Name: מניפולציה של דפוסי צבע ב עכבישים קופצים לשימוש ניסויים התנהגותיים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: למד שיטה לשינוי דפוסי צבע בעכבישים קופצים באמצעות צבעי אמייל ואיפור. טכניקה זו מאפשרת חקר ברירה מינית, טריפה ואבולוציה של צבע בחרקים קטנים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מימון של הקרן הלאומית למדעים (IOS-1557867 כדי LAT), מוזיאון פלורידה לתולדות הטבע, ואת אנטומולוגיה ונמטולוגיה המחלקה באוניברסיטת פלורידה. דמי הפרסום של מאמר זה מומן בחלקו על ידי הקרן הפתוחה של אוניברסיטת פלורידה להוצאת גישה.

1. הכנת ציוד
<ol><li>בחר צבעים מתאימים.<ol>
<li>ליישום מוצלח, להשתמש בצבעים כי הם מהירים לייבוש יש מרקם מניפולציות בקלות עם דק יותר. מוצרים שנעשה בהם שימוש בהצלחה כוללים eyeliners שאינם עמידים למים אשר ניתן לדבר עם מים, וצבעי אמייל אשר ניתן לדבר עם רזה אמייל (טבלת חומרים).</li>
		<li>כאשר ציור עכבישים, לשקול את שריון של רוב המינים יש שלד חיצוני קשוח בזמן הבטן הרך לעתים קרובות מותח ומכווץ עם האכלה40.<ol>
<li>צבעי אמייל מייצרים ציפוי מוצק ומוקשח על פני השטח הנצבע; לכן, להחיל אותם על חלקים קשים של הקוטיקולה (למשל, carapace, הרגליים, הגמלון). ציפוי אמייל זה פחות יעיל עבור בטנם עכביש כי הם לקלף את העכביש כמו הבטן משתנה צורה עם האכלה.</li>
			<li>לעומת זאת, הeyeliners אינם מייצרים ציפוי מוקשח, אלא מחלחל לתוך מאזני הגוף הצבעוניים; ככאלה, השתמשו בהם בחלקי גוף קשים ורכים (כולל בטנם עכביש). הערה: בשלבים הבאים מוצגת הטכניקה העדינה ביותר המורכבת מציור הפנים והגמלון של העכבישים; צבע אמייל משמש, שהיא השיטה הניתן ביותר להכליל בשל מגוון הצבעים של צבע אמייל זמין.</li>
		</ol>
</li>
		<li>לפני בדיקת צבעים על בעלי חיים חיים, אם אפשר, תחילה למדוד את התכונות הספקטרליות של הצבע (פשוט להחיל על נייר או משטח אחר) באמצעות ספקטרוסקופיה UV-VIS השתקפות כדי להבטיח כי אין פסגות UV לא רצויות בספקטרום כי יהיו בלתי נראים לבני האדם, אבל אולי בגלוי למין הנלמד.</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש במיקרוסקופ מבתר המחובר למצלמה ומחשב כדי לצלם ביתר קלות תמונות של תוצאות המניפולציה בתיעוד והגדלת היכולת הכפיל (לוח חומרים).<ol>
<li>הפעל את המיקרוסקופ, המחשב והתוכנה שמעבדת את קלט המצלמה.</li>
		<li>בחר את הזום הרלבנטי שבו התמונה הסופית תילקח.</li>
		<li>הצמד סיכה להרכבה בחרק או ציפורן קטנה (כשהראש מופנה כלפי חוץ) לתוך כדור של חימר לא מזיסום (בערך בגודל של ענב). (העכביש החי להיות נצבע יהיה מותקן באופן זמני לראש סיכה זו בשלב 3.1 למטה). מניחים את חימר הדוגמנות ואת הסיכה מתחת למיקרוסקופ כדי להתאים את המטרות, כך שהם בערך להתמקד בראש הסיכה (שם העכביש הוא להיות מותקן).</li>
		<li>ודאו שהיעדים נמצאים במרחק הנכון לעיני הצייר, ושהמצלמה אינה מפריעה לתחום הראייה במהלך הציור (כפי שקורה אם המצלמה מקורה באחת מoculars, תפיסת העומק).</li>
	</ol>
</li>
	<li>להעביר את העכביש לתוך בקבוקון פלסטיק נקי הפקק (סביב 12 drams, ללא כל webbing או טרף מת).</li>
	<li>הכינו ציוד להרכבה וצביעה.<ol>
<li>מניחים סיכה דקה נוספת הרכבה לתוך כדור של חימר מידול שאינו התקשות (בנוסף לאחד ששימש Step 1.2.3) ולמקם אותם בצד שמאל של המיקרוסקופ (עבור אנשים ימניים). סיכה זו ישמש כדי להתאים בעדינות את מיקומי הרגליים של העכביש ואת הגמלון (לפי הצורך) במהלך הציור.</li>
		<li>קבל חלק קטן של נייר סופג (כגון מגבת נייר), פיסת נייר מדפסת לבן, הצבעים להחיל (כאן, צבע אמייל), מכולות להפריד של מדלל צבע (אחד עבור כל צבע ועוד אחד שמר שקוף ונקי), מברשות מיקרו בודדות לכל צבע (ראה טבלת חומרים), ומברשת מיקרו להיות משמש רק עם דק נקי, כל ממוקם בצורה מאורגנת בצד ימין של המיקרוסקופ (עבור אנשים ימניים).</li>
		<li>בעזרת קיסם, הוסיפו טיפת צבע בצלוחית פלסטיק פתוחה (כגון צלחת פטרי קטנה או כובע בקבוקון) והוסיפו מדלל צבע, למשל באמצעות מזרק קטן. מערבבים את השניים עם הקיסם לעקביות הנכונה (כאשר הצבע הוא הומוגניים לחלוטין, אך לא מנוזל מדי) על ידי בדיקת אותו על נייר מדפסת לבן עם מברשת מיקרו. הערה: במקרים מסוימים, אם הצבע מתייבש במהירות, הכינו אותו במעט יותר נוזל מאשר הרצוי ליישום, ותן למברשות לטבול בסיר מדלל הצבע עד לשימוש מאוחר יותר (שלב 4).</li>
		<li>שימו טיפה בגודל אפונה של דבק מבוסס מים (ראו טבלת חומרים) לפינה של נייר המדפסת. הערה: זה חייב להיות השלב האחרון של ההכנה והשלב הבא צריך לקרות מיד אחרי זה, כך הדבק לא להתייבש.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. להרדמה של העכביש
<ol><li>עם העכביש במבחנה יד שנכרת מעל הפתח כדי למנוע בריחה, לאט להוסיף CO2 גז עד זוג השלישי של העכביש הרגליים משתרע על 180 מעלות.</li>
	<li>להשתמש בזמן של חשיפה CO2 של כ 20 שניות כדי 1.5 דקות, בהתאם לגודל הממוצע של המינים ועל העכביש הבודד. מצאנו את השלוחה של זוג הרגליים השלישי כדי להיות מחוון אמין של רמת ההרדמה הנכונה ב -H פירובריקס, אבל זה כנראה משתנה על פני מינים. אם שימוש בטכניקות אלה עם מינים שונים בפעם הראשונה, בדוק תחילה את ההרדמה על כמה דגימות כדי להעריך את התגובה שלהם.</li>
	<li>לתת עכבישים כמעט CO2 ככל האפשר כדי להשיג את הרמה הדרושה של הרדמה. בעוד תקופות קצרות של הרדמה שתוארו כאן לא הניבו תמותה (ואין הבדלים התנהגותיים מורגש מעכבישים לא מורדם), לתת את כל החיות בניסוי רמות שונות של הרדמה (כולל שולטת המזויף).</li>
	<li>שמור את המבחנה סגורה לאחר הוספת CO2 כדי לשמור על העכביש תחת הרדמה; לכן, לכלול את הזמן הזה בעת חישוב כמה זמן העכביש נחשף CO2.</li>
	<li>לאחר הסרת העכביש מן המבחנה כדי להתחיל מניפולציה צבע, הוא יישאר מורדם לחלוטין במשך 1 כדי 2 דקות; לכן, בצע את הפעולות הבאות (סעיפים 3-6) מיד. בגלל חלון זמן מוגבל זה, נסה את שיטת הצביעה הבאה עם דגימות מתות קודם (לתרגול) לפני שמנסים לצייר עכבישים חיים.</li>
</ol>3. הרכבה העכביש מתחת למיקרוסקופ
<ol><li>הוסף כמות קטנה מאוד של דבק על הראש של הסיכה ההרכבה או מסמר בחימר הדוגמנות מוכן בתחום הראייה של המיקרוסקופ. הערה: השתמש בכמות הקטנה ביותר של דבק המאפשר שמירה על העכביש במקום כדי להבטיח כי אני) העכביש לא להחליק את הסיכה (אם הרבה יותר מדי משמש), ו ii) העכביש מצליח לשחרר את עצמו לאחר שהתעורר.</li>
	<li>החליקו בעדינות את העכביש ההרדמה מתוך הבקבוקון שלו אל השולחן עם הצד הגשני שלו למעלה. הערה: בגלל שבטנם של עכבישים רכים, יש לקחת את הטיפול שלא להקיש או להפיל את העכבישים על השולחן, משום שזה עלול לגרום לפציעה.</li>
	<li>לחץ בעדינות על הסיכה (עם דבק) על עצם החזה של העכביש (האזור המרכזי שבו הרגליים של העכביש לצרף לגוף) כך העכביש יהיה מעט להקפיץ ולהאריך את רגליו מתחת ללחץ קטן מוחל. עבור שליטה נוספת על הלחץ להחיל, להחזיק את חימר מידול עם שתי הידיים, לאחר שתי הידיים מתים בחוזקה על השולחן.</li>
	<li>מקם מחדש את חימר הדוגמנות מתחת למיקרוסקופ כך שהאזור לצייר פונה כלפי מעלה ובפוקוס.</li>
</ol>4. צביעת העכביש
<ol><li>העריכו את עקביות הצבע לפני נגיעה במברשת הצבע לעכביש.<ol>
<li>בדוק מחדש את עקביות הצבע (השתמש בנייר הסופג כדי לנגב את המברשות אם הם היו מתוחזקים בדילול), התאם שוב במידת הצורך, ולאחר מכן נסה תחילה להחיל צבע על נייר המדפסת כדי לשלוט על כמות הצבע הכלולה בשערות המברשת.</li>
		<li>עם יד ימין ותוך כדי התבוננות דרך המיקרוסקופ, להביא את קצה המברשת בשדה הראייה, ולוודא (פעם שנייה) כי שערות המברשת לא מכילים יותר מדי צבע, ובמקרה זה לנגב חלק ממנו על נייר המדפסת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בדוק את עקביות הצבע על העכביש.<ol>
<li>לגעת בעכביש עם המברשת על האזור הגדול ביותר שיהיה צורך לצבוע מעל. זה יודיע לצייר אם העקביות וכמות הצבע מימין (כלומר, כאשר הצבע מתקלף מעט ולאט לתוך השיער/הקשקשים של העכביש).<ol>
<li>אם לא מוחל צבע, משרים את המברשת לתוך הצבע וחוזרים לשלב 4.1 כדי לחזור על השגרה.</li>
			<li>אם הצבע מתקלף במהירות ונשפך לאזור שאינו אמור להיות מכוסה בצבע, ובהנחה שה "מינימלי וכי האדם עדיין יכול להשתתף בניסוי, לנגב את המברשת על הנייר הסופג ולחזור לשלב 4.1 לחזור על ההליך. הערה: אין אפשרות לתקן סוג זה של התעלה הנוזלית. אם התעלה מגיעה אל הכלעיים או אל העיניים, או חלקים אחרים שעלולים להיות קטלניים או רעילים לאדם, שקול להציב את העכביש מיד במקפיא כדי להרדים אותו לפני שהוא מתעורר וללא כולל את העכביש מהניסוי.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>צבעו את כל האזורים הזקוקים לצבעים הבאים לאחר השלבים 4.1 ו-4.2.<ol>
<li>אם צובעים את פניו של העכביש, השתמשו בסיכה הדקה הנוספת עם יד שמאל כדי להחזיק את הרגליים הקדמיות ואת הגמלון (כך שהם יהיו מחוץ לדרך של מברשת הצבע). זה הטוב ביותר לעשות בעת התבוננות דרך המיקרוסקופ כדי למנוע פגיעה בתוספות של העכביש. בנוסף, אם צובעים את פניו של העכביש, ובהתאם למברשות המשמשות לצביעה, שקלו לצבוע את שני צדי הפנים לפני שמנסים לצבוע את החלק המרכזי בין העיניים-ניתן לצרף את המברשת לשני הצדדים, תוך שהיא מחזקת את המכחול במקביל לפני העכביש. וגרימת פעולה קפילר. הערה: כאשר צובעים את פניו של העכביש, הדבר הטוב ביותר הוא לצבוע את הצד הקרוב ביותר של היד הדומיננטית, ולאחר מכן לסובב את כדור החימר (עם העכביש הרכוב) סביב המיקרוסקופ כדי לצבוע את הצד השני, ואחריו באמצע.</li>
		<li>כאשר צובעים את הגמלון או הרגליים, הקפידו לא לגעת במפרקים אם הצבע הוא התקשות (כגון צבע האמייל), וודאו שלא למרוח צבע על איברי הזרע של הזכר (בצד התחתון של החלק המרוחק של הגמלון).</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. צילום העכביש
<ol><li>החלף את המטרה במצב המצלמה.</li>
	<li>צלם תמונה באמצעות תוכנת המחשב, וודא שבחירת הזום היא זו שנבחרה במיקרוסקופ, כך שניתן יהיה להוסיף סרגל בקנה מידה.</li>
</ol>6. שחרור העכביש מהסיכה או הציפורן
<ol><li>כשהעכביש מתחיל לנוע, החזק את הסיכה כך שרגליו הקדמיות של העכביש נוגעות במבחנה של העכביש.</li>
	<li>תן לעכביש לשחרר את עצמו, ואם צריך, בעדינות לשאת את הסיכה כדי לעזור העכביש למשוך את עצמו הרחק מן הדבק מיובש.<ol>
<li>אם העכביש מתעורר לפני הציור הושלמה, לאפשר לעכביש לפחות 15 דקות להתאושש לפני שהוא מורדם שוב. אם זה נעשה, ודא כי כל הקבוצות לקבל את אותן רמות של הרדמה (כולל אנשים מטופלים מזויפים, אם ישים). הערה: העכבישים מופיעים כדי לחדש את ההתנהגות הנורמלית שלהם במהירות לאחר מניפולציה (< 15min) אבל אנחנו ממליצים על מנוחה בזמן המנוחה של 12 שעות לפני השימוש בעכביש במבחן התנהגותי.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. ניתוח התנהגות העכבישים
<ol><li>להשוות את ההתנהגות של מניפולציות, מטופל, ומניפולציה נושאים כדי להעריך את הרעילות הפוטנציאלי של היישום (אשר עשוי להשתנות על ידי סוג צבע מסוים, צבע, אזור יישומים, ומינים המחקר). התנהגות רלוונטית להשוואה יכולה לכלול שיעור פעילות, סוג הפעילות שבוצעה, הצלחה בביצוע פעילויות ספציפיות (למשל, לכידת טרף) וכו '.<ol>
<li>השתמש בעכבישים מטופלים כחלק מהעיצוב הניסיוני (למשל קבלת יישום הצבע באזור שאינו גלוי או צבעי נייטרלי המוחלים על אותם אזורים) כדי לשנות רק את צבע האדם תוך שליטה ב גורמים אחרים (לדוגמה, זמן הטיפול, ריח, מרקם פני השטח וכו '). הערה: אם לצייר רגליים או הגמלון, לשקול את האפשרות כי זה עלול להפריע שערות החושים (שכיחה על רגלי העכביש והגמלון, לראות Foelix 201040) ו, במקרים אלה התייחסו לזכרים שטופלו בידי גברים צריך צבעים ניטרליים בצבע להחיל את אזורים כפקד.</li>
		<li>בעת פיתוח שיטות חדשות, להשוות עכבישים צבועים עם עכבישים מניפולציות כדי להעריך אם אנשים מניפולציות צבע עדיין להתנהג כרגיל.</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. מדידת תכונות ההשתקפות של מניפולציה הצבע על הנושא הנצבע
<ol><li>לאחר מורדמים (אחרי שעכבישים היו מעורבים בניסוי או מורדמים במיוחד למטרה זו, ראה הערה להלן), למדוד את התכונות הספקטרליות של מניפולציה צבע באמצעות מתקני UV-VIS סטנדרטיים ניידים (טבלת חומרים ), במיוחד עבור אזורים הגדולים מ-1 מ"מ בקוטר.</li>
	<li>עבור אזורים קטנים יותר, השתמש מיקרוספקטרוסקופיה בנויה אישית (ספקטרוסקופיה UV-VIS מנותב דרך מיקרוסקופ) עבור מדידות קלה יותר ומדויקת יותר, למרות האופטיקה של המיקרוסקופ לגזור אור UV, כלומר מדידות מוגבלות ל אורכי גל הנראים לעין (ראה טיילור ואח '. 201141).</li>
	<li>במקרים בהם צבע מניפולציה אזורים קטנים מאוד השתקפות UV נתונים נדרשים, להשתמש מסחרית הזמין UV-VIS microspectrophotometers, למרות שהם יקרים יותר (ראה טיילור ואח '. 201442). הערה: מקור האור של UV-VIS ספקטרופוטומטרים מכיל אור UV והוא יכול להיות מסוכן לעיני בעלי חיים (כולל שלנו) כך צעדים ספקטרלי צריך להיעשות רק אחרי החיות מורדמים ולא רק מורדם. עבור עכבישים צבועים בצבע, זה יכול להיעשות לאחר העכבישים שימשו ניסויים מאז הצבע אינו להתפוגג (לראות את התוצאות הנציג להלן). עבור צבע מים מבוסס שלפעמים לדעוך לאחר ימים או שבועות, קבוצה של עכבישים יכול להיות הקריב למדידה בזמן כאשר המקביל שלהם יהיה מעורב בניסוי (כדי ללכוד נתונים המשקף את מניפולציה בפועל צבע בשימוש ב ניסוי). דיווח על תכונות ספקטרליות של הצבעים יאפשר שכפול על ידי חוקרים אחרים שעשויים לרצות לשכפל את מניפולציה הצבע, אבל אין להם גישה לאותם מוצרי צבע ספציפיים.</li>
</ol>

<ol><li>Baeta, R., Faivre, B., Motreuil, S., Gaillard, M., Moreau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carotenoid+trade-off+between+parasitic+resistance+and+sexual+display%3A+an+experimental+study+in+the+blackbird+%28Turdus+merula%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Carotenoid trade-off between parasitic resistance and sexual display: an experimental study in the blackbird (Turdus merula).</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 275 (1633), 427-434 (2008).</li>
<li>Ninnes, C. E., Webb, S. L., Andersson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+red+bishops+red+enough%3F+On+the+persistence+of+a+generalized+receiver+bias+in+Euplectes%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Are red bishops red enough? On the persistence of a generalized receiver bias in Euplectes.</a> Behavioral Ecology. 28 (1), 117-122 (2017).</li>
<li>Mappes, J., Marples, N., Endler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complex+business+of+survival+by+aposematism%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Ecology+%26+Evolution%22%5BJournal%5D)">The complex business of survival by aposematism.</a> Trends in Ecology & Evolution. 20 (11), 598-603 (2005).</li>
<li>Clark, D. L., Macedonia, J. M., Rowe, J. W., Kamp, K., Valle, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+Gal%C3%A1pagos+Lava+Lizards+%28Microlophus+bivittatus%29+to+Manipulation+of+Female+Nuptial+Coloration+on+Lizard+Robots%5BTitle%5D)+AND+%22Herpetologica%22%5BJournal%5D)">Responses of Galápagos Lava Lizards (Microlophus bivittatus) to Manipulation of Female Nuptial Coloration on Lizard Robots.</a> Herpetologica. 73, (2017).</li>
<li>Finkbeiner, S. D., Briscoe, A. D., Reed, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Warning+signals+are+seductive%3A+Relative+contributions+of+color+and+pattern+to+predator+avoidance+and+mate+attraction+in+Heliconius+butterflies%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Warning signals are seductive: Relative contributions of color and pattern to predator avoidance and mate attraction in Heliconius butterflies.</a> Evolution. 68 (12), 3410-3420 (2014).</li>
<li>Moore, M. P., Martin, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrasexual+selection+favours+an+immune-correlated+colour+ornament+in+a+dragonfly%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Intrasexual selection favours an immune-correlated colour ornament in a dragonfly.</a> Journal of Evolutionary Biology. 29 (11), 2256-2265 (2016).</li>
<li>Nokelainen, O., Valkonen, J., Lindstedt, C., Mappes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+predator+community+structure+shifts+the+efficacy+of+two+warning+signals+in+Arctiid+moths%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Animal+Ecology%22%5BJournal%5D)">Changes in predator community structure shifts the efficacy of two warning signals in Arctiid moths.</a> Journal of Animal Ecology. 83 (3), 598-605 (2014).</li>
<li>Yewers, M. S. C., Pryke, S., Stuart-Fox, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+differences+across+contexts+may+indicate+morph-specific+strategies+in+the+lizard+Ctenophorus+decresii%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Behavioural differences across contexts may indicate morph-specific strategies in the lizard Ctenophorus decresii.</a> Animal Behaviour. 111, 329-339 (2016).</li>
<li>Baldwin, J., Johnsen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+male+blue+crab%2C+Callinectes+sapidus%2C+uses+both+chromatic+and+achromatic+cues+during+mate+choice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The male blue crab, Callinectes sapidus, uses both chromatic and achromatic cues during mate choice.</a> The Journal of Experimental Biology. 215 (7), 1184(2012).</li>
<li>Künzler, R., Bakker, T. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+preferences+for+single+and+combined+traits+in+computer+animated+stickleback+males%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Female preferences for single and combined traits in computer animated stickleback males.</a> Behavioral Ecology. 12 (6), 681-685 (2001).</li>
<li>Landmann, K., Parzefall, J., Schlupp, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sexual+preference+in+the+Amazon+molly%2C+Poecilia+formosa%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Biology+of+Fishes%22%5BJournal%5D)">A sexual preference in the Amazon molly, Poecilia formosa.</a> Environmental Biology of Fishes. 56 (3), 325-331 (1999).</li>
<li>Nelson, X. J., Jackson, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+predator+from+East+Africa+that+chooses+malaria+vectors+as+preferred+prey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A predator from East Africa that chooses malaria vectors as preferred prey.</a> PLoS ONE. 1 (1), e132(2006).</li>
<li>Bajer, K., Molnár, O., Török, J., Herczeg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+European+green+lizards+%28Lacerta+viridis%29+prefer+males+with+high+ultraviolet+throat+reflectance%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology+and+Sociobiology%22%5BJournal%5D)">Female European green lizards (Lacerta viridis) prefer males with high ultraviolet throat reflectance.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 64 (12), 2007-2014 (2010).</li>
<li>Gerlach, T., Sprenger, D., Michiels, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fairy+wrasses+perceive+and+respond+to+their+deep+red+fluorescent+coloration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Fairy wrasses perceive and respond to their deep red fluorescent coloration.</a> Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 281 (1787), 20140787(2014).</li>
<li>Girard, M. B., Elias, D. O., Kasumovic, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+red+coloration+and+song+in+peacock+spider+courtship%3A+insights+into+complex+signaling+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">The role of red coloration and song in peacock spider courtship: insights into complex signaling systems.</a> Behavioral Ecology. 29 (6), 1234-1244 (2018).</li>
<li>Lim, M. L. M., Land, M. F., Li, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-specific+UV+and+fluorescence+signals+in+jumping+spiders%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sex-specific UV and fluorescence signals in jumping spiders.</a> Science. 315 (5811), 481(2007).</li>
<li>Xu, M., Fincke, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultraviolet+wing+signal+affects+territorial+contest+outcome+in+a+sexually+dimorphic+damselfly%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Ultraviolet wing signal affects territorial contest outcome in a sexually dimorphic damselfly.</a> Animal Behaviour. 101, 67-74 (2015).</li>
<li>Hill, G. E., McGraw, K. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHill%2C+GE+%22Bird+coloration%3A+function+and+evolution%22">Bird coloration: function and evolution</a>. 2, Harvard University Press. 137-200 (2006).</li>
<li>Chaine, A. S., Roth, A. M., Shizuka, D., Lyon, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+confirmation+that+avian+plumage+traits+function+as+multiple+status+signals+in+winter+contests%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Experimental confirmation that avian plumage traits function as multiple status signals in winter contests.</a> Animal Behaviour. 86 (2), 409-415 (2013).</li>
<li>Hasegawa, M., Arai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimentally+reduced+male+ornamentation+increased+paternal+care+in+the+Barn+Swallow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ornithology%22%5BJournal%5D)">Experimentally reduced male ornamentation increased paternal care in the Barn Swallow.</a> Journal of Ornithology. 156 (3), 795-804 (2015).</li>
<li>Lawes, M. J., Pryke, S. R., Andersson, S., Piper, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carotenoid+status+signaling+in+captive+and+wild+red-collared+widowbirds%3A+independent+effects+of+badge+size+and+color%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Carotenoid status signaling in captive and wild red-collared widowbirds: independent effects of badge size and color.</a> Behavioral Ecology. 13 (5), 622-631 (2002).</li>
<li>Quesada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plumage+coloration+of+the+blue+grosbeak+has+no+dual+function+-+A+test+of+the+armament-ornament+model+of+sexual+selection%5BTitle%5D)+AND+%22The+Condor%22%5BJournal%5D)">Plumage coloration of the blue grosbeak has no dual function - A test of the armament-ornament model of sexual selection.</a> The Condor. 115 (4), 902-909 (2013).</li>
<li>Safran, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+maintenance+of+phenotypic+divergence+through+sexual+selection%3A+An+experimental+study+in+barn+swallows+Hirundo+rustica%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">The maintenance of phenotypic divergence through sexual selection: An experimental study in barn swallows Hirundo rustica.</a> Evolution. 70 (9), 2074-2084 (2016).</li>
<li>Tringali, A., Bowman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plumage+reflectance+signals+dominance+in+Florida+scrub-jay%2C+Aphelocoma+coerulescens%2C+juveniles%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Plumage reflectance signals dominance in Florida scrub-jay, Aphelocoma coerulescens, juveniles.</a> Animal Behaviour. 84 (6), 1517-1522 (2012).</li>
<li>Jerónimo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plumage+color+manipulation+has+no+effect+on+social+dominance+or+fitness+in+zebra+finches%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Plumage color manipulation has no effect on social dominance or fitness in zebra finches.</a> Behavioral Ecology. 29 (2), 459-467 (2018).</li>
<li>Hill, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plumage+coloration+is+a+sexually+selected+indicator+of+male+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Plumage coloration is a sexually selected indicator of male quality.</a> Nature. 350 (6316), 337-339 (1991).</li>
<li>Wolfenbarger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+mate+choice+in+northern+cardinals%3A+is+there+a+preference+for+redder+males%3F%5BTitle%5D)+AND+%22The+Wilson+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Female mate choice in northern cardinals: is there a preference for redder males?</a> The Wilson Bulletin. 111 (1), 76-83 (1999).</li>
<li>ten Cate, C., Verzijden, M. N., Etman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+imprinting+can+induce+sexual+preferences+for+exaggerated+parental+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Sexual imprinting can induce sexual preferences for exaggerated parental traits.</a> Current Biology. 16 (11), 1128-1132 (2006).</li>
<li>Davis, A. K., Cope, N., Smith, A., Solensky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wing+color+predicts+future+mating+success+in+male+monarch+butterflies%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Entomological+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Wing color predicts future mating success in male monarch butterflies.</a> Annals of the Entomological Society of America. 100 (2), 339-344 (2007).</li>
<li>Exnerová, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Avoidance+of+aposematic+prey+in+European+tits+%28Paridae%29%3A+learned+or+innate%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Avoidance of aposematic prey in European tits (Paridae): learned or innate?</a> Behavioral Ecology. 18 (1), 148-156 (2006).</li>
<li>Forsman, A., Appelqvist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+predators+impose+correlational+selection+on+prey+color+pattern+and+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Visual predators impose correlational selection on prey color pattern and behavior.</a> Behavioral Ecology. 9 (4), 409-413 (1998).</li>
<li>Hebets, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subadult+experience+influences+adult+mate+choice+in+an+arthropod%3A+exposed+female+wolf+spiders+prefer+males+of+a+familiar+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Subadult experience influences adult mate choice in an arthropod: exposed female wolf spiders prefer males of a familiar phenotype.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 100 (23), 13390(2003).</li>
<li>Hebets, E. A., Cuasay, K., Rivlin, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+visual+ornamentation+in+female+choice+of+a+multimodal+male+courtship+display%5BTitle%5D)+AND+%22Ethology%22%5BJournal%5D)">The role of visual ornamentation in female choice of a multimodal male courtship display.</a> Ethology. 112 (11), 1062-1070 (2006).</li>
<li>Kingsolver, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+manipulation+of+wing+pigment+pattern+and+survival+in+western+white+butterflies%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Naturalist%22%5BJournal%5D)">Experimental manipulation of wing pigment pattern and survival in western white butterflies.</a> The American Naturalist. 147 (2), 296-306 (1996).</li>
<li>Morehouse, N. I., Rutowski, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+the+eyes+of+the+beholders%3A+Female+choice+and+avian+predation+risk+associated+with+an+exaggerated+male+butterfly+color%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Naturalist%22%5BJournal%5D)">In the eyes of the beholders: Female choice and avian predation risk associated with an exaggerated male butterfly color.</a> The American Naturalist. 176 (6), 768-784 (2010).</li>
<li>Prudic, K. L., Skemp, A. K., Papaj, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aposematic+coloration%2C+luminance+contrast%2C+and+the+benefits+of+conspicuousness%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Aposematic coloration, luminance contrast, and the benefits of conspicuousness.</a> Behavioral Ecology. 18 (1), 41-46 (2006).</li>
<li>Rutledge, J. M., Miller, A., Uetz, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+multiple+sensory+cues+as+a+juvenile+affects+adult+female+mate+preferences+in+wolf+spiders%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Exposure to multiple sensory cues as a juvenile affects adult female mate preferences in wolf spiders.</a> Animal Behaviour. 80 (3), 419-426 (2010).</li>
<li>Taylor, L. A., Clark, D. L., McGraw, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+variation+in+condition-dependent+display+colour+does+not+predict+male+courtship+success+in+a+jumping+spider%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Natural variation in condition-dependent display colour does not predict male courtship success in a jumping spider.</a> Animal Behaviour. 93, 267-278 (2014).</li>
<li>Taylor, L. A., McGraw, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+ornamental+coloration+improves+courtship+success+in+a+jumping+spider%2C+but+only+in+the+sun%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology%22%5BJournal%5D)">Male ornamental coloration improves courtship success in a jumping spider, but only in the sun.</a> Behavioral Ecology. 24 (4), 955-967 (2013).</li>
<li>Foelix, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFoelix%2C+R+%22Biology+of+spiders.+Third+edn%22">Biology of spiders. Third edn</a>. , Oxford University Press. (2010).</li>
<li>Taylor, L. A., Clark, D. L., McGraw, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Condition+dependence+of+male+display+coloration+in+a+jumping+spider+%28Habronattus+pyrrithrix%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Ecology+and+Sociobiology%22%5BJournal%5D)">Condition dependence of male display coloration in a jumping spider (Habronattus pyrrithrix).</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1133-1146 (2011).</li>
<li>Taylor, L. A., Maier, E. B., Byrne, K. J., Amin, Z., Morehouse, N. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colour+use+by+tiny+predators%3A+jumping+spiders+show+colour+biases+during+foraging%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Colour use by tiny predators: jumping spiders show colour biases during foraging.</a> Animal Behaviour. 90, 149-157 (2014).</li>
<li>Bates, D., Maechler, M., Bolker, B., Walker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fitting+Linear+Mixed-Effects+Models+Using+lme4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Statistical+Software%22%5BJournal%5D)">Fitting Linear Mixed-Effects Models Using lme4.</a> Journal of Statistical Software. 67 (1), 1-48 (2015).</li>
<li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22R%3A+A+language+and+environment+for+statistical+computing%22">R: A language and environment for statistical computing</a>. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. https://www.R-project.org (2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

כאן, אנו מראים כי הצבעים של חלקי גוף זעירים של פרוקי רגליים ניתן ביעילות להיות מניפולציות באמצעות צבעי כגון איפור צבע אמייל.
הצעד הקריטי הראשון להשגת מניפולציה עדינה זו הוא להיות מסוגל לשתק בעלי חיים קטנים שבדרך כלל אי אפשר לרסן ביד אחת. כאן, כדי להיות מסוגל לצייר אזורים רגישים כגון קפיצה הפנים של עכביש, אנו מורדם אנשים עם CO2 ו רכוב עליהם על ראשו של סיכה. הדבר מאפשר לעבוד קרוב לעיני העכביש בפחות מתח מאשר העכביש היה מנוסה אם היה ער (עם אור ממיקרוסקופ הנוצץ לתוך פניהם במהלך תהליך הציור).
השיטה גם דורשת קבלת איכות טובה מברשות מיקרו, ו, באופן ביקורתי ביותר, חומרים צביעה מתאים. הצעד הקשה ביותר בהחלת צבע ללא מריחת, אך עם כיסוי טוב הוא לקבל את העקביות הנכונה. לכן, את החומרים צביעה צריך להיות מדולל בקלות עם רזה, ובקלות להתייבש לעיבוי. ניתן להשתמש בסוגים שונים של צבעים; כאן, התוצאות מוצגות עם מסיסים במים (שאינם עמידים בפני אטימות) eyeliners וצבעי אמייל. Eyeliners שאינם עמידים למים יש את היתרון של להיות מעובה בקלות כאשר מעורבב עם מים. עם זאת, מסחר זה עם דילול של פיגמנטציה (אשר עשוי לא יכול להיות רצוי (ראה למשל איור 3)). צבעי אמייל יש עקביות כי ניתן לשלוט בקלות על ידי הוספת רזה אמייל, תוך מתן כיסוי מלא. עם זאת, מאפיין זה משנה את האפשרות של שמירה על מבנה השיער או קנה המידה של חלק הגוף צבוע. בנוסף, צבעי אמייל הם ממושכים. החיסרון הוא כי צבע האמייל ולדלל פולט ריחות חזקים במהלך היישום ולפני ייבוש. אחד הקושי הנוסף לגבי החומרים צביעה יכול להיות למצוא את הגוון הנכון, עם תכונות ספקטרלי הנכון. זה למשל קשה לקבל אייליינר אדום להשתמש במקביל עם אייליינר שחור, כמו eyeliners הם לעתים קרובות יותר ורוד מאשר אדום. זה גם קשה לקבל אבקת איפור (או פיגמנטים) שאינם מכילים כל נצנצים (אשר יכול לפעמים להיות גלוי רק מתחת למיקרוסקופ). מוצרי איפור רבים משקפים גם אור UV אשר, בעוד בלתי נראה לניסויים, יכול להיות בולט לבעלי החיים למדו.
שינוי הצבע של פרוקי רגליים על ידי החלת צבעים ישירות על חלקי הגוף שלהם מגיע עם יתרונות וחוסר נוחות כאשר בהשוואה לשיטות אחרות. המגבלה העיקרית שלה היא כי אי אפשר לבטל לחלוטין את האפשרות של כמה אפקטים הרעילות עדין. עם זאת, ניתן להבטיח לא להחדיר הטיות נגד קבוצת טיפול אחת על ידי החלת צבע על כל קטגוריות הטיפול, ו/או אחד יכול לבדוק אם יישום הצבע מפריעה התנהגויות עניין. עם השיטות המוצגות כאן, אספנו מספיק ראיות כדי להציע שיישום הצבע הוביל לזניח ללא השפעה שלילית (שולחן 1 ושולחן 2). היתרון העיקרי של שיטה זו היא כי כתמים זעירים של צבע יכול להיות ממוקד, הצבע שלהם ' הוסר ' (ראה איור 2), עשה העמום (איור 3) או בהיר (איור 4), בבידוד משאר הצבע הגוף ואת האדם של סביבה. הדבר מנוגד לשיטה האלטרנטיבית הנפוצה ביותר, המורכבת מטיפול בתנאי התאורה, ובכך משנה את המראה החזותי של הפרט כולו וסביבתו. למעשה, גם כאשר לא מניפולציה במיוחד בתנאי תאורה, ניתן לטפל בהצלחה בצבע ולראות מוגבל או לא אפקטים של מניפולציה זו אם סביבת התאורה אינה מתאימה39. לכן, חשוב למדוד ולשקול את הסביבה האור שבו כל הניסויים יתקיימו (כלומר, למדוד irradiance) ולוודא היטב להתאים אותו לתנאי תאורה טבעית (למשל באמצעות מלוא הספקטרום נורות המחקים אור טבעי כאשר בשבי). בסך הכל, באמצעות מברשות מיקרו ומיקרוסקופ, פרוטוקול זה מאפשר מניפולציה מדויקת יותר של תיקוני צבע זעירים מאשר ברוב שיטות צביעה ישירה אחרים שהיו בשימוש בעבר חסרי חוליות. רוב המחקרים הקודמים השתמשו בעלי חיים עם טלאים צבע כי הם גדולים יחסית לפנים של עכבישים קופצים (g., מניפולציה של הכנף פרפר צבעים29,34,35, הגופות של מבוגרים המיפטרנים (' באגים אמיתיים ')30,36 ו חגבים31, או הרגליים של עכבישים זאב גדולים יחסית32,33,37). השיטות שהוצגו כאן לפתוח את ההזדמנויות כדי ללמוד את המגוון המדהים של תיקוני צבע על מיסים שאינם למדו בשל גודלם הקטן.
טכניקות דומות יכול להיות מיושם על פרוקי רגליים אחרים שיכולים להיות מנוכל או מורדם ועבור אזורים שבהם צבע לא ישפיע על הניידות או הבריאות של הפרט (כלומר, למעט אזורים כגון פרקים, מבנים כגון שיער או ארוליה הדרושים לתנועה מתאימים, לחלקי פה או לפתחים אחרים כגון מבני נשימה. טכניקות אלה ניתן גם להרחיב כדי לכלול לוח גדול יותר של צבעים, צבעים, ו-איפור כי הם רבים זמינים.
לבסוף, טכניקות עדינות אלה יכול לשמש לא רק כדי לתמרן צבעים על אורגניזמים קטנים, אלא גם לתמרן דפוסים (כגון פסים) באורגניזמים גדולים יחסית. זה צריך להיות מועיל למגוון רחב של חוקרים שיכולים להתאים את השיטות שלנו למחקרים שלהם של בחירה מינית, תקשורת, אותות הטרף aposematic, והקשרים אחרים בהם בעלי חיים להשתמש בצבע.

בעלי חיים לעיתים קרובות יש דפוסי צבע מורכבים שהם מציגים במהלך מפגשים מיניים, מפגשים אגאליים, או להרתיע מראש. תכונות אלה עשויות להעביר מידע למקלטים כגון האיכות האישית של האדם כשותף1, יכולת הלחימה כמתחרה2, או הפליוביליות כפריט טרף3. כדי להבין את המטרות האדפטיבית של תכונות צבעוניות, החוקרים עיצבו ניסויים הכרוכים מניפולציה צבעים בדרכים שונות. כמה חוקרים השתמשו גירויים בצבע דמה כגון מודלים4,5,6,7,8, תצלומים9, או קטעי וידאו10,11, 12 המוצגים לרסיברים בניסויים התנהגותיים. אחרים, במיוחד כאשר משתמשים חסרי חוליות, השפיעו על סביבת התאורה כדי להשפיע על המראה של צבעים של אנשים חיים13,14,15,16, 17. כל אלה מניפולציות, בעוד גאוני, יש את החיסרון של הסרת התנהגות טבעית העלול להיות חשוב ו/או להשפיע הרבה יותר מאשר תכונה של ריבית. בחוליות גדולות, כגון ציפורים, חוקרים לעתים קרובות מניפולציה צבע ישירות על חיות חיים (שנסקרו בגבעה מקגרו, 200618). נוצות בודדות או מקורים בצבע ישיר עם סמנים2,19,20,21,22,23,24, צבעים המכילים מי חמצן מימן משמש לעתים קרובות ב לימברק שיער25,26,27, או צבעים שונים כולל מסמר פולנית28. בחסרי חוליות, מחקרים כאלה שמשנים דפוסי צבע ישירות על חיות חיים הם נדירים יחסית אבל עדיין סיפקה תובנה עצומה לתוך הפונקציה והאבולוציה של צבע29,30,31 ,32,33,34,35,36,37,38,39. אפילו מחקרים ארמטים נראים מוטים לקראת מטקא שיכול להיות יותר קל לטפל ולצבוע, השארת דפוסי צבע במינים קטנים מאוד יחסית.
כאן, אנו מתארים טכניקה עדינה מניפולציה צבע שפותחה עבור בעלי חיים קטנים מאוד. באופן ספציפי, שיטה זו כרוכה בטיפול בצבע הפנים של עכבישים קופצים זכר מתחת למיקרוסקופ כדי לחקור את החשיבות של תכונות צבעוניות כגון בהקשר של הבחירה התאומה וקניבליזם מיני. במקרה זה, השתמשנו בברואטיוס פירובריקס (שנאסף מפיניקס, AZ, ארה ב) כמין מודל (איור 1). פרסמנו את התוצאות של עבודה ניסיונית באמצעות חלק משיטות אלה במקום אחר38,39, אבל כאן אנו מתארים את השיטות בפירוט רב יותר מאשר נעשה בעבר, בדרך שאמורה להפוך אותם לנגישים לאחרים מנסה לשכפל אותם או להתאים אותם לשימוש על מיתר קטן מאוד. פרוטוקולים כאלה צריכים לפתוח הזדמנויות ניסיוני על בעלי חיים שיכולים להיות צבעוניים כמו הציפורים הסמלי ביותר אבל כי הם בדרך כלל למדו.

<table><tbody><tr><td>מיכל CO2</td><td>AirGas (רדנור, פנסילבניה)</td><td>#CD 50</td><td>להרדמת עכבישים מדלל</td></tr><tr><td>צבע אמייל</td><td>בודקים (ורנון הילס, אילינוי)</td><td>75611792569</td><td>לצבע אמייל דק</td></tr><tr><td>צבע אמייל שטוח</td><td>בודקים (ורנון הילס, אילינוי)</td><td>אדום: 075611115009, שחור: 075611114903, לבן:</td><td>ניתן לדלל 075611116808 עם מדלל צבע אמייל</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור</td><td>Zeiss (Jena, גרמניה)</td><td>stemi 508</td><td>לצביעת אזורים קטנים עם</td></tr><tr><td>מצלמת מיקרוסקופ אור</td> מדויקת <td>Zeiss (Jena, גרמניה)</td><td>Axiocam 105 צבע</td><td>לצילום לפני ואחרי מניפולציה לתיעוד</td></tr><tr><td>תוכנת מצלמת מיקרוסקופ אור</td><td>Zeiss (Jena, גרמניה)</td><td>Zen 2 blue edition</td><td>לעיבוד תמונות שצולמו לפני ואחרי מניפולציה</td></tr><tr><td>אייליינר תוחם נוזלי, גוון " סטייה"</td><td>Urban Decay (קוסטה מסה, קליפורניה)</td> <td>(הופסק)</td> <td>אייליינר לא עמיד למים שניתן לדלל במים; אייליינר 2</td></tr><tr><td>אייליינר נוזלי MegaLiner, שחור</td><td>WetnWild (לוס אנג'לס, קליפורניה)</td><td>מק"ט# 871A</td><td>אייליינר שאינו עמיד למים שניתן לדלל במים; אייליינר 1</td></tr><tr><td>מברשות מיקרו</td><td>MicroMark (Berkeley Heights, NJ)</td><td>#84648</td><td>כדי לאפשר צביעה מדויקת של אזורים קטנים</td></tr><tr><td>דוגמנות לא מתקשה חימר</td><td>ואן אקן אינטרנשיונל קליטון (צפון צ'רלסטון, דרום קרוליינה)</td><td>18165</td><td>כדי לתקוע סיכת מסמר או חרקים קטנים ולהתאים בגמישות את הזוויות שלהם</td></tr><tr><td>סיכות הרכבה קטנות של מסמרים או חרקים</td><td>BioQuip (ראנצ'ו דומינגז, קליפורניה)</td><td>#1208B7</td><td>להדביק עכבישים כמו גם להרחיק עכביש ' נספחים בחזית האזור לצביעה</td></tr><tr><td>מיכלי פלסטיק קטנים כגון המכסים של בקבוקוני איסוף חרקים עם כובע הצמד</td><td>BioQuip (ראנצ'ו דומינגז, קליפורניה)</td> <td># 8912</td><td>לערבוב צבע ומדלל לעקביות הנכונה</td></tr><tr><td>מזרק קטן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>1482910F</td><td>להעברת כמות קטנה של מדלל אמייל</td></tr><tr><td>ספקטרלון לבן</td><td>סטנדרטי Labsphere Inc. (צפון סאטון, ניו המפשייר )</td> <td>WS-1-SL</td><td>למדידת תכונות ספקטרליות של צבעים</td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר UV-VIS</td><td>אופטיקה אוקיינוסית (דנידין, פלורידה)</td> <td>USB 2000 (ספקטרופוטומטר) עם PX-2 (מקור אור)</td> <td>למדידת תכונות ספקטרליות של צבעים</td></tr><tr><td>דבק בית ספר מסיס במים</td><td>Elmer's (High Point, NC)#E304</td><td></td> <td>להרכיב את העכבישים על מסמר/סיכה</td></tr><tr><td>קיסמי עץ</td><td>Up& למעלה, תאגיד טארגט (מיניאפוליס, מינסוטה)</td> <td>#253-05-0125</td><td>להעברת טיפות צבע אמייל</td></tr></tbody></table>

מניפולציה של דפוסי צבע ב עכבישים קופצים לשימוש ניסויים התנהגותיים

Manipulation of Color Patterns in Jumping Spiders for Use in Behavioral Experiments

בתחום האקולוגיה התנהגותית, ניסויים רבים מתוכננים לחקור את המטרות ההתפתחותיות של תכונות צבעוניות בהקשר של הבחירה המינית והירידה. שיטות הן שונות, אבל בעיקר מורכב לשנות את דפוסי הצבע של אנשים עם צבעים מגוונים. טכניקות כאלה שימשו על פני מיני בעלי חוליות רבים, במיוחד בציפורים, אך נותרו לא מפותחות לחסרי חוליות בשל הקושי של שימוש יעיל בצבע באורגניזמים קטנים. במקום זאת, כדי לתמרן את המראה של חסרי חוליות, מדענים שינו בדרך כלל את סביבת התאורה כדי לסנן אורכי גל מסוימים. עם זאת, שיטה כזו משפיעה לא רק על התכונה פנוטימית של עניין, אלא על המראה כולו של הפרט וסביבתו. כאן, שדרוג למטה את הטכניקות המשמשות בעבר על ציפורים צבעוניות, אנו מציגים דרכים לתמרן את הצבעים של יצורים פרוקי רגליים קטנים, באמצעות סמלי באופן שווה אך מינים לא למדו: עכבישים קופצים צבעוניים.

יעילות של טפלול צבעים
שימוש בטכניקות אלה, דרגות שונות של טפלול צבעים יעילים, כולל הסתרת צבעים לחלוטין או הפחתה או שיפור העוצמה שלהם. זה ניכר הן מהתמונות והן מהמדידות של השתקפות ספקטרלית (איור 2, איור 3 ואיור 4). כאן אנו מראים צבע מניפולציות הבהברואוס הגברי פירורינוס לעומת זכרים טבעי הפנים אדום. תכונות ספקטרליות נמדדו באמצעות ספקטרוסקופיה UV-VIS (ראה טבלת חומרים) זה יכול בדיוק למדוד אזורים צבעוניים קטן כמו 1 מ ' קוטר. המדידות נלקחו ביחס לתקן השתקפות לבנה מפוזר (ראה טבלת חומרים).
בהזדמנויות נדירות (5 מתוך 108 זכרים צבועים עם אייליינר שחור 1 (ראה טבלת חומרים) על הפנים שלהם), אייליינר מסיסים במים החלה להתפוגג את פניהם של העכבישים אחרי שבוע או שניים. זה לא נצפתה עבור המותג השני של אייליינר (אייליינר 2; ראה טבלה של חומרים). בשני המקרים רוססו כלובי העכביש במים שלוש עד חמש פעמים בשבוע. תנאים שונים של תחזוקה עלול להשפיע על בלאי של צבע על בסיס מים. צבע האמייל היה עדיין שלם עבור כל הזכרים המתמרנים (n = 221), אפילו לאלה שעדיין חיים לאחר 6 חודשים.
רעילות פוטנציאלית של טפלול הצבעים
אחד צריך להימנע מקבלת צבע על העיניים של העכבישים כדי לא לחסום את החזון שלהם, ולא על הכלעיים שלהם, חלקי הפה ופתחים אחרים, ואולי אחרים חלקי גוף רכים כדי למנוע בליעה אפשרית והרעלה. יש להקפיד גם בצביעת מפרקים או חלקים המכילים שערות חישה (כגון הרגליים והגמלון) כדי לא להגביל את הניידות או את מערכת החישה שלהם. עם זאת, אם מניפולציות צבע כגון על אזורי גוף אלה נחוצים, או אם יש ספק לגבי האפשרות של אפקטים שליליים עדינים, אז עדיף להחיל צבעים על אנשים בקטגוריות כל הטיפול. בדרך זו, ניתן יהיה להימנע בשוגג מלתמרן את המערכות התחושתיות של אנשים בדרכים שעלולות להיות מוטים נגד אחד הטיפולים בלבד. למשל, בניסוי שימוש בזכרים שהיו מניפולציות באיור 4, המטרה הייתה להגדיל ולהקטין את מספר הטלאים האדומים המוצגים על ידי זכרים במהלך חיזור. מכיוון שחלק מהגברים מקבלים את פניהם האדומים הטבעיים מוסתרים בצבע אמייל אפור (כדי להקטין את כמות האדום המוצג), הזכרים האחרים שעבורם רצינו לשמור על פנים אדומות צוירו באדום על פניו האדומות באופן טבעי עם מוצר זהה לזה של הפנים האפורות זכרים. באופן דומה, כיוון שרצינו להוסיף טלאים אדומים על גברים מסוימים כדי להגדיל את כמות טלאים צבע אדום מוצג, צבע אפור שימש כדי לכסות את הגמלון של זכרים אחרים כך שכל הזכרים יהיו צבועים על האזור הזה רגיש (ראה איור 4) . למרות שעדיף, אסטרטגיה זו לא תמיד יכול להיות אפשרי. למשל, בניסוי אחר, הצבע האדום הוסר באמצעות אייליינר שחור נותן את המאפיין ספקטרלי אותו כמו הקוטיקולה הבסיסית של הזכר, תוך השארת הצבעים הזכרים האחרים שלמים וטבעיים (איור 2). במקרה זה, עבור גברים הנראים טבעי, אותה כמות של אייליינר הוחל על האזור בחלק העליון של שריון שלהם רק מאחורי העיניים החציוני הקדמי שלהם (אזור שאינו גלוי בבירור לנקבות), כדי לשלוט על ריח פוטנציאלי או רעילות הכולל של מוצר. עם זאת, המיקום שבו הצבע מוחל עשוי להשפיע על עכבישים באופן שונה. לכן, כדי להעריך את ההבדלים העדינים בדרך או במקום בו הוחל הצבע על שלמות העכביש, ההתנהגות של שני סוגי הזכרים בהקשר שהיה רלוונטי להשערות שלנו (ביחס לבחירת ההזדווג ולקניבליזם המיני). הושווה. הזכרים הכניסו שניים על שניים בנוכחות של נקבה, והשוונו את העיכוב שלהם להיות פעיל, העיכוב שלהם לחיזור, והמשך הכולל שהם בילו בחיזור עם מודלים השפעה מעורבת לינארית כללי (באמצעות הפונקציה lmer עם החבילה R lme443 בגירסה R 3.5.244 עם הזהות הנשית כאפקט אקראי, ושימוש בקריטריון הסבירות המירבי להשגת ערכי p). במקרה זה, כל ההשוואות לחשוף את ההבדלים בין הטיפולים (לראות שולחן 1) ולכן הגיע למסקנה כי אנחנו לא הציג הטיה לטובת האחד או את קטגוריית הטיפול האחר.
בכל מקרה, כאשר יש קטגוריות טיפול דומה מאוד (איור 4), או רק אנשים מטופלים המזויף (איור 2 ואיור 3), החוקרים צריכים להעריך כיצד מינים מודל שלהם מושפעים הצבע שהם משתמשים ולהבטיח כי הם עדיין מתנהגים בצורה דומה ובעלת רלוונטיות אקולוגית. אדם יכול להקליט נתונים כדי להעריך את ההשפעות האפשריות של רעילות ככל האפשר, למשל על ידי השוואת שיעורי פעילות בין אנשים מטופלים ובלתי מניפולציות. העכבישים שלנו צוירו בצבע אמייל כמו באיור 4 הושוו לזכרים שלא מניפולציות בהקשר זהה באופן אחר. באופן ספציפי, הזכרים הוצגו ביחידים לכלוב נשי והעיכוב שלהם לעזוב את המבחנה, לעכב את החיזור ואת שיעור החיזור (לפני הזדווגות, ולפני שהותקף או הותקפו) הושוו. לא נמצאו הבדלים (כאשר באמצעות מודלים דומים ליניארי מעורבת אפקט כלפי מעלה) ולכן הגענו למסקנה כי הזכרים שלנו צבועים התנהגו בטבעיות (שולחן 2).
לבסוף, חשוב לציין כי כל העכבישים בניסויים (בדרך כלל נקבות) שזכרים מניפולציות צבע מעולם לא נראו כסובלים מהשפעות שליליות. עכבישים מעכלים את טרפם מבחוץ, בדרך כלל משאירים את האזורים המצוירים של הקוטיקולה מאחור. עם זאת, אם התאמת שיטה זו עבור מערכות אחרות בהן בעלי החיים מניפולציה הצבעים יהיה נצרך, יש להעריך את הסיכונים הפוטנציאליים של רעילות.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59824/59824fig1.jpg"> איור 1 . בוגר הברונזה הגברית פירוקס הממחישות עד כמה זעירים אזורי הגוף הצבעוניים שלהם. צולם על ידי לייל Buss. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59824/59824fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59824/59824fig2.jpg"> איור 2 . מניפולציה בצבע ניסיוני השתמשו כדי להסתיר את צבע הפנים האדום בהלברון פירובריס. (א) צבע הפנים האדום ללא שינוי לפני טפלול הצבעים. (ב) צבע הפנים של אותו זכר לאחר הסתרת הצבע האדום הטבעי עם אייליינר שחור 1. (ג) המייצג ספקטרום השתקפות עבור הפנים האדומות הטבעיות, הקוטיקולה השחורה הטבעית הבסיסית, והפנים האדומות שצוירו עם אייליינר שחור 2. שונה מ טיילור ו מגרו 201339. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59824/59824fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59824/59824fig3.jpg"> איור 3 . מניפולציה צבע ניסיוני המשמש כדי להקטין את הגודל והאדמומיות של התיקון האדום של הפנים של הגבר הלברון פירוריאוס. (א) צבע הפנים האדום ללא שינוי לפני טפלול הצבע. (ב) צבע הפנים של אותו זכר לאחר החלת אייליינר שחור מדולל (הריקבון העירוני) אל החלק הקדמי של הפנים, ו אייליינר שחור לא מדולל לאורך הקצוות של תיקון הפנים כדי להקטין את הגודל של האזור האדום. (ג) מתכוון לעקומות ספקטרליות של זכרים שליטה בעלי השליטה ברמאות (n = 21) וגברים מניפולציות צבע (n = 21), לעומת ממוצע האוכלוסיה (n = 57) ו -10 הזכרים הטובים ביותר מבית המחקר הקודם41. איור ששוחזר מטיילור ואח ' 201438. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59824/59824fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59824/59824fig4v2.jpg"> איור 4 . מניפולציה צבעונית ניסיונית המשמשת לשינוי הצבע של טלאי הפנים האדום של זכר . הברוברייוס פירוריקס הברונטס הזכרים הצבעוניים צבועים עם (א) אדום, (ב) אדום ואפור, ו-(C) צבע אמייל אפור על פני הפנים האדומים הטבעיים שלהם בצבע קרם טבעי הגמלון. (ד) מתכוון לעקומות ספקטרליות עבור גברים לא מניפולציות (n = 9), וזכרים עם הפנים שלהם מכוסים בצבע אמייל אדום (n = 9). על ידי החלת אדום בהיר יותר על פני העכביש, אנחנו ביעילות הגדילו את הצבע הפנים האדום שלה. מכיוון שצבע האמייל מכסה לגמרי את הקשקשים הבסיסיים, הצבע יכול גם להשתנות לחלוטין, כמו המקרה עם האמייל האפור. (ה) בניסוי זה, צבעי אמייל אדומים ואפורים נבחרו להיות מתאימים לבהירות מוחלטת (השתקפות מוחלטת על מגוון אורכי הגל הגלויים לעכבישים אלה). הבדלים בקנה מידה של ציר Y ב D ו-E הם בגלל טכניקות שונות (כגון מרחק למדגם וגודל של אזורים שנמדדו) למדידת דגימות צבע על נייר (E) מול מדידות ישירה של צבעים על פני העכביש (ד). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59824/59824fig4v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a> 
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>N</td>
			<td>משתנה תלוי</td>
			<td>p</td>
			<td>t</td>
			<td>אדום פנים</td>
			<td>כיצד לצפות</td>
			<td>שחור פנים</td>
			<td>כיצד לצפות</td>
			<td>הנפיד</td>
		</tr>
<tr>
<td>202b
</td>
			<td>השהיה גברית לעזוב את הצלחת</td>
			<td>0.35</td>
			<td>-0.93</td>
			<td>140.0</td>
			<td>23.9</td>
			<td>109.8</td>
			<td>23.9</td>
			<td>102</td>
		</tr>
<tr>
<td>179c
</td>
			<td>השהיית זכר לבית המשפט</td>
			<td>0.74</td>
			<td>0.33</td>
			<td>983.4</td>
			<td>127.1</td>
			<td>1031.0</td>
			<td>126.5</td>
			<td>95</td>
		</tr>
<tr>
<td>204א
</td>
			<td>מאמץ חיזור גברי</td>
			<td>0.52</td>
			<td>0.63</td>
			<td>181.2</td>
			<td>24.4</td>
			<td>203.0</td>
			<td>24.4</td>
			<td>102</td>
		</tr>
<tr>
<td>204א
</td>
			<td>מאמץ חיזור גברי לפני כל התקפה</td>
			<td>0.41</td>
			<td>0.68</td>
			<td>89.0</td>
			<td>15.7</td>
			<td>97.5</td>
			<td>15.7</td>
			<td>102</td>
		</tr>
</tbody></table>. שולחן 1 השפעת מניפולציה של צבע הפנים הגברי על התנהגות, כאשר מצוירים עם אייליינר שחור לעומת התייחס המזויף (איור 2). המבנה של כל דגם ניתן, כמו גם האומדנים מתכוון בשניות (± SE) עבור כל קבוצת טיפול. N = מספר הזכרים, p ו-t = p-value ו-t-value עבור הטיפול הגברי, הנפיד = מספר הרמות בזהות הנשית האקראית של האפקט. מהווה מתוך 104 בדיקות זכר שבוצעו, 102 נרשמו בהצלחה, המובילים 204 הזכרים הייחודיים שנצפו. ב2 הזכרים הואמו הנקבה לפני היציאה מצלחת הפטרי. . הנקבה לפני שחזר אחרי הנקבה
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>N</td>
			<td>משתנה תלוי</td>
			<td>p</td>
			<td>t</td>
			<td>ללא התערבות</td>
			<td>כיצד לצפות</td>
			<td>צבוע</td>
			<td>כיצד לצפות</td>
		</tr>
<tr>
<td>32א
</td>
			<td>השהיה גברית לעזוב את הצלחת</td>
			<td>0.87</td>
			<td>-0.17</td>
			<td>380.8</td>
			<td>143.1</td>
			<td>345.4</td>
			<td>152.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>31ב
</td>
			<td>השהיית זכר לבית המשפט</td>
			<td>0.93</td>
			<td>-0.09</td>
			<td>502.6</td>
			<td>105.8</td>
			<td>488.1</td>
			<td>116.6</td>
		</tr>
<tr>
<td>31ב
</td>
			<td>מאמץ חיזור גברי</td>
			<td>0.74</td>
			<td>-0.33</td>
			<td>2324.3</td>
			<td>455.0</td>
			<td>2102.1</td>
			<td>484.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>31ב
</td>
			<td>מאמץ חיזור גברי לפני כל התקפה</td>
			<td>0.68</td>
			<td>0.42</td>
			<td>1495.1</td>
			<td>450.8</td>
			<td>1770.1</td>
			<td>479.9</td>
		</tr>
</tbody></table>. שולחן 2 השפעת מניפולציה של צבע הפנים הגברי על התנהגות, כאשר צבוע עם צבע אמייל אדום או אפור (n = 15, איור 4) לעומת גברים לא מניפולציות (n = 17). המבנה של כל דגם ניתן, כמו גם האומדנים מתכוון בשניות (± SE) עבור כל קבוצת טיפול. N = מספר הזכרים, p ו-t = p-value ו-t-value עבור הטיפול הגברי. 17 זכרים שאינם מניפולציות הושוו לקבוצת משנה של כל הזכרים המצוירים בניסוי שלנו (n = 221). במיוחד, הם הושוו ל 15 זכרים צבועים (5 אדום (איור 2A), 5 אדום ואפור (איור 2a), ו 5 אפור (איור 2a)) נבדק באותו הקשר (בנוכחות נקבה) ובאותה תקופה מסוימת. הדבר חשוב משום שזכרים שאינם מניפולציות נבדקו לקראת סוף הניסוי (באוגוסט ובספטמבר 2018), המתאים לסוף עונת הרבייה הטבעית שלהם, והזכרים בדרך כלל פחות פעילים. שמירה על כל המשתנים האחרים שווים מאפשרת לנו להשוות את הטיפול בציור מבלי להציג הטיות אחרות. ב זכר אחד (כולו אפור) היה כושל לפני שחזר אחרי הנקבה.

