר וקריסטלים של גודל 40-50 יקרומטר נצפו לאחר 5 שעות (איור 4). ניתן לצפות בגידול בגביש בעזרת מיקרוסקופ אור שידור (איור 4) עם או בלי מקטצר. סרטים שקפים גבוהים להבטיח התבוננות וניטור הטוב ביותר של התנאים הגדלים גביש באמצעות שני, מיקרוסקופ אור קונבנציונאלי או מערכת הדמיה אוטומטית של גביש. התבוננות בצמיחה קריסטל באמצעות UV-אור לא נבדקה.
לאחר הסרת משקה האם מסביב הקריסטלים, מחזיק לדוגמה עם גבישים ביצה לבנה-לבן ליתיום היתה נלקחה מלוחית התגבשות והניח בזרם אוויר מבוקר לחות על HZB-MX beamline 14.332. נתוני עקיפה נאספו בטמפרטורת הסביבה בהפרשים של 1 ° באמצעות קרן 150 יקרומטר ב-13.8 אנרגיה קוו עם 4 x 1010 פוטונים/s וזמן חשיפה של 5 s לכל תמונה. תמונת עקיפה טיפוסית מוצגת באיור 5. לא ניתן לזהות פיזור רקע מוגבה על תמונת העקיפה. פרטים ניסיוניים נוספים, כמו גם סטטיסטיקות עיבוד נתונים משויכות, מפורטות בטבלה 2.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59722/59722fig1.jpg"> איור 1 : מבט סכימטי של מחזיקי המדגם החדש. מחזיקי מדגם מורכב תמיכה פלסטיק שחור, אשר מכוסה בצד החיצוני עם מחזורית אמורקיים אולפין (coc) מחזורי הנייר. מסכל זה (צבעוני בכחול) הוא שקוף מאוד וריפוי עצמי. זה גם מבטיח את התכווצות הגז של הניסוי. הרדיד הפנימי (בצבע צהוב) עשוי מפולימיד ביו-אינרטי, שהוא שקוף מאוד לצילומי רנטגן. על נייר הכסף הזה, טיפות התגבשות ניתן להציב. השפה החיצונית של מחזיק המדגם מכיל שני עזרי מיקום המצוין על ידי החץ האדום (פאנל A), אשר מאפשר מיקום מדויק של מחזיק המדגם על החלל מלפני משומן הפרט של צלחת התגבשות. (א) מחזיק לדוגמה (סוג 1) עם קוטר 22 מ"מ עם טבעת תמיכה חיצונית קבועה. (ב) מחזיק לדוגמה (סוג 2) עם קוטר 22 מ"מ עם טבעת תמיכה חיצונית נשלפת. (ג) מחזיק לדוגמה (סוג 3) עם קוטר 18 מ"מ עם טבעת תמיכה חיצונית נשלפת. שני האחרונים פותחו לשימוש בהם בצורה גבוהה תפוקה עם רובוטים הרכבה אוטומטית לדוגמה באמצעות תקן השדרה. נקודות ההפסקה המיועדות מסומנות בחצים אדומים בלוח B. החץ השחור בלוח C מציין את סמן המיקום. הפינים הבולטות בהיקף החיצוני של הרדיד הצהוב נחוצים ליישור רדיד האלומיניום במהלך תהליך הייצור. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59722/59722fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59722/59722fig2.jpg"> איור 2 : מחזיק הדגימה עשוי לשמש על צלחת לינברו 24-גם באותו אופן כמו מכסה מיקרוסקופ נפוץ לכסות. . הוא חותם את החלל האטום עזרי מיצוב להבטיח את המיקום הנכון של מחזיק המדגם על החלל (חיצים אדומים בלוח A). עד שלוש טיפות בודדות ניתן להציב על סוג 1 מחזיק לדוגמה (פאנל B), בעוד המספר המרבי המומלץ של טיפות ממוקם על סוג 2 או 3 מחזיק המדגם הוא שניים. אמצעי האחסון המומלץ ביותר עבור כל טיפה הוא 2 μL. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59722/59722fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59722/59722fig3.jpg"> איור 3 : 24 סוג 1 בעלי מדגם להתאים על צלחת 24. מחזיקי המדגם ניתן להציב בשני הכיוונים על הצלחת 24-באר כפי שצוין (פאנל D). צינורית משמש כדי לחדור את רדיד COC בגב כדי להסיר משקאות חריפים מן ירידה התגבשות (פאנלים a ו- C) באמצעות הפתיל נייר הוכנס בעדינות באותו חור (פאנל B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59722/59722fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59722/59722fig4.jpg"> איור 4 : תמונה של ביצה תרנגולת-לבן קריסטלים ליזוזים נצפתה באמצעות מיקרוסקופ שידור מצויד מקטפה. גבישים בודדים מפלים בקלות מתמיסת חלבון זירז. הקריסטלים בתמונה זו הם בגודל ממוצע של 40 יקרומטר x 50 יקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59722/59722fig4large.jpg" target="_blank">נא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a> 
