Name: והטיפול מתאי הגידול הראשוניים מבודדים מעכבר תמס שריר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: למד שיטה לאיסולציה של תאי ראבדומיוסרקומה ראשוניים מעכברים, יצירת כדוריות גידול וטיפול בהן. השיטה מאפשרת זיהוי תאי מקור הגידול וסינון תרופות ביולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכת על ידי מענק אליסון הקרן רפואי המענק AG-NS-0843-11, ואת מענק הפיילוט NIH בתוך מרכז הסרטן NCI תמיכה גרנט P30CA030199. ס. י.

<ol><li>Dagogo-Jack, I., Shaw, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+resistance+to+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and resistance to cancer therapies.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (2), 81-94 (2018).</li>
<li>Wicha, M. S., Liu, S., Dontu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+old+idea--a+paradigm+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an old idea--a paradigm shift.</a> Cancer Research. 66 (4), 1883-1890 (2006).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+National+Academy+of+Science+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings National Academy of Science of the United States of America. 100 (7), 3983-3988 (2003).</li>
<li>Oishi, N., Yamashita, T., Kaneko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+liver+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of liver cancer stem cells.</a> Liver Cancer. 3 (2), 71-84 (2014).</li>
<li>Crous, A. M., Abrahamse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+stem+cells+and+low-intensity+laser+irradiation%3A+a+potential+future+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Lung cancer stem cells and low-intensity laser irradiation: a potential future therapy.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4 (5), 129(2013).</li>
<li>Tomao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+molecular+profiles+of+ovarian+cancer%3A+an+update+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Investigating molecular profiles of ovarian cancer: an update on cancer stem cells.</a> Journal of Cancer. 5 (5), 301-310 (2014).</li>
<li>Zhan, H. X., Xu, J. W., Wu, D., Zhang, T. P., Hu, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+stem+cells%3A+new+insight+into+a+stubborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer stem cells: new insight into a stubborn disease.</a> Cancer Letters. 357 (2), 429-437 (2015).</li>
<li>Sharpe, B., Beresford, M., Bowen, R., Mitchard, J., Chalmers, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Searching+for+prostate+cancer+stem+cells%3A+markers+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Searching for prostate cancer stem cells: markers and methods.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 9 (5), 721-730 (2013).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Lee, C. -H., Yu, C. -C., Wang, B. -Y., Chang, W. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorsphere+as+an+effective+in+vitro+platform+for+screening+anti-+cancer+stem+cell+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Tumorsphere as an effective in vitro platform for screening anti- cancer stem cell drugs.</a> Oncotarget. 7 (2), 1215-1226 (2015).</li>
<li>Sultan, I., Qaddoumi, I., Yaser, S., Rodriguez-Galindo, C., Ferrari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+adult+and+pediatric+rhabdomyosarcoma+in+the+surveillance%2C+epidemiology+and+end+results+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Comparing adult and pediatric rhabdomyosarcoma in the surveillance, epidemiology and end results program.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (20), 3391-3397 (1973).</li>
<li>Blum, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+overlapping+sarcoma+subtypes+initiated+from+muscle+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Distinct and overlapping sarcoma subtypes initiated from muscle stem and progenitor cells.</a> Cell Reports. 5 (4), 933-940 (2013).</li>
<li>Rubin, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+unanticipated+relationship+between+undifferentiated+pleomorphic+sarcoma+and+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an unanticipated relationship between undifferentiated pleomorphic sarcoma and embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 19 (2), 177-191 (2011).</li>
<li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+rhabdomyosarcomas+in+conditional+Pax3%3AFkhr+mice%3A+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22of+Ink4a%2FARF+and+Trp53+loss+of+function.+Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Alveolar rhabdomyosarcomas in conditional Pax3:Fkhr mice: cooperativity.</a> of Ink4a/ARF and Trp53 loss of function. Genes & Development. 18 (21), 2614-2626 (2004).</li>
<li>Tremblay, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+transducer+YAP1+transforms+activated+satellite+cells+and+is+a+potent+effector+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Hippo transducer YAP1 transforms activated satellite cells and is a potent effector of embryonal rhabdomyosarcoma formation.</a> Cancer Cell. 26 (2), 273-287 (2014).</li>
<li>Hatley, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+rhabdomyosarcoma+originating+from+the+adipocyte+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A mouse model of rhabdomyosarcoma originating from the adipocyte lineage.</a> Cancer Cell. 22 (4), 536-546 (2012).</li>
<li>Drummond, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Drives+Fusion-Negative+Rhabdomyosarcoma+Initiated+From+Non-myogenic+Endothelial+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Drives Fusion-Negative Rhabdomyosarcoma Initiated From Non-myogenic Endothelial Progenitors.</a> Cancer Cell. 33 (1), 108-124 (2018).</li>
