Name: ביצוע שריר השלד האנושי Xenografts בעכברים חיסוני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-16T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: למדו כיצד ליצור קסנוגרפטים של שריר השלד האנושי בעכברים חיסוני NRG. שיטה זו מאפשרת מידול מחלות שריר וניסוי טיפולים טרום-קליניים בחולדות ללא מערכת חיסון מסתגלת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי עמותת מיאוסיטיס וקרן פיטר באק. ברצוני להודות לד ר יואן-פן ג'אנג על שיתוף המומחיות וההכשרה שלה בטכניקת הכירורגיה הכירורגית.

<ol><li>Wong, C. H., Siah, K. W., Lo, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+clinical+trial+success+rates+and+related+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Biostatistics%22%5BJournal%5D)">Estimation of clinical trial success rates and related parameters.</a> Biostatistics. 0, 1-14 (2018).</li>
<li>Hay, M., Thomas, D. W., Craighead, J. L., Economides, C., Rosenthal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+development+success+rates+for+investigational+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Clinical development success rates for investigational drugs.</a> Nature Biotechnology. 32, 40-51 (2014).</li>
<li>Perel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+treatment+effects+between+animal+experiments+and+clinical+trials%3A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Comparison of treatment effects between animal experiments and clinical trials: systematic review.</a> BMJ. 334, 1-6 (2007).</li>
<li>Rubio-Viqueira, B., Hidalgo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+in+vivo+xenograft+tumor+model+for+predicting+chemotherapeutic+drug+response+in+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacology+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Direct in vivo xenograft tumor model for predicting chemotherapeutic drug response in cancer patients.</a> Clinical Pharmacology Therapeutics. 85, 217-221 (2009).</li>
<li>Roberts, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targetable+Kinase-Activating+Lesions+in+Ph-like+Acute+Lymphoblastic+Leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Targetable Kinase-Activating Lesions in Ph-like Acute Lymphoblastic Leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 371, 1005-1015 (2014).</li>
<li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GDF11+Controls+the+Timing+of+Progenitor+Cell+Competence+in+Developing+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">GDF11 Controls the Timing of Progenitor Cell Competence in Developing Retina.</a> Science. 308, 1927-1930 (2005).</li>
<li>Sako, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+ligand+binding+functionality+of+the+extracellular+domain+of+activin+receptor+type+IIB%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemisty%22%5BJournal%5D)">Characterization of the ligand binding functionality of the extracellular domain of activin receptor type IIB.</a> Journal of Biological Chemisty. 285, 21037-21048 (2010).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skeletal+muscle+xenograft+as+a+new+preclinical+model+for+muscle+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Human skeletal muscle xenograft as a new preclinical model for muscle disorders.</a> Human Molecular Genetics. 23, 3180-3188 (2014).</li>
<li>Gabellini, D., Green, M. R., Tupler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inappropriate+Gene+Activation+in+FSHD+%3A+A+Repressor+Complex+Binds+a+Chromosomal+Repeat+Deleted+in+Dystrophic+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inappropriate Gene Activation in FSHD : A Repressor Complex Binds a Chromosomal Repeat Deleted in Dystrophic Muscle.</a> Cell. 110, 339-348 (2002).</li>
<li>Lemmers, R. J. L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Unifying+Genetic+Model+for+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Unifying Genetic Model for Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy.</a> Science. 329, 1650-1654 (2010).</li>
<li>Chen, J. C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morpholino-mediated+Knockdown+of+DUX4+Toward+Facioscapulohumeral+Muscular+Dystrophy+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Morpholino-mediated Knockdown of DUX4 Toward Facioscapulohumeral Muscular Dystrophy Therapeutics.</a> Molecular Therapy. 24, 1405-1411 (2016).</li>
<li>Medical Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Aids+to+the+investigation+of+the+peripheral+nervous+system%22">Aids to the investigation of the peripheral nervous system</a>. , Her Majesty’s Stationary Office. London. (1943).</li>
<li>Jones, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+Molecular+Anatomy+of+the+Human+Neuromuscular+Junction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Cellular and Molecular Anatomy of the Human Neuromuscular Junction.</a> Cell Reports. 21, 2348-2356 (2017).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

המטופל נגזר שתלי xenografts דרך חדשנית למודל מחלת שרירים ולבצע מחקרים טרום קליניים. השיטה המתוארת כאן כדי ליצור שתלי השלד xenografts מהירה, ישירה, ו להיות מנויית. ניתוחים חד צדדיים ניתן לבצע בתוך 15 עד 25 דקות, או בקיעים בתוך 30 עד 40 דקות. שתלי הדו הדו-צדדיים יכולים לספק גמישות ניסויית נוספת. למשל, החוקרים יכולים לבצע טיפול מקומי של השתלת xenograft, עם השני שמאל כפקד. העכברים NRG עמידים בפני זיהום באתר כירורגי כאשר הוא שוכן במתקן נטול הפתוגן; בניסיון שלנו ביצוע יותר מ-200 xenografts, מעולם לא היה לנו עכבר לרכוש דלקת כיר...

דווח כי רק 13.8% של כל תוכניות פיתוח הסמים שעברו ניסויים קליניים מצליחים להוביל טיפולים שאושרו1. בעוד ששיעור הצלחה זה גבוה יותר מ-10.4% שדווחו בעבר2, יש עדיין מקום משמעותי לשיפור. גישה אחת כדי להגדיל את שיעור ההצלחה של ניסויים קליניים היא לשפר את דגמי המעבדה המשמשים במחקר טרום קליני. מינהל המזון והתרופות (FDA) דורש מחקרים בעלי חיים כדי להפגין יעילות טיפול ולהעריך רעילות לפני שלב 1 ניסויים קליניים. עם זאת, לעתים קרובות יש קונקורדנציה מוגבלת בתוצאות הטיפול בין לימודי בעלי חיים וניסויים קליניים3. בנוסף, הצורך בלימודי בעלי חיים פרה-קליניים יכול להיות מכשול בלתי ניתן להתפתחות טיפולית במחלות שאין בהן מודל בעל חיים מקובל, שלעיתים קרובות מדובר במחלות נדירות או מפוזרות.
אחת הדרכים למודל מחלת האדם היא על ידי שתילת רקמת האדם לתוך עכברים לקוי כדי לייצר שתלי xenografts ישנם שלושה יתרונות מרכזיים ל מבע מודלים: הראשון, הם יכולים ללכוד את העיוותים גנטית מורכבים אפיגנטיים הקיימים במחלה האנושית, כי ייתכן שלעולם לא להיות מיוכל במודלים של בעלי חיים אחרים. שנית, ניתן להשתמש ב-xenografts כדי לדגמן מחלות נדירות או מפוזרות אם דגימות החולה זמינות. שלישית, xenografts תלי מודל המחלה בתוך מערכת שלמה vivo. מסיבות אלה, אנו ההשערה כי הטיפול תוצאות יעילות במודלים מבע נוטים יותר לתרגם ניסויים בחולים. האדם xenografts תלי הגידול כבר מנוצל בהצלחה כדי לפתח טיפולים עבור סוגי סרטן נפוצים, כולל מיאלומה נפוצה, כמו גם טיפולים אישיים עבור חולים בודדים4,5,6, 7. לאחר מכן
לאחרונה, xenografts שימשו כדי לפתח מודל של מחלת שריר האדם8. במודל זה, דגימות של ביופסיה של האדם האנושי מושתלים לתוך הגפיים של העכברים NRG לקויה ליצור שתלי xenografts הזרע מיושתלים האדם למות, אבל תאי גזע השריר האנושי הנוכחים בשתל מבע אחר מכן להרחיב ולהבדיל לסיבים האנושי החדש אשר מאכלס את הבסיס האנושי מנופה של האדם. לכן, הסיבים הנוצרות מחדש ב-xenografts אלה הם אנושיים לחלוטין, הם באופן ספונטני revascularized על ידי מארח העכבר. חשוב מכך, ניוון שרירים fascioscapulohumeral (FSHD) רקמת שריר החולה המושתלים לתוך עכברים לכידה של תכונות מפתח של המחלה האנושית, כלומר ביטוי של הגורם שעתוק DUX4 8. Fshd נגרמת על ידי הבעות יתר של DUX4, אשר מושתק גנטית ברקמת שריר נורמלי9,10. במודל fshd מבע, טיפול עם DUX4 olino מסוים הוכח לדכא בהצלחה DUX4 ביטוי ותפקוד, והוא עשוי להיות אופציה טיפולית פוטנציאלית עבור חולים fshd11. תוצאות אלה מציגות כי שרירי האדם xenografts הם גישה חדשה למודל מחלת שרירים אנושית ולבדוק טיפולים פוטנציאליים עכברים. כאן, אנו מתארים בפירוט את השיטה כירורגית ליצירת שרירי השלד האנושי xenografts בעכברים חיסוני.

<table><tbody><tr><td>צלחת פטרי 100 מ"מ x 15 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>2-מתילבוטן</td><td>פישר</td><td>O3551-4</td><td></td></tr><tr><td>20 מ"מ x 30 מ"מ מיקרו כיסוי זכוכית</td><td>VWR</td><td>48393-151</td><td></td></tr><tr><td>משקל שקילה לבעלי חיים</td><td>קנט סיינטיפיק</td><td>SCL- 1015</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת אנטיביוטיקה-אנטימיקוטית</td><td>, Cellgro</td><td>30-004-CI</td><td></td></tr><tr><td>מערכת AutoClip</td><td>FST</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט Castroviejo</td><td>FST</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>תמצית עובר אפרוח</td><td>מדויק</td><td>CE650TL</td><td></td></tr><tr><td>CM1860 UV cryostat</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM1860UV</td><td></td></tr><tr><td>צנצנת צביעה קופלין</td><td>Thermo Scientific</td><td>19-4</td><td></td></tr><tr><td>סיכות דיסקציה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S13976</td><td></td></tr><tr><td>קרח יבש - גלולה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC9584462</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן מיוזין עוברי</td><td>DSHB</td><td>F1.652</td><td>ריכוז מומלץ 1:10</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>459836</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30071.01</td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite MI-150</td><td>דולן-ג'נר</td><td>Mi-150</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>FST</td><td>11295-20</td><td></td></tr><tr><td>עיזים נגד עכבר IgG1, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-21121</td><td>ריכוז מומלץ 1:500</td></tr><tr><td>עיזים נגד עכבר IgG2b, AlexaFluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>A-21145</td><td>ריכוז מומלץ 1:500</td></tr><tr><td>גומי tragacanth</td><td>Sigma</td><td>G1128</td><td></td></tr><tr><td>Hams F-10</td><td>קורנינג</td> בינוני <td>10-070-CV</td><td></td></tr><tr><td>היסטואקריל כחול אטם רקמות דבק מקומי לעור</td><td></td><td>TS1050044FP</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן למין למין ספציפי אנושי</td><td>Abcam</td><td>ab40567</td><td>ריכוז מומלץ 1:50-1:100</td></tr><tr><td>נוגדן ספקטרין ספציפי לאדם</td><td>Leica Biosystems</td><td>NCLSPEC1</td><td>ריכוז מומלץ 1:20-1:100</td></tr><tr><td>תא אינדוקציה</td><td>VetEquip</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>איריס מלקחיים</td><td>FST</td><td>11066-07</td><td></td></tr><tr><td>מוקרן גלובלי 2018 (Uniprim 4100 ppm)</td><td>Envigo</td><td>TD.06596</td><td>דיאטת מכרסמים אנטיביוטית להגנה שוב על זיהומים בדרכי הנשימה</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>MWI אספקה וטרינרית</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td>מגבונים כירורגיים</td></tr><tr><td>Mapleson E Breathing Circuit</td><td>VetEquip</td><td>921412</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>פישר מדעי</td><td>A412</td><td></td></tr><tr><td>מכונת הרדמה ניידת</td><td>VetEquip 901805</td><td></td><td></td></tr><tr><td>עכבר על עכבר ערכה בסיסית</td><td>מעבדות וקטור</td><td>BMK-2202</td><td>עכבר IgG חוסם מגיב</td></tr><tr><td>לק</td><td>אלקטרונים מיקרוסקופיה Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>NAIR מסיר שיער קרם / שמן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC0132811</td><td></td></tr><tr><td>עכברי NOD-Rag1null IL2rg null (NRG)</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>007799</td><td></td></tr><tr><td>תרכובת O.C.T. בת</td><td></td><td>23-730-571</td><td></td></tr><tr><td>חמצן</td><td>איירגז OX</td><td>USPEA</td><td></td></tr><tr><td>PBS (פוספט חוצץ מלח) מאגר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>4870500</td><td></td></tr><tr><td>פובידון יוד פתרון הכנה</td><td>Dynarex</td><td>1415</td><td></td></tr><tr><td>ProLong&trade; זהב אנטיפייד מאונטנט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>P10144 (ללא DAPI); P36935 (עם DAPI)</td><td></td></tr><tr><td>משחת עיניים Puralube</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>רימדיל (קרפרופן) הזרקה</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>10000319</td><td>משכך כאבים כירורגי, ניתן תת עורי במינון של 5 מ"ג/ק"ג</td></tr><tr><td>להבי אזמל - #11</td><td>FST</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>ידית אזמל - #3</td><td>FST</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>סטריאו מיקרוסקופ</td><td>Accu-scope</td><td>3075</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus מיקרוסקופ שקופיות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>תפר, סינטטי, לא נספג, אורך 30 אינץ', מחט CV-11</td><td>Covidien</td><td>VP-706-X</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל (26 מד, מחט 3/8 אינץ')</td> <td>BD Biosciences</td><td>329412</td><td></td></tr><tr><td>גוזם</td><td>קנט סיינטיפיק</td><td>CL9990-KIT</td><td></td></tr><tr><td>Vannas מספריים קפיציים, 8.0 מ"מ קצה חיתוך</td><td>FST</td><td>15009-08</td><td></td></tr><tr><td>VaporGaurd מסנן פחם פעיל</td><td>VetEquip</td><td>931401</td><td></td></tr><tr><td>תפסי פצע, 9 מ"מ</td><td>FST</td><td>12022-09</td><td></td></tr></tbody></table>

ביצוע שריר השלד האנושי xenografts בעכברים חיסוני

Performing Human Skeletal Muscle Xenografts in Immunodeficient Mice

תופעות הטיפול שנצפו במחקרים בעלי חיים לעתים קרובות אינן מצליחות להיות מיובחנות בניסויים קליניים. בעוד בעיה זו היא רבת פנים, סיבה אחת לכישלון זה הוא השימוש במודלים מעבדה לקוי. הוא מאתגר לדגם מחלות אנושיות מורכבות באורגניזמים המעבדה המסורתית, אבל בעיה זו ניתן להקיף באמצעות לימוד של האדם xenografts. השיטה הכירורגית שאנו מתארים כאן מאפשר יצירה של שתלי השלד האדם שרירים xenografts אשר ניתן להשתמש מודל מחלת שרירים לבצע בדיקות טיפוליות טרום קלינית. תחת הלוח סקירה מוסדית (IRB)-פרוטוקול מאושר, דגימות שריר השלד נרכשים מחולים ולאחר מכן מושתלים לתוך נוד-Rag1nullIL2rγnull (NRG) מארח עכברים. עכברים אלה הם מארחים אידיאליים עבור לימודי השתלת בשל חוסר היכולת שלהם להפוך לימפוציטים בוגרת ולכן אינם מסוגלים לפתח תא בתיווך ותגובות החיסונית מוסרית הסתגלות. עכברים מארחים מרדימים עם isof, והשרירים הקדמית ופושט המים הקדמי מוסרים. חלק משריר האדם מוצב לאחר מכן בתוך תא השוקה הריק והוא מונח אל הגידים האבוקיים והמרוחק של השריר הארוך ביותר. השריר מושתל באופן ספונטני ומinnervated על ידי מארח העכבר, וכתוצאה מכך שריר האדם מחדש מכבש שיכול לשמש כמודל למחקרים פרה-קליניים.

כפי שמתואר על ידי יואן-פאן ג'אנג ואח ', פרוטוקול זה כירורגי הוא שיטה ישירה לייצר שרירי השלד האנושי xenografts תלי8. שתלי xenografts חדש הופכים לinnervated באופן ספונטני ומציגים כיצד פונקציונלי. בנוסף, שריר xenografted ושתל מהחולים FSHD לאחר שינויים בביטוי גנים נצפתה בחולים FSHD8.
בניסיון שלנו, כ 7 מתוך 8 שתלי xenografts יצע מן המטופלים בשליטה דגימות יראה השריר מוצלחת התיאום. השתלת מבע וצלחת מראה התחדשות איתנה של סיבים אנושיים כמזוהה עם נוגדנים ספ...

מחלות אנושיות מורכבות יכול להיות מאתגר למודל במערכות מסורתיות דגם מעבדה. כאן, אנו מתארים גישה כירורגית למודל מחלת שריר האדם באמצעות השתלת ביופסיות שריר השלד האנושי לתוך עכברים לקויה.

ביצוע שריר השלד האנושי Xenografts בעכברים חיסוני

Treatment effects observed in animal studies often fail to be recapitulated in clinical trials. While this problem is multifaceted, one reason for this ...

פרוטוקול זה הוא משמעותי כי זה יכול לשמש כדי ליצור xenografts שריר השלד האנושי, אשר ניתן להשתמש בהם כדי מודל מחלת שרירים ולבצע בדיקות טיפוליות פרה-קליניות. מודל קסנוגרפט זה מאפשר לחוקרים לחקור את השריר האנושי ב-vivo כדי להבין טוב יותר את הביולוגיה של תאי השריר האנושיים ולפתח מודלים חדשניים למחלות שרירים נדירות או נרכשות. לאחר קבלת ביופסיה של שריר אנושי, מניחים את הדגימה בצלחת פטרי 100 על 15 מילימטר המכילה מדיום שריר, ולהשתמש במיקרוסקופ סטריאו ומספריים כירורגיים כדי להסיר כל fascia שנותר או רקמת שומן.לנתח את ביופסיית השריר לחתיכות של שבעה על שלושה על שלושה מילימטרים בקירוב, ולדאוג לכך שהסיבים מסודרים באורך בתוך הדגימה. לאחר מכן, מעבירים את צלחת פטרי המכילה את השריר המנותח על הקרח, ומניחים תפרים סינתטיים שאינם ניתנים לספיגה בצלחת פטרי 100 על 15 מ"מ של 70% אתנול. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר NOD-Rag-gamma בן 8 עד 12 שבועות, הרדמה, להחיל משחה על העיניים של החיה immunodeficient, ולהשתמש גוזם כדי להסיר את השיער overlying את השוקית לפני הקרסול אל הברך.לאחר מכן, להחיל קרם depilatory על העור החשוף במשך דקה אחת לפני חיטוי האתר הכירורגי עם פתרון povidone-יוד ו 70%אתנול. כדי להשתיל את הרקמה האנושית, תחילה קלטת במורד רגל העכבר, ולעשות חתך ישר על השוקיים לפני מקורו בגידים דיסטליים ו סי

performing-human-skeletal-muscle-xenografts-in-immunodeficient-mice

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מעקב דינמיקה של engraftment שריר בבעלי חיים קטנים על ידי In vivo פלורסנט הדמיה

שיטה אמינה עבור השתלת בלוציפראז-מתויג האדם ממאיר עצב היקפי נדן תאים סרטניים לתוך עצב השת של עכברים immunodeficient מתואר. השימוש הדמיה פליטת אור להפגין הקמת התקין של שתלי וקריטריונים גידול של הפרדה אקראית של בעלי חיים לקבוצות המחקר נדונות גם.

Orthotopic Xenografting של האדם בלוציפראז-Tagged ממאירה היקפיים נדן בתאי העצב גידול של In vivo בדיקה של סוכני המועמד טיפולית

כאן אנו מתארים מתודולוגיה להעביר חוט האדם הנגזרות דם אנדותל מושבת תאים יוצרי (ECFCs) ו מח עצם שמקורם בתאי גזע mesenchymal (MSCs), מוטבע ג'ל קולגן / פיברונקטין, תת עורי לעכברים immunodeficient. שילוב זה תא / ג'ל יוצרת רשת כלי דם האדם מתחבר עם vasculature העכבר.

האדם Bioengineering רשתות כלי הדם של עכברים Immunodeficient

סרטון זה מדגים שיטה להשתלת עור אנושי על עכבר מדוכא חיסון עם תגובת נויטרופילים מדוכאת. השיטה כוללת מריחת עור אנושי בעובי מפוצל על מיטת השתל של העכבר, אטימתו וכיסויו להתאוששות. בסופו של דבר, העור האנושי נצמד לעור העכבר, מבסס את כלי הדם ואת זרימת הדם, וכתוצאה מכך קסנוגרפט עור מוצלח.

טכניקה להשתלת עור אנושי במודל עכבר

סרטון זה מדגים בדיקה ליצירת מודל עכבר xenograft אנושי. עכבר מדוכא חיסון מוזרק עם cyclophosphamide כדי לגרום לדלדול תאי החיסון. תאי גידול שמקורם במטופל מעורבבים עם תאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים (PBMCs) בהידרוג'ל מוזרקים תת עורית לעכבר, ויוצרים גידול עם תאי T חודרים.

טכניקה ליצירת מודל עכבר קסנוגרפט אנושי המושתל על ידי PBMC אנושי

תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים (iPSC) שמקורם באבות מיוגניים מבטיחים מועמדים לאסטרטגיות טיפול בתאים לטיפול בדיסטרופיות שרירים. פרוטוקול זה מתאר השתלות ומדידות תפקודיות הנדרשות כדי להעריך את החריטה והבידול של מזואנגיובלסטים שמקורם ב- iPSC (סוג של אבות שרירים) במודלים של עכברים של התחדשות שרירים חריפה וכרונית.

השתלה של תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרה נגזר Mesoangioblast כמו אבות מיוגניים במודלים עכבר של התחדשות שרירים

xenografts גידול האנושי בעכברים עם מערכת חיסון חלשים הם כלים רבי ערך כדי ללמוד ביולוגיה בסרטן. פרוטוקולים ספציפיים כדי ליצור xenografts תת עורי וintrahepatic מתאי אנושיים hepatocellular קרצינומה או שברי גידול מתוארים. התחדשות כבד הנגרמת על ידי כריתה חלקית בעכברי נמען מוצגת כאסטרטגיה כדי להקל על קליטתם intrahepatic.

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

אנו מתארים טכניקה ניסיוני הרומן נקרא מינימלית פולשנית שריר הטבעת (MIME), אשר מבוססת על ראיות כי רקמת שריר השלד מכיל תאים myogenic קיימא יכול להקל על התורם-תאית myogenesis כאשר מושתל לתוך שריר המארח.

שריר פולשנית הטבעה (MIME) - טכניקה ניסיוני הרומן כדי להקל על Myogenesis התורם-תאית

אנו מציגים טכניקות עבור בידוד, culturing, אפיון, וההבחנה תאים האדם העיקרי שריר השריר (hMPCs) המתקבל רקמת שריר השלד ביופסיה.  hmpcs התקבל ומאופיין באמצעות שיטות אלה ניתן להשתמש לאחר מכן לכתובת מחקר שאלות הקשורות מיוגנזה האדם התחדשות השלד שריר.

בידוד, תרבות, אפיון, והבידול של תאים האדם שריר ביופסיה של השלד שרירי השגרה נוהל

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתיל עור אנושי בעכברים סוכרתיים שאינם שמנים (NOD)-scid interleukin-2 קולטן שרשרת גמא (NSG). בדו"ח נכללים תיאור מפורט של הכנת עור אדם להשתלה, הכנת עכברים להשתלה, השתלת עור אדם בעובי מפוצל והליך התאוששות לאחר ההשתלה.

מודל Xenograft לעור למניפולציה של תגובות חיסוניות אנושיות in vivo

זריקות תוך פמורליות מאפשרות קליטה של מספר קטן של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים (HSPCs), על ידי הצבת התאים ישירות בחלל מח העצם. כאן אנו מתארים פרוטוקול ניסיוני של הזרקה תוך-פמורלית של HSPCs אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון.

הזרקה תוך-פמורלית של תאי גזע ותאי אב המטופויטיים אנושיים לעכברים מדוכאי חיסון 

למדו כיצד ליצור קסנוגרפטים של שריר השלד האנושי בעכברים חיסוני NRG. שיטה זו מאפשרת מידול מחלות שריר וניסוי טיפולים טרום-קליניים בחולדות ללא מערכת חיסון מסתגלת.

ביצוע שריר השלד האנושי Xenografts בעכברים חיסוני

גלה סרטונים נוספים