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59722/59722fig5.jpg"> איור 5 : תמונת הפרדה טיפוסית של קרני רנטגן של גביש ליזוזים גדל על מחזיק המדגם. לפני החשיפה לצילומי רנטגן כל המשקאות האם העודפים הוסרו מסביב לגביש. נתוני עקיפה נאספו בטמפרטורת הסביבה על BL 14.3 בטבעת אחסון אלקטרון BESSY II32 באמצעות לחות בסביבה מבוקרת לדוגמה עם 97.5% לחות יחסית. אין רקע מוגבה בשל מחזיקי לדוגמה ניתן לצפות. הקווים המקווקו בתמונה מציינים את טבעות הרזולוציה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59722/59722fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59722/59722fig6.jpg"> איור 6 : מחזיק הדגימה מוכן לאיסוף נתונים עקיפה. ראשית, הסרט COC מוסר בעדינות על ידי שימוש מלקחיים ולאחר מכן לקלוף (פאנל a). לאחר מכן, מחזיק המדגם מוסר מן החלל ומוכנס לתוך החור המרכזי של בסיס מגנטי עד שצוין על-ידי הסמן (לוח B). על ידי החזקת החלק המרכזי, הלחץ העדין מוחל על הטבעת החיצונית כדי לשחרר את החלק המרכזי באמצעות סימטרי מסודרים נקודות הפסקה ייעודי (פאנל C). לאחר ההסרה, מחזיק המדגם יכול להיות צלל לתוך חנקן נוזלי והועבר לתוך בבקבוקונים סטנדרטי עמוד השדרה. ממוקם, למשל, ב-pucks הם יכולים להיות מועברים לאתרים סינכרוטרון שם אוטומטי הרכבה לדוגמה רובוטים לזהות אותם כדגימות רגיל (פאנל D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59722/59722fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a> 
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>פרטים התגבשות</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>שיטה</td>
			<td>טיפה תלויה, שיטת פיזור אדים</td>
		</tr>
<tr>
<td>סוג צלחת</td>
			<td>צלחות ברורות</td>
		</tr>
<tr>
<td>טמפ ' (K)</td>
			<td>293</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריכוז חלבון (mg mL-1)</td>
			<td>15</td>
		</tr>
<tr>
<td>הרכב פתרון למאגר</td>
			<td>50 mM NaAc pH 4.7, 500 mM הנאקל, 25% (w/v) יתד-6000</td>
		</tr>
<tr>
<td>נפח ויחס של שחרור</td>
			<td>2 μL בסך הכל, 1:1 יחס (חלבון: משקה אמא</td>
		</tr>
<tr>
<td>נפח של מאגר המים</td>
			<td>500 מיקרומטר</td>
		</tr>
<tr>
<td>זמן דגירה</td>
			<td>12 שעות</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: פרטים ניסיוניים של ניסוי התגבשות מתוארת.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>איסוף ועיבוד נתונים</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>אורך הגל (Å)</td>
			<td>0.89429</td>
		</tr>
<tr>
<td>טמפ ' (K)</td>
			<td>293</td>
		</tr>
<tr>
<td>גלאי</td>
			<td>Rayonix MX225 CCD</td>
		</tr>
<tr>
<td>מרחק גלאי קריסטל (mm)</td>
			<td>120</td>
		</tr>
<tr>
<td>טווח סיבוב לכל תמונה (°)</td>
			<td>0.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>טווח סיבוב כולל (°)</td>
			<td>120</td>
		</tr>
<tr>
<td>זמן חשיפה לכל תמונה</td>
			<td>מיכל 5</td>
		</tr>
<tr>
<td>קבוצת חלל</td>
			<td>P43212</td>
		</tr>
<tr>
<td>הפרמטרים של תאי היחידה (Å)</td>
			<td>a = 79.01, b = 79.01, c = 37.95</td>
		</tr>
<tr>
<td>מוזניטי (°)</td>
			<td>0.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>טווח רזולוציה (Å)</td>
			<td>39.50-1.35 (1.37-1.35)</td>
		</tr>
<tr>
<td>מספר כולל של השתקפויות</td>
			<td>191940 (8932)</td>
		</tr>
<tr>
<td>מספר השתקפויות ייחודיות</td>
			<td>27020 (1292)</td>
		</tr>
<tr>
<td>שלמות (%)</td>
			<td>99.88 (99.20)</td>
		</tr>
<tr>
<td>ריבוי</td>
			<td>7.1 (6.9)</td>
		</tr>
<tr>
<td>אומר אני/σ (I)</td>
			<td>15.0 (1.9)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Rאני35 (%)</td>
			<td>6.3 (107.0)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Rpim36 (%)</td>
			<td>2.4 (40.4)</td>
		</tr>
<tr>
<td>CC1/237 </td>
			<td>99.9 (68.5)</td>
		</tr>
<tr>
<td>. איסה38
</td>
			<td>16.1</td>
		</tr>
<tr>
<td>וילסון ב' פקטור (Å2)</td>
			<td>17.0</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 2: איסוף נתונים עקיפה וסטטיסטיקת עיבוד.

