Name: מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 s
Description: למד שיטת ברונכיט חד צדדית של חומצה בעכברים ליצירת מודל פגיעה ריאתית חריפה. שיטה זו מאפשרת חקר ממוקד של תגובת דלקת והחלמה בריאה השמאלית תוך שימוש בימין כבקרה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות לד ר יוסף מיזגרד על תרומתו לפיתוח השיטה הסלקטיבית של הסימפונות ולהערות העזרה והסקירה של כתב היד. עבודה זו נתמכת על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענקי P01GM095467 (B.D.L.) ו K08HL130540 (R.E.A.).

כל ההליכים בעלי החיים להלן נבדקו ואושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים והשתמש בבית החולים לנשים (פרוטוקול #2016N000356).
הערה: הטכניקה הסטרילית הייתה בעקבותיו. עבור כל נוהלי ההישרדות שדה סטרילי הוקם עבור כל ניתוח באמצעות מגבת מנוקה וסטרילי, בעוד מנתחים לבשו כפפות כירורגי סטרילי, כובעים, מסכות, ומעילים נקיים מעבדה. כל כלי הניתוח היו מעוקרים באמצעות החיטוי, ואת העקרות נשמר באמצעות חרוז מחוטא.
1. הכנת 0.1 N HCl
<ol><li>הוסף 11 מ ל של ddH2O לבקבוק זכוכית ענבר. לאט להוסיף 1 מ ל של 37% HCl (12 N) כדי ליצור 1 N HCl מלאי עבודה. זהירות: ודא HCl נוסף לתוך המים. זוהי דאגה בטיחות כי הוספת מים ישירות חומצה יכול לגרום חומצה לרתיחה להתיז מתוך הבקבוק. כאשר הטיפול HCl מרוכז, לוודא את החומצה נשמר במכסה כימי של פרקו ואת ציוד המגן האישי המתאים הוא שחוק, כולל חלוק מעבדה, כפפות, ומשקפיים בטיחות.</li>
	<li>לאט להוסיף 4 מ ל של מלאי מדולל בעבר HCl לתוך 35 mL של ddH2O ב-50 ml שפופרת חרוט ליצור 0.1 N HCl מלאי ניסיוני.</li>
	<li>למדוד את ה-pH של המניה ניסיוני באמצעות בדיקה pH אלקטרונית לאחר כיול שתי נקודות באמצעות פתרונות pH נמוך. Titrate ל- pH 1.1 באמצעות מניות Naoh או HCl פתרונות לפי הצורך, כך אמצעי האחסון הסופי הוא 40 mL. הערה: מדידת ערכי ה-pH הנמוכים עלולה להיות קשה. כדי להבטיח מדידה מדויקת, ודא כי הבדיקה pH הוא מכויל כראוי באמצעות סטנדרטים pH נמוך כדי למנוע אומדן מעל של המדידה.</li>
	<li>מיד לפני הניסוי, לסנן 1 – 2 מ ל של המניה הניסיונית HCl באמצעות מסנן סטרילי 0.22 יקרומטר לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי.</li>
</ol>2. סלקטיבי בסימפונות של הHCl
<ol><li>
הכנת האזור הכירורגי
	<ol>
<li>לגרום הרדמה כללית על ידי אספקת קטמין (100 מ"ג/ק"ג) ו xylazine (10 מ"ג/ק"ג) תערובת על ידי הזרקת הצפק. ודא שהעכבר מורדם לחלוטין על-ידי סחיטה עדינה של קצה הזנב או הרגל האחוריות. העדר תגובת גמילה נדרש לפני ביצוע חתך העור.  אם יש צורך בבולבי הרדמה נוספים.</li>
		<li>לספק 0.1 mg/ק"ג של בופרנורפין תת-עורי תחת העורף של הצוואר. כאבים לפני הניתוח יחזק את ההשפעה של ההרדמה ויהיה שפר לפני ואחרי הניתוח כאב הנובע מההליך.</li>
		<li>השימוש קוצץ חשמלי כדי לגלח בעדינות את האזור כירורגי על המשטח הגחוני של העכבר, מתחת לסנטר באזור הצוואר הצווארי של הגרון, באמצעות משיכות איטית כלפי מטה. להסיר פרווה רופף כדי לחשוף באופן מלא את העור הבסיסי.</li>
		<li>להכין את האזור כירורגי ידי שאיפה את האתר מגולח עם 10% povidone-פתרון יוד. לאחר החלת הפתרון אספטי, לנקות את האתר באמצעות שימוש בספוגית אלכוהול איזופרופילי 70%. חזור על שלב 3 x.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
בידוד קנה הנשימה
	<ol>
<li>מניחים את העכבר במצב פרקדן על לוח כירורגי נקי לכסות את העכבר בתוך כירורגית סטרילי ולשמור על חשיפה של האזור כירורגי. . אבטחו את המקום</li>
		<li>לעשות חיתוך האורך 0.5 ס מ בעור מעל קנה הנשימה ואת בלוטות הרוק. השתמש מלקחיים משונן מעט מעוקל כדי למשוך בזהירות את העור ולהפריד בעדינות את בלוטות הרוק כדי לחשוף את השרירים הקנה.</li>
		<li>באמצעות מלקחיים משונן לניתוח קהה, בעדינות לדחוף את השרירים paratracheal ולהקניט את הfascia כי הוא מסביב לקנה הנשימה עד טבעות הסחוס של קנה הנשימה חשופים לחלוטין.</li>
		<li>השתמש מלקחיים משונן מלאה מעוקל להרים את קנה הנשימה ולהפריד את רקמת החיבור בין קנה הנשימה הרטרו לבין רטרו-fascia. לאחר רקמת החיבור מנותקת, קצה המלקחיים צריך להחליק לחלוטין מאחורי קנה הנשימה.</li>
		<li>לשמור על מלקחיים מעוקל מאחורי קנה הנשימה ולתפוס 10 – 15 ס"מ פיסת 4-0 משי תפר קלוע עם קצות מלקחיים. משוך את התפר מאחורי קנה הנשימה כך שיהיה אורך אפילו משני צדדיו.</li>
		<li>ברגע שתפר נמצא במקומו, משוך בעדינות את צדי התפר לכיוון האחורי של העכבר והחזק את הצדדים במקומם.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
באופן סלקטיבי ברונולאת הגזע השמאלי ברונזה והחדרת הHCl
	<ol>
<li>קח a 24 G x 3/4 "אנגיוצנתר והכנס את המחט, משופע למעלה, לתוך האזור הקדמי של קנה הנשימה בין טבעות הקנה הראשון והשני. לאחר ההכנסה הנכונה מאושר על ידי ויזואליזציה ישירה של קצה המחט בתוך לומן הקנה, לשחרר את התפר ולקדם את הצינורית מעל המחט לתוך קנה הנשימה עד ההתנגדות הוא הגיע, ואז לסגת את המחט. להטות את כיוון הכניסה לכיוון מחסום הגבעול השמאלי הראשי לצורך בניה סלקטיבית בריאה השמאלית.</li>
		<li>לאחר הצינורית היא במקום, לתפוס בחוזקה את יציאת ההזרקה כדי למנוע את הקטטר מן הסטה.</li>
		<li>באמצעות P200 P200 מעוקר וסטרילי טיפים, להחדיר 2.5 mL/ק ג (50 μL for 20 עכבר) של סטרילי מסוננים 0.1 N HCl לתוך הצנתר, ואחריו נפח זהה של האוויר.</li>
		<li>במהירות למשוך את הצנתר ולהרים את הלוח הכירורגי לזווית 60 ° עבור 30 s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
סגירת האזור הכירורגי
	<ol>
<li>הנח את הלוח הכירורגי והוצא. את התפר מאחורי קנה הנשימה</li>
		<li>השתמש 4-0 שעווה מצופה משי קלוע תפר לסגור את חתך העור באמצעות 2 – 3 תפרים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. טיפול שלאחר הניתוח
<ol><li>לאחר החתך סגור, מניחים את העכבר בצד שמאל על משטח חימום חם עד העכבר מתאושש מן ההרדמה. בגין הפיקוח על העכבר על הכאב ורמת הפעילות לפני החזרתם אותו לדיור נורמלי. הערה: בופראורפין צריך להיות מנוהל ב 0.1 מ"ג/ק"ג תת-עורי כל 6-12 h עבור הראשון 24 ה. אם כאב פריצת דרך מתמשך הוא נוכח, להאריך את משטר כאבים עד הכאב הצדדים.</li>
</ol>4. ריאה מלאה ברונשיים ששטיפה (BAL) ו לוקיציט הקלדה
<ol><li>
המתת חסד העכבר על ידי ניהול 3x את המינון של קטמין/xylazine בשימוש שלב 2.1.1.
	<ol>
<li>כדי להבדיל בין ביניים intravascular נויטרופילים, להזריק באופן מידי fluorophore שנבחרו התווית Ly6G נוגדן 5 דקות לפני המתת החסד. תווית זו צריכה להיות מתאימה לאיתור על-ידי cy, לנסות להבחין intravascular נויטרופילים מתוך ביניים של ריאה מכתשי נויטרופילים, אשר יהיה מתויג במהלך הכנת רקמות עם fluorophore שונים (ראה להלן).</li>
	</ol>
</li>
	<li>מניחים את העכבר על לוח כירורגי לחבר את החותכות הקדמי סביב לולאה של 2-0 משי תפר קלוע.</li>
	<li>בצע את השלבים 2.2.2 – 2.2.6. להכין את קנה הנשימה לצינורית. הערה: ודאו שהסרעפת אינה נוקבת כדי למקסם את הלחץ מנפח טרנס-מכתשי בזמן ששטיפה הריאה; שמאל תאימות הריאה יורדת לאחר הפציעה, אשר עשוי לדרוש הלחץ הטרנס מכתשי גבוה הדרישה לשטיפה ריאות.</li>
	<li>צינורית קנה הנשימה הבא בשלב 2.3.1, אבל לא לקדם את הקטטר מתחת לקרינה; להכניס את הצנתר במקביל לקנה הנשימה.</li>
	<li>עם הקטטר מוכנס, לקשור את תפר סביב קנה הנשימה כדי להחזיק את הקטטר במקום.</li>
	<li>להחדיר ולמשוך שני ברציפות 1 mL מתחת לקרח קר-/-(ללא מגנזיום או סידן) עם 0.6 mM EDTA באמצעות מזרק 1 cc. עבור immunophenotyping קלדה על ידי הזרמת cy, להסיר כל סדרת מחלקים ו לחזור 5 מ"ל פוליסטירן מוקצף הצינור על הקרח.</li>
	<li>על מנת להבטיח המתת חסד, בצע ניקור מותני באמצעות מספריים כירורגיים ואחריו ניקוב לב. ניתן לקצור את הריאות לצורך עיבוד נוסף.</li>
	<li>צנטריפוגה את BAL עבור 10 דקות ב 800 g ב 4 ° צ' כדי לצנפה את התאים.</li>
	<li>Decant סופרנטאנט לתוך שפופרת מיקרוצנטריפוגה 2 mL ו סדרת מחלקים לתוך 1.5 mL מיקרוצנטריפוגה צינורות. חנות at-80 ° c עבור הניתוח הבא.</li>
	<li>השהה מחדש את הגלולה הסלולרית ב-PBS-/-עם 2% FBS עבור ניתוח דיפרנציאלי לוקיציט על ידי הזרמת cy, try.</li>
	<li>כדי להבדיל בין ביניים intravascular נויטרופילים, להסיר את הריאה השמאלית והימנית בנפרד ולעבד את הריאות לזרימה cy, לנסות כמו בתוך עבדול ואח '. 20146.</li>
	<li>כתם ההשעיה התא שנוצר באמצעות נוגדנים FACS שנבחרו, וודא כתם עבור Ly6G כי הוא מצועם עם fluorophore שונים מאשר הנוגדן Ly6G משלב 4.1.1.</li>
</ol>5. הערכה של חדירות המכשול באמצעות צבען כחול של אוון (EBD)
<ol><li>הכנס באופן פנימי את הצבע הכחול של אוון (40 מ"ג/ק"ג) 30 דקות לפני המתת חסד.</li>
	<li>המתת החסד העכבר באמצעות מנת יתר קטמין/xylazine (שלב 4.1).</li>
	<li>כדי למדוד מכתשיים שלמות המכשול, בצע את שלבים 4.2 – 4.9 עבור אוסף BAL.</li>
	<li>העבר 100 μL של BALF לתחתית ברורה 96-ובכן microplate, יחד עם 100 μL של תקני EBD כפולים. השתמש ב-PBS-כריק.</li>
	<li>השתמש בקורא מיקרופלייט כדי למדוד את ספיגת הבאלף ב620 nm ו740 ננומטר. השתמש בספיגה ב 740 ננומטר כדי לתקן את הזיהום מוגלובין בדגימות7.</li>
	<li>כדי למדוד את שלמות המחסום כלי הדם, מבשם הריאות על ידי הזרקת באיטיות 5 מ ל של הקרח קר PBS-/-דרך החדר הימני של הלב. . הסירו את הריאה השמאלית</li>
	<li>יבש את הריאה השמאלית עבור 72 h ב 58 ° צ' כדי להסיר את המים העודפים.</li>
	<li>לעבד את רקמת הריאה מיובש כמו ראדו ו Chernoff 20138, ולמדוד את ספיגת ב 620 nm ו 740 nm.</li>
</ol>6. ריאה היסטולוגיה
<ol><li>צינורית קנה הנשימה באמצעות צעדים 4.1 – 4.5.</li>
	<li>כדי הלחץ לתקן את הריאות ב 20 ס"מ H2O, השתמש במעמד טבעת ומלחציים כדי להעלות מזרק 60 mL מצויד אבובים שסתומים מבוקר ומילא פתרון בחירה קבע (למשל, קבע אבץ) כך מניסקוס הפתרון הקבע הוא 20 ס מ מעל ה ריאות.</li>
	<li>לחבר את אבובים לצנתר ולפתוח את הערך. ממלאים לאט את הריאות בתיקונים עד שהם מפסיקים לנפח.</li>
	<li>להסיר את הצנתר 3/4 של הדרך מתוך קנה הנשימה. לקשור את קנה הנשימה עם תפר לפני באופן מלא הסרת קטטר כדי למזער את אובדן של הfixative.</li>
	<li>. הסר את הריאות והלב בלוק הערה: ודא כי הריאות לא מנוקב במהלך ההסרה כדי לשמור על הלחץ החדרת הספק.</li>
	<li>תקן את הריאות עבור 24 שעות ב 25 מ ל של התיקון בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>לשטוף את הריאות קבוע עבור רציפים 20 דקות מרווחי PBS-/-, 30% אתנול, ו 50% אתנול.</li>
	<li>לאחר השטיפה האחרונה, לאחסן את הריאות ב 70% אתנול עבור עיבוד היסטולוגיה כמו ב Eאיקרוס et al. 20139.</li>
</ol>

<ol><li>Baron, R. M., Levy, B. D., et al. Acute Respiratory Distress Syndrome. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaron%2C+RM+%22Harrison%27s+Principles+of+Internal+Medicine%2C+20e%22">Harrison's Principles of Internal Medicine, 20e</a>. Jameson, J. L. , McGraw-Hill Education. (2018).</li>
<li>Bellani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology%2C+Patterns+of+Care%2C+and+Mortality+for+Patients+With+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome+in+Intensive+Care+Units+in+50+Countries%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Epidemiology, Patterns of Care, and Mortality for Patients With Acute Respiratory Distress Syndrome in Intensive Care Units in 50 Countries.</a> The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 788-800 (2016).</li>
<li>The ARDS Definition Task. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Respiratory+Distress+Syndrome%3A+The+Berlin+DefinitionThe+Berlin+Definition+of+ARDS%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Acute Respiratory Distress Syndrome: The Berlin DefinitionThe Berlin Definition of ARDS.</a> The Journal of the American Medical Association. 307 (23), 2526-2533 (2012).</li>
<li>Thompson, B. T., Chambers, R. C., Liu, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Respiratory+Distress+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Respiratory Distress Syndrome.</a> New England Journal of Medicine. 377 (6), 562-572 (2017).</li>
<li>Krishnamoorthy, N., Levy, B. D., Walker, K. H., Abdulnour, R. -E. E., Engstrom, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specialized+Proresolving+Mediators+in+Innate+and+Adaptive+Immune+Responses+in+Airway+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Specialized Proresolving Mediators in Innate and Adaptive Immune Responses in Airway Diseases.</a> Physiological Reviews. 98 (3), 1335-1370 (2018).</li>
<li>Abdulnour, R. -E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maresin+1+biosynthesis+during+platelet-neutrophil+interactions+is+organ-protective%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Maresin 1 biosynthesis during platelet-neutrophil interactions is organ-protective.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (46), 16526(2014).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+permeability+assessed+by+fluorescent-labeled+dextran+instilled+intranasally+into+mice+with+LPS-induced+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Pulmonary permeability assessed by fluorescent-labeled dextran instilled intranasally into mice with LPS-induced acute lung injury.</a> PLoS ONE. 9 (7), (2014).</li>
<li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> Journal of Visualized Experiments. 73 (73), e50062(2013).</li>
<li>Eickmeier, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspirin-triggered+resolvin+D1+reduces+mucosal+inflammation+and+promotes+resolution+in+a+murine+model+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Aspirin-triggered resolvin D1 reduces mucosal inflammation and promotes resolution in a murine model of acute lung injury.</a> Mucosal Immunology. 6 (2), 256-266 (2013).</li>
<li>Abdulnour, R. -E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholipase+D+isoforms+differentially+regulate+leukocyte+responses+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Phospholipase D isoforms differentially regulate leukocyte responses to acute lung injury.</a> Journal of Leukocyte Biology. 103 (5), 919-932 (2018).</li>
<li>Fukunaga, K., Kohli, P., Bonnans, C., Fredenburgh, L. E., Levy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclooxygenase+2+Plays+a+Pivotal+Role+in+the+Resolution+of+Acute+Lung+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cyclooxygenase 2 Plays a Pivotal Role in the Resolution of Acute Lung Injury.</a> Journal of Immunology. 174 (8), 5033(2005).</li>
<li>Colby, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolvin+D3+and+Aspirin-Triggered+Resolvin+D3+Are+Protective+for+Injured+Epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Resolvin D3 and Aspirin-Triggered Resolvin D3 Are Protective for Injured Epithelia.</a> American Journal of Pathology. 186 (7), 1801-1813 (2016).</li>
<li>Bonnans, C., Fukunaga, K., Keledjian, R., Petasis, N. A., Levy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+phosphatidylinositol+3-kinase+by+polyisoprenyl+phosphates+in+neutrophil-mediated+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Regulation of phosphatidylinositol 3-kinase by polyisoprenyl phosphates in neutrophil-mediated tissue injury.</a> The Journal of Experimental Medicine. 203 (4), 857-863 (2006).</li>
<li>Mandell, L. A., Niederman, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspiration+Pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Aspiration Pneumonia.</a> New England Journal of Medicine. 380 (7), 651-663 (2019).</li>
<li>Seki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-inflammatory+and+proresolving+mediator+resolvin+E1+protects+mice+from+bacterial+pneumonia+and+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The anti-inflammatory and proresolving mediator resolvin E1 protects mice from bacterial pneumonia and acute lung injury.</a> Journal of Immunology. 184 (2), 836-843 (2010).</li>
<li>Abdulnour, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspirin-triggered+resolvin+D1+is+produced+during+self-resolving+gram-negative+bacterial+pneumonia+and+regulates+host+immune+responses+for+the+resolution+of+lung+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunology%22%5BJournal%5D)">Aspirin-triggered resolvin D1 is produced during self-resolving gram-negative bacterial pneumonia and regulates host immune responses for the resolution of lung inflammation.</a> Mucosal Immunology. 9 (5), 1278-1287 (2016).</li>
<li>Traber, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-epithelial+cross+talk+coordinates+synthesis+of+the+tissue-protective+cytokine+leukemia+inhibitory+factor+during+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Myeloid-epithelial cross talk coordinates synthesis of the tissue-protective cytokine leukemia inhibitory factor during pneumonia.</a> American journal of physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 313 (3), L548-L558 (2017).</li>
<li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+lung+epithelium+in+neutrophil+recruitment+during+pneumococcal+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Roles of lung epithelium in neutrophil recruitment during pneumococcal pneumonia.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 253-262 (2014).</li>
<li>Acute Respiratory Distress Syndrome Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventilation+with+Lower+Tidal+Volumes+as+Compared+with+Traditional+Tidal+Volumes+for+Acute+Lung+Injury+and+the+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Ventilation with Lower Tidal Volumes as Compared with Traditional Tidal Volumes for Acute Lung Injury and the Acute Respiratory Distress Syndrome.</a> New England Journal of Medicine. 342 (18), 1301-1308 (2000).</li>
<li>Peng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+nitric+oxide+synthase+contributes+to+ventilator-induced+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inducible nitric oxide synthase contributes to ventilator-induced lung injury.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 172 (4), 470-479 (2005).</li>
<li>Abdulnour, R. -E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+stress+activates+xanthine+oxidoreductase+through+MAP+kinase-dependent+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical stress activates xanthine oxidoreductase through MAP kinase-dependent pathways.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 291 (3), L345-L353 (2006).</li>
<li>Serhan, C. N., Levy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolvins+in+inflammation%3A+emergence+of+the+pro-resolving+superfamily+of+mediators%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Resolvins in inflammation: emergence of the pro-resolving superfamily of mediators.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2657-2669 (2018).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

השיטה הפנימית בסימפונות המתוארת כאן משתמשת בצינורית סלקטיבית של מחסום הגזע השמאלי כדי להחדיר את HCl לתוך הריאה השמאלית, וכתוצאה מכך פגיעה חדה בריאה ומצומצמת ממורין. זה חומצה מורבית מודל פציעה מקרוב מייצג את התגובה דלקתית, histopathology, ותפקוד פיסיולוגי לראות בנות אדם, שבו השאיפה חומצת הקיבה הוא מאוד מצוי או גורם תורם4. חשיפה של נתיב האוויר murine לנמוך התוצאות pH נמוכה התוצאה חדירות מוגברת של מחסום מכתשי-נימי, מכתשי בצקת, והסתננות נויטרופילים עמוק באתר הפציעה. אירועים אלה אינם מצופים בריאה הימנית הבלתי נפגעת. בנוסף, מודל זה מייצר תגובות דלקתיות מהירה כי השיא בתוך 24 h בעקבות חומצות האיזולציה, ומניות שינויים בביטוי הגנים עם בעלי החיים האנושיים, כגון הביטוי הדיפרנציאלי של phospholipase D איזופורמים10.
למרות המודל הקדם-קליני המורכי הזה מתרבה רבות מהתכונות של כרטיסי הבית ברמות המולקולריות, הסלולר והרקמה, הוא אינו מסכם באופן מלא את בגדי האדם. ההגדרה של בגדי הגוף כוללת מעורבות דו-צדדית של הריאה3, ואילו השיטה הביזילסטית המתוארת כאן גורמת לעיצוב במחלת ריאות חד-צדדית. כמו-כן, בעלי החיים אינם מחייבים אוורור מכני רציף, חוסר ניידות, או הרדמה בלתי פוסקת. התוצאות המוצגות כאן (הארץ) ובמקומות אחרים6,9, 11,12,13 להדגים כי פציעה חד צדדית המושרה חומצה מתרבה את רוב הסימנים הפתולוגיים של בגדי הים תוך מתן הזדמנות ייחודית להשתמש בריאה הימנית כשליטה פנימית ללמוד את שלב הפתרון של מחלה זו. ככזה, המודל שדנו כאן מודלים בעלי ביולוגיה פתולוגית, אבל גם מאפשר חקירת מנגנונים של תגובות בסיסיות של רקמת הריאה מנגנוני הפגיעה והפתרון העשויים להיות רלוונטיים לטיפול במחלה חשובה זו.
הסטיזיללציה של HCl מייצגת פציעה בריאה חריפה, כך שהוא מידול היבטים של הפתופסולוגיה הקשורים השאיפה דלקת ריאות. בנוסף, הפגיעה הראשונית הימנית הראשונה במודל זה נוצרת באמצעות HCl סטרילי ולא חיידקים לפני הקיבה לאדן לראות כמה אירועים שאיפה אנושית שיכולים גם לגרום לדלקת ריאות14. אצל בני אדם, השאיפה של חיידקים פתוגניים יכול לגרום לדלקת ריאות משנית בקטריאלי המגדיל את התגובה הדלקתית חריפה, הארכת פציעת הריאה הראשונית והגדלת הרגישות החולה לפתח ברווזים14. זו מגבלה פוטנציאלית טופלה על ידי החוקרים בכוונה החדרת חיידקים פתוגניים Esהמאנכיה קולי (E. coli)15 אחרי HCl סטרילי. בנוסף, שיטה זו שימש לחקירת הפתוגן-תיווך דלקת דלקת ריאות בקטריאלי חד צדדית יכול להיגרם על ידי שמאל סלקטיבי הריאה השמאלית של חיידקים, כגון E. coli16,17, הפסאודומונס aeruginosa16, ודלקת ריאות סטרפטוקוקוס18 . המודל העצמי לפגיעה בריאות חריפה המתואר כאן עשוי לשמש גם כדי ללמוד פגיעה בריאה הנגרמת מהנשמה (שווילי), גורם חשוב של תמותה מוגברת האדם19. מודלים בעלי חיים ניסיוניים של שווילי בדרך כלל כוללים אוורור מכני בעכברים תמימים עם כרכים גאות, כי הם הרבה יותר גבוה ממה שמשמש קלינית לגרום לפציעה בריאה (> 15 מ ל/ק"ג; ראה עבודה קודמת20,21). לקראת המודל הרלוונטי יותר קליני של שווילי, ברונכיט-חומצה בסימפונות כמתואר כאן עשוי לשמש תחילה כדי לגרום נזק לריאות לא קטלני ואחריו אוורור מכני באמצעי הגאות בתוך טווח קליני (6-12 mL/ק"ג). מודל זה לבעלי חיים היפותטי עשוי לאפשר לחוקרים לחקור את שווילי בצורה הרלוונטית קלינית לאחר שפותחה ואומתה. יחד, אלה מודלים murine להדגיש את צדדיות של שיטת החוסר החלטיות סלקטיבי כדי ליצור עלבונות הריאות חד צדדית הדומה הפתווגיות הקשורים מחלות ריאה האדם.
בנוסף להתרת התערבות סלקטיבית של סוכני רעילים שונים אל הריאה השמאלית, טכניקת הסימפונות הפנימית לאחר הטיפול במעי הגס אינה דורשת הכשרה מורחבת, זמן הליך ארוך, או ציוד מורכב, ובידיים מנוסים גורם למצוקה מינימלית לבעלי החיים. למרות זאת, בעיות מסוימות עלולות להתרחש במהלך ההליך הסלקטיבי של HCl שיכול להשפיע על תוצאות נסיוניות. צינורית לא נכונה של ברופון הגבעול השמאלי הראשי עלולה לגרום לפגיעה בריאה הדו הפוחתת ההישרדות של עכברים ניסיוניים ומבלבלת את השימוש בריאה הימנית כשליטה פנימית שלא נפגעה. זה יכול להיות נמנע על ידי לדוג את הקטטר מספיק לכיוון הריאה השמאלית בזמן הצינורית עד ההתנגדות הוא הגיע. לאחר ההזרקה של HCl, מנת אוויר צריך להיות מוזרק, הקטטר הוסר במהירות, ואת לוח כירורגי הביא זקוף לזווית 60 °. שלבים אלה הם חיוניים להבטיח כי החומצה מגיע המרוחק של הריאה השמאלית ומונע ריפלוקס של חומצה לתוך הריאה הימנית וקנה הנשימה, אשר עלול לגרום לפציעה האבובה. תוך 24 שעות לאחר הפגיעה, הפציעה בריאה השמאלית מפוזרת עם בצקת ריאות נרחבת, המשפיעה על הריאה הארוכה והשמאלית ביותר.
במהלך פיתוח שיטה בוגרים 8-12 בשבוע עכברים ישנים, 2.5 mL/ק ג של ברונכיט ו-HCl הפיק נזק משמעותי עדיין לריאות חריפה; מינונים נמוכים יותר של HCl לא היתה פגיעה בריאה והומוגנית. למרות שאנחנו לא ביצעו את המודל הזה צעיר (למשל, 3-6 בן שבועות) או עכברים מבוגרים יותר (למשל, 10-14 חודשים בן), אנו צופים כי מינון מבוסס משקל של HCl יביא לפגיעה בריאה פנוטיפ דומה למה שצוין ב 8-12 שבוע העכברים הישנים. אנו ממליצים כי החוקרים נכייל מינונים HCl כדי להשיג את המידה הרצויה של פגיעה בריאות לפני ביצוע ניסויים עם עכברים בקיצוניות של משקל.
זה הליך בררני חומצה סלקטיבית מציע מודל מורטין לא קטלני של דלקת רקמה סטרילית המפחית את הצורך בטיפול תומך, כגון אוורור מכני. עם הישרדות מורחבת של עכברים פצועים, הדלקת הנגרמת חומצה יש מספיק זמן כדי לפתור את עצמו. שלב הרזולוציה של מודל זה נעשה שימוש כדי לזהות מוסדר באופן זמני מתווכים אקטיביים השומנים, כינה המקצועית pro-פתרון מתווכים (spms), כגון ליפושין A4 (lxa4), maresin 1 (MaR1), ו-resolvins6 ,11,12,16. ניהול SPMs האקסוגני לעכברים פצועים מהירות הרזולוציה של חומצה הנגרמת על ידי פגיעה מנגנונים דלקתיים וקידום catabasis של רקמת הריאה הפצועה. SPMs אלה לקדם את הסיווג של מכתשי בצקת12, להגדיל את efferocytosis של האפוטוטיק נויטרופילים על ידי מגויס מקרופאגים16, ולהאיץ את האפיתל מחדש של נתיבי הנשימה ומכתשי12 כדי להפחית את כלי הדם דליפת שומן ברקמה. במודל של פגיעת הפתוגן המושרה, 15-אפי-resolvin D1 גם הציגו פעולות מיקרוביאלית באמצעות phagocyציטוזה מוגבר על ידי מקרופאגים והסיווג חיידקי משופר מן הריאה הנגועה16. חקירת מנגנוני החלטה אנדוגניים אלה מספק תובנה אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות לחולים עם ברווזים5.
לחקר הטוב ביותר את הרגולציה הטמפורלית של מנגנוני הפענוח, במודלים ניסיוניים vivo נחוצים. מודלים של פגיעה בריאה חריפה חייבים לכלול תגובות דלקתיות חריפה ותפקוד איברים עם התחייבות של החלטה מארח קידום תהליכים מולקולריים וסלולריים. ניתן לכמת מנגנונים אלה באמצעות מדדי הרזולוציה הקבועים22. השיטה הסלקטיבית של הסימפונות ליצירת פגיעה בריאה חד צדדית הוכיחה שימושי בהקשר זה כדי לחקור מגשרים ומסלולים ברזולוציה אנדוגניים. מחקרים עתידיים להעמיק את הבנתנו את התהליכים הללו ברזולוציה האקטיבית יש את ההבטחה של מוביל אגוניסטים טיפולית כי לחקות את bioactions של המגשרים השומנים אנדוגניים כדי לשפר את הרזולוציה של דלקת ומקלים את התחלואה והתמותה של ברווזים ומחלות ריאות חשובות אחרות.

תסמונת מצוקה נשימתית חריפה (ברווזים) היא גורם חשוב לכשל נשימתי חריף1. זוהי מחלה נפוצה, קטלני או השבתת המתרחשת ב 10% של כל החולים הודה יחידות טיפול נמרץ ברחבי העולם2. על פי הגדרת ברלין3, ברווזים מוגדר על ידי התפרצות חריפה של כשל נשימתי ההיפוקסימית (< 1 שבוע) ומחלחל ריאתי דו צדדי על צילומי חזה שאינם מוסברים על ידי אי ספיקת לב4. הפתיולוגיה המשמשת כבסיס מתאפיינת בתגובה דלקתית מוגזמת. ניתן לפצוע את הריאה ישירות, כגון דלקת ריאות או השאיפה לחומצת קיבה, או בעקיפין, כגון אלח דם או לאחר עירויי דמים מרובים4. בעקבות העלבון הראשוני, מתקדמת הפתוגנזה בשלושה שלבים: שלבים מתרבים, מפיצים ושלבי הפיברוטיק1. שלבים אלה מאופיינים מנגנונים מולקולריים וסלולריים נפרדים ומנגנוני תיקון הקובעים את הפרוגנוזה של חולי ברווזים. טיפול תומך נשאר התומך התווך של חולים ברווזים; כיום, אין טיפולים תרופתי יעילים עבור ברווזים, אז יש צורך דחוף מחקר חדש על המצב הזה הרסני4.
דיסרגולציה של התגובה החיסונית מולדת במהלך השלב האקסוטיבי תורמת לתחילתה החריפה של כמויות וכישלון נשימתי משויך1. עוצמה pro-דלקתיות מגשר איתות התזמולי התגובות החיסונית הראשונית, המוביל לשיבוש של מחסום מכתשי-נימי, לפזר בצקת מכתשי, ו נויטרופילים הסתננות לאתר של פציעה רקמת ריאה4. בתוך מניות, אותות בלימה יעיל עבור דלקת חריפה להיפטר מכישלון ריאות והוא יכול לעכב catabasis בזמן של רקמת הריאה הפצועה5. למטרה זו, חקירה מראש בניסויים קליניים בייזום ומנגנוני ברזולוציה pro של ברווזים עלול לחשוף אסטרטגיות טיפוליות הרומן. חקירה זו מחייבת מוגבלות עצמית במודלים vivo של פגיעה בריאה חריפה, הדומה לתכונות של בעלי החיים האנושיים, ומאפשר חקירה של מנגנונים המשמשים את שלבי החניכה והפענוח של פציעת רקמות.
מודל murine הציג כאן מייצרת פגיעה ישירה בריאות חריפה אשר ממחיש את התהליכים הפתוביולוגי הקרדינל של ברווזים, כלומר מכתשי-נימי מחסום הסתננות ו נויטרופילים. השיטה מסתמכת על ברונכיט סלקטיבית בסימפונות של HCl באמצעות צינורית של הסמפון השמאלי של הגבעול, לוקליזציה את הפציעה ואת התגובה הדלקתית לריאה השמאלית; הריאה הימנית הבלתי נפגעת יכולה לשמש כשליטה פנימית לדטרמינציות בחירה של פגיעה ברקמה ודלקת. בנוסף, פגיעה בריאה חד-צדדית היא לא קטלנית וחושפת תוכנית פתרון. זה מציע חלון נפרד לתוך הרזולוציה של דלקת ריאות כי יכול להיות ממונפת לזיהוי של המגשרים הפרו-פתרון מתווכים ומנגנונים סלולריים לפתוח שדרות טיפוליות חדשות עבור ברווזים המדגיש את הפיזיולוגיה ברזולוציה ו פרמקולוגיה.

<table><tbody><tr><td>10x אבץ מקבע</td><td>BD Biosciences</td><td>552658</td><td></td></tr><tr><td>2-0 תפר משי</td><td>קלוע התמחויות כירורגיות</td><td>SP118</td><td></td></tr><tr><td>24 גרם x 3/4 אינץ' קטטר חד פעמי Safelet IV Excel</td><td></td><td>26751</td><td></td></tr><tr><td>33 מ"מ, 0.22 ומיקרו; m יחידת מסנן מזרק</td><td>Millipore-Sigma</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>4 "ארוך משונן קל עקומה Graefe מלקחיים</td><td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>4 "קצה ארוך משוננים עקומה מלאה מלקחיים Graefe</td><td>Roboz</td><td>RS-5137</td><td></td></tr><tr><td>4.5 " מספריים מיקרו חיתוך</td><td>Roboz</td><td>RS-5912</td><td></td></tr><tr><td>6 "מחזיק מחט עץ קריל</td><td>Roboz</td><td>RS-7860</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 60 מ"ל</td><td>BD Biosciences</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד עכבר FITC-Ly6G Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-9668-82</td> ניתן <td>להשתמש בפלואורופור מועדף</td></tr><tr><td>נוגדן נגד עכבר PE-Ly6G</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-9668-82</td><td>ניתן להשתמש בפלואורופור מועדף</td></tr><tr><td>מעקר</td><td></td><td></td><td></td>חרוזים</tr><tr><td>Betadine Solution Swabstick</td><td>בטדין</td><td>67618-153-01</td><td></td></tr><tr><td>בופרנקס</td><td>רקיט בנקיזר</td><td></td><td><חזק>NDC</חזק>: 12496-0757-1, 12496-0757-5</td></tr><tr><td>שקוף עם תחתית שטוחה 96 בארות מיקרופלייט</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>12565501</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeccos's Phosphate Buffered Saline (PBS) ללא Ca2+ או טכנולוגיות Mg+</td><td>life</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>קוצץ</td><td></td><td></td><td></td>חשמלי</tr><tr><td>חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA)</td><td>Millipore-Sigma</td><td>E6758</td><td></td></tr><tr><td>צבע כחול אוונס</td><td>Millipore-Sigma</td><td>E-2129</td><td></td></tr><tr><td>כרית</td><td></td><td></td><td></td>חימום</tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית, 37%</td> <td>Millipore-Sigma</td><td>258148</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>הנרי-שיין</td><td>56344</td><td></td></tr><tr><td>קורא מיקרופלייט (640, 720 ננומטר)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P200 פיפטה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P200 קצות</td><td></td><td></td><td></td>פיפטות</tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>pH</td></tr><tr><td>בדיקה מעמד טבעת עם מהדק</td><td></td><td></td><td></td>הארכה</tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול סטריליות</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>וילון עכבר סטרילי 8 אינץ' x 8 אינץ' עם דבק סגלגל</td><td>סטריס</td><td>88VCSTF</td><td></td></tr><tr><td>כפפות ניטריל סטריליות</td><td>קימברלי-קלארק</td><td>56890</td><td></td></tr><tr><td>וילון טרילי</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td></td></tr><tr><td>מצופה שעווה 4-0 תפר משי קלוע</td><td>Covidien</td><td>SS733</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>AKORN</td><td></td><td>NDC</חזק>: 59399-111-50</td></tr></tbody></table>

מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

ברונכיט סלקטיבית של חומצה הידרוכלורית (HCl) לברופון שמאל מורלין גורם לפגיעה ברקמה חריפה עם ממצאים יסטופתולוגיות דומה לתסמונת מצוקה נשימתית חריפה של האדם (ברווזים). בצקת מכתשיים, מכתשי-נימי-מחסום, וחדירת לוקיציט משפיעות בעיקר על הריאה השמאלית, ושומרת על הריאה הימנית כשליטה בלתי נפגעת ומאפשרת לבעלי חיים לשרוד. מודל זה של פגיעה עצמית מוגבלת בריאות חריפה מאפשר חקירה של מנגנוני רזולוציית רקמות, כגון מקרופאג efferocytosis של נויטרופילים האפוטוטיים ופיצוי של מכתשי-נימי שלמות המחסום. מודל זה עזר לזהות תפקידים חשובים עבור אגוניסטים ברזולוציה, כולל מתווכים מיוחדים בפתרון מקצועי (SPMs), מתן בסיס לפיתוח גישות טיפוליות חדשות עבור חולים עם ברווזים.

התוצאה הסלקטיבית של הסימפונות. גורמת לפציעה בריאה חריפה
השיטה של שיטת ברונכיט בלתי סלקטיבית של HCl לתוך הסמפון של הגזע השמאלי מומחש באיור 1A. פציעת הריאה החריפה כרוכה בריאה השמאלית כולה, ובעקבות המשך העירוי של EBD ומיזוג הריאה, ה-EBD נשארה רק בריאה השמאלית (איור 1B). בדיקת EBD בריאה השמאלית הייתה כמותית ונמצאה מוגברת באופן משמעותי יחסית לחוסר החלטיות בררני (איור 1C; מותאם מתוך עבדול ואח '. 20146). בתגובה לפגיעה בריאה, המחזור הלוקוציטים מתאים לרקמה הדלקתית. במודל זה, כלי דם נויטרופילים עוברים הגירה טראנס-אנדותל אל הריאה הפצועה interstitium. נויטרופילים ביניים המצטבר בריאה השמאלית 24 שעות לאחר HCl, בניגוד לריאה הימנית שבה כמה ביניים נויטרופילים הם נצפו (איור 1D). תוצאות אלו מעידות על כך ששיטת האנטי-ברונכיט המנובת המועלת בסימפונות הביאה לפגיעה בריאה חריפה, שהייתה מקומית ברובו לריאה השמאלית והפיקה שינויים פתולוגיים הנראים גם עם בעלי החיים האנושיים, כולל הגדלת מכתשיים-הפרת מחסום נימי וחדירת נויטרופילים.
פגיעה חדה בריאות חריפה מאפשרת חקירה של מנגנוני הפענוח
כדי ללמוד את השלב החלטה של הנגרמת חומצה חמורה פגיעה בריאות העכברים חייב להיות מסוגל לשרוד את העלבון הראשוני. ברור מתוך הHCl של intratracheal, הסטילציה לתוך רק מוביל שמאל ברונטה הגזע מובילה לפציעה עצמית מוגבלת עם הישרדות אחידה בעכברים בריאים אחרת. ניתן להשיג את הריאות מעכברים בזמנים מוקדמים או מאוחרים יותר כמו באיור 2A. היסטולוגיה ריאה מראה פגיעה ברקמה ודלקת על האיבר ברמה התאית עם דלקת האקסופית 24 שעות לאחר הפגיעה המאופיינת על ידי מסומן בצקת מכתשי ו נויטרופילים הסתננות בריאה השמאלית. שימו לב שאין פגיעה משמעותית או זרימה לאוקוציט לריאה הימנית שאינה נפגעת (איור 2 א). 72 h לאחר הפגיעה, בצקת ומחלחל הסלולר מופחתים באופן משמעותי, ומייצגים שלב מהווה פתרון. מכתשי נויטרופילים יכול להיות מפוקח על ידי הזרמת cy, CD45+/cd68-/F4/80-/ly6g+/cd11b+) המתקבל על ידי ששטיפה ריאות שלמה. הגידול נויטרופילים בריאה השמאלית 24 h בעקבות הפציעה הראשונית וירידה משמעותית ב 48 ו 72 h (איור 2B). אם נקודות זמן מאוחרות יותר נחקרים, מספרי נויטרופילים יחזרו לבסיס ומנגנונים בשלבים מאוחרים יותר של catabasis, כגון תגובות פיברומתרבים, ניתן ללמוד.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60024/60024fig1v2.jpg"> איור 1: האינסטילציה של HCl בסימפונות מייצרת פגיעה בריאה חד-צדדית המוגדרת על ידי הפרת מחסום מכתשי והסתננות נויטרופילים. (א) ייצוג של הצינורית של מורלין השמאלית הימנית של מורנה לצורך התסטיציה סלקטיבית של HCl אל הריאה השמאלית. (ב) הריאות הימנית (ב) והשמאל (LL) החשופים לחומצה סלקטיבית ולאחר העירוי של הצבע הכחול של אוון. (ג) קוונפיקציה של ביניים הצבע הכחול של אוון מן הומוגניים הריאה 24 שעות לאחר פגיעת חומצה או שליטה מזויף; שהוא מותאם מתוך עבדול ואח '. 20146. הערכים מייצגים את הממוצע ± SEM, כאשר n ≥ 5. *p &lt; 0.05, מאן-ויטני U מבחן. (ד) זרם הנציג cyintravascular try של העירוי (האינפוזיה; fluorophore 1) ו ביניים (I.S.; fluorophore 2) נויטרופילים כמו אחוזשל CD45 הכולל ותאים בריאה מעובד 24 שעות לאחר פגיעת חומצה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60024/60024fig1v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60024/60024fig2.jpg"> איור 2: פגיעה בריאה חד צדדית היא בפתרון עצמי. (א) נציג H &amp; E היסטולוגיה (10x) של ריאות שמאל שהתקבלו מעכברים תמימים (0 H) או עכברים 24, 48, 72 H לאחר הפציעה, יחד עם הריאה הימנית המשויכת מאותו עכבר (סרגל קנה מידה = 250 μm). (ב) זרם מייצג cy, מכתשי נויטרופילים (Ly6G+ CD11b+) שהתקבלו משטיפה שלמה של הריאה כאחוז הכולל CD45+ תאים ב נאיבי (0 h) עכברים או עכברים 24, 48, ו 72 h לאחר פגיעת חומצה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60024/60024fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

הטיות סלקטיבית של חומצת הסימפונות לריאה השמאלית בעכברים גורמת לפגיעה בריאה חד צדדית ועצמית מוגבלת, אשר מודלים תסמונת מצוקה נשימתית חריפה של האדם (ברווזים) הנגרמת על ידי שאיפה חומצת קיבה.

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

השיטה הסנובית הסלקטיבית היא משמעותית משום שהיא מציעה לחוקרים מודל לשחזור ולא קטלני לחקר פגיעה חריפה בריאות, הגורם העיקרי לתסמונת מצוקה נשימתית חריפה בבני אדם. היתרון של הטכניקה האינטר-ברונכיאלית הסלקטיבית הוא לוקליזציה של התגובה הדלקתית לריאות השמאליות המציעה את הריאה הימנית כשליטה בלתי פצועה ומזעור המצוקה של בעלי החיים. הדגמת הליך זה יהיה אלכסנדר Tavares, טכנאי וסטודנט לתואר ראשון במעבדה שלנו.כדי להכין 0.1 חומצה הידרוכלורית נורמלית, להוסיף 11 מיליליטר של מים מזוקקים כפולים לבקבוק זכוכית ענבר, ואחריו תוספת איטית של מיליליטר אחד של 37%12 חומצה נורמלית. לאחר מכן, להוסיף לאט ארבעה מיליליטר של חומצה נורמלית אחת עובד מלאי לתוך 35 מיליליטר מים מזוקקים כפול בצינור חרוט 50 מיליליטר. לאחר מכן השתמש בגשוש pH אלקטרוני כדי למדוד את ה- pH של פתרון המלאי הרגיל 0.1, titrating ל- pH של 1.1 באמצעות נתרן הידרוקסידי או פתרון מלאי חומצה לפי הצורך לנפח סופי של 40 מיליליטר.לפני תחילת ההליך, לסנן אחד עד שני מיליליטר של פתרון החומצה באמצעות מסנן מיקרוליטר סטרילי 0.22 לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי ולאשר חוסר תגובה רפלקס כאב בעכבר הרדמה. באמצעות קוצץ חשמלי בשבץ איטי כלפי מטה לגלח בעדינות את האזור הכירורגי על פני השטח הגחוניים של העכבר מתחת לסנטר באזור צוואר הרחם של הגרון. הסר כל שיער רופף, ולנגב את העור החשוף עם שלושה תווי יוד 10%povidone רצופים 70% isopropyl אלכוהול ספוגיות.כאשר העור כבר מוכן, מניחים את העכבר בתמונת supine על לוח כירורגי נקי, ולכסות את החיה עם וילון כירורגי סטרילי. הפוך פתח אורך 0.5 ס"מ בעור מעל קנה הנשימה ובלוטות הרוק, ולהשתמש ממטרים משונן מעט מעוקל כדי לסגת בזהירות את העור. מפרידים בעדינות את בלוטות הרוק כדי לחשוף את שרירי קנה הנשימה ולהשתמש בממטרים משונן מעט מעוקל כדי לדחוף בעדינות לגזרים את השרירים הצנחנים.להקניט את fascia המקיף את קנה הנשימה עד הטבעות סחף של קנה הנשימה נחשפים לחלוטין, ולהשתמש מלקחיים משונן מעוגל לחלוטין כדי לעבוד משם את רקמת החיבור בין רטרוטרצ'ה ואת retrofascia. החלק מדפים משונים מעוגלים לחלוטין מאחורי קנה הנשימה והרם את קנה הנשימה. ברגע קצה המלקחיים הוא מאחורי קנה הנשימה, לתפוס חתיכה 10 עד 15 ס"מ של תפר משי קלוע 4-0 עם קצות המלקחיים ולמשוך את התפר מאחורי קנה הנשימה, כך שיש אורך שווה משני הצדדים.הלוח הכירורגי עשוי להיות פנה כדי לקרב את האזור הכירורגי ליד הדומיננטית לשלבים הבאים. ואז בעדינות למשוך את הקצוות של התפר לכיוון החלק הראשון של העכבר, ולהחזיק את הקצוות במקום. עבור cannulation של הסוכר mainstem השמאלי, לחשוף את המחט של 24-מד על ידי אנגיוקטר 3/4 אינץ' ולהכניס את הצד משופע המחט לאזור הפנימי של קנה הנשימה בין טבעות קנה הנשימה הראשון והשני.כאשר קצה המחט ניתן לדמיין בתוך לומן קנה הנשימה, לשחרר את התפר ולקדם את cannula מעל המחט לתוך קנה הנשימה angling לכיוון הצד האחורי השמאלי של העכבר. כאשר נתקלו בהתנגדויות, משיכת המחט. לאחר שה cannula הוא במקום, בחוזקה לתפוס את יציאת ההזרקה כדי למנוע קטטר מסט ולהבטיח קצה מיקרופיגט P-200 בתוך הנמל.ואז להחדיר 50 microliters של פתרון חומצה נורמלית מסוננת 0.1 לתוך קטטר, ואחריו נפח שווה של אוויר. צעד זה דורש מניפולציה מדויקת של ה cannula, בעוד דרכי הנשימה של חסום, ויש להשלים במהירות ובחלקה כדי לשחזר את זרימת האוויר הנכונה כדי למזער את הנזק בדרכי הנשימה. למשוך במהירות את הקטטר ולהטות את הלוח הכירורגי בזווית של 60 מעלות.לאחר 30 שניות, להניח את הלוח הכירורגי שטוח, ולהסיר את התפר מאחורי קנה הנשימה. לאחר מכן השתמש בתפר משי קלוע מצופה שעווה 4-0 כדי לסגור את חתך העור עם שניים עד שלושה תפרים. הפציעה הריאותית החריפה הנובעת מההטבה של חומצה תוך-ברונכיאלית מערבת את כל הריאה השמאלית.ואכן, בעקבות ניהול תוך ורדם של צבע כחול אוונס ו תדלוק ריאות, הצבע מזוהה רק בתוך הריאה השמאלית. כימות של פזרנות הצבע לתוך הריאה השמאלית גדל באופן משמעותי יחסית להחדיר סלקטיבית מזויפת. נויטרופילים Interstitial לצבור בריאה השמאלית 24 שעות לאחר החדרת חומצה בניגוד הריאה הימנית שבה כמה נויטרופילים interstitial נצפו.היסטולוגיה של הריאות חושפת פגיעה ברקמות ודלקת ברמות האיברים והתאיים עם דלקת אקסודיסטיבית 24 שעות לאחר הפציעה כפי שהיא מאופיינת בצקת מטח מסומנת וחדירת נויטרופילים בריאה השמאלית. שים לב כי חוסר פציעה משמעותית או זרם לויוציט לתוך הריאה הימנית שליטה בלתי פצועה. 72 שעות לאחר פציעה בצקת ומסתננים הסלולר מופחתים באופן משמעותי המייצג שלב exudative פתרון.כפי שהוערך על ידי ציטומטריה זרימה, נויטרופילים alveolar להגדיל את הריאה השמאלית 24 שעות לאחר הפציעה הראשונית, ולהקטין באופן משמעותי ב 48 ו 72 שעות. חשוב לדמיין את הקטטר בקנה הנשימה לפני התקדמות. זווית cannula לכיוון הסמפנוס mainstem השמאלי במהלך החדרה ופעל החדרת החומצה עם 50 microliters של אוויר.ניתוח נוזלי lavage ברונכואלוולרית, היסטולוגיה של ריאות, פנוטיפים של תאי מערכת החיסון על ידי ציטומטריית זרימה, הדמיית עכבר חיה ובדיקות תפקודי ריאות יכולות להתבצע כולם כדי להעריך את הדלקת והרזולוציה. הפיתוח של מודל זה מוגבל עצמית של פגיעה ריאות חריפה אפשרה לחוקרים לתרום תרומות משמעותיות לתחום הביולוגיה פתרון. זכור כי חומצה הידרוכלורית מרוכזת מסוכנת וצריך לטפל בה במכסה המנוע הכימי כשהיא לובשת את ציוד המגן האישי המתאים.

a-model-self-limited-acute-lung-injury-unilateral-intra-bronchial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

מודל Murine לפגיעה ריאות הנגרמת ההנשמה הוא כלי חשוב ללמוד פציעה ריאות...

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

פיתחנו מודל פגיעה ריאתית של עכבר על ידי הזרקה תוך-קנה של חיידקים Pseudomonas aeruginosa. מודל זה מחקה פגיעה ריאתית במהלך דלקת ריאות והוא רלוונטי מבחינה קלינית.

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

פרוטוקול זה גורם לפגיעה ריאתית חריפה בעכבר שיש לו נאמנות קרובה לפתוגנזה של דלקת ריאות חומצית שנצפתה בבני אדם. אנו מייצרים פגיעה ריאתית חריפה לא קטלנית עם pH נמוך ומביאים בחשבון הבדלים במבנה הנשימה האנטומי של מכרסמים ובני אדם באמצעות טרכאוסטומיה פתוחה יחד עם שחרור לחץ היקפי.

להרחיב הנשמת קיבת חומצה שאיפת Murine הדגם של פגיעה החריפה ריאות תוצאות ב מקסימלי חריפה קטלנית פגיעת ריאות

הציג כאן הוא צעד אחר צעד הליך כדי לגרום לפציעה ריאה חריפה בעכברים על ידי ישירה intratracheal ליפוסכאלפסיד ולבצע ניתוח FACS של דגימות דם, ברונמכתשי נוזל ששטיפה, ורקמות ריאות. מיניציה מינימלית, טיפול פשוט, תוכנות טובה, ו טיטור של חומרת המחלה הם יתרונות של גישה זו.

גרימת פציעה חריפה של הריאה בעכברים על ידי הישירה ליפופוליסכראסטיליאלגרלציה

אנו מתארים מודל של תסמונת מצוקה נשימתית חריפה הנגרמת על ידי חומצה הידרוכלורית (ARDS) בחזירונים המקבלים הרגעה עם חומרים הלוגן, איזופלוראן ו sevoflurane, באמצעות מכשיר המשמש הרגעה בטיפול נמרץ בשאיפה. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור את המנגנונים הביולוגיים של חומרים הלוגן על פגיעה בריאה ותיקון.

משלוח סוכן הלוגני במודל חזירי של תסמונת מצוקה נשימתית חריפה באמצעות מכשיר מסוג יחידת טיפול נמרץ

שילוב של שטיפה פעילי שטח באמצעות 0.9% מלוחים (35 מ"ל / קילוגרם משקל גוף, 37 °C) ואוורור נפח גאות ושפל גבוה עם מציצה נמוכה כדי לגרום לפגיעה ריאות הנגרמת על ידי מכונת הנשמה בינונית (VILI) תוצאות תסמונת מצוקה נשימתית חריפה ניסיונית (ARDS). שיטה זו מספקת מודל של פגיעה בריאות עם יכולת גיוס נמוכה /מוגבלת ללמוד את ההשפעה של אסטרטגיות אוורור שונות לתקופות ממושכות.

דלדול פעילי שטח בשילוב עם אוורור מזיק גורם למודל רבייה של תסמונת מצוקה נשימתית חריפה (ARDS)

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל פגיעה ריאתית בעכברים המשתמש בחומצה אולאית כדי לחקות תסמונת מצוקה נשימתית חריפה (ARDS). מודל זה מגביר את מתווכי הדלקת על בצקת ומקטין את היענות הריאות. חומצה אולאית משמשת בצורת מלח (oleate) שכן צורה פיזיולוגית זו מונעת את הסיכון של תסחיף.

מודל עכברי של תסמונת מצוקה נשימתית חריפה הנגרמת על ידי חומצה אולאית

כתב יד זה מתאר את ביסוס מודל זיהומי של דלקת ריאות בעכברים ואת אפיון פתרון הפגיעה בהתאמה יחד עם שיטות לגידול חיידקים והחדרה תוך טרכיאלית. מתוארת גם גישה חדשנית המשתמשת בציטומטריית זרימה בממד גבוה להערכת הנוף החיסוני.

מודל ניסיוני להערכת רזולוציה של דלקת ריאות

כאן, אנו מציעים פרוטוקול להעברת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי (LPS) באמצעות אינטובציה אנדוטרכאלית אורופרכאלית לא פולשנית. שיטה זו ממזערת את הטראומה של ההליך הכירורגי עבור החיה ומעבירה LPS מדויק לקנה הנשימה ולאחר מכן לריאות.

החדרת ליפופוליסכריד תוך טרכאלי לא פולשני בעכברים

במחקר זה, טכניקת החדרה אנדוטרכיאלית לא פולשנית הוכחה כמפתחת ALI בעכברים באמצעות לרינגוסקופ בסיסי להבטחת העברת LPS מדויקת לריאות. ה-LPS מושתל דרך צינור אנדוטרכיאלי באמצעות לרינגוסקופ. גודל הפגיעה בריאתיות מוערך במספר נקודות זמן.

מתן לא פולשני של ליפופוליסכריד באנדוטרכיה כדי לגרום לפגיעה ריאתית חריפה אצל מכרסמים

למד שיטת ברונכיט חד צדדית של חומצה בעכברים ליצירת מודל פגיעה ריאתית חריפה. שיטה זו מאפשרת חקר ממוקד של תגובת דלקת והחלמה בריאה השמאלית תוך שימוש בימין כבקרה.

מודל של פגיעה עצמית מוגבלת בריאה חריפה על ידי ברונכיט חד צדדית של חומצה בסימפונות

גלה סרטונים נוספים