ליבה/פגז הדפסה פיגומים קפלים להנדסת רקמות של מבנים צינורי

ייצור מבנים צינוריים הוא גישה מבטיחה להנדסת רקמות של רשתות כלי דם, אשר נשאר אחד האתגרים העיקריים בטיפוח של רקמות עבות במבחנה. היתרון העיקרי של טכניקת הליבה /מעטפת הוא ייצור פשוט של פיגומים חלולים בשלב אחד, צמצום זמן הייצור ופוטנציאל המאפשר הדפסה ישירה עם תאים. הכנת ניסוח הידרוג'ל עם התכונות הוויסקולסטיות המתאימות, וקיום זרימה מאוזנת רציפה של חומרי הליבה/מעטפת חיוניים להדפסה תלת מימדית של פיגומים יציבים.

כדי להתחיל, למלא את המזרק סטרילי 5 מ"ל עם הידרוג'ל מוכן טרי. מלא מזרק שני 5 מ"ל, מצויד במחט קהה 27 מד, עם פתרון crosslinking מוכן טרי. להרכיב את הזרבובית הליבה / פגז.

הכנס מחט G27 קהה קצה כמו רכיב הליבה להדק את המחט באמצעות הבורג. המחט הפנימית צריכה לבלט על 1 מ"מ מן הזרבובית מעטפת הליבה החיצונית. חבר את המזרק עם פתרון crosslinking למחט G27 בזרבובית ולטעון את המזרק לתוך אחד ההרים extruder של מדפסת 3D מעקר אתנול.

הר את המזרק עם הידרוג'ל לתוך extruder השני ולחבר אותו אל הזרבובית. השתמש במנעול Luer כדי לחבר צינור קצר לקלט לור בצד של חריר הליבה / פגז. כוונן בזהירות את היישור עד שהזרבובית תיגע בפני השטח לפני נסיגת הזרבובית למרחק השווה לקוטר הזרבובית החיצוני.

יבא את הפיגום שנוצר g-code והקש Play כדי ליזום את תהליך ההדפסה. לאחר ההדפסה, מוציאים בזהירות את המצע עם הפיגום המודפס ויוצקים את פתרון ההצלבה המשני על הפיגום כולו. הדגירה את הפיגום במשך דקה אחת בטמפרטורת החדר.

כדי לנתק את הפיגום מהמצע, משוך בעדינות את הפיגום הצידה. אם הפיגום נצמד בחוזקה למצע, הכנס קצה חד בין שני החומרים כדי להפריד ביניהם. מעבירים את הפיגום למיכל טרי.

UV לעקר את שני הצדדים של הפיגום במשך 30 דקות לכל צד. לאחר מכן מניחים את הפיגום במדיום תרבות תאים חסר צבע וולדגר את הפיגום ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני לפחות 24 שעות. למחרת, קציר huvex מתרבות במבחנה עם 0.25% טריפסין במשך חמש דקות ב 37 מעלות צלזיוס.

כאשר התאים התנתקו, לעצור את התגובה אנזימטי עם 3 מ"ל של מדיום תרבות תאים טריים ולאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה. להשעות מחדש את גלולה במדיום תרבות טרי המכיל פנול אדום, ולדלל את התאים ל 3.4 פעמים 10 לתאי אנדותל החמישי לריכוז מיליליטר. לטעון את התאים לתוך מזרק סטרילי 5 מ"ל מצויד מחט 27 מד ולאתר נקודת כניסה בפיגום.

יישור המחט עם החלק הישר של פילה הפיגום, בזהירות לנקב את הפיגום בזווית נמוכה. אשר כי המחט היא בתוך תריס חלול של התעלה בעדינות לדכא את הבוכנה להזריק כ 1-2 מ"ל של השעיית התא לתוך הפיגום. זרימת ההשעיה צריכה להיות גלויה דרך הפיגום השקוף.

כאשר הפיגום כולו התמלא בהשעיית תאים, הטביעו את הפיגום במדיום של תרבות תאים טריים, והחזירו את הפיגום לחממת תרבות התאים למשך עד 10 ימים. להדמיה חיה/מתה בסוף הדגירה, יש לשטוף את הפיגום ב-PBS, ולהשתמש במחט קהה כדי להזריק בזהירות תס"א חיה/מתה לפיגום. ודא כי הפתרון מילא את הפיגום כולו, ולה מניחים את הפיגום ב 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.

בסוף הדגירה, שוטפים את הפיגום ב-PBS ומעבירים בזהירות את הפיגום למגלשת זכוכית. לאחר מכן ניתן לראות את התאים צבועים בפיגומים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. בהצלבה זו של פיגום מודפס טרי ולאחר מעובד, ערוץ חלול גלוי בבירור ניתן לראות בתוך התסיסה.

גם לאחר 72 שעות של דגירה בתרבות התא בינוני ב 37 מעלות צלזיוס כפי שהוכח, הסימור שומר על המבנה החלול לאורך הפיגום כולו. כאן מוצגת תולדה חיה/מתה של תאי אנדותל לאחר 48 שעות של תרבות בתוך פיגום. התאים החיים יכולים להיות מזוהים על ידי אות פלואורסצנטי ירוק בהיר שלהם.

טכניקה זו היא הבסיס לייצור שלב אחד של פיגומים צינוריים חלולים ו ניתן לשדרג אותה באמצעות הדפסה ישירה באמצעות תאים המשולבים בדיו הביולוגית.