מחזיק לדוגמה הרומן לקריסטלוגרפיה macromolecular רנטגן יחד עם פרוטוקול טיפול מתאים מוצג. המערכת מאפשרת צמיחה גביש, הטבילה גביש באוסף נתונים עקיפה באתרו בשניהם, הסביבה ואת הטמפרטורה הקריוגני ללא צורך של כל מניפולציה גביש או הרכבה.

מחזיק מדגם All-in-one עבור קריסטלוגרפיה Macromolecular X-ray עם פיזור רקע מינימלי

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...

מחזיק מדגם זה יכול לשמש לגידול גבישים ואיסוף נתוני דיפוזיה של קרני רנטגן. מחזיק מדגם זה נעשה לשימוש על צלחות 24 באר אשר נמצאים בשימוש נרחב בקהילת MX. ההיבט החשוב ביותר הוא שאין צורך במניפולציה.מחזיק מדגם המציג היבטים אלה המתוארים כאן לא היה קיים קודם לכן. לראות משהו זה תמיד הרבה יותר טוב מאשר לקרוא על זה. על ידי צפייה בסרטון, משתמש פוטנציאלי יכול לתפוס את התכונות והמורכבות של מחזיק הדגימה החדש באופן מיידי.כדי להתחיל, צור משטח נקי ונשחרר מאבק באמצעות מטלית לחה ונשחררת מוך. קח מחזיק מדגם אחד מהתיבה שלו והצב אותו בעדינות, רדיד אלומיניום צהוב פונה כלפי מעלה, על המשטח הנקי כדי למנוע נזק או ניקוב לא רצוי של רדיד COC האחורי. הגדר את טיפות התגבשות על רדיד צהוב כפי שהוא ייעשה על שקופיות כיסוי נפוץ.מניחים את הטיפות בעדינות, כדי למנוע כל קרע או פירסינג של רדיד באמצעות פיפטה. במחזיקי מדגם מסוג 2 וסוג 3, שתי טיפות הן המקסימום המומלץ. במחזיק מדגם מסוג 1, ניתן להציב עד שלוש טיפות.הופכים את מחזיק הדגימה ומ מניחים אותו על חלל משומן מראש של צלחת בסגנון לינברו 24 באר. השתמשו בעזרי המיקום של מחזיק הדגימה כדי להנחות אותו למיקום האופטימלי שלו. ודא את המיקום הנכון של מחזיק הדגימה על מנת למנוע אידוי לא רצוי.על ידי הנחת לוח ההתגבשות תחת מיקרוסקופ אור שידור, ללא או בלי מקטבים, לפקח על צמיחת גביש ללא כל הפרעה של הניסוי. בצע קריו-פרוטקציה תחת מיקרוסקופ של אור שידור. לנקב בעדינות את רדיד COC החיצוני באמצעות canula בסדר.ודא שהרדיד הצהוב הפנימי נותר ללא שינוי. הדקירה צריכה להיות ממש ליד הירידה שיש לתמרן. הכנס פתיל נייר משובח לחור התקוע.בזהירות לדחוף את הפתיל קדימה עד שהוא נוגע בנייר הפולימיד הצהוב. שמור על הפתיל במגע עם רדיד הכסף מחורר. הפתיל ישאב את כל הפתרון העודף.הזמן הנדרש להסרת נוזלים מלאה תלוי צמיגות של הפתרונות ואת הרכב המשקאות האם. אחרי שכל הנוזל נשאב משם, בעדינות לסגת פתיל הנייר. זכור את המיקום של הירידה, שכן זה לא יכול להיות גלוי לאחר הסרת המשקאות האם.קח פיפטה סטנדרטית כדי להחיל נפח קטן של פתרון מגן קריו, באמצעות קצה מובלט דרך אותו חור. כדי לסנות מחדש את רדיד ה- COC המרפא את עצמו, מניחים בעדינות אצבע מוגנת על החור למשך כשני שנייה ומחלקים אותו על-פני הדקירה. הלחץ הקל בשילוב עם הטמפרטורה הגבוהה יקדם את החרימות מחדש של נקבים שהם לא גדולים מדי.ממיסים את הליגנד באלכוהול אם בריכוז הרצוי בצינור תגובה. לסובב את הפתרון במשך 10 דקות ב 12, 000 פעמים גרם כדי להסיר חלקיקים מסיסים. יש להשתמש בצנטריפוגה מבוקרת טמפרטורה במידת הצורך.מניחים בעדינות מקסימום שלושה מיקרוליטרים של פתרון המכיל ליגנד בפער שבין רדיד ה- COC לסרט הפולימיד באמצעות קצה פיפטה ארוך ומובלט;לסגת מהקצה. כדי לסנות מחדש את רדיד ה- COC המרפא את עצמו, מניחים בעדינות אצבע מוגנת על החור למשך כשני שנייה ומחלקים אותו על-פני הדקירה. דגירה הניסוי במשך זמן מה כדי לאפשר דיפוזיה על פני הממברנה.זמן ההשריה תלוי מאוד צמיגות של פתרון פיזור ומרכיביו. חזור על שלבי השריית ליגנד מספר פעמים כדי להשרות לאחר מכן ליגנדים שונים. כדי למזער את פיזור הממסים, הסר פתרון עודף לפני איסוף הנתונים.ודאו סביבת קורות יציבה ומבוקרת לחות עם תנאים שנקבעו מראש. כדי לבצע איסוף נתוני דיפוזיה במקום בטמפרטורת הסביבה, הרם בעדינות את רדיד ה- COC השקוף בנקודה המיועדת באמצעות מלקחים וקלף אותו. עכשיו בעדינות להרים את מחזיק המדגם מהחלל שלה ולהכניס אותו מיד לתוך בסיס מחזיק מדגם מגנטי מוכן מראש.אין צורך בדבק עבור שלב זה. יש להפעיל לחץ עדין כדי להבטיח את המיקום הנכון של מחזיק הדגימה בתוך הבסיס. למחזיקי דגימה עם טבעת חיצונית נשלפת, יש להפעיל לחץ עדין על ידי החזקת הטבעת החיצונית ולשבור אותה בנקודות ההפסקה המיועדות.הדוגמה מוכנה כעת לאיסוף נתוני מרכונים ועבירה. הר את מחזיק הדגימה על גוניומטר קורן ולהבטיח מיקום נכון של המחזיק. בהתאם לגיאומטריית הגוניומטר, ניתן לסובב את מחזיק הדגימה עד 160 מעלות מבלי לגרום להצלה במהלך ניסוי ההפשטה.השתמש פתיל נייר בעדינות לגעת בנייר פולימיד צהוב מהישבן כדי להסיר עודף ליקר אמא. הדוגמה מוכנה כעת לאיסוף נתוני מרכונים ועבירה. היכונו לאיסוף נתוני דיפרציה במקום בטמפרטורה קריוגנית כפי שנעשה לטמפרטורת הסביבה, ואז לצלול את המדגם לתוך חנקן נוזלי ולהעביר אותו לתוך בקבוקון תואם SPINE.הגיאומטריה של סוגי מחזיק הדגימה 2 ו -3 מאפשרת את העברתם לבקבוקונים לדוגמה סטנדרטיים של SPINE, אשר ניתן להשתמש בהם להרכבה מדגם בסיוע רובוט. מחזיק הדגימה סוג 1 וסוג 2 תוכננו להתאים לגם של צלחת בסגנון לינברו 24 בארות. כל מחזיק מדגם מכיל עזרי מיקום משני צדי השפה החיצונית על מנת להבטיח מיקום אופטימלי על שפת הבאר.צלחת בסגנון לינברו 24 באר שימש עם מחזיק מדגם מסוג 1 כדי לצייד טיפה ב 293 קלווין נגד 500 microliters של משקאות חריפים אמא. גבישים של 40 עד 50 מיקרון נצפו לאחר חמש שעות באמצעות מיקרוסקופ אור שידור עם או בלי מקטב. מחזיק מדגם עם גבישי ליזוזיים לבנים ביצה הוצב בזרם אוויר מבוקר לחות על קורת HZB-MX 14.3.תמונת דיפוזיה טיפוסית מוצגת כאן. לא ניתן לזהות פיזור רקע מוגבה על תמונת ההתעקנות. זה קריטי כי זיהומים של רדיד פולימיד יש להימנע.כמו כן, חשוב כי מחזיק המדגם ממוקם במדויק מניפולציה גביש מתבצע בזהירות. מחזיק הדגימה מאפשר טיפול בגבישים עדינים מאוד, אחד השלבים החשובים ביותר בקריסטלוגרפיה מיקרומולקולרית. השימוש בו מקטין מאוד את הסיכוי להרוס את המדגם.

an-all-one-sample-holder-for-macromolecular-x-ray-crystallography

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

פרוטוקול מוצג עבור קריסטלוגרפיה רנטגן באמצעות microcrystals חלבון. שתי דוגמאות ניתוח vivo- microcrystals מגודלים לאחר טיהור או תאמול מושווים.

Microcrystallography של קריסטלים חלבון ו<em&gt; בסולו</em&gt; השתברות

פרוטוקול יעילה לביצוע הביוכימי ומבניים נרחב של איפיון פרוטאין מחייב המצע פחמימות של סטרפטוקוקוס pneumoniae מוצג.

אפיון הביוכימי ומבניים של SP0092 המצע-מחייב-חלבון פחמימות תחבורה

שיטה זו מתאר את שיבוט, הביטוי, ואת טיהור של Nsa1 רקומביננטי לקביעת מבנה על ידי קריסטלוגרפיה באמצעות קרני רנטגן, רנטגן זווית קטנה פיזור (SAXS), והוא רלוונטי לניתוח המבני היברידית של חלבונים אחרים שניהם הורו, מגרה תחומים.

שילוב קריסטלוגרפיה באמצעות קרני רנטגן עם זווית קטנה פיזור קרני רנטגן ליצור מודל לא מובנה מחוזות Nsa1 של Cerevisiae ס

פרוטוקול זה מתאר בפירוט כיצד לפברק ופועלים microfluidic התקנים עבור איסוף נתונים של קרני רנטגן בטמפרטורת החדר. בנוסף, הוא מתאר כיצד לפקח התגבשות חלבונים על ידי פיזור אור דינאמי וקיבלתי כיצד לעבד ולנתח נתונים עקיפה.

Microfluidic שבבים עבור בחיי עיר קריסטל רנטגן עקיפה ו בחיי עיר פיזור אור דינאמי עבור קריסטלוגרפיה טורי

אנו מתארים מלכודת הפרעות לקרן החלקיקים אמורה לבצע רנטגן מימדי מהיר פלורסצנטיות, רנטגן microdiffraction מיפוי של דגימות קריסטל או אבקת יחיד באמצעות לאווה (קרינה צבעוני) או אבקת (קרינה מונוכרומטי) עקיפה. המפות וכתוצאה מכך נותנים מידע על זן, התמצאות, שלב ההפצה דפורמציה פלסטית.

סינכרוטרון Microdiffraction רנטגן והדמיה זריחה של דגימות הסלע המינרלים

אנו מציגים את השימוש בפרוטוקול MeshAndCollect כדי לקבל ערכת נתונים עקיפה מוחלטת, לשימוש בקביעת מבנה עוקבות, המורכב עקיפה חלקי ערכות נתונים שנאספו מקריסטלים קטנים רבים של החלבון הניאון Cerulean.

מבנה תמיסת Cerulean חלבון פלואורסצנטי באמצעות MeshAndCollect

כאן, אנו נתאר כיצד להשתמש את הסינון האוטומטי ואת אפשרויות של איסוף נתונים זמינים ב beamlines סינכרוטרון מסוימים. מדענים לשלוח דוגמאות cryocooled סינכרוטרון, ואת המאפיינים עקיפה מוקרנים, ערכות הנתונים נאספים וכוח עיבוד ומתבצע, במידת האפשר, פתרון מבנה — כל זאת ללא התערבות אנושית.

איסוף נתונים מקריסטלים של מקרומולקולות ביולוגיות ואפיון עצמאית לחלוטין

נייר זה מפרט את פרוטוקול הייצור של שבבים מיקרופלואידיים שפותחו להתגבשות  חלבונים על שבב בשיטת הדיאליזה ובניסויי עקיפת קרני רנטגן. תהליך microfabrication מאפשר לשלב קרום דיאליזה תאית מתחדשת למחצה עם כל משקל מולקולרי מנותק, בין שתי שכבות של השבב.

התגבשות חלבונים על שבב על ידי מיקרודיאליזה עבור In Situ רנטגן עקיפה מחקרים

יחס אות לרעש של נתונים הוא אחד השיקולים החשובים ביותר בביצוע מדידות עקיפה של קרני רנטגן ממיקרו-קריסטלים. קו הקרן VMXm מספק סביבה עם רעש נמוך ומיקרואורגניזם לניסויים כאלה. כאן, אנו מתארים שיטות הכנה לדוגמה עבור microcrystals הרכבה וקירור עבור VMXm וקווי קרן קריסטלוגרפיה מיקרומוקולריים אחרים.

צינור הכנה לדוגמה עבור מיקרוקריסטלים בקו הקרן VMXm

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להכנת מדגם קריוגני והעברת גבישים לתוך תחנת הקצה ואקום על קו קרן I23 במקור אור יהלום, לניסויים קריסטלוגרפיה באורך גל ארוך רנטגן מקרומולקולרי.

פרוטוקול הכנה והעברה לדוגמה לקריסטלוגרפיה באורך גל ארוך בוואקום בקו קרן I23 במקור אור יהלום

מאמר זה מתאר את תהליך XChem המלא לסינון מקטעים מבוסס גביש, החל מהגשת בקשה לגישה וכל השלבים הבאים להפצת נתונים.

השגת סינון מקטעים יעיל במתקן XChem ב-Diamond Light Source

למד שימוש במחזיק מדגם חדשני לגידול גבישים ואיסוף נתוני עקיפת קרני X במצב קריסטלוגרפיה מקרומולקולרית. השיטה מאפשרת ניטור ואיסוף נתונים ללא מניפולציה בגבישים עדינים.

מחזיק מדגם All-in-one עבור קריסטלוגרפיה Macromolecular X-ray עם פיזור רקע מינימלי

גלה סרטונים נוספים