Name: גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 7 s
Description: למדו שיטה לגרימת פציעה חריפה בריאות בעכברים באמצעות הזרקת LPS intratracheal. טכניקה זו מאפשרת ניתוח FACS של דם, נוזלי שטיפה ורקמת ריאה לחקר מנגנונים אימונולוגיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות ליאן קליינר וסוזן שולץ על מתן תמיכה טכנית. המחברים מכירים בתמיכה המצוינת של מתקן הליבה של הזרם cy, בפקולטה לרפואה של אוניברסיטת בון. המחברים לא קיבלו מימון מארגון חיצוני כלשהו.  חלק מהנתונים שניתנו במקטע התוצאות ומתוארים באיור 3 כבר הוצגו בפרסום קודם8.

פרוטוקול בעלי חיים זה אושר על ידי הוועדה המקומית לטיפול בבעלי חיים (LANUV, רקלינגהאוזן, גרמניה; פרוטוקול 84-02.04.2015) ובוצע בהתאם הנחיות המכון הלאומי לבריאות לשימוש בעלי חיים חיים (הפרסום NIH No 85-23, תוקן 1996).
1. עלי השראה
<ol><li>השתמש במבוגר C57BL/6 עכברים בגילאים של כ 10-12 שבועות. הבית בעלי החיים בכלובים מאוורר באופן אינדיבידואלי עם גישה חופשית למים ואוכל מכרסם רגיל. עם זאת, ניתן לבצע גישה זו על בעלי חיים צעירים יותר עם זנים עכברים אחרים.</li>
	<li>חנות LPS (EsO111 coli החיידק: B4) ב ali, בריכוזים של 5 מ"ג/mL ב-20 ° c. לגבי האינקטלציה, לדלל LPS בתמיסת מלח סטרילית באגירה (PBS) לריכוז הסופי של 2,000 μg/mL.</li>
	<li>. שוקלים את העכבר הכנס קטמין [120 mg/ק ג משקל גוף העכבר (BW) ו xylazine (16 מ"ג/ק"ג BW) intraperitoneally (נמוך יותר משליש הבטן, פאראדין), ולחכות עד תחילת ההרדמה.</li>
	<li>בדוק את עומק ההרדמה על ידי גרימת גירוי מישוש. במקרה של הרדמה מספקת, לחזור על הזריקה עם קטמין (30 מ"ג/ק"ג BW) ו xylazine (4 מ"ג/ק"ג BW).</li>
	<li>מניחים את העכבר בתנוחה מועדת על שולחן טמפרטורה מבוקרת כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של 37 ° c.</li>
	<li>. כדי למנוע התייבשות של קרניות בהרדמה</li>
	<li>הרם את הראש והקרס חותכות על פס אופקי הממוקם כ-5 ס מ מעל השולחן, בעוד שכפות הרגליים נשארות במגע צמוד עם השולחן. הארך את הצוואר בזווית 90 מעלות יחסית לטבלה (איור 1). להחזיק את הלשון עם מלקחיים כדי ליישר את הגרון לתנאי צנרור קל.</li>
	<li>לגזור a 22 מד (ז) קטטר ורידי לאורך של 20 מ"מ. בעדינות להכניס את הצנתר בכיוון האנכי לאורך שורש הלשון. מניחים מקור אור קר על העור מעל הגרון כדי לעזור להמחיש את מיתרי הקול ולכוון את קנה הנשימה. אם התנגדות של הגרון מתרחשת, למשוך את הקטטר כמה מילימטרים לפני להתקדם שוב.</li>
	<li>הכנס את הקטטר כ 10 מ"מ לתוך קנה הנשימה. ודא כי הכניסה אינה עמוקה מדי כמו זה יגרום הצטברות חד צדדית של נוזל לתוך ימין או שמאל ברונזה הראשי.</li>
	<li>הכנס LPS (5 μg/g BW) מדולל ב-PBS באמצעות פיפטה [אמצעי אחסון מוזרק תלוי במשקל גוף העכבר (למשל, 20 גר' משקל ← להשתמש 50 μL של פתרון LPS)]. הערה: העכבר יגיב בדרך כלל עם שיעול או מתנשף בחוסר הסדר המתאים של נוזל לתוך קנה הנשימה.</li>
	<li>לחבר מזרק ולהוסיף בולוס של 50 מ"ל אוויר כדי להבטיח כי נפח נוזלי מלא מופץ בריאות. . הסירו לאט את הצנתר</li>
	<li>לשמור על הגוף העליון של העכבר בתנוחה זקופה עבור 30 כדי למנוע דליפה של הנוזל מקנה הנשימה.</li>
	<li>בבעלי חיים בעלי הפעלה מזויפת, הכנס 50 μL של הערוץ האחר במקום LPS.</li>
	<li>הכנס בופרנורפין הידרוכלוריד 0.08 מ"ג/ק"ג תת-עורי לתוך העור רופף על הצוואר מיד לאחר האינדוקציה עלי ואת כל 12 h לאחר מכן, במהלך הראשון 48 h.</li>
	<li>לשמור על טמפרטורת הגוף של 37 ° צ' עד מודעות מלאה מגיעה על ידי שמירה על העכבר על משטח ההתחממות.</li>
	<li>העבר את העכבר לכלוב מאוורר בנפרד עם גישה חופשית למזון ולמים. נטר את העכבר בקביעות. הפחתת טמפרטורת הגוף ודיכאון הנשימה מעיד על השראה מתאימה של עלי.</li>
</ol>2. דגימת דם, ששטיפה ברונדושיים, קצירת איברים
הערה: עיתוי המתת החסד תלוי בסוגיה המדעית הנדונה. בדרך כלל, זה מבוצע 12-72 h לאחר ה, לאחר ה,3,4,9,10. חומרת עלי ניתן לקבוע קלינית על ידי התבוננות סדירה של טמפרטורת הגוף ואת הסימפטומים מצוקה הנשימה11.
<ol><li>לגרום הרדמה על ידי הצבת העכבר בחדר מוצף באיזוofלאנה. השתמש ב-3 שימוש בזרימת חמצן של 1 L/min. להבטיח הרדמה עמוקה על ידי גרימת גירוי מישוש. במקרה של עומק מספיק של הרדמה, להגדיל את isofלאנה עד 5 vol%.</li>
	<li>להקריב את העכבר בהרדמה מעמיקה. ע י פריקת העורף לאטלנטיס</li>
	<li>תקן את העכבר עם קלטת על טבלת פעולה ובקרוב לחטא את הפרווה על הבטן עם 70% אתנול. פתח את חלל הבטן בזהירות בקו החציוני עם מספריים ומלקחיים. להסיר חלקים של המעי כדי להשיג גישה אל הנחות הבנה קאווה (IVC) הזכות לעמוד השדרה ואת אבי העורקים הבטני.</li>
	<li>לאתר את הוורידים כליה ולהוסיף כפוף 23 G צינורית מחובר מזרק 1 מ ל לתוך ה-ivc ישירות מתחת למפגש של הוורידים. מאספירין 250 μl של דם והעברה לתוך שפופרת 1.5 mL מלא 20 μl של 0.5 M ethylenediamiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii\ טלטל בעדינות כדי להקל על הערבוב של EDTA ולשים את השפופרת על הקרח.</li>
	<li>עבור ששטיפה ברונמאשיים (BAL), להכין שלושה מזרקים mL 1 מ מ עם 0.5 mL של PBS סטרילי ו 0.1 mL של אוויר כל אחד. זמן קצר לחטא את הפרווה של הגרון עם 70% אתנול ולחשוף בזהירות את קנה הנשימה עם מספריים ומלקחיים. להניע את קנה הנשימה. ולעטוף תפר</li>
	<li>לבצע BAL: נקב את קנה הנשימה באמצעות מיקרו מספריים ולהוסיף 22 קטטר ורידי ורידים לחתוך לאורך של 20 מ"מ. תקן את הקטטר עם תפר ו-in, 0.5 mL של PBS סטרילי ו 0.1 mL של אוויר. . מרוב הנוזל לאחר 60 ס חזור על ההליך עם שני מזרקים נוספים ולאסוף את כל הנוזלים בצינור 15 מ ל על הקרח.</li>
	<li>פתחו בזהירות את החזה עם מספריים ומלקחיים כדי לקצור את הריאות. חותכים את הסרעפת לאורך השוליים הקוסטל וחותכים את הצלעות עם שני חתכים לרוחב. הימנע בזהירות מלשאת את הריאות. הרם את עצם החזה בגולגולת. ותקן או הסר אותו</li>
	<li>הכינו מזרקים 2 10 mL עם 37 מעלות צלזיוס חם PBS (ללא סידן ומגנזיום). לעשות חתך קטן לתוך החדר השמאלי. לנקב את החדר הימני עם משחק 26 G צינורית ולשטוף את זרימת הריאות עם PBS הקדם. להיות מודעים לריאות להפוך חיוור במהלך ההליך.</li>
	<li>להסיר את האונה הימנית של הריאות ולחתוך אותו בשני חצאים. הצמד-הקפאת אותם בחנקן נוזלי, ואחריו אחסון לטווח ארוך ב-80 ° c עבור ביטוי גנטי נוסף ניתוח חלבונים.</li>
	<li>להסיר את הריאה השמאלית כולה ואת המגון את זה ב 48 צלחת היטב על ידי מיניב את הרקמה עם מספריים ו tweezer. מודדת את הרקמה 2 מ ל של מאגר העיכול [RPMI 1640 with 10% סרום עגל עוברי (fcs) ו 0.1% נאן3, כולגאז I (1 מ"ג/ml), ו dnase II (7 מ"ג/mL)] ב 37 ° צ' עבור 60 min. לבצע הומוגון נוספת על ידי ליטוף זהיר של חתיכות רקמת ה למטה.</li>
</ol>3. הכנת רקמות לניתוחי FACS
<ol><li>הכן מאגר FACS טרי (טבלה 1): השתמש תמיד ב-PBS ללא סידן ומגנזיום כדי להפחית את הדבקה של תא לתא-לתא התלוי בקטיון ולמנוע הסתעפות. תוספת עם FCS (1%) כדי להגן על התאים ואפופטוזיס, למנוע כתמים לא ספציפיים, ולמנוע תאים לדבוק צינורות FACS. כלול EDTA (0.5 mM) כדי למנוע הדבקה מבוססי-הקטיון תא לתא כאשר עובדים עם תאים נדבקים וחסיד כמו מקרופאגים. הוסף נתרן אזיד (0.1%), כפי שהוא מונע זיהום חיידקי והלבנת של fluorochromes וחוסם נוגדן שפיכת.</li>
	<li>להעביר את דגימות הדם (צעד 2.4) לתוך 5 מנורות FACS ולערבב בעדינות את הדם עם 2 מ ל של מאגר פירוק הדם של תא דם אדום. לשים את הצינורות על הקרח ולסיים את התגובה לאחר 2 דקות על ידי הוספת 2 מ ל של הקרח קר PBS. צנטריפוגה את הדגימות עבור 5 דקות ב 400 x g ולהיפטר supernatant. להשעות מחדש את הגלולה תא עם 60 μL של מאגר FACS והתהליך עבור כתמים של FACS לאחר מכן על פי פרוטוקולים שתוארו בעבר12. הערה: עיתוי של המתת חסד של השפעות העכבר לספירה כחלק מדלקת מערכתית. לכן, מומלץ להתאים את מספר התא ל 1 x 106 תאים/60 μl בשלב זה כדי להשיג את התוצאות מכתים הטוב ביותר עבור הניתוח cy, try הזרימה.</li>
	<li>צנטריפוגה נוזל BAL (שלב 2.6) עבור 5 דקות ב 400 x g. לאחר מכן, הקפאת הסופרנטאנט והקפא אותו בחנקן נוזלי, ואחריו אחסון לטווח ארוך ב-80 ° c לניתוח חלבון נוסף. השהה מחדש בל התאים עם 2 מ ל של מאגר facs קר, ולאחר מכן להעביר את ההשעיה לתוך 5 ml facs צינור באמצעות מסנן רשת מ100 יקרומטר לרסן שערות.</li>
	<li>שוב, צנטריפוגה את המדגם עבור 5 דקות ב 400 x g. השהה מחדש את הגלולה עם 60 μL של מאגר FACS ותהליך עבור כתמים של FACS לאחר מכן בהתאם לפרוטוקולים שתוארו בעבר12. הערה: עיתוי של המתת חסד של השפעות העכבר לספור בתוך בל כחלק מדלקת. לכן, מומלץ להתאים את מספר התא ל 1 x 106 תאים/60 μl בשלב זה כדי להשיג את התוצאות מכתים הטוב ביותר עבור הניתוח cy, try הזרימה.</li>
	<li>העבר את רקמת הריאה השמאלית מתעכל (שלב 2.10) לתוך צינור של 5 mL FACS באמצעות מסנן שינוי מגוון 100 μL כדי לחלץ גושים ולסיים את תהליך העיכול על ידי הוספת 2 מ ל של מאגר FACS קר קרח. צנטריפוגה את המדגם עבור 5 דקות ב 400 x g. להיפטר supernatant ולהשעות מחדש את הגלולה עם 60 μL של מאגר FACS והתהליך עבור כתמים הבאים של FACS בהתאם לפרוטוקולים שתוארו בעבר12. הערה: העיתוי של המתת החסד של השפעות העכבר ספירת לוקיציט ברקמת הריאה כחלק מדלקת. לכן, מומלץ להתאים את מספר התא ל-1 x 106 תאים/60 μl כדי להשיג את התוצאות מכתים הטוב ביותר עבור ניתוח cy, הזרמת ציטונסה.</li>
	<li>עבור ניתוח FACS, התאים המענבית עם CD16/CD32 נוגדן ב 4 ° צ' עבור 15 דקות כדי לחסום את הכריכה הלא ספציפית של האימונוגלובולין לקולטנים Fc. הוסף 20 μL של פתרון חסימת 1 x 106 תאים ב 60 μl בתוך צינור 5 מ ל.</li>
	<li>בינתיים, להכין תערובת הורים עם מאגר FACS ונוגדנים כפי שמתואר בטבלה 2.</li>
	<li>לאחר חסימת, לא לשטוף את התאים. הוסף 20 μL של שילוב מאסטר נוגדן לדוגמה כדי לקבל את הנפח הסופי של 100 μL. מארג הדגימות עבור 20 דקות בחשיכה ב-4 ° c.</li>
	<li>לשטוף כל מדגם עם 1 מ ל של מאגר FACS ו צנטריפוגה עבור 5 דקות ב 400 x g. השמט את הסופרנטאנט והשהה מחדש את הגלולה עם מאגר ה-FACS לריכוז התא המתאים עבור מדידות ה-FACS. הערה: מספר תא של 1 x 106 תאים/500 μl הוא הציע להשיג את התוצאות הטובות ביותר של הפנוטיפים החיסונית בניתוח facs עם פרוטוקול זה. עם זאת, מומלץ לחייב את הנוגדנים בנפרד.</li>
	<li>במקרה הצורך, הוסיפו כתמים חיים/מתים לפני הצביעת המשטח באמצעות ערכות מסחריות זמינות מסוימות8.</li>
	<li>לבסוף, להוסיף מספרים קבוע של מסחרית fluorochrome בשילוב חרוזי כיול (3 x 105 חרוזים ב 20 μl של מאגר facs) לכל מדגם כדי לקבוע מספרי תאים מוחלטים12. באיור 2מוצגת אסטרטגיית היציאה לדם, בל ותאי הרקמה.</li>
</ol>

<ol><li>Fink, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).</li>
<li>Lu, Y. -C., Yeh, W. -C., Ohashi, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LPS%2FTLR4+signal+transduction+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">LPS/TLR4 signal transduction pathway.</a> Cytokine. 42 (2), 145-151 (2008).</li>
<li>Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lung injury.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (3), 379-399 (2008).</li>
<li>Rabelo, M. A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Lung+Injury+in+Response+to+Intratracheal+Instillation+of+Lipopolysaccharide+in+an+Animal+Model+of+Emphysema+Induced+by+Elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Acute Lung Injury in Response to Intratracheal Instillation of Lipopolysaccharide in an Animal Model of Emphysema Induced by Elastase.</a> Inflammation. 41 (1), 174-182 (2018).</li>
<li>Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trübel, H., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+rats%3A+comparative+assessment+of+intratracheal+instillation+and+aerosol+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation.</a> Toxicology. 304, 158-166 (2013).</li>
<li>Rittirsch, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Lung+Injury+Induced+by+Lipopolysaccharide+Is+Independent+of+Complement+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Acute Lung Injury Induced by Lipopolysaccharide Is Independent of Complement Activation.</a> Journal of Immunology. 180 (11), Baltimore, Md. 7664-7672 (2008).</li>
<li>D'Alessio, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+Tregs+resolve+experimental+lung+injury+in+mice+and+are+present+in+humans+with+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury.</a> The Journal of Clinical Investigation. 119 (10), 2898-2913 (2009).</li>
<li>Ehrentraut, H., Weisheit, C., Scheck, M., Frede, S., Hilbert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+murine+acute+lung+injury+induces+increase+of+pulmonary+TIE2-expressing+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Experimental murine acute lung injury induces increase of pulmonary TIE2-expressing macrophages.</a> Journal of Inflammation. 15, 12(2018).</li>
<li>Szarka, R. J., Wang, N., Gordon, L., Nation, P. N., Smith, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+pulmonary+damage+induced+by+lipopolysaccharide+via+intranasal+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">A murine model of pulmonary damage induced by lipopolysaccharide via intranasal instillation.</a> Journal of Immunological Methods. 202 (1), 49-57 (1997).</li>
<li>Reutershan, J., Basit, A., Galkina, E. V., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+recruitment+of+neutrophils+into+lung+and+bronchoalveolar+lavage+fluid+in+LPS-induced+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Sequential recruitment of neutrophils into lung and bronchoalveolar lavage fluid in LPS-induced acute lung injury.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 289 (5), 807-815 (2005).</li>
<li>Hoegl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+the+multifactorial+nature+of+ARDS+-+approach+to+model+murine+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Capturing the multifactorial nature of ARDS - approach to model murine acute lung injury.</a> Physiological Reports. 6 (6), (2018).</li>
<li>Weisheit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ly6Clow+and+Not+Ly6Chigh+Macrophages+Accumulate+First+in+the+Heart+in+a+Model+of+Murine+Pressure-Overload%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Ly6Clow and Not Ly6Chigh Macrophages Accumulate First in the Heart in a Model of Murine Pressure-Overload.</a> PLoS ONE. 9 (11), (2014).</li>
<li>Grommes, J., Soehnlein, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+Neutrophils+to+Acute+Lung+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Contribution of Neutrophils to Acute Lung Injury.</a> Molecular Medicine. 17 (3-4), 293-307 (2011).</li>
<li>Müller-Redetzky, H. C., Suttorp, N., Witzenrath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+pulmonary+endothelial+barrier+function+in+acute+inflammation%3A+mechanisms+and+therapeutic+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Dynamics of pulmonary endothelial barrier function in acute inflammation: mechanisms and therapeutic perspectives.</a> Cell and Tissue Research. 355 (3), 657-673 (2014).</li>
<li>Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+apoptosis+in+lipopolysaccharide-induced+lung+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell apoptosis in lipopolysaccharide-induced lung injury in mice.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 117 (3), 202-208 (1998).</li>
<li>Doyen, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+induced+by+inhaled+lipopolysaccharide+depends+on+particle+size+in+healthy+volunteers%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inflammation induced by inhaled lipopolysaccharide depends on particle size in healthy volunteers.</a> British Journal of Clinical Pharmacology. 82 (5), 1371-1381 (2016).</li>
<li>Stephens, R. S., Johnston, L., Servinsky, L., Kim, B. S., Damarla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tyrosine+kinase+inhibitor+imatinib+prevents+lung+injury+and+death+after+intravenous+LPS+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">The tyrosine kinase inhibitor imatinib prevents lung injury and death after intravenous LPS in mice.</a> Physiological Reports. 3 (11), (2015).</li>
<li>Yu, Y., Jing, L., Zhang, X., Gao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simvastatin+Attenuates+Acute+Lung+Injury+via+Regulating+CDC42-PAK4+and+Endothelial+Microparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Simvastatin Attenuates Acute Lung Injury via Regulating CDC42-PAK4 and Endothelial Microparticles.</a> Shock. 47 (3), Augusta, Ga. 378-384 (2017).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

פולשני מינימלי, טיפול פשוט, ומהווה מאפיינים טובים הם תכונות מפתח של הגישה המוצגת כדי לגרום ALI במודל מכרסם קטן. השימוש LPS במקום חיידקים שלמים במודלים לבעלי חיים יש יתרונות. זהו תרכובת יציבה וטהורה, וניתן לאחסנם בצורה ליאופטוחה עד לשימוש. זהו ממריץ חזק עבור תגובות החיסונית מולדים באמצעות מסלול TLR4, הפעילות הביולוגית שלה עשוי בקלות להיות כמותית, הקלה טיטור של חומרת המחלה עם השגות טוב. יתר על כן, השימוש LPS הוכח לשמש מודל בטוח כדי לגרום ברונכיטיס חריפה במתנדבים בריאים אנושיים ובכך מאפשר תרגום מספסל למיטה...

מודלים ניסיוניים לבעלי חיים הינם חיוניים במחקרים חיסוניים בסיסיים. מינהל של חיידקים שלמים או מרכיבים מיקרוביאלית נעשה שימוש תכוף במודלים בעלי חיים קטנים כדי לגרום לדלקת מקומית או מערכתית1. ליפופוליסכריד (LPS, או אנדוטוקסין חיידקי) הוא רכיב קיר תא ואנטיגן פני השטח של חיידקים גראם שליליים (למשל, בריקובאכניים, פסאודומונס spp.). המולקולה התרמויציבה והגדולה (משקל מולקולרי 1-4 x 106 kda) מורכב moiety השומנים (ליפיד a), אזור הליבה (oligosaccharide), ו-o רב סוכר (או אנטיגן o). ליפיד A, עם שרשראות חומצות שומן הידרופובי שלה, עוגנים את המולקולה לתוך קרום חיידקי ו סכסוכי (על השפלה של חיידקים) את הפעילות החיסונית רעילות של lps. בעקבות הכריכה לחלבון איגוד lps (LBP), lps: LBP מתחמי פסיקים CD14/TLR4/MD2 מורכבות הקולטן ממוקם על המשטח של סוגי תאים רבים, גרימת תגובה חזקה proinflammatory עם טרנסלוקציה גרעינית NF-κB והבאים upregulation ביטוי של ציטוקין2.
פגיעה חריפה בריאות (עלי) מוגדרת ככשל נשימתי חריף באמצעות בצקת בריאות דו-צדדית בהיעדר אי ספיקת לב3. מינהל דרכי הנשימה של lps היא דרך נפוצה כדי לגרום לדלקת ריאתי עלי4,5,6,7. למרות שהחומר הסטרילי אינו מתאים לחקר התערבויות פרמקולוגית במחלות זיהומיות, ניתן לענות על שאלות אימונולוגיות מכניסטיות בדיוק מספיק. הסטיזילציה של LPS לתוך קנה הנשימה גורמת תגובה דלקתית חזקה עם הפלישה לוקיציט, upregulation של ציטוקינים proinflammatory, ושיבוש של מחסום מכתשי-נימי בתוך שעות לימים, בהתאם למינון LPS3, 6,7.
הפרוטוקול המוצג מתאר נוהל צעד אחר צעד מפורט כדי לגרום לעלי בעכברים על ידי intratracheal לדבר. המודל אומת על ידי הערכת ביטוי ציטוקין, הפלישה נויטרופילים, ו מכתשיים הדליפה בתוך מכתשי כמתואר בעבר8.

<table><tbody><tr><td>מזרקים 1 מ"ל</td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>300013</td><td></td></tr><tr><td>מזרקים 10 מ"ל</td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>309110</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD115 (c-fms) APC</td><td>Thermo Fisher, וולת'אם, MA, ארה"ב</td><td>17-1152-80</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD11b (M1/70) - FITC</td><td>Thermo Fisher, וולת'אם, MA, ארה"ב</td><td>11-0112-81</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD45 (30-F11) - eF450</td><td>Thermo Fisher, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב</td><td>48-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4/80 (BM-8) - PE Cy7</td><td>Thermo Fisher, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב</td><td>25-4801-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Gr1 (RB6-8C5)</td><td>BD Biosciences, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>552093</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ly6C (HK1.4) PerCP-CY5.5</td><td>Thermo Fisher, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב</td><td>45-5932-82</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ly6G (1A8) APC/Cy7</td><td>Bio Legend, סן דייגו, קליפורניה</td><td>127623</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין הידרוכלוריד</td><td>אינדיביור בריטניה בע"מ, ברקשייר, בריטניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 עכברים, נקבה, 10 - 12 שבועות</td><td>צ'ארלס ריבר, ווילמונגטון, מסצ'וסטס, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חרוזי APC של CaliBRITE (6&micro; m)</td><td>BD Biosciences, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>340487</td><td></td></tr><tr><td>Canula 23 מד 1''</td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>300800</td><td></td></tr><tr><td>Canula 26 מד 1/2''</td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>303800</td><td></td></tr><tr><td>מסננת תאים 70 ומיקרו; m</td><td>BD Biosciences, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג I</td><td>סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>1148089</td><td></td></tr><tr><td>Deoxyribonuclease II</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>D8764&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח פוספט בופר (PBS) של Dulbecco,</td><td>סיגמא-אולדריץ' סטרילי, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>D8662</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS), ללא סידן כלורי ומגנזיום כלוריד, סטרילי</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA)</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td> צינורות FACS <td>E7889</td><td></td></tr><tr><td>, 5 מ"ל</td><td>Sarstedt, N&uuml; mbrecht, גרמניה</td><td>551579</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FCS)</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fine Science Tools, היידלברג, גרמניה</td><td>11049-10</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter, Unterschlei&szlig; heim, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד</td><td>סרומוורק ברנבורג, ברנבורג, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ליפופוליסכרידים (LPS) מ- Escherichia coli O111:B4</td><td>Sigma-Aldrich, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>LIVE / DEAD Fixable Dead Cell Green Kit</td><td>Thermo Fisher, Waltham, MA, ארה"ב</td><td>L23101</td><td></td></tr><tr><td>חולדה מטוהרת נגד עכבר CD16 / CD32 (עכבר BD Fc Block &trade;), שיבוט 2.4G2</td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>מאגר ליזה של תאי דם אדומים</td><td>תרמו פישר, וולת'אם, MA, ארה"ב</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640, עם L-גלוטמין ונתרן ביקרבונט</td><td>סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>R8758</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>כלי מדע עדין, היידלברג, גרמניה</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>נתרן אזיד (NaN3)</td> <td>סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>מספריים אביביים</td><td>כלי מדע עדין, היידלברג, גרמניה</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>לרקמות כלי מדע עדין, היידלברג, גרמניה</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>צינורות</td><td>אפנדורף, המבורג, גרמניה</td><td>30125150</td><td></td></tr><tr><td>קטטר ורידי, 22 מד</td><td>B.Braun, Melsungen, גרמניה</td><td>4268091B</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין הידרוכלוריד</td><td>סרומוורק ברנבורג, ברנבורג, גרמניה</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

מינהל דרכי הנשימה של ליפופוליסכד (LPS) היא דרך נפוצה לחקר דלקת ריאות ופגיעה בריאות חריפה (ALI) במודלים של בעלי חיים קטנים. היבטים שונים תוארו, כגון האינהלציה של aerosolized LPS, כמו גם אפי או intrracheal הסטילציה. הפרוטוקול המוצג מתאר נוהל צעד אחר צעד מפורט כדי לגרום לעלי בעכברים על ידי ישיר intratracheal לחות ולבצע ניתוח FACS של דגימות דם, ברונמישיים ששטיפה (BAL) נוזל, ורקמות ריאות. לאחר הרגעה הצפק פנימי, קנה הנשימה נחשף ו-LPS מנוהל באמצעות צנתר הווריד 22 G. תגובה דלקתית חזקה ומיועלת עם הפלישה הלוקוטית, upregulation של ציטוקינים proinflammatory, ושיבוש של מחסום מכתשי-נימים מושרה בתוך שעות לימים, בהתאם למינון LPS בשימוש. איסוף דגימות דם, נוזל בל וקצירת ריאות, כמו גם עיבוד לניתוח FACS, מתוארים בפרוטרוט בפרוטוקול. למרות שהשימוש ב-LPS סטרילי אינו מתאים לחקר התערבויות פרמקולוגית במחלות זיהומיות, הגישה המתוארת מציעה החלטיות מינימלית, טיפול פשוט, ומענה טוב למענה על שאלות אימונולוגיות מכניסטיות. יתר על כן, מינון המינון, כמו גם שימוש אלטרנטיבי LPS ההכנות או זנים העכבר לאפשר אפנון של ההשפעות הקליניות, אשר יכול להציג דרגות שונות של החומרה ALI או מוקדם לעומת התפרצות מאוחרת של תסמיני המחלה.

הגישה המתוארת כדי לגרום ALI בעכברים היה מאומת על ידי הערכת ביטוי cy, הסתננות נויטרופילים, ומחסום מכתשי-נימים הפרעה 24 h ו 72 h לאחר LPS הפרעות. בעלי חיים מוזרקים. שימשו כשליטה ממשלת intratracheal LPS הנגרמת תגובה יציבה הריאות הריאתי. ביטוי של TNF-α ברקמת הריאה היה upregulated באופן משמעותי, הגעה מתמשכת ויותר 50-קיפול להגדיל בהשוואה לבעלי חיים בקרה [RQ (TNF-α/18s); 24 h: 53.7 (SD = 11.6); 72 h: 55.0 (SD = 20.6); p &lt; 0.05)] הפלישה הלוקוציט לתוך רקמה ומכתשיים היא סימן ההיכר ...

הציג כאן הוא צעד אחר צעד הליך כדי לגרום לפציעה ריאה חריפה בעכברים על ידי ישירה intratracheal ליפוסכאלפסיד ולבצע ניתוח FACS של דגימות דם, ברונמכתשי נוזל ששטיפה, ורקמות ריאות. מיניציה מינימלית, טיפול פשוט, תוכנות טובה, ו טיטור של חומרת המחלה הם יתרונות של גישה זו.

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

מודלים אמינים של בעלי חיים הם מרכיבים חיוניים במחקר בסיסי. גישת המורין שלנו מאפשרת לענות על שאלות אימונולוגיות על המכיניסטים והקינטיקה של התפתחות פגיעה חריפה בריאות ביונקים. זעיר פולשניות, טיפול פשוט, כמו גם רבייה טובה הם היתרונות העיקריים של טכניקה זו.בנוסף, עם טיטריון מינון, אנחנו יכולים לווסת את האפקט הקליני. טכניקה זו משקפת את המצב הקליני של חולים עם פגיעה חמורה בריאות ומאפשרת לחקור את המנגנונים הבסיסיים. לאחסן lipopolysaccharide, או LPS, ב aliquots בריכוז של חמישה מיליגרם למיליליטר במינוס 20 מעלות צלזיוס.להזרמה תוך-אצ'יאלית, לדלל את LPS מופשר מלוחים פוספט סטריליים לריכוז סופי של 2, 000 מיקרוגרם למיליליטר. חותכים קטטר ור הווריד 22-מד לאורך של 20 מילימטרים. מניחים את העכבר במצב נוטה על שולחן מבוקר טמפרטורה כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של 37 מעלות צלזיוס.בעקבות הרדמה כמתואר בפרוטוקול הטקסט, להחיל חומר סיכה עיניים סטרילי כדי למנוע התפלה של קרניות תחת הרדמה. הרם את חותכי הראש והקרס על פס אופקי ממוקם כחמישה סנטימטרים מעל השולחן בעוד הישבן נשאר בקשר הדוק עם השולחן. להאריך את הצוואר בזווית של 90 מעלות יחסית לשולחן.מניחים מקור אור קר על העור מעל הגרון כדי לעזור לדמיין את מיתרי הקול ולכוון קנה הנשימה. החזק את הלשון עם מעצורים כדי ליישר את הגרון לתנאי צנרור קלים יותר. הדמיה וזיהוי נאותים של הגרון הם קריטיים כדי להבטיח מיקום תוך-רשאלי נכון של הקטטר.מקור אור קר חיצוני מסייע בשלב זה. הכנס את הקטטר כ 10 מילימטרים לתוך קנה הנשימה. ודא כי הכניסה אינה עמוקה מדי, כמו זה יגרום החדרה חד צדדית של נוזל לתוך הסופת הראשית הימנית או השמאלית.אם מתרחשת התנגדות של הגרון, לסגת קטטר כמה מילימטרים לפני התקדמות שוב. עכשיו, להזריק MPBS מדולל LPS באמצעות פיפטה. נפח מוזרק תלוי במשקל גוף העכבר.חבר מזרק והוסף בולוס של 50 מיקרוליטרים של אוויר כדי להבטיח את נפח הנוזל המלא מופץ בריאות. הסר לאט את הקטטר. שמור על פלג הגוף העליון של העכבר במצב זקוף במשך 30 שניות, כדי למנוע דליפה של הנוזל מקנה הנשימה.תקן את העכבר המתת ים עם קלטת על שולחן הניתוחים וזמן קצר לחטא את הפרווה מעל הבטן עם 70% אתנול. פתח את חלל הבטן בזהירות בקו החציוני עם מספריים פינצטה. הסר חלקים של המעי כדי להשיג גישה לוונה קאווה נחות הזכות לעמוד החוליות באבי העורקים הבטן.אתר את ורידים בכליות ולהכניס מכופף, 23-מד cannula מחובר מזרק מיליליטר אחד לתוך וריד קאווה נחות, ישירות מתחת להתכנסות של ורידים. שאפו 250 מיקרוליטרים של דם והעברו לצינור 1.5 מיליליטר מלא ב-20 מיקרוליטרים של תותב EDTA טוחן 0.5. לנער בעדינות כדי להקל על ערבוב EDTA ולשים את הצינור על קרח.עבור lavage ברונכואלוולאר, להכין שלושה מזרקים מיליליטר אחד, כל אחד עם 0.5 מיליליטר של PBS סטרילי ו 0.1 מיליליטר של אוויר. לחטא את הפרווה של הגרון עם 70% אתנול בזהירות לחשוף את קנה הנשימה עם מספריים פינצטה. לגייס את קנה הנשימה ולעטוף תפר סביבו.לנקב את קנה הנשימה באמצעות מיקרו מספריים ולהכניס קטטר ורסי 22-מד, לחתוך לאורך של 20 מילימטרים. לתקן את הקטטר עם תפר ולהחדיר 0.5 מיליליטר של PBS סטרילי ו 0.1 מיליליטר של אוויר. שאף את הנוזל לאחר 60 שניות.חזור על ההליך עם שני מזרקים נוספים ולאסוף את כל שאף בצינור 15 מיליליטר על קרח. בזהירות לפתוח את בית החזה עם מספריים פינצטה כדי לקצור את הריאות. חותכים את הסרעפת לאורך השוליים costal לחתוך דרך הצלעות עם שני חתכים משניים.בזהירות להימנע מנקב את הריאות. הרם את עצם החזה בקרניות ותקן או הסר אותו. הכינו שני מזרקים של 10 מיליליטר עם PBS חם של 37 מעלות.לעשות חתך קטן לחדר השמאלי. לנקב את החדר הימני עם cannula 26-מד. לאחר מכן, לשטוף את זרימת הדם ריאתי עם PBS מחומם מראש.שים לב שהריאות הופכות חיוורות במהלך ההליך. מוציאים את האונה הימנית של הריאות וחותכים אותה לחצאים. הצמד להקפיא אותם חנקן נוזלי ואחריו אחסון לטווח ארוך במינוס 80 מעלות צלזיוס לביטוי גנים נוסף וניתוח חלבון.הסר את כל הריאה השמאלית והומוגניזציה אותו בצלחת 48 היטב על ידי טחון הרקמה עם מספריים פינצטה. דגירה הרקמה בשני מיליליטר של חיץ עיכול ב 37 מעלות צלזיוס במשך 60 דקות. בצע הומוגניזציה נוספת על ידי צינורות בזהירות חתיכות רקמת הריאה למעלה ולמטה.מעבירים את דגימות הדם לחמישה צינורות FACS מיליליטר ומערבבים בעדינות את הדם עם שני מיליליטר של חיץ תותבת תא דם אדום. שים את הצינורות על קרח ולסיים את התגובה לאחר שתי דקות על ידי הוספת שני מיליליטר של PBS קר כקרח. צנטריפוגה המדגם במשך חמש דקות ב 400 פעמים g ולהשליך את העל טבעי.תן שימוש חוזר לכדור התא עם 60 מיקרוליטרים של מאגר FACS ותהליך הכתמת FACS עוקבת בהתאם לפרוטוקולים שתוארו קודם לכן. נוזל BAL צנטריפוגה במשך חמש דקות ב 400 פעמים g. שאף את העל-טבעי והקפיא אותו בחנקן נוזלי ואחריו אחסון ארוך טווח במינוס 80 מעלות צלזיוס לניתוח חלבון נוסף.לאחר שימוש חוזר גלולת התא BAL עם שני מיליליטר של חיץ FACS קר, להעביר את ההשעיה לתוך צינור FACS חמישה מיליליטר באמצעות מסנן רשת 100 מיקרון כדי לרסן את השערות. לאחר צנטריפוגה המדגם שוב, resuspend את גלולה עם 60 microliters של חיץ FACS ותהליך הכתמת FACS הבאים על פי פרוטוקולים שתוארו קודם לכן. עכשיו, להעביר את רקמת הריאה השמאלית מתעכל לתוך צינור FACS חמישה מיליליטר באמצעות מסנן רשת 100 מיקרון כדי לחלץ גושים.לסיים את תהליך העיכול על ידי הוספת שני מיליליטר של חיץ FACS קר כקרח לפני צנטריפוגה המדגם במשך חמש דקות ב 400 פעמים g. להשליך את supernatant ולתלות מחדש את גלולה עם 60 microliters של מאגר FACS ותהליך עבור כתמים FACS הבאים על פי פרוטוקולים שתוארו קודם לכן. לניתוח FACS, הוסיפו 20 מיקרוליטרים של פתרון חסימת נוגדנים CD16/CD32 ל-60 מיקרוליטר של תאים בצינור של חמישה מיליליטר.דגירה התאים בארבע מעלות צלזיוס במשך 15 דקות כדי לחסום כריכה לא ספציפית של אימונוגלובולין לקולטנים Fc. בינתיים, הכינו תמהיל ראשי עם מאגר FACS ונוגדנים, כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר החסימה, אין לשטוף את התאים.הוסף 20 מיקרוליטרים של תערובת אב נוגדנים לכל מדגם כדי להשיג נפח סופי של 100 מיקרוליטר. דגירה הדגימות במשך 20 דקות, בחושך, בארבע מעלות צלזיוס. לשטוף כל מדגם עם מיליליטר אחד של חיץ FACS וצנטריפוגה כמו קודם.השלך את העל-טבעי והתן מחדש את גלולת החיץ עם מאגר FACS לריכוז התאים המתאים למדידות FACS. לבסוף, הוסף מספר קבוע של חרוזי כיול מסחריים זמינים בזוגות פלואורוכרום לכל מדגם כדי לקבוע מספרי תאים מוחלטים. בצע ציטומטריית זרימה באמצעות אסטרטגיית gating המוצגת בפרוטוקול הטקסט עבור תאי דם, BAL ורקמות.24, כמו גם 72 שעות לאחר החדרה תוך-אצ'ית, הביטוי של TNF-אלפא ברקמת הריאה היה מוסדר באופן משמעותי, להגיע לעלייה מתמשכת יותר מ 50-פי לעומת חיות הבקרה. פלישת לאוציט לתוך רקמות וחלל מכתביים היא סימן היכר ומאפיין להתפתחות של פגיעה חריפה ריאות. ניתוח FACS חשף חדירה משמעותית של גרנולוציטים נויטרופילים לתוך interstitium הריאות, עם ספירת תאים מוחלטת גדל כמעט פי תשעה לעומת הפקדים לאחר 24 שעות.ספירת גרנולוציטים נויטרופילים מוחלטת ירדה מעט לאחר 72 שעות, עם זאת, עליית הפקטור בהשוואה לפקדים נשארה. בקנה אחד עם חדירת גרנולוציטים נויטרופילים interstitial, ביטוי MMP-9 ברקמת הריאה כולה גדל באופן משמעותי במהלך תקופת התצפית הכוללת. גרנולוציטים נויטרופילים לא רק גדלו ברקמת הריאה, אלא גם בנוזל BAL.עליית הקיפול בהשוואה לבעלי חיים שולטים הייתה בולטת יותר מאשר ברקמת הריאה. בצקת ריאות עקב פגיעה חמורה של מחסום alveolocapillary הוא פתוגנומוני להתפתחות של פגיעה ריאות חריפה. ניתוח של תוכן אלבומן בנוזל BAL על ידי ELISA חשף אובדן משמעותי של תפקוד מחסום ב 24 שעות ו 72 שעות לאחר החדרת LPS.מיקום קטטר נכון הוא חיוני להחדיר דו-צדדית של LPS. לעתים קרובות, שינויים בדפוסי הנשימה, כגון שיעול או התנשפות, מצביעים על ההטבה האינטראצ'ית הנכונה של הנוזל. לאחר אינדוקציה של פגיעה חריפה בריאות, מספר צעדים הבאים, כגון ניתוח FACS, PCR, זיהוי חלבון, עשוי להתבצע כדי לענות על שאלות המחקר המתאימות.

inducing-acute-lung-injury-mice-direct-intratracheal

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Instillations Intratracheal לספק מומסים ישירות לריאות. הליך זה מטרות אספקת instillate לתוך אזורים דיסטלי של הריאה, ולכן שולבו לעתים קרובות במחקרים שמטרתם ללמוד alveoli. אנו מספקים הישרדות פרוטוקול מפורט לביצוע instillations intratracheal בעכברים.

החדרה ישירה של קנה הנשימה אל הריאות מומסים עכבר

מודל Murine לפגיעה ריאות הנגרמת ההנשמה הוא כלי חשוב ללמוד פציעה ריאות...

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

מקור: רדולוביץ', ק., ואחרים. הזרקות של ליפופוליסכריד לעכברים כדי לחקות כניסת מוצרים שמקורם במיקרוביאליזם לאחר פריצת מחסום מעיים. J. Vis. Exp. (2018)הסרטון הזה מדגים הליך שלב אחר שלב להזרקת ליפופוליסכריד (LPS) לעכברים תוך-פריטונית כדי לגרום לדלקת מערכתית.

הזרקה תוך-פריטונית של ליפופוליסכריד חיידקי בעכברים לחקר תגובות חיסוניות מערכתיות

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury in Mice for Exosome and Immune Analysis

התגובה החיסונית המארחת לזיהום הפתוגן היא תהליך מוסדר היטב. ניצול מודל חשיפת ריאות lipopolysaccharide בעכברים, ניתן לבצע הערכות ברזולוציה גבוהה של המנגנונים המורכבים הקשורים להיווצרות מחלה.

הניצול של לוע התחתון Intratracheal PAMP מנהל ושטיפה ברונכואלוואולרית כדי להעריך את תגובת מארח חיסון של עכברים

אנו מתארים שיטה לגרימת דלקת ריאות neutrophilic על ידי אתגר לlipopolysaccharide תרסיס על ידי עִרפּוּל, מודל פציעת ריאות חריפה. בנוסף, טכניקות ניתוחיות בסיסיות לבידוד ריאה, אינטובציה לקנה הנשימה ושטיפה ברונכואלוואולרית הם גם תיארו.

שיטה ליצירת ריאות neutrophilia שימוש התרסיס lipopolysaccharide

intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT) של חומרים כימיים היא שיטה מצוינת, לא פולשנית ללימוד מחלות בדרכי הנשימה, כמו גם שיטה להחדרת חומרים כימיים טיפוליים ישירות לתוך הריאות. זוהי שיטה מהירה ושחזור ביותר אשר מתאימה לניסויים פרה-קליניים.

Intratracheal החדרת תיווך אינטובציה (IMIT): מערכת לא פולשני, ריאות ספציפי משלוח

הטיות סלקטיבית של חומצת הסימפונות לריאה השמאלית בעכברים גורמת לפגיעה בריאה חד צדדית ועצמית מוגבלת, אשר מודלים תסמונת מצוקה נשימתית חריפה של האדם (ברווזים) הנגרמת על ידי שאיפה חומצת קיבה.

מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות

אוזון משולב ועכברים חשופים אנדוטוקסין חיידקי מראים מוות תאי נרחב, כולל זה של נויטרופילים. ראינו התאמות תאיות כגון שיבוש של lamellipodia ציטוסלטל, ביטוי תאי מוגבר של subunit סינתאז V ATP מורכב β ואנגיוסטין בשטיפת ברונכו-מכתשית, דיכוי התגובה החיסונית ריאות וגיוס נויטרופילים מעוכבים.

הדמיה של התאמות תאיות ריאות במהלך אוזון משולב ו- LPS המושרה פגיעה ריאות חריפה מורין

כאן, אנו מציעים פרוטוקול להעברת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי (LPS) באמצעות אינטובציה אנדוטרכאלית אורופרכאלית לא פולשנית. שיטה זו ממזערת את הטראומה של ההליך הכירורגי עבור החיה ומעבירה LPS מדויק לקנה הנשימה ולאחר מכן לריאות.

החדרת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי לא פולשני בעכברים

במחקר זה, טכניקת החדרה אנדוטרכיאלית לא פולשנית הוכחה כמפתחת ALI בעכברים באמצעות לרינגוסקופ בסיסי להבטחת העברת LPS מדויקת לריאות. ה-LPS מושתל דרך צינור אנדוטרכיאלי באמצעות לרינגוסקופ. גודל הפגיעה בריאתיות מוערך במספר נקודות זמן.

מתן לא פולשני של ליפופוליסכריד באנדוטרכיה כדי לגרום לפגיעה ריאתית חריפה אצל מכרסמים

למדו שיטה לגרימת פציעה חריפה בריאות בעכברים באמצעות הזרקת LPS intratracheal. טכניקה זו מאפשרת ניתוח FACS של דם, נוזלי שטיפה ורקמת ריאה לחקר מנגנונים אימונולוגיים.

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

גלה סרטונים נוספים