<li>Almazan-Moga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Inhibition+Hampers+Sphere+and+Holoclone+Formation+in+Rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Inhibition Hampers Sphere and Holoclone Formation in Rhabdomyosarcoma.</a> Stem Cells International. , (2017).</li>
<li>Walter, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133+positive+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population+is+enriched+in+rhabdospheres%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD133 positive embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population is enriched in rhabdospheres.</a> PLoS One. 6 (5), (2011).</li>
<li>Ciccarelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+MEK%2FERK+pathway+in+sustaining+tumorigenicity+and+in+vitro+radioresistance+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Key role of MEK/ERK pathway in sustaining tumorigenicity and in vitro radioresistance of embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population.</a> Molecular Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Deel, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Transcriptional+Coactivator+TAZ+Is+a+Potent+Mediator+of+Alveolar+Rhabdomyosarcoma+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Transcriptional Coactivator TAZ Is a Potent Mediator of Alveolar Rhabdomyosarcoma Tumorigenesis.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2616-2630 (2018).</li>
<li>Boscolo Sesillo, F., Fox, D., Sacco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Stem+Cells+Give+Rise+to+Rhabdomyosarcomas+in+a+Severe+Mouse+Model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Muscle Stem Cells Give Rise to Rhabdomyosarcomas in a Severe Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Cell Reports. 26 (3), 689-701 (2019).</li>
<li>Chamberlain, J. S., Metzger, J., Reyes, M., Townsend, D., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+mdx+mice+display+a+reduced+life+span+and+are+susceptible+to+spontaneous+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma.</a> The FASEB Journal. 21 (9), 2195-2204 (2007).</li>
<li>Kessel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+3D+Tumor+Spheroid+Screening+Method+for+Cancer+Drug+Discovery+Using+Celigo+Image+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Technology%22%5BJournal%5D)">High-Throughput 3D Tumor Spheroid Screening Method for Cancer Drug Discovery Using Celigo Image Cytometry.</a> SLAS Technology. 22 (4), 454-465 (2017).</li>
<li>Johnson, S., Chen, H., Lo, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Tumorsphere+Formation+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">In vitro Tumorsphere Formation Assays.</a> Bio-Protocol. 3 (3), (2013).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+tumorsphere+culture+system+for+the+efficient+and+low-cost+enrichment+of+cancer+stem+cells+with+natural+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional tumorsphere culture system for the efficient and low-cost enrichment of cancer stem cells with natural polymers.</a> Experimental and Therapeutic. 15 (1), 85-92 (2018).</li>
<li>Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+molecular+pathways+of+FLT3+in+the+pathogenesis+of+acute+myeloid+leukemia%3A+biology+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Jornal+of+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute myeloid leukemia: biology and therapeutic implications.</a> Jornal of Hematology and Oncology. 4, (2011).</li>
<li>Laouar, Y., Welte, T., Fu, X. Y., Flavell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+is+required+for+Flt3L-dependent+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation.</a> Immunity. 19 (6), 903-912 (2003).</li>
<li>Ogawa, M., Bergsagel, D. E., McCulloch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+melphalan+on+mouse+myeloma+%28adj.+PC-5%29+and+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential effects of melphalan on mouse myeloma (adj. PC-5) and hemopoietic stem cells.</a> Cancer Research. 31 (12), 2116-2119 (1971).</li>
<li>Hamburger, A. W., Salmon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bioassay+of+human+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Primary bioassay of human tumor stem cells.</a> Science. 197 (4302), 461-463 (1977).</li>
<li>Hamburger, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+tumor+clonogenic+assay+as+a+model+system+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">The human tumor clonogenic assay as a model system in cell biology.</a> The International Journal of Cell Cloning. 5 (2), 89-107 (1987).</li>
<li>Jimenez-Hernandez, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRP1-positive+lung+cancer+cells+possess+tumor-initiating+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">NRP1-positive lung cancer cells possess tumor-initiating properties.</a> Oncology Reports. 39 (1), 349-357 (2018).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+%283D%29+models+in+cancer+research%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li>
<li>Salerno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+cell+subsets+with+cancer+stem+cell+properties+in+human+musculoskeletal+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming cell subsets with cancer stem cell properties in human musculoskeletal sarcomas.</a> International Journal of Oncology. 43 (1), 95-102 (2013).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

שיטות מרובות מועסקים לבידוד ואפיון של TPCs מן הגידול אוכלוסיות תאים הטרוגנית: הגידול clonogenic assays, בידוד FACS, ו-tumorsphere שיטת היווצרות. שיטת הגידול clonogenic תוארה לראשונה ב 1971, משמש ללימודי תאי גזע, ורק לאחר מכן להחיל על הביולוגיה סרטן29,30. שיטה זו מבוססת על תאי גזע סרטן המאפיין הפנימי כדי להרחיב ללא אילוצים בתרבויות ג'ל רכות31. מאז התפתחותה, שיטה זו נעשה שימוש נרחב בחקר הסרטן למטרות מרובות, כולל תאים סרטניים טרוגניות מחקרים,...

סרטן היא מחלה הטרוגנית; יתר על כן, אותו סוג של גידול יכול להציג מוטציות גנטיות שונות בחולים שונים, ובתוך החולה גידול מורכב על ידי אוכלוסיות מרובות של תאים1. טרוגניות מציג אתגר בזיהוי של תאים האחראים על ייזום והפצת סרטן, אבל האפיון שלהם חיוני לפיתוח של טיפולים יעילים. הרעיון של הגידול תאים הפצת (TPC), אוכלוסייה נדירה של תאים שתורמים להתפתחות הגידול, כבר נבדקו בעבר בהרחבה2. למרות העובדה tpcs התאפיין בסוגים מרובים של סרטן, זיהוי של סמנים עבור בידוד אמין שלהם נשאר אתגר עבור מספר סוגי גידולים3,4,5,6 , מיכל סבן , בן שמונה , 9. Thus, שיטה שאינה נשענת על סמנים מולקולריים אלא על תכונות פונקציונליות tpc (התחדשות עצמית גבוהה ויכולת לצמוח בתנאים בעלי קבצים מצורפים נמוכים), המכונה שיטת היווצרות tumorsphere, ניתן להחיל נרחב על ה זיהוי של TPCs מרוב הגידולים. חשוב מכך, שיטת הפעולה יכולה גם להיות מועסק להרחבת tpcs ובכך להחיל ישירות על הקרנת תרופות לסרטן ומחקרים על התנגדות לסרטן1,10.
הרדויוסרקומה (RMS) היא צורה נדירה של סרקומה של רקמה רכה הנפוצה ביותר בילדים צעירים11. לאחר ההערכה ניתן לזהות היסטולוגית באמצעות הערכת הביטוי של סמנים מיוגניים, תא RMS של המקור לא כבר univocally מאופיין בשל תת הסרטניים מרובים טרוגניות גבוהה של גירויים התפתחותיים הגידול. ואכן, מחקרים שנעשו לאחרונה יצרו דיון מדעי משמעותי על האם rms הוא של מקורות מיוגניים או לא מיוגניים, הרומז כי rms עשוי לנבוע מסוגי תאים שונים בהתאם להקשר12,13, מיכל בן 14 , מיכל בן 15 , מיכל בן 16 , 17. מחקרים רבים על קווי התאים של RMS בוצעו באמצעות שיטת היווצרות tumorsphere לזיהוי של מסלולים מעורבים בפיתוח הגידול ואפיון של סמנים הקשורים לאוכלוסיות התחדשות עצמית מאוד מיכל בן 18 , מיכל בן 19 , מיכל בן 20 , . עשריםואחד
עם זאת, למרות היכולת של היווצרות הצורה tumorsphere לזיהוי תאי RMS של המקור, שיטה אמינה שניתן ליישם בתאי RMS ראשוניים עדיין לא תוארה. בהקשר זה, מחקר שנערך לאחרונה מהקבוצה שלנו מועסקים שיטת היווצרות ממוטבת tumorsphere לזיהוי של תאי RMS המקור ב ניוון שרירים Duchenne (DMD) העכבר מודל22. סוגים מרובים של תא מראש, מבודדים מרקמות שרירים, נבדקים על יכולתם לצמוח בתנאים מצורפים נמוכה, המאפשר זיהוי של תאי גזע שריר כמו תאים של מוצא RMS בהקשרים הדיסטרומכולה. מתואר כאן הוא פרוטוקול מהימן ואמין עבור שיטת היווצרות tumorsphere (איור 1), אשר הועסק בהצלחה לזיהוי של אוכלוסיות תאים נדירים ביותר האחראים לפיתוח העכבר RMS.

<table><tbody><tr><td>מגיב דיסוציאציה של תאי Accutase</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>ניתוק תאים דבקים וניתוק גידולים</td></tr><tr><td>Celigo</td><td>Nexcelom</td><td>Celigo</td><td>Microwell ציטומטר תמונה מבוסס צלחת לתאים דבקים ותרחיף</td></tr><tr><td>קולגנאז, סוג II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td>אנזים עיכול רקמות</td></tr><tr><td>Dispase II, פרוטאז</td><td>Life Technologies</td><td>17105041</td><td>אנזים עיכול רקמות</td></tr><tr><td>DMEM מדיה גבוהה של גלוקוז</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>רכיב של מדיה של תאי גידול</td></tr><tr><td>DMEM/F12 Media</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td>רכיב של מדיה טומוספירה</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ThermoFisher</td><td>S312500</td><td>רכיב של FACS</td></tr><tr><td>buffer EGF חלבון עכבר רקומביננטי</td><td>Gibco</td><td>PMG8041</td><td>רכיב של מדיה</td></tr> <tr><td>טומוספירהFACSAria II Flow Cytometry</td><td>BD Biosciences</td><td>650033</td><td>ממיין תאים מופעל פלואורסצנטי</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>אומגה מדעית</td><td>FB-11</td><td>רכיב של תאי גידול מדיה</td></tr><tr><td>פלוריסו (איזופלואורנה) חומר הרדמה</td><td>MWI Vet Supply</td><td>502017</td><td>מגיב הרדמה לבעלי חיים</td></tr><tr><td>FxCycle Violet Stain</td><td>Life Technologies</td><td>F10347</td><td>להבחין בין תאים חיים ומתים</td></tr><tr><td>Goat Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16210072</td><td>רכיב של מאגר FACS</td></tr><tr><td>F10 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11550043</td><td>של Ham רכיב של מאגר FACS</td></tr><tr><td>Horse</td><td>Serum Life Technologies</td><td>16050114</td><td>רכיב של מדיית בידוד תאים</td></tr><tr><td>מגיב טרנספקציה</td><td>ThermoFisher</td><td>L3000015</td><td>מגיב</td></tr> <tr><td>טרנספקציהמטריצת ממברנה של מטריג'ל</td><td>Corning</td><td>CB40234</td><td>מספקת תמיכה לתאים נטועים</td></tr><tr><td>N-2 Supplemtns (100X)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>רכיב של מדיה טומוספירה</td></tr><tr><td>Neomycin-Polymyxin B סולפטים-בציטראצין אבץ משחת עיניים</td><td>MWI Vet Supply</td><td>701008</td><td>משחת עיניים</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>רכיב 10010023</td><td>של מאגר FACS ומשמש לשטיפת תאים</td></tr><tr><td>pEGFP-C1</td><td>Addgene</td><td>6084-1</td><td>GFP פלסמיד</td></tr><tr><td>פניצילין - סטרפטומיוצין</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td>15140163</td><td>מרכיב של טומוספירה ותאי גידול מדיה</td></tr><tr><td>רקומביננטית אנושית ובטא; FGF-basic</td><td>Peprotech</td><td>10018B</td><td>רכיב של מדיה טומוספירה</td></tr><tr><td>עכבר רקומביננטי Flt-3 Ligand חלבון</td><td>R& D Systems</td><td>427-FL-005</td><td>חלבון רקומביננטי</td></tr><tr><td>טריפאן כחול</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>להבחין בין תאים חיים ומתים</td></tr></tbody></table>

והטיפול מתאי הגידול הראשוניים מבודדים מעכבר תמס שריר

Tumorsphere Derivation and Treatment from Primary Tumor Cells Isolated from Mouse Rhabdomyosarcomas

הרדויוסרקומה (RMS) הוא סרקומה רקמת רך השכיח ביותר אצל ילדים. למרות מאמצים משמעותיים אפשרו זיהוי של מוטציות נפוצות הקשורות RMS ומותר אפליה של תתי סוגים שונים, האתגרים העיקריים עדיין קיימים לפיתוח של טיפולים חדשניים כדי לשפר עוד יותר פרוגנוזה. למרות שהוא מזוהה על ידי הביטוי של סמנים מיוגניים, יש עדיין מחלוקת משמעותית על האם RMS יש מקורות או לא מזוגניים, כמו תא המוצא עדיין מובן בצורה גרועה. במהלך המחקר הנוכחי, שיטה אמינה מסופקת עבור הספק הטמורספירה עבור העכבר RMS. המנה מבוססת על תכונות פונקציונליות של תאים סרטניים ומאפשרת זיהוי של אוכלוסיות נדירות בגידול עם פונקציות tuמוריגניים. מתוארים גם הליכים עבור בדיקות רקומביננטי חלבונים, שילוב פרוטוקולי החצייה עם שיטת tumorsphere, והערכת גנים המועמדים המעורבים בפיתוח וצמיחה הגידול. תיאר עוד הוא הליך השתלת השתלת של tumorspheres לתוך עכברי הנמען כדי לאמת את הפונקציהtumorspheres ב vivo. באופן כללי, השיטה המתוארת מאפשרת זיהוי ובדיקה אמינים של אוכלוסיות מתוגני מחלות מחלות שניתן להחילם על RMS העולות בהקשרים שונים. לבסוף, הפרוטוקול יכול להיות מנוצל כפלטפורמה עבור הקרנת סמים ופיתוח עתידי של therapeutics.

כדורי טומורזה בידוד התא היה אופטימיזציה כדי לקבל את הטרוגניות המרבי של אוכלוסיות תאים נוכח רקמת הגידול. ראשית, מאז רקמות מבודדות הציגו אזורים שונים מורפולוגית, כדי לשפר את הסיכויים לבודד אוכלוסיות תאים נדירים, הדגימה בוצעה מאזורים מרובים של הגידול (איור 1A, הפאנל הראשון משמאל). שנית, דיסוציאציה מכנית של הדגימות שנקטפו בוצע תוך שמירה על הומוגניות בגודל רקמת טחון, למרות תנוחות שונות שייתכן שהיו נוכח בדגימות (איור 1A</str...

פרוטוקול זה מתאר שיטה המיומנת לבידוד של תאים ראשוניים של העכבר השרירים, היווצרות tumorsphere וטיפול, השתלת השתלת החל בתרבויות tumorsphere.

Rhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children. Although significant efforts have enabled the identification of common ...

Rhabdomyosarcoma היא צורה נדירה של סרקומס רקמות רכות המאופיינת בהיסטולוגיה על ידי מורפולוגיה של רקמות והביטוי של סמנים מיוגניים. עם זאת, בהתחשב בקיומם של תת-סוגים שונים של גידולים אלה ואת ההטרוגניות של הגירויים התורמים להיווצרותו, זיהוי תא המקור היה מאתגר מאוד. כאן אנו מתארים שיטות לשחזור ואמין לזיהוי התא של מקור rhabdomyosarcomas החל רקמות גידול קציר טרי מעכברים וראיה זו היא בדיקה היווצרות הגידול.היתרונות העיקריים של היווצרות tumorsphere assay היא כי היא מסתמכת על תכונות הסלולר כי ידועים להיות נוכח בתאים שמקורם בגידול וזה יכול לשמש גם עבור התרחבות והעשרה של אוכלוסיית התא הספציפי. יתר על כן, המבנה הכדורידי שלה לחקות את סביבת הגידול, ולכן הם יכולים לשמש מחקרים הקרנת סמים. שיטה זו יש פוטנציאל להיות מיושם על סוג אחר של גידולים כי זה לא דורש ידע מוקדם של סמנים מולקולריים אבל זה עשוי לדרוש אופטימיזציה של תנאי התרבות.Tumorsphere עשוי לקחת קצת זמן כדי ליצור, במיוחד אם מנסה לזהות אוכלוסיית תאים נדירים בתוך הגידול שלך. לכן, זה לא הציע להסתכל על צלחת תת-תרבות שלך כל יום, שכן זה עלול להשפיע לרעה על תוצאות הניסויים שלך. התחל על ידי חימום צלחת 10 ס"מ עם חמישה מיליליטר של תקשורת בידוד באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס.לשקול 500 עד 1,000 מיליגרם של רקמת הגידול ולמקום אותו בצלחת. הביאו את הצלחת עם רקמת

tumorsphere-derivation-treatment-from-primary-tumor-cells-isolated

Research

JoVE Journal

Genetics

גנטיקה

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד, העשרה, ותחזוקה של הגידול מדולובלסטומה בתאי גזע שמקורם בעכברים מוטנטים עם פעילות חוץ רחמי מסלול סוניק הקיפוד.

, בידוד והעשרה, ותחזוקה של גזע תאים מדולובלסטומה

השיטה מתוארת להפיץ גידולים אנושיים בעכברים רטינובלסטומה. תאים סרטניים הם מוזרק ישירות לתוך עיניו של עכברים חסר החיסונית. גידולים משניים הוקמו בהצלחה הן באמצעות תאים שנקטפו ישירות גידולים אנושיים tumorspheres תרבותי.

הקמה התפשטות של גידולים רטינובלסטומה האדם עכברים החיסון לקויה

זה פרוטוקול וידאו מדגים את הבידוד והרחבת גזע כמו תאים mutliforme resected בניתוח גליובלסטומה אדם (GBM) רקמת הגידול בשיטת neurosphere תרבות assay.

בידוד הרחבת האדם multiforme Glioblastoma גידול תאים שימוש Assay Neurosphere

הנוכחות של תאי גזע סרטניים (CSCS) ב סרקומות עצם נקשר לאחרונה בפתוגנזה שלהם. במאמר זה, אנו מציגים את הבידוד של CSCS מתרבויות תא ראשוניים המתקבלות ביופסיות אדם של אוסטאוסרקומה קונבנציונלי (OS) באמצעות היכולת של CSCS לגדול בתנאי nonadherent.

הקמת סרטן גזע תא תרבויות מן האדם הקונבנציונלי אוסטאוסרקומה

פרוטוקול הבאים מתמקד הקמת תרבות העיקרי של סרקומה של רקמות רכות, נגזר החולה (STS). מודל זה יכול לעזור לנו להבין טוב יותר את רקע מולקולרי ופרופיל תרופתי של ממאירות נדירים אלה, שעשוי לייצג נקודת התחלה עבור מחקרי המשך שמטרתם לשפר את ניהול STS.

הקמתה של תרבות העיקרי של סרקומה של רקמות רכות, נגזר החולה

אנו מתארים פרוטוקול מפורט לבידוד של תאים מתחילים הגידול מחולה סרקומה האדם נגזר xenografts תלי על ידי מיון מופעל על ידי קרינה פלואורסצנטית, באמצעות אנטיגן לוקיציט אנושי-1 (HLA-1) כסמן שלילי, ועל אימות נוסף האפיון של התאים האלה HLA-1-שלילי גידול מתחיל.

בידוד ואפיון של הגידול-ליזום תאים מחולה סרקומה-Xenografts נגזרים

מטרת מתודולוגיה זו היא לזהות את תאי גזע הסרטן (csc) בקווי התאים של סרטן ודגימות הגידול האנושי הראשוני עם הפרוטוקול ליצירת כדור, בצורה איתנה, באמצעות בחני פונקציונלי ואפיון פנוטימית עם זרימה cy, try ומערבי מחוק.

קבלת סרטן גזע כדורים מגינקולוגית סרטן השד גידולים

בפרוטוקול זה, אנו מתארים מודל העכבר של כריתת כירורגית לא הושלמה של סרקומה של רקמה רכה עבור בדיקות (ניאו) שדון טיפולים.

מודל עכבר של Insected רקמה רכה לחלוטין סרקומה עבור בדיקה (ניאו) שפיטה טיפולים

מוצג כאן פרוטוקול לשימוש בהיפרתרמיה מבוקרת, הנוצרת על ידי אולטרסאונד ממוקד מונחה תהודה מגנטית בעוצמה גבוהה, כדי להפעיל שחרור תרופות מליפוזומים רגישים לטמפרטורה במודל עכבר rhabdomyoscoma.

אולטרסאונד ממוקד מונחה תהודה מגנטית בעוצמה גבוהה שנוצר היפרתרמיה: שיטת טיפול אפשרית במודל מורין רבדומיוסרקומה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר יצירת מודלים תלת-ממדיים של תרביות גידול מתאי סרטן ראשוניים והערכת רגישותם לתרופות באמצעות בדיקות כדאיות תאים ובדיקות מיקרוסקופיות.

קביעת ספרואידים תלת מימדיים מדגימות גידול שמקורן בחולה והערכת רגישותם לתרופות

פיתוח מודלים אורתוטופיים של גידולי מוח בילדים דורש דיוק קפדני, תוך שימוש במכשיר סטריאוטקסי להשתלת תאים סרטניים בצורה מדויקת. המתודולוגיה המוצגת כאן מתארת את השלבים הכרוכים בהכנת תאי גידול במוח, ביצוע זריקות תוך גולגולתיות ויישום מערכת ניטור לאחר ניתוח להערכת השתלת גידול מוח.

הקמת מודלים אורתוטופיים של קסנוגרפט שמקורם בחולה לגידולי מוח באמצעות מכשיר סטריאוטקסי

למד שיטה לאיסולציה של תאי ראבדומיוסרקומה ראשוניים מעכברים, יצירת כדוריות גידול וטיפול בהן. השיטה מאפשרת זיהוי תאי מקור הגידול וסינון תרופות ביולוגיות.

והטיפול מתאי הגידול הראשוניים מבודדים מעכבר תמס שריר

גלה סרטונים נוספים