הערכה לפירעון ביצת אנוש ויישומו הקליני

בתרגול הקליני, נהוג להניח שכל ביצית המציגה גוף קוטבי מוכנה להפריה. הדמיה של החיים של התבגרות ביצית אנושית מגלה כי גוף הקוטב הופך גלוי הרבה לפני ציר metaphase II דו קוטבי מורכב, יצירת הסיכון של הזרקת זרע בטרם עת. מיקרוסקופ אור מקוטב מאפשר הדמיה לא פולשנית של הציר המיוטי ביציות אנושיות, והוא יכול להיות מנוצל בבטחה IFV כדי להעריך את בגרות הביצית לפני הזרקת זרע intracytoplasmic.

אופטימיזציה של העיתוי של ICSI חשוב במיוחד פרוגנוזה ירודה של מחזורי הפריה חוץ גופית, עם מספר נמוך של ביציות זמין להפריה. הליך קליני זה הוא טכניקת הרחבה לטיפול סטנדרטי בהפריה חוץ גופית, ויש לבצעו מראש על ידי כוח אדם מנוסה, בהתאם לנוהגים מעבדתיים טובים. 35 עד 36 שעות לאחר הזרקת גונדוטרופין כוריוני אנושי, לאסוף את קומולוס-oocyte מאוחזר קומפלקסים ב פחמן דו חמצני עצמאי טיפול בינוני.

לצייד את oocytes במשך 10 עד 15 דקות באינקובטור פחמן דו חמצני עצמאי ב 37 מעלות צלזיוס. חשוף את הוציטים לתספורת היאלואורונידה גבוהה, מדוללת במדיום הטיפולי. לאחר 30 שניות, השתמשו בפיפיטה של 200 מיקרוליטר כדי להסיר באופן מכני תאי קומולוס-קורונה.

להעריך את המספר ואת המצב ההתפתחותי של oocytes denuded על פי נוכחות או היעדר הגרעין וגוף הקוטב הראשון. מניחים שלב ורידים נביטתי, ו metaphase אני ו metaphase II שלב oocytes לתוך טיפות בודדות של פחמן דו חמצני עצמאי תרבות בינונית, מכוסה בשמן מינרלי. לאחר מכן, מניחים את oocytes ב 37 מעלות צלזיוס, 5%פחמן דו חמצני ו 6% חמצן עם לחות במשך 3 עד 4 שעות.

כדי להכין צלחות טיפוח לתרבות העוברים, הוסיפו את הנפח המתאים של תרבות מוגדרת מראש בינונית לבאות בודדות של צלחת תרבות בגודל מתאים. מכסים את טיפות בשמן מינרלי שווה ערך, מתייגים את הצלחת במזהה ייחודי ומ מניחים אותה בחוסר ודאות תלוי פחמן דו-חמצני למשך 20 דקות לפחות. להכנת צלחת ה-ICSI, הוסיפו 5 טיפות מיקרוליטר של מדיום טיפול מחומם מראש לכל בוציט מציג גוף קוטבי, וטיפה נוספת אחת לשטיפת מחטים לצלחת פלסטיק נקייה.

הוסף טיפה נוספת של פתרון PVP עבור קיבוע הזרע לפני הזרקת הזרע intracytoplasmic, ו כיסוי טיפות עם שמן מינרלי מחומם מראש. הקפד לתייג את המנה. לאחר מכן, מניחים את צלחת הזרקת הזרע באינקובטור פחמן דו חמצני עצמאי לפחות 20 דקות.

בעוד הצלחת היא שיווי משקל, להוסיף 5 טיפות microliter של מדיום טיפול מחומם מראש עבור כל גוף קוטב מציג oocyte לצלחת תרבות תחתית זכוכית. כיסוי כל טיפות עם שמן מינרלי מחומם מראש. הקפד לתייג את המנה.

לאחר מכן, מניחים את הצלחת באינקובטור פחמן דו חמצני עצמאי לפחות 20 דקות. בעוד הצלחות הן שיווי משקל, לעבור על הבמה מחוממת על מיקרוסקופ הפוך להתאים את החזקה סטרילית ומחט הזרקת זרע למחזיקי מיקרו הזרקת. להביא את המחטים לפוקוס, ולבחור את המטרה המתאימה, דואג כי מעבה הוא במצב שדה בהיר.

הכנס את מסנן ההפרעה הירוק והגדר את מחוון ניתוח הגביש הנוזלי למצב עבודה. הגדר את התריס לכ- 50% והתאם מקטב מעגלי כדי להפחית רעשי רקע. כדי להגדיר את המחשב לבדיקת מיקרוסקופיית אור מקוטבת, הפעל את תוכנת ההדמיה ובחר וידאו, מקור וידאו ו- polarAIDE בתפריט וידאו.

לאחר מכן, עבור לסרטון בשידור חי על-ידי מעבר לדף וידאו ובחר את הסