Name: בתוך שיטת חוץ גופית כדי ללמוד גידול-מקרופאג אינטראקציה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: חקור שיטת חוץ גופית להערכת משיכת מקרופאגים על ידי מדיום מותנה מתאי גידול. שיטה זו מאפשרת לחוקרים ללמוד אינטראקציות בין תאי גידול לתאי חיסון ולפתח טיפולים מותאמים אישית לחולי סרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

גרנט תמיכה: Z התקבלה תמיכה מתוך הקרן לימונדה של אלכס לעמוד, האגודה האמריקנית לגידול במוח, NIH T32CA108462 ותוכנית למחקר ביורפואי פריצת דרך, אשר ממומנת חלקית על ידי קרן סנדלר. וייס נתמך על ידי מענקי NIH R01CA221969, R01NS091620, P50CA097257, U01CA217864, P30CA82103; הקרן לחקר הסרטן ע שמואל וקסמן; והיו ר אוולין ומאטי אנדרסון

1. הכנה בינונית
<ol><li>
הכנת מדיום תאי גזע ללא הנסיוב
	<ol>
<li>הפשרת תוספת 50x B27, גורם הגידול באפידרמיס (EGF, 20 μg/mL ב 10 מ"מ חומצה אצטית עם 0.1% BSA), ואת גורם הצמיחה פיברוהפיצוץ (FGF, 20 μg/mL ב 10 מ"מ חומצה אצטית עם 0.1% BSA).</li>
		<li>להוסיף 500 μL של EGF (הריכוז הסופי 20 ng/mL), 500 μL של FGF (ריכוז סופי 20 ng/mL), 10 מ ל של 50x B27 ל 500 מ ל של בינונית שונה של נשר מדיום/תערובת מזינים F-12 (DMEM/F12) ו-5 מ ל של 100x פניצילין/סטרפטומיצין (עט הפוך את הבקבוק 4-6 פעמים כדי לערבב, מסנן לעקר באמצעות מ500 mL 0.1 יקרומטר הגביע לסינון. סמנו את הבקבוק והחנות ב -4 ° c. הערה: המדיום טובה לשימוש עד חודש ב -4 ° c.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכינו את מדיום התרבות MV-4-11: הוסף 50 mL של סרום בפרה העוברי (FBS) כדי 500 מ ל של Iscove שונה של המדיום של החברה (IMDM). הפוך את הבקבוק 4-6 פעמים כדי לערבב, מסנן לעקר באמצעות מ500 mL 0.1 יקרומטר הגביע לסינון. סמנו את הבקבוק והחנות ב -4 ° c. הערה: המדיום טובה לשימוש עד חודש ב -4 ° c.</li>
	<li>להכין את המדיום תחזוקה תא הגידול: להוסיף 50 mL של FBS כדי 500 mL של מדיום הנשר של דולבקה שונה (DMEM). הפוך את הבקבוק 4-6 פעמים כדי לערבב, מסנן לעקר באמצעות מ500 mL 0.1 יקרומטר הגביע לסינון. סמנו את הבקבוק והחנות ב -4 ° c. הערה: המדיום טובה לשימוש עד חודש ב -4 ° c.</li>
</ol>2. הכנה לתא
יום 1:
<ol><li>תאי גידול</li>
	<li>לחמם את המדיום תחזוקת תא הגידול (כמתואר בשלב 1.3) ב 37 מעלות צלזיוס אמבט מים 20 דקות.</li>
	<li>קח את U87 קפוא, U87: EGFR, U87: EGFRvIII ו U87: EGFR + EGFRvIII תאים ממיכל החנקן הנוזלי. הפשרת התאים באמבט המים 37 ° c במשך 2 דקות. התראה: היזהר כשאתה לוקח את התאים ממיכל החנקן הנוזלי. לבש כפפות עם הגנה תרמית ומשקפי בטיחות לפי הצורך.</li>
	<li>רסס את משטח התרבות רקמה עם 70% אתנול ולנגב 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר.</li>
	<li>רסס את מבחנות קריוגניים המכילים תאים ובקבוק בינוני עם 70% אתנול, לנגב את 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר, ולהביא אותם לתוך המכסה התרבותי של הרקמה.</li>
	<li>פיפטה 5 מ ל של מדיום לתחזוקת תאים סרטניים לתוך שפופרת צנטריפוגה סטרילית בגודל 15 מ ל. היפוך הצינור המכיל תאים סרטניים 4-6 פעמים כדי לערבב. מנקז את כל התאים. לצינור הצנטריפוגה של 15 מ ל להפוך את צינורית צנטריפוגה 4-6 פעמים כדי לערבב.</li>
	<li>צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5 דקות ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט</li>
	<li>לשטוף את התאים עם 10 מ ל של פוספט מאגור מלוחים (PBS). צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5 דקות ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט</li>
	<li>השהה מחדש את התאים בגודל 12 mL של המדיום תחזוקת תאי הגידול (כפי שמתואר בשלב 1.3). הפיפטה עולה ויורד 3-5 פעמים כדי לערבב. העבר את התאים לתוך בקבוקון תרבות תא T75.</li>
	<li>לגדל את התאים בחממה 37 ° c עם 5% CO2. לשים את המדיום תחזוקת תא הגידול בחזרה למקרר 4 ° c.</li>
</ol>יום 2:
<ol start="2"><li>. תבדקו את התאים מתחת למיקרוסקופ שנה את המדיום במידת הצורך. תאים גדלים בתוך מונאולייר בתרבות.</li>
</ol>יום שלישי:
<ol start="3"><li>התאגף MV-4-11 תאים
	<ol>
<li>לחמם את ה-MV-4-11 בינוני בתרבות (כמתואר בשלב 1.2) באמבט מים בגודל 37 של מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. הערה: MV-4-11 ניתן לשנות את מקרופאגים ראשיים או קווי תא אחרים מקרופאג, בהתאם לצורך של המחקר הספציפי.</li>
		<li>קח את התאים הקפואים MV-4-11 ממיכל החנקן הנוזלי. הפשרת התאים באמבט מים בגודל 37 ° c במשך 2 דקות. זהירות: תיזהר כשאתה לוקח את התאים ממיכל החנקן הנוזלי. לבש כפפות עם הגנה תרמית ומשקפי בטיחות לפי הצורך.</li>
		<li>רסס את משטח התרבות רקמה עם 70% אתנול ולנגב 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר.</li>
		<li>רסס את מבחנות קריוגניים המכילים תאים ובקבוק בינוני עם 70% אתנול, לנגב את 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר, ולהביא אותם לתוך המכסה התרבותי של הרקמה.</li>
		<li>פיפטה 5 מ ל של MV-4-11 תרבות בינונית (כמתואר בשלב 1.2) לתוך שפופרת צנטריפוגה סטרילית של 15 מ"ל. היפוך הצינור המכיל תאים סרטניים 4-6 פעמים כדי לערבב. מנקז את כל התאים. לצינור הצנטריפוגה של 15 מ ל להפוך את צינורית צנטריפוגה 4-6 פעמים כדי לערבב.</li>
		<li>צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5 דקות ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט</li>
		<li>לשטוף את התאים 10 מ ל של PBS ו צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5 דקות ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט</li>
		<li>השהה מחדש את התאים ב-12 mL של מדיום התרבות MV-4-11 (כמתואר בשלב 1.2). פיפטה בעדינות למעלה ולמטה 3-5 פעמים כדי לערבב. העבר את התאים לתוך בקבוקון תרבות תא T75.</li>
		<li>לגדל את התאים בחממה 37 ° c עם 5% CO2.</li>
	</ol></li>
	<li>פיצול תאים סרטניים
	<ol>
<li>לחמם את בינונית תא גזע ללא סרום (כפי שמתואר בשלב 1.1) באמבט מים 37 ° c במשך 20 דקות.</li>
		<li>רסס את משטח התרבות רקמה עם 70% אתנול ולנגב 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר. . קח את הפתרון לניתוק התאים מהמקרר לרסס את בקבוקי הניתוק התא מדיום פתרון עם 70% אתנול, לנגב את 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר ולהביא אותם לתוך המכסה התרבותי של הרקמה. הערה: אל תחמם מראש את פתרון התנתקות התא של המאהבורסה.</li>
		<li>להעביר את התרבות תא הגידול מן החממה לתוך השכונה תרבות רקמה. מוסיף למדיום, להוסיף 2 מ ל פתרון התנתקות התא לתוך הבקבוקון. הערה: שטיפה עם PBS לפני הוספת המאאז היא אופציונלית כאן.</li>
		<li>. הגדר את הבקבוקון במכסה המנוע תבדוק אם תאי הגידול. מסתובבים כל דקה ברגע שתאי הגידול מסתובבים, מקישים בעדינות על צד הבקבוקון כדי לעזור לתאים להתנתק מהבקבוקון.</li>
		<li>פיפטה 8 מ ל של בינונית תא גזע ללא סרום לתוך הבקבוקון, הצינור למעלה ולמטה 3 פעמים כדי לערבב, ולהעביר את התאים לתוך 15 מ"ל שפופרת צנטריפוגה סטרילית. צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5 דקות ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט</li>
		<li>שטוף את התאים ב 10 מ ל של PBS. הפיפטה עולה ויורד 3-5 פעמים כדי לערבב. צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5 דקות ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט הערה: שלב זה הוא אופציונלי.</li>
		<li>להשעות את התאים ב 10 מ ל של בינונית תא גזע ללא סרום (כפי שמתואר בשלב 1.1). הפיפטה עולה ויורד 3-5 פעמים כדי לערבב. לקחת 10 μL של התאים ולערבב עם 10 μL של פתרון כחול טרימין. פיפטה 10 μL של התערובת לתוך שקופית ספירה, מכמת את מספר התאים החיים באמצעות מונה התא אוטומטי.</li>
		<li>כוונן את צפיפות התא כדי 2.5 x 105 תאים/mL עם סרום ללא מדיום תא גזע (כפי שמתואר בשלב 1.1), ואת הזרע 2 מ ל של התאים לתוך כל באר של 6-היטב התאים לתרבות התא. עבור כל סוג של תאים, זרעי 3 בארות (דגימת טרילקאט). באותו זמן, להכין 6 בארות עם 2 מ ל של סרום ללא מדיום תאי גזע בלבד (ללא תאים). הערה: ניתן להשתמש בדגימות אלה: 1) כפקדים שליליים ו-2) להתאמת אמצעי אחסון בינוניים ממוזגים המבוססים על מספרי תאים.</li>
		<li>שים את הצלחות 6-היטב בחממה 37 ° c עם 5% CO2. אפשר לתאים לצמוח 24 שעות ביממה.</li>
	</ol></li>
</ol>3. במקרופאג האטרקציה החוץ גופית
<ol><li>הכנת מדיה ממוזגת
	<ol>
<li>לחמם את המדיום תחזוקת תא הגידול (כמתואר בשלב 1.3) ב 37 מעלות צלזיוס אמבט מים 20 דקות.</li>
		<li>רסס את משטח התרבות רקמה עם 70% אתנול ולנגב 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר. . קח את הפתרון לניתוק התאים מהמקרר לרסס את הבקבוקים של המדיום ואת הפתרון הניתוק התא עם 70% אתנול, לנגב את 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר ולהביא אותם לתוך המכסה התרבותי של הרקמה.</li>
		<li>. קח את הצלחות מהאינקובטור פיפטה בזהירות את המדיה הממוזגת ל -15 מנורות צנטריפוגה סטריליות. . שימו את הצינורות על הקרח פיפטה את התקשורת ב-"תקשורת בלבד" לתוך שפופרת צנטריפוגה סטרילית בהפרדה של 15 מ"ל. הערה: לפני שלב זה, הקפד לבדוק תחת המיקרוסקופ כדי לראות אם התאים לצרף. אם לא, ניתן להשתמש בלוחות מצופים בשלב 2.4.8 כדי לאפשר הצמדה טובה יותר או לכלול את התאים הצפים בשלב הספירה.</li>
		<li>הוסף 0.5 mL של פתרון התנתקות התא לתוך כל טוב של הצלחת 6-היטב. תבדוק אם תאי הגידול. מסתובבים כל דקה ברגע שתאי הגידול מסתובבים, מקישים בעדינות על צד הצלחת כדי לעזור לתאים להתנתק.</li>
		<li>פיפטה 2.5 mL של שמירה על תאי הגידול בינונית לתוך הבאר, הצינורות למעלה ולמטה 3 פעמים כדי לערבב ולהעביר את התאים לתוך 15 מ"ל צינור הצנטריפוגה סטרילי. לקחת 10 μL של התאים ולערבב עם 10 μL של פתרון כחול טרימין. פיפטה 10 μL של התערובת לתוך שקופית ספירה ולכמת את מספר התאים החיים באמצעות מונה התא אוטומטי.</li>
		<li>כוונן את עוצמת הקול של המדיה הממוזגת לפי מספר התאים באמצעות סרום בינוני תאי גזע חופשי (37 מעלות בדגירה של ° c). לדוגמה, אם גם יש 3x כמו תאים חיים רבים כמו הבאר עם המספר הנמוך ביותר של תאים, לדלל את המדיה הממוזגת 1:3. שלב זה משמש לשליטה בהפרש הנגרם על-ידי קצב הפצת תאים. הערה: הסיבה להשתמש סרום חינם תא גזע בינונית עם 37 ° c דגירה הלילה היא לשלוט על השינוי האפשרי בתקשורת עם ממושך 37 ° c חשיפה.</li>
		<li>סנן את המדיה הממוזגת באמצעות מסנני 0.45 יקרומטר. הניחו את המדיה הממוזגת על הקרח. הערה: שלב זה מסיר תאים ופסולת תא במדיה הממוזגת.</li>
	</ol></li>
	<li>הכנת תאים MV-4-11
	<ol>
<li>לחמם את מדיום IMDM (ללא FBS) באמבט מים 37 ° c עבור 20 דקות.</li>
		<li>רסס את משטח התרבות רקמה עם 70% אתנול ולנגב 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר. לרסס את בקבוק בינוני עם 70% אתנול, לנגב 70% אתנול על פני השטח עם מגבות נייר ולהביא אותם לתוך המכסה התרבותי של הרקמה.</li>
		<li>קח את הבקבוקון של תאים MV-4-11 לתוך המכסה של תרבות הרקמה. פיפטה 10 מ ל של תאים לתוך שפופרת צנטריפוגה סטרילית בעלת 15 מ ל. לקחת 10 μL של תאים ולערבב עם 10 μL של פתרון כחול טרימין. פיפטה 10 μL של התערובת לתוך שקופית ספירה ולכמת את מספר התאים החיים באמצעות מונה התא אוטומטי. צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5min ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט</li>
		<li>לשטוף את התאים עם 10 מ ל של PBS ו צנטריפוגה את התאים ב 200 x g עבור 5 דקות ב 4 ° c. . ומכה את הסופרנטאנט</li>
		<li>השהה מחדש את התאים באמצעי IMDM (ללא FBS) עבור צפיפות תא סופית של 1x106 תאים/mL. הערה: ניתן לכוונן את מספר התאים של מקרופאגים שבשימוש.</li>
	</ol></li>
	<li>שיטת טרנסוטוב הערה: עבור שלב זה, השתמש בערכת שיטת העברת תאים או רכוש את הריאגנטים והכנס בנפרד. עבור MV-4-11 תאים, בחר transwell מוסיף עם גודל 5 יקרומטר הנקבוביות. כדי לזהות הגירה מקרופאג, באופן ישיר לכמת את מספר מקרופאגים בתא התחתון או להשתמש בשיטות צביעה/שיטות פלוורימטרית. כאן אנו מדגימים את השיטה בשיטת הצביעה.<ol>
<li>הביאו את הצלחת 24-היטב, את התוספת ואת הריאגנטים לטמפרטורת החדר.</li>
		<li>הוסף 250 μL של תאים MV-4-11 שהוכנו לעיל לכל הוספה.</li>
		<li>הוסף 400 μL של בינוני/בינוני ממוזג בלבד (עם הדגירה של לילה ב-37 ° c, דגימות אלה משמשות כשליטה שלילית) לתאים התחתונים של הצלחת 24. עבור כל קו גידול או שליטה, השתמש בדגימות טרילקאט. הימנע מבועות בין ההכנסה לבינונית הממוזגת. בועות לעכב מקרופאגים לעבור בארות התחתון.</li>
		<li>מודטה את לוחיות בחממה 37 ° c עם 5% CO2 עבור 4 h. הערה: ניתן לכוונן את זמן הדגירה. תאים הגירה לתוך התאים התחתונים ניתן לראות מתחת למיקרוסקופ.</li>
		<li>הקש בעדינות על ההוספה על הקיר הפנימי של אותה הבאר וביטול ההוספה. כמו MV-4-11 תאים לצמוח בהשעיה, ניתוק התא פתרון או טריפסין טיפול אינו נחוץ כאן.</li>
		<li>מצנעת בעדינות את התאים בבארות למעלה ולמטה 3 פעמים כדי לערבב. העברת 225 μL של השעיית התא לצלחת שחור-חומה 96-באר מתאים למדידה פלורסנט.</li>
		<li>לדלל את הצבע CyQuant 1:75 עם מאגר פירוק 4 x. מערבולת לזמן קצר ולסובב את הפתרון. הוסף 75 μL של פתרון לכל טוב של הצלחת 96-באר. הטמפרטורה 15 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>קרא את הקרינה הפלואורסצנטית באמצעות מסנן nm 480/520 עם קורא לוחית קרינה.</li>
		<li>ניתוח נתונים על-ידי חיסור הריק והנורמליזציה לקו התאים של הגידול בפקד.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Liu, Y., Cao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+function+of+tumor-associated+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+%26+Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">The origin and function of tumor-associated macrophages.</a> Cellular & Molecular Immunology. 12 (1), 1-4 (2015).</li>
<li>Riabov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tumor+associated+macrophages+in+tumor+angiogenesis+and+lymphangiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Role of tumor associated macrophages in tumor angiogenesis and lymphangiogenesis.</a> Frontiers in Physiology. 5, (2014).</li>
<li>Coussens, L. M., Zitvogel, L., Palucka, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+tumor-promoting+chronic+inflammation%3A+a+magic+bullet%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neutralizing tumor-promoting chronic inflammation: a magic bullet.</a> Science. 339 (6117), 286-291 (2013).</li>
<li>Tsukamoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+Blockade+of+IL6+and+PD-1%2FPD-L1+Signaling+Abrogates+Mutual+Regulation+of+Their+Immunosuppressive+Effects+in+the+Tumor+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Combined Blockade of IL6 and PD-1/PD-L1 Signaling Abrogates Mutual Regulation of Their Immunosuppressive Effects in the Tumor Microenvironment.</a> Cancer Research. 78 (17), 5011-5022 (2018).</li>
<li>Borgoni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+tumor-associated+macrophages+switches+the+epigenetic+profile+of+pancreatic+cancer+infiltrating+T+cells+and+restores+their+anti-tumor+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Depletion of tumor-associated macrophages switches the epigenetic profile of pancreatic cancer infiltrating T cells and restores their anti-tumor phenotype.</a> Oncoimmunology. 7 (2), e1393596(2018).</li>
<li>Argyle, D., Kitamura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Macrophage-Recruiting+Chemokines+as+a+Novel+Therapeutic+Strategy+to+Prevent+the+Progression+of+Solid+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Targeting Macrophage-Recruiting Chemokines as a Novel Therapeutic Strategy to Prevent the Progression of Solid Tumors.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2629(2018).</li>
<li>An, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFR+cooperates+with+EGFRvIII+to+recruit+macrophages+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">EGFR cooperates with EGFRvIII to recruit macrophages in glioblastoma.</a> Cancer Research. , (2018).</li>
<li>Fan, Q. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFR+phosphorylates+tumor-derived+EGFRvIII+driving+STAT3%2F5+and+progression+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">EGFR phosphorylates tumor-derived EGFRvIII driving STAT3/5 and progression in glioblastoma.</a> Cancer Cell. 24 (4), 438-449 (2013).</li>
<li>Jacquelot, N., Duong, C. P. M., Belz, G. T., Zitvogel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Chemokines+and+Chemokine+Receptors+in+Melanoma+and+Other+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Targeting Chemokines and Chemokine Receptors in Melanoma and Other Cancers.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2480(2018).</li>
<li>Arimont, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+Analysis+of+Chemokine+Receptor-Ligand+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Structural Analysis of Chemokine Receptor-Ligand Interactions.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 60 (12), 4735-4779 (2017).</li>
<li>Turner, M. D., Nedjai, B., Hurst, T., Pennington, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+chemokines%3A+At+the+crossroads+of+cell+signalling+and+inflammatory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Cytokines and chemokines: At the crossroads of cell signalling and inflammatory disease.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1843 (11), 2563-2582 (2014).</li>
<li>Sokol, C. L., Luster, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemokine+system+in+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">The chemokine system in innate immunity.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (5), (2015).</li>
<li>Pathria, P., Louis, T. L., Varner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Tumor-Associated+Macrophages+in+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Targeting Tumor-Associated Macrophages in Cancer.</a> Trends in Immunology. 40 (4), 310-327 (2019).</li>
<li>Mantovani, A., Marchesi, F., Malesci, A., Laghi, L., Allavena, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-associated+macrophages+as+treatment+targets+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour-associated macrophages as treatment targets in oncology.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 14 (7), 399-416 (2017).</li>
</ol>

ויליאם א. וייס הוא ממייסדי Therapeutics. . לzhenyi אין שום דבר לגלות

בפרוטוקול זה, קיימים מספר שלבים מרכזיים: 1) הבחירה של הכנסת הטרנסטוב. עבור הקו הנייד MV-4-11, 5 יקרומטר טרנסטוב מוסיף עבודה היטב. עם זאת, עבור קווי תאים אחרים כגון קו מונוציט בשימוש נפוץ THP-1, גודל נקבובית שונה עשוי לעבוד טוב יותר. 2) כאשר קווי תאים שונים גדלים במהירויות שונות, חשוב לכוונן את עוצמת המדיה הממוזגת בהתאם למספרי התאים. למטרה זו, ניתן להשתמש במדיה נטולת-תאים הניתנת לשימוש באותם תנאים ניסיוניים כדי לדלל את המדיה הממוזגת. 3) מכיל ציטוקינים. חשוב להשתמש במדיום ללא סרום כדי seed MV-4-11 תאים בחדר העליון. אם נעשה...

המקרופאגים הם התאים החיסוניים עם פנוטיic גבוהה ופונקציונלי טרוגניות1. הם משחקים תפקידים חשובים במערכות ההגנה של המארחים, תיקון רקמות, פיתוח והתקדמות הגידול1. TAMs הם מקרופאגים ב מיקרואקולוגיה של גידולים מוצקים. Tams מסוימים יכולים לקדם את צמיחת הגידול באמצעות מעכב T בתיווך התא מתווכת פעילות, מודוללדירוג מיקרוסביבה הגידול (tams), קידום אנגיוגנזה, פלישה גרורות2,3,4, 5. tams הם בין סוגי התאים הנפוצים ביותר ב tams ומספר גבוה יותר של tams בדרך כלל הקשורים הישרדות החולה גרוע יותר בסוגים רבים של גידולים מוצקים6. חתימות גנטיות נפרדות של תאי הגידול משפיעים על יכולתם לגייס מקרופאגים. ב-GBM, גידול אגרסיבי במוח עם תרופה לא, מקרופאגים יכולים לייצג עד חצי של מסת הגידול7. שיתוף הגברה של קולטן הגידול באפידרמיס (Egfr) ואת המוטציה שלה egfrviii היא נצפתה לעתים קרובות ב-GBM, אשר מקנה יתרונות גידול הגידול8. תאים שיתוף הביטוי EGFR ו EGFRvIII למשוך מקרופאגים יותר לעומת תאים ביטוי EGFR או EGFRvIII ביחידים7.
נוגדנים הם משפחה של ציטוקינים קטנים לשחק תפקידים משמעותיים בוויסות הרכב החיסונית ב tme6,9. תאים אנושיים לבטא יותר מ 50 ציטוקינים10. חדירת החיסון בגידולים ממומשת במידה רבה על ידי האינטראקציה בין ציטוקינים וקולטני ציטוקינים11. כל סוג של תאים חיסוניים מבטא קולטנים כימוקין ברורים/נוגדנים והוא יכול להיות מגויס על ידי תאים הפרשת נוגדנים/כימוקין קולטנים ספציפיים12. תאים סרטניים יכולים להגביר את הביטוי של נוגדנים מסוימים כדי לגייס תאים חיסוניים כגון TAMs, הרגולציה תאים T ותאי מדכא מיאלואיד נגזר (MDSCs)6. המצור על כימוקין ספציפיים מופרש על ידי גידולים יכולים להיות דרך מבטיחה חדירה מעכבים של תאים חיסוניים לתוך מסת הגידול.
כאן, אנו מתארים פרוטוקול המאפשר הערכה מתורבת של האינטראקציה מקרופאג הגידול, באמצעות מדיה ממוזג מתאי הגידול המכילים נוגדנים ו מקרופאג קווי תאים.

<table><tbody><tr><td>0.1 &mu; סינון m</td><td>תרמו פישר</td><td>566-0010</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &mu; m סינון יחידת</td><td>Millipore</td><td>SLHA033SS</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפטות סרולוגיות</td><td>אולימפוס פלסטיק</td><td>12-104</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה סטריליים</td><td>אולימפוס פלסטיק</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל קצה פיפטה</td><td>ART מוצרים ביולוגיים מולקולריים</td><td>2779-RI</td><td></td></tr><tr><td>2 מ"ל שואב פיפט</td><td>פלקון</td><td>357558</td><td></td></tr><tr><td>24 בארות צלחת</td><td>Millipore</td><td>ECM507</td><td>חלק מ-ECM507, או ניתן לרכוש בנפרד</td></tr><tr><td>4x מאגר ליזה</td><td>Millipore</td><td>ECM507</td><td>חלק מ-ECM507, או ניתן לרכוש אותו בנפרד</td></tr><tr><td>5 &mu; m Transwell הכנס</td><td>Millipore</td><td>ECM507</td><td>חלק מ-ECM507, או ניתן לרכוש בנפרד</td></tr><tr><td>75 ס"מ2 בקבוק</td><td>Corning</td><td>430641U</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>טכנולוגיות תאים חדשניות</td><td>AT-104</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>12587-010</td><td></td></tr><tr><td>CyQuant Dye</td><td>Millipore</td><td>ECM507</td><td>חלק מ-ECM507, או ניתן לרכוש בנפרד</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>10565-018</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>26140</td><td></td></tr><tr><td>FGF</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Gibco</td><td>12440-053</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>עט סטרפטוקוקוס</td><td>ג'יבקו</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>טריפן כחול</td><td>Biorad</td><td>1450021</td><td></td></tr></tbody></table>

בתוך שיטת חוץ גופית כדי ללמוד גידול-מקרופאג אינטראקציה

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

מקרופאגים הקשורים לגידול (TAMs) חשבון עבור אחוז גדול של תאים במסת הגידול עבור סוגים שונים של סרטן. Gliנובלסטומה (GBM), גידול ממאיר במוח ללא תרופה, יש עד מחצית ממסת הגידול TAMs. TAMs יכול להיות pro-tumoral וסרי או אנטי-מוסרי, בהתאם להפעלת גנים ספציפיים בתאים. מוטציות גנטיות בגידולים, באמצעות ויסות ציטוקין ביטוי, יכול להשפיע על גיוס של TAMs לסביבת מיקרו הגידול. כאן, אנו מתארים שיטת כמותית מבוססת התא כדי להעריך את הגיוס מקרופאג על ידי המדיום הממוזג מתאי הגידול. שיטת הפעולה הזאת משתמשת בקו מקרופאג cell האנושי MV-4-11 כדי לחקור את האטרקציה מקרופאג על ידי המדיום הממוזג מ glioblastoma, ומאפשר השתנות גבוהה ושינויים נמוכים. נתונים שנוצרו באמצעות שיטת העבודה הזאת יכולים לתרום להבנה טובה יותר של האינטראקציה בין הגידול לבין מיקרואקולוגיה של הגידול. שיטת דומה יכולה לשמש להערכת האינטראקציה בין תאי הגידול לבין תאים חיסוניים אחרים, כולל תאי T והרוצח הטבעי (NK) תאים.

התוצאות מוצגות בדרך כלל באמצעות תרשימי עמודות (דוגמה המוצגת באיור 1). דגימות עם 480/520 גבוה ערכים עולה כי המדיה הממוזגת יש קיבולת גבוהה לגייס מקרופאגים. בהתאם לצורך ניסיוני, ניתן לכלול פקדים נוספים. לדוגמה, ניתן להשתמש בנטרול נוגדנים כדי לטפל באמצעי התקשורת הממוזגים כדי לבטל את המקרופאג מוניות, ולבצע את אותה הצורה. ניתן גם להוסיף נוגדנים נוספים (כלומר, CCL2) למדיה הממוזגת, המשמשת כשליטה חיובית.
<im...

מאמר זה מייצג שימושי בתוך מבחנה כדי להעריך את היכולת של המדיום הממוזג מתאי הגידול כדי למשוך מקרופאגים.

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

מקרופאגים הקשורים לגידול ממלאים תפקידים חשובים במיקרו-וירוס הגידול. להבין כיצד מוטציות גנטיות שונות בתאי הגידול משפיעות על גיוס מקרופאג' הוא קריטי לעיצוב טיפול מותאם אישית לחולי סרטן. מבחנה זו מספקת דרך קלה וחזקה להעריך את האינטראקציה בין תאים סרטניים מקרופאגים במבחנה.ניתן לשנות את ההערכה הזו כדי להעריך את האינטראקציות בין תאי הגידול לתאי החיסון האחרים במבחנה. כדי להתחיל בהליך זה, לחמם את מדיום תא גזע ללא סרום על ידי הצבת אותו לתוך אמבט מים ב 37 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. לרסס את משטח מכסה המנוע של תרמת הרקמה עם 70% אתנול ולנגב את המשטח מרוסס עם מגבות נייר.לאחר מכן לרסס את בקבוקי פתרון ניתוק בינוני ותא עם 70% אתנול ולנגב אותם עם מגבות נייר. מעבירים את הבקבוקים הנקיים למכסה המנוע של תרבות הרקמות. לאחזר את תא הגידול ולהעביר אותו למכסה המנוע של תרבות הרקמה.שאפו את המדיום ושטפו את התאים עם 10 מיליליטר של PBS. לאחר מכן להוסיף שני מיליליטר של פתרון ניתוק התא לבקבוקון. מניחים את הבקבוקון במכסה המנוע, בודקים כל דקה כדי לראות אם תאי הגידול התעגלו.לאחר שתאי הגידול מתעגלים, הקישו בעדינות על צד הבקבוק כדי לעזור לתאים להתנתק. לאחר מכן, פיפטה שמונה מיליליטר של תא ללא סרום בינוני לתוך הבקבוק פיפטה למעלה ולמטה שלוש פעמים כדי לערבב. העבר את ההשעיה התאית הזאת לצינור צנטריפוגה 15 מיליליטר וצנטריפוגה ב 200 פעמים g וב ארבע מעלות צלזיוס במשך חמש דקות.שאף את העל-טבעי. ואז לשטוף את התאים ב 10 מיליליטר של PBS, הקפדה פיפטה למעלה ולמטה שלוש עד חמש פעמים כדי לערבב. צנטריפוגה התאים ב 200 פעמים g ו בארבע מעלות צלזיוס במשך חמש דקות.שאף את העל-טבעי, ולחץ מחדש על התאים ב-10 מיליליטר של מדיום נטול סרום. פיפטה למעלה ולמטה שלוש עד חמש פעמים כדי לערבב. מערבבים 10 מיקרוליטרים של השעיית תא זה עם 10 מיקרוליטרים של פתרון טריפאן כחול.הפיפסה הבאה 10 מיקרוליטרים של תערובת טריפאן כחול ותאים לתוך שקופית ספירה, ולהשתמש מונה תא אוטומטי לכמת את מספר התא החי. השתמש במדיום תאים ללא סרום כדי להתאים את צפיפות התאים לפי 2.5 10 לתאים החמישיים למיליליטר. ואז לזרוע שני מיליליטר של התאים לתוך כל באר של צלחת תרבות שש בארות.במקביל, הכינו שש בארות עם שני מיליליטר בלבד של מדיום תאי גזע נטולי סרום. לאחר מכן, הדגירה את צלחות שש באר ב 37 מעלות צלזיוס עם 5%פחמן דו חמצני במשך 24 שעות. ראשית לרסס את משטח מכסה המנוע של תרמת הרקמה עם 70% אתנול ולנגב את המשטח מרוסס עם מגבות נייר.לאחר מכן לרסס את בקבוקי פתרון ניתוק בינוני ותא עם 70% אתנול ולנגב אותם עם מגבות נייר. מעבירים את הבקבוקים הנקיים למכסה המנוע של תרבות הרקמות. לאחר מכן, אחזר את לוחיות השש בארות מהחמה.בזהירות pipette התקשורת מותנה לתוך 15 צינורות צנטריפוגה סטריליים מיליליטר, ולה מניחים את הצינורות על קרח. מוסיפים 0.5 מיליליטר של תותבת תאים לכל באר של צלחות שש הבאר, ובדקו כל דקה אם תאי הגידול מעוגלים. לאחר שתאי הגידול מתעגלים, הקישו בעדינות על צד הצלחת כדי לעזור לנתק את התאים.הבא pipette 2.5 מיליליטר של תאים סרטניים תחזוקה בינוני לתוך הבאר פיפטה למעלה ולמטה שלוש פעמים לערבב. מעבירים את התאים לצינור צנטריפוגה סטרילי באורך 15 מיליליטר. מערבבים 10 מיקרוליטרים של תאים עם 10 מיקרוליטרים של פתרון טריפאן כחול, ומעבירים 10 מיקרוליטרים של תערובת זו לשקופית הספירה.השתמש מונה תאים אוטומטי לכמת את מספר התאים החיים, ולהשתמש באמצעי תא גזע ללא סרום כי היה דגירה ב 37 מעלות צלזיוס לילה כדי להתאים את נפח המדיה המותנית על פי מספר התא. סנן את המדיה המותנה באמצעות מסנני מיקרומטר של 0.45 והצב את המדיה המותנה בקרח. כדי להתחיל, לחמם את מדיום IMDM באמבט מים ב 37 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות.נקה את מכסה המנוע של תרבות הרקמה עם 70%אתנול ונקה את בקבוק המדיום והעבר אותו למכסה המנוע כפי שתואר קודם לכן. לאחר מכן להעביר את הבקבוק של MV-4-11 תאים לתוך מכסה המנוע. פיפטה 10 מיליליטר של תאים לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר.השתמש ב- Trypan Blue וב מונה תאים אוטומטי כדי לכמת את מספר התאים החיים כפי שתואר קודם לכן. ואז צנטריפוגה התאים ב 200 פעמים g וב ארבע מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. שאפו את העל-טבעי ושטפו את התאים ב-10 מיליליטר של PBS.צנטריפוגה שוב ב 200 פעמים g וב ארבע מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. שאפו את העל-טבעי, והתינו מחדש את התאים במדיום IMDM בצפיפות תאים סופית של מיליון תאים למיליליטר. ראשית להביא את החומרים הדרושים לטמפרטורת החדר.הוסף 250 מיקרוליטרים של תאי MV-4-11 המוכנים לכל הוספה. לאחר מכן להוסיף 400 microliters של מדיום מותנה או בינוני רק את התאים התחתונים של צלחת 24 באר, הקפד להוסיף את הדגימות ב triplicate. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני במשך ארבע שעות.לאחר מכן הקישו בעדינות על ההוספה בקיר הפנימי של אותה באר והשליכו את ההוספה. בעדינות pipette התאים בארות למעלה ולמטה שלוש פעמים כדי לערבב. העבר 225 מיקרוליטרים של מתלי תא זה לתוך הבארות של צלחת 96 באר עם קיר שחור המתאימה למדידת פלואורסצנטי.לאחר מכן, לדלל את הצבע CyQUANT עם חיץ תזה 4x ביחס של אחד עד 75. מערבולת בקצרה ולסובב את הפתרון. מעבירים 75 מיקרוליטרים של פתרון זה לכל באר של צלחת 96 באר ודגירה בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות.באמצעות קורא לוחיות פלואורסצנטיות, קרא את הפלואורסצנטיות ונתח את הנתונים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. במחקר זה, מים במבחנה משמש לחקר אינטראקציה מקרופאג הגידול. דגימות עם ערכי פלואורסצנטיות גבוהים מצביעות על כך שלמדיה המותנה יש יכולת גבוהה לגייס מקרופאגים.בהתאם לצרכים הניסיוניים, ניתן לכלול פקדים נוספים. לדוגמה, ניתן להשתמש בנטרול נוגדנים כדי לטפל במדיה המותנה כדי לבטל את chemotaxis מקרופאג ולבצע באותו אופן. ניתן גם להוסיף כימוקינים נוספים למדיה המותנה, המשמשים כשליטה חיובית.חשוב לשלוט בהבדלי מספר התאים עבור ההתדגם הזה מכיוון שסוגי תאים שונים יכולים לגדול במהירויות שונות. אישור Vivo של תוצאות במבחנה הם קריטיים. אפשר להזריק תאים סרטניים לעכברים ולנתח את הגידולים עם ציטומטריית זרימה, כשל חיסוני ו- CyTOF כדי לאשר את התוצאות.

in-vitro-assay-to-study-tumor-macrophage-interaction

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בסרטון זה, אנו חוקרים אינטראקציה בין גידולים למקרופאגים באמצעות בדיקת אינטראקציה מבוססת פלואורסצנטיות של מקרופאגים טרנסוולים. הבדיקה כוללת ניתוח של נדידת מקרופאגים באמצעות כימוטקסיס המושרה על ידי כימיקלים.

בדיקת משיכה למקרופאגים מבוססי פלואורסצנטיות: שיטה במבחנה לחקר אינטראקציה בין גידולים למקרופאגים באמצעות כימוטקסיס המושרה על ידי כימיקלים

הבנת ההתנהגות הממאירה של סרטן דורשת יצירת מודלים מדויקים של האופן שבו תאי הגידול מתקשרים עם מרכיבים של מיקרו-סביבת הגידול, כגון מקרופאגים. כאן אנו מתארים שתי שיטות לחקר אינטראקציה של תאי גליובלסטומה עם מקרופאגים ומיקרוגליה הקשורים לגידול שבהם מוערכת ההשפעה על פלישת גליובלסטומה.

מבחני Coculture ללמוד מקרופאג Microglia גירוי של גליובלסטומה הפלישה

פעילות מקרופאג phagocytic נגד תאים סרטניים, במיוחד 4T1 עכבר קרצינומה של החלב בתאי, היה בתמונה במחקר זה. מודל התרבות של התאים החיים הוקם ונצפה בשילוב של מיקרוסקופ פלורסנט והפרעות דיפרנציאליות. הערכה זו היתה תמונה באמצעות תוכנת דימות כדי לפתח וידאו לפקיעה מרובה נקודות.

הדמיה הזמן 2D דימות של פעילות Phagocytic ב-M1 מקרופאג-4T1 עכבר קרצינומה של החלב תאים במשותף תרבויות

כאן, אנו מציגים שיטה באמצעות ממברנה חדיר תומך כדי להקל על המחקר של אי-מגע הפרדרין איתות בשימוש על ידי תאים סרטניים כדי לדכא את התגובה החיסונית. המערכת היא קלה ללמוד את התפקיד של גורמים מופרש הגידול בהפעלת לחות מקרופאג.

לומד את ההשפעות של הקרנף המופרש ליגרין המקרופאג הפעלה באמצעות תרבות שיתוף עם ממברנה חדיר תומך

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקירת האינטראקציה של מקרופאגים ראשוניים שמקורם במונוציטים אנושיים עם ספרואיד גידול במטריצת קולגן I תלת מימדית (תלת מימדית), עם אפשרות להשוות את ההשפעה של תכונות מסיסות ופיזיקליות של המיקרו-סביבה על פלישת התאים.

בדיקת פלישה משותפת של מקרופאגים-גידול ספרואידים

בהתחשב במודלים המוגבלים של קסנוגרפט הזמינים לחקר אינטראקציות בין CART אנושי לתאים מיאלואידים, הקמנו מודלים במבחנה וב-vivo כדי להבין את ההשפעות של מקרופאגים אנושיים על תאי CART. ניתן להכליל את הממצאים כדי להעריך את תפקידי המקרופאגים במיקרו-סביבת הגידול ולבדוק אימונותרפיות ממוקדות מקרופאגים.

חקר אינטראקציות בין תאים מיאלואידים ותאי CAR T במבחנה וב-In Vivo

כאן אנו מציגים פרוטוקול מפורט של יישום rhodamine 123 לזהות את מיטוכונדריאלי קרומית אפשרית (MMP) וללמוד CLIC4 נוקאאוט-induced HN4 תא אפופטוזיס בתוך חוץ גופית. תחת מיקרוסקופ פלורסצנטיות נפוצות לייזר קונפוקלי סריקה קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ, נרשם השינוי בזמן אמת של MMP.

זיהוי של המיטוכונדריה פוטנציאל ממברנה לימודים CLIC4 נוקאאוט-induced HN4 תא אפופטוזיס במבחנה

שביט וזמינותו היא שיטה יעילה לאיתור נזק לדנ א כולל יחיד, כפול גדילי ה-DNA שובר. אנו מתארים שביט אלקליין ונייטרלי מבחני למדוד נזק לדנ א בתאים סרטניים כדי להעריך את השפעת טיפולי כימותרפיה.

הערכת במבחנה נזק לדנ א שימוש Assay שביט

פרוטוקול זה מתאר של assay הפוכה הפלישה אנכי יכול לשמש כדי לכמת את יכולות העברת ופלישה של תאים בתוך תפאורה תלת מימדי תוך שמירה על microenvironment תא. Assay הזה מתאים תאים נדירים ו/או רגישים.

נעים כלפי מעלה: פשוט וגמיש במבחנה הפלישה תלת מימדי Assay פרוטוקול

מאמר זה מציג נוהל מקיף כדי להעריך במבחנה אם אנגיוגנזה קלאסי קיימת ב- hemangioblastomas (HBs) ותפקידו HBs. התוצאות להאיר את המורכבות של HB-כורוידאלית, מציע כי זו הצורה השכיחה של אנגיוגנזה הוא רק מנגנון משלים ב- HB-כורוידאלית.

נוהל מקיף כדי להעריך את ביצועי במבחנה כורוידאלית Hemangioblastoma בשם משתמש את ספרואיד הלבלוב Assay

חקור שיטת חוץ גופית להערכת משיכת מקרופאגים על ידי מדיום מותנה מתאי גידול. שיטה זו מאפשרת לחוקרים ללמוד אינטראקציות בין תאי גידול לתאי חיסון ולפתח טיפולים מותאמים אישית לחולי סרטן.

בתוך שיטת חוץ גופית כדי ללמוד גידול-מקרופאג אינטראקציה

גלה סרטונים נוספים