שימוש מיקרו רנטגן טומוגרפיה ממוחשבת עם חומצה Phosphotungstic הכנה לדמיין את רקמת האדם האנושי

אנו מיישמים microCT עם חומצה phosphotungstic כדי לשפר את ניגודיות רקמות רכות בחקירה לא פולשנית של orbicularis האנושי שמירה על רצועה, מבנה עדין בתוך אזור המסלול. פרוטוקול זה עבר אופטימיזציה כדי לסייע לחוקרים בחקירה לא פולשנית של רקמות רכות אנושיות והוא פשוט לבצע עם כמות סבירה של הוצאות. כדי להשיג את הדגימות, תחילה להשתמש בעיפרון צבעוני כדי לציין את אזור החיתוך על העור עבור קציר מדגם.

ודא כי הקו המסומן משתרע באופן מתווך לקמפוס המדיאלי, באופן משני לקמפוס משני, עדיף על גבול עליון של העפעף התחתון, ונחיתות לסנטימטר אחד מתחת לקו מהשפה מסלולית. לאחר מכן, השתמש בלהב כדי לחתוך את רקמות הפנים לאורך הקו המסומן, ולוודא כי החתך הוא עמוק מספיק עבור קצה הלהב לגעת העצם. המדגם שנקטף חייב לכלול את העור, רקמה תת עורית, שריר, שומן, ו periosteum.

לאחר איסוף, מיד לתקן את המדגם ב 10% פורמלין במשך חמישה עד שבעה ימים בטמפרטורת החדר. בסוף תקופת התקבעון, פורסים את הדגימה בשלושה חלקים בעובי של חמישה עד שבעה מילימטרים. השתמש מחט וחוט שחור כדי לתפור את הצד superolateral של כל מדגם, כך הכיוון של המדגם ניתן לקבוע בנקודות זמן מאוחרות יותר.

ייבש את הדגימה בסדרת ריכוז אתנול עולה ליום אחד לכל ריכוז, והשאיר את הדגימות בתתכולת האתנול של 70% עד שהן מכתימות. שבוע לפני סריקת טומוגרפיה מיקרו מחשב מתוכנן, להוסיף 2.1 גרם של PTA ל 210 מיליליטר של 70% אתנול ולמקם את הפתרון על שייקר ב 55 עד 60 סיבובים לדקה. הכינו שלושה מיכלי פלסטיק 70 מיליליטר לכל חתיכה פרוסה.

כאשר הצבע נמס לתוך תמיסת האלכוהול, למלא את המיכלים עם הפתרון. הנח דגימה אחת בכל מיכל של 1%PTA, ונער את הדגימות ב-55 עד 60 סיבובים בדקה למשך חמישה עד שבעה ימים. לאחר השלמת הכתמים, אחסן את הדגימות באתנול טרי של 70% למשך שבוע כדי להתכונן לסריקה.

לסריקת microCT, יש לעטוף את הדגימות ב-Parafilm כדי למנוע ייבוש ולהמקם דגימה על מגש הסורק. הגדר את מתח המקור של הסורק ל- 70 קילו-וולט, את זרם המקור ל- 114 מיקרואמפר, את מסנן האלומיניום ל- 0.5 מילימטרים, את גודל פיקסל התמונה ל- 20 מיקרומטר בריבוע, את הפיקסלים ל- 2, 240 על 2, את החשיפה ל- 500 אלפיות השניה ואת שלב הסיבוב ל- 0.3 מעלות. לאחר מכן, ליזום את הסריקה.

לאחר השלמת הסריקה, פתח את תוכנת השחזור ובחר פעולות ופתיח ערכת נתונים כדי להפעיל את הקבצים הסרוקים. בחרו בכרטיסיה 'קביעות' והגדירו את הפחתת ממצאי הטבעת לשבעה ואת תיקון התקשות הקרן. כדי להתחיל בשחזור, בחר התחל.

הנתונים הסופיים יאוחסנו בתיקיה המיועדת. בסוף השחזור, פתח את תוכנת שינוי גודל הקובץ ובחר ערכת נתוני מקור כדי להפעיל את הקבצים המשוחזרים. בחרו jpg בכרטיסייה 'ערכת נתונים של יעד' ובחרו באפשרות 'שינוי גודל של 1/2' עם האפשרות 'איכות ללא אינטרפולציה' ואז התאימו את סרגל השקופיות ל- 100 בכרטיסייה 'דחיסת תמונה' והתחלו בהמרה.

לשחזור תלת-ממדי, פתחו את תוכנת עיבוד אמצעי האחסון תלת-ממדי ובחרו 'פעולות' ו'טען נתוני עוצמה'. כדי לכוונן את רמת הבהירות והחדות, שנה את פונקציית העברת הצורה בהיסטוגרמה בכרטיסיה עורך פונקציות העברה. לאחר מכן בחרו 'אפשרויות ותאורה', ובחרו בסמלים 'צללים ותאורת פני שטח' כדי להשיג גוון מידול מציאותי.

לחצו וגררו, ולחצו לחיצה ימנית וגררו להזזה ולסיבוב של התמונה תלת-מימדית כדי למצוא את התצוגה הטובה ביותר, תוך גלילה להגדלה או הקטנה הרצויה. לחצו על 'הסט' וגררו כדי להחליק את המקום כדי להציג את התמונות החלקתיות. הפעל את סמל Light והתאם את סרגל האינדיקציה לתאורה כדי למצוא את התאורה הטובה ביותר לצפייה ולאחר מכן כבה את סמל האור וסגור את הכרטיסיה תאורה.

בכרטיסיה אפשרויות, בחר הצג ותיבת גזירות כדי להסתיר את התיבה עבור התמונה הסופית. לאחר מכן, בחרו 'פעולות' ו'שמור תמונה' לאחסון התמונה. שחזור מפורט זה של ORL הושג על ידי microCT עם הכנת PTA כפי שהוכח, המאפשר הדמיה של מבנה פיברומוסקולרי רצועה המשתרעת אלכסון בין הדרמיס לבין periosteum.

בהיכל הדרך, כמות הסיבים ומורכבותם גדלים באופן מאוחר יותר. בתצוגה אופקית, רשת משוכללת עם היווצרות arborized נצפתה. בתצוגה הסגיטלית, עובי סיבי ה-ORL פוחת באופן נחות.

בסך הכל, תצפית רב כיוונית זו מוכיחה כי ORL מורכב רשת רב שכבתית של צלחות רציפות עם וריאציות במספר ועובי הסיבים בהתאם למיקומם. כאשר משך הכתם אינו מספיק בהשוואה לנפח הדגימה, התמונה הסופית עשויה לכלול חור ריק באזור המרכזי של הדגימה. סוכנים אחרים לצד PTA ניתן להשתמש וסוכנים שונים יש יתרונות שונים או תכונות מכתים תחומי עניין.

לכן, כדאי לייעל את אזור הכתמים בהתאם לניסוי.