המטרה של פרוטוקול זה היא לתמרן את דפוסי הצבע של עכבישים קופצים מאוד קטנים ופרוקי רגליים עם צבע כדי ללמוד שאלות הקשורות בחירה מינית, קניבליזם מיני, לפחד, aposematism או כל שדה אחר של בעלי חיים.

In the field of behavioral ecology, many experiments are designed to investigate the evolutionary purposes of colorful traits in the context of sexual ...

כדי להבין כיצד ומדוע צבעים מתפתחים, אנו זקוקים לניסויים שבהם אנו מתפעלים דפוסי צבע של בעלי חיים. בעלי חיים זעירים הם לעתים קרובות understudied כי הצבעים שלהם קשה לתפעל. היתרון העיקרי של מניפולציה ישירה של כתמי צבע הוא כי שיטה זו אינה משפיעה על המראה של שאר החיה, או לשנות את סביבת התאורה הטבעית שלהם.אנו מראים כיצד מחקרים יכולים להחיל צבעי אמייל ואיפור על עכבישים קופצים. אותן שיטות עובדות גם על מגוון פרוקי רגליים קטנים, צבעוניים ומותחת. הייתי ממליץ תחילה לנסות לצייר דגימה מתה כך שלא ימהר להשיג את עקביות הצבע והכמות המושלמת על מברשת המיקרו.הדגמה חזותית של שיטה זו היא חיונית מכיוון שקשה להסביר מהי עקביות הצבע הנכונה, כיצד להחיל את הצבע, איזו זווית תהיה למברשת, למשל. כדי להתחיל, חבר מיקרוסקופ לנתח למצלמה ולמחשב, כדי לצלם את התוצאה ביתר קלות. הפעל את כל שלושת ההתקנים והתחל את התוכנה המעבדת את קלט המצלמה.לאחר מכן, בחר את גודל התצוגה הרלוונטי שבו תצולמו התמונה הסופית. מקל סיכת הרכבה חרקים או מסמר קטן לתוך כדור של חימר דוגמנות לא התקשות כי הוא בערך בגודל של ענב. מניחים את חימר דוגמנות הגדרת סיכה מתחת למיקרוסקופ ולהתאים את המטרות, כך שהם בערך להתמקד בראש הסיכה שבו העכביש יהיה מותקן.לאחר מכן, מניחים סיכת הרכבה דקה במיוחד של חרקים לתוך כדור חדש של חימר דוגמנות ללא התקשות, ומ מניחים את זה ליד המיקרוסקופ. הגדר את החומרים הבאים בצורה מאורגנת ליד המיקרוסקופ. פיסת נייר סופגת קטנה, פיסת נייר מדפסת לבנה, החלת הצבעים, מיכלים נפרדים של מדלל צבע עבור כל צבע מוחל, ועוד אחד כדי להישמר שקוף ונקי, מברשות מיקרו בודדות עבור כל צבע, ו microbrush אחד לשמש רק עם דק יותר נקי.בעזרת קיסם, מוסיפים טיפת צבע לצלחת פלסטיק פתוחה. מוסיפים מדלל צבע ולהשתמש בקיסם כדי לערבב את השניים לעקביות הנכונה, שם הצבע הוא הומוגני לחלוטין, אבל לא נזלת מדי. השתמש במברשת מיקרו כדי לבדוק את הצבע המעורב על נייר המדפסת הלבנה.לאחר מכן, לשים טיפה בגודל אפונה של דבק על בסיס מים על פינה של נייר המדפסת. ראשית, מוסיפים כמות קטנה מאוד של דבק על ראש סיכת ההרכבה או הציפורן שהוכן בעבר והונח מתחת למיקרוסקופ. מחליק בעדינות את העכביש הרדמה מבקבוקון שלו אל השולחן עם הצד הגחוני שלו למעלה, הקפד לא להקיש או להפיל את העכביש על השולחן.החזק את חימר הדוגמנות בשתי הידיים, מוודא ששתי הידיים יציבות בחוזקה על השולחן. לאחר מכן, לחץ בעדינות על ראש הסיכה עם דבק על עצם החזה של העכביש, כך שהעכביש יקפץ מעט וירחיב את רגליו תחת הלחץ הקטן המוחל. ממקם מחדש את מערך ההרכבה מתחת למיקרוסקופ, כך שהאזור שיש לצבוע פונה כלפי מעלה ובפוקוס.ראשית, אנו בודקים את עקביות הצבע, ומתאינים אותה שוב במידת הצורך. נסה תחילה להחיל את הצבע על נייר המדפסת, כדי לשלוט באיכות הצבע הכלולה שערות המברשת. לפני נגיעה העכביש, זה קריטי כדי לוודא את הצבע יש את העקביות הנכונה, כי יש רק את הכמות הנכונה של צבע על microbrush.תוך כדי התבוננות במיקרוסקופ, השתמש ביד הדומיננטית כדי להכניס את קצה המברשת לשדה הראייה, ולהבטיח, שוב, כי שערות המברשת אינן מכילות יותר מדי צבע. אם יש יותר מדי צבע על המברשת, נגב חלק ממנו על נייר המדפסת. לאחר מכן, לגעת במברשת לעכביש על האזור הגדול ביותר שיהיה צורך לצבוע מעל.זה יגלה אם העקביות והכמות של הצבע הוא נכון, וזה כאשר הצבע מעט לאט ספוג לתוך השיער או קשקשים של העכביש. אם לא מוחל צבע, השרו את המברשת לצבע וחזרו על תהליך זה, החל מבדיקת הצבע על נייר המדפסת. אם הצבע נספג במהירות, ושופך לאזור שלא אמור להיות מכוסה בצבע, נגב את המברשת על הנייר הסופג וחזור על התהליך מההתחלה, על ידי בדיקת הצבע על נייר המדפסת.אם צובעים את פני העכביש, השתמשו בסיכה הדקה הנוספת ביד הלא דומיננטית, כדי להחזיק את הרגליים הקדמיות ואת pedipalps. בהתאם למברשות ולצבע, שקול לצבוע את שני צידי הפנים לפני שתנסה לצבוע את האזור המרכזי בין העיניים, בכך שניתן לחבר את הציור באזורים הצדדיים על ידי החזקת המברשת במקביל לפני העכביש ופעולה נימית. בעת צביעת pedipalps או הרגליים, הקפד לא לגעת בכל צירופים עם צבע התקשות, ולוודא לא להחיל צבע על איברי אספקת הזרע הגברי בצד התחתון של החלק הדיסטלי של pedipalps.לאחר צביעת צד אחד של פני העכביש, מומלץ לסובב את העכביש מתחת למיקרוסקופ, כך שניתן יהיה לצבוע את הצד השני של הפנים באותה יד דומיננטית. הציור חייב להיעשות בזהירות ובמהירות, לפני שהעכביש מתעורר מהרדמה. לבסוף, להקטין את התצוגה עם המיקרוסקופ כדי לבדוק את מניפולציית הצבע הכוללת ולהתכונן לצלם.תחילה, העבר את המטרה למצב המצלמה. באמצעות תוכנת המחשב, צלם תמונה תוך הקפדה שהגדלת התצוגה שנבחרה היא זו שנבחרה במיקרוסקופ, כך שנוסף סרגל קנה מידה. כאשר העכביש מתחיל לזוז, החזק את הסיכה כך שרגליו הקדמיות של העכביש נוגעות בבקבוקון העכביש.במידת הצורך, שפו בעדינות את הסיכה כדי לעזור לעכביש להתרחק מהדבק המיובש ולתת לעכביש לשחרר את עצמו. במחקר זה, הפנים הזעירות של זכרי הברונטוס pyrrithrix הם צבע מניפולציה. באמצעות הטכניקות המודגמים כאן, דרגות שונות של מניפולציות צבע יעילות.כולל הסתרה מוחלטת של צבעים, או צמצום או שיפור עוצמתם. עבור הזכרים המוצגים כאן, המטרה היא להגדיל או להקטין את מספר כתמים אדומים המוצגים על ידי גברים במהלך החיזור. לחלק מהזכרים יש את פניהם האדומים הטבעיים מוסתרים בצבע אמייל אפור, בעוד שאחרים שומרים על צבעיהם על ידי ציור על האדום הטבעי בצבע אמייל אדום כפקד.כמו כן, מאז כמה עכבישים יש כתמים אדומים הוסיף pedipalps כדי להגדיל את כמות כתמי צבע אדום המוצגים, צבע אפור משמש כדי לכסות את pedipalp של הזכרים האחרים, כך שכל הזכרים יש צבע להחיל על האזור הרגיש. עם זאת, לאחר עכבישים מקבוצות שונות צבועים על אותם אזורים בדיוק, כדי לשלוט על כל השפעה שלילית אפשרית של הצבע, הוא לא תמיד ריאלי. במחקר אחר, הצבע האדום מוסר באמצעות אייליינר שחור שיש לו את אותם מאפיינים ספקטרליים כמו הקוטיקל הבסיסי של הזכר, בעוד הצבעים הזכריים האחרים נשארים שלמים וטבעיים.עבור הזכרים הטבעיים למראה, אותה כמות של אייליינר מוחל על האזור על גבי carapace, ממש מאחורי העיניים החציוניות קדימה, כדי לשלוט על כל ריח פוטנציאלי או רעילות הכוללת של המוצר. ההתנהגות של שני סוגי הזכרים מושווית בהקשר נתון כדי להעריך את כל ההבדלים העדינים שעשויים להציע רעילות או השפעות לא מכוונות של הצבעים. שאם טיפל בזכרים ובזכרים שפניהם צבועים באיינר, שמים שניים על שניים בנוכחות נקבה, והתנהגויות גבריות ספציפיות נצפו.במקרה זה, כל ההשוואות לא מגלות הבדלים בין הטיפולים. לכן, ניתן להסיק כי לא מוצגת הטיה לאף אחת מקטגוריות הטיפול. כמו כן, כאשר הציגו בנפרד לכלוב נקבה, זכרים צבועים בצבע אמייל אפור או אדום וזכרים שאינם מניפולציה, אינם מציגים הבדלים בהתנהגות.לכן, ניתן להסיק כי הזכרים המצוירים פעלו באופן טבעי. כדי לא נכות העכביש בכל דרך שהיא, חשוב להימנע לחלוטין הוספת צבע על חלק הפה או איברי אספקת הזרע. כמו כן, אין להוסיף או להשאיר צבע כלשהו על עיני העכביש או על המפרקים.צבע מניפולציה עכבישים או פרוקי רגליים אחרים ניתן להשתמש בניסויים התנהגותיים כדי להבין את התפקיד של צבע במגוון של הקשר, החל חיזור, כדי זכר, אינטראקציות זכר, כדי למנוע טורפים. תחום הצבע של בעלי החיים מונע בעיקר על ידי עבודה על בעלי חוליות גדולים יותר, כגון ציפורים. עם טכניקות מניפולציה צבע מוקטנות, עכשיו אנחנו יכולים לשאול שאלות נוספות על צבע בבעלי חיים זעירים.

manipulation-color-patterns-jumping-spiders-for-use-behavioral

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

מדידת מומנט לסבסב של תסיסנית קשור עם מד מומנט מאפשר שליטה הנוירולוג מעולה של המצב גירוי של החיה ניסיוני. יחד עם כלים גנטיים ייחודיים זמין זבוב הפירות, פרדיגמה זו משמשת עבור מגוון רחב של מחקר הנוירוביולוגי.

למידה אופרנטית של תסיסנית במד מומנט

אנו מתארים שיטה להקליט פעילות מוטורית, בעיתוי לאותת רשמה חשמלית הקשר tarsal ב חרק קשור, הליכה על משטח חלקלק. זה משמש כדי לחקור את הבסיס העצבי של התנהגות אדפטיבית תחת השפעה מופחתת של אינטראקציה מכני בין הרגליים דרך המצע.

ללמוד את הבסיס העצבי של התנהגות מסתגלת של תנועה בתוך חרקים

זחלי דרוזופילה רגישים לאור ומגיבים לשינויים באור שמסביב. סרטון זה מתאר בדיקה הבדוקה את יכולתם להימנע מאור, הנקראת בדיקת נקודת האור. הפרוטוקול המוצג מדגים כיצד להגדיר את התסעפות עם נורית אור כחול ומראה כיצד לתעד את התנהגות החיה בתגובה למפגש האור.

אור ספוט Assay: שיטה לחקור התנהגות פוטוטאקטית Drosophila

סרטון זה מדגים מחקר על התנהגות הניווט של זחלי דרוזופילה בתגובה לגירוי אופטוגנטי של נוירונים חושי ריח (ORN). זחלי דרוזופילה טרנסגניים המבטאים תעלות יונים רגישות לאור ב-ORN ממוקמים על אגרוז בתוך זירת התנהגות. גירוי אופטוגנטי עם אור פותח את הערוצים, גורם לזרם קטיון שמפעיל את העברת האות למוח, והתנהגות הניווט נרשמת.

התנהגות ניווט של זחלי דרוזופילה בתגובה לגירוי אופטוגנטי של נוירוני חוש הריח

כלי optogenetic מקודד גנטי מאפשרים מניפולציה לא פולשנית של תאי עצב ספציפיים...

גירוי Optogenetic של התנהגות בריחה ב<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

פרוטוקול זה מתאר דרך פשוטה וחסכונית לזהות באופן אינדיבידואלי דרוזופילה או חרקים אחרים. נתוני הדגמה החוקרים את הצלחת ההזדווגות על פני שלושה מינים של דרוזופילה מראים כי שיטה זו דומה או טובה יותר מהשימוש בהרדמת CO2.

צביעת חרקים למבחני התנהגות: התנהגות חיזור של הרדים<em&gt; דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מנתח התנהגות ניווט של זחל דרוזופילה בתגובה optogenetic בו זמנית גירוי של נוירונים חוש הריח שלו. אור של 630 ננומטר אורך גל משמש כדי להפעיל את חוש הריח נוירונים בודדים לבטא של אופסין # רודופסין אדום-העביר ערוץ. תנועת הזחל מתבצע בו זמנית, רשמה דיגיטלית, נותחה באמצעות תוכנה מותאמת אישית-נכתב.

מעקב אחר התנהגות זחל דרוזופילה בתגובה Optogenetic גירוי של חוש הריח נוירונים

צילום-אטרקציה bioassay ארנאס משמשים כדי לקבוע את צבעי אור אופטימלי כדי למקסם את האטרקציה חרקים; עם זאת bioassays ושיטות הם ספציפיים כדי להתמקד בהתנהגויות חרקים, בתי גידול. ציוד להתאמה אישית ושינויים מוסברים עבור חרקים ליליים, ההשתנות היומית, יבשתי או אווירי.

המרכיבים העיקריים של צילום Bioassay משיכה עבור מחקרים חרקים או תוכניות ניטור

פרוטוקול זה מציג שיטה בעלת מקום קל לחקור התנהגות של דרוזוהילה זחל פוטוטקטיקה. בשיטה זו, נקודת אור נוצרת כגירוי קל, והתהליך של התחמקות מאור הזחל נרשם על-ידי מערכת הדמיה מבוססת אור אינפרא-אדום.

שיטת האור המבוססת על ספוט לניתוח דרוזופילה זחל פוטומוניות

מאמר זה מציג שיטות למניפולציה אופטוגנטית ב-Drosophila melanogaster, תוך שימוש ב-CsChrimson ו-GtACR2 כדי להפעיל ולהשתיק נוירונים ספציפיים. ארבעה ניסויים מתוארים לשימוש באופטוגנטיקה כדי לחקור התנהגויות תרמוטקטיות וטעמיות, ומספקים תובנות לגבי המנגנונים העצביים הבסיסיים השולטים בתהליכים אלה.

מבחנים התנהגותיים למניפולציה אופטוגנטית של מעגלים עצביים בדרוזופילה מלנוגסטר

פרוטוקול זה מעריך פעילות סינפטית פונקציונלית בין שותפים נוירונליים מוגדרים במערכת העצבים המרכזית של זחלי דרוזופילה מלנגסטר באמצעות כלים מקודדים גנטית. גירוי אופטוגנטי בתיווך CsChrimson של נוירונים סנסוריים פרה-סינפטיים cIVda מעורר פוטוקונברנסציה תלויה בסידן של CaMPARI באינטרנוירונים פוסט-סינפטיים של Basin-4.

אפיון פונקציונלי של שותפים פרה-סינפטיים ופוסט-סינפטיים במערכת העצבים המרכזית של זחל הדרוזופילה באמצעות CaMPARI

למד שיטה לשינוי דפוסי צבע בעכבישים קופצים באמצעות צבעי אמייל ואיפור. טכניקה זו מאפשרת חקר ברירה מינית, טריפה ואבולוציה של צבע בחרקים קטנים.

מניפולציה של דפוסי צבע ב עכבישים קופצים לשימוש ניסויים התנהגותיים

גלה סרטונים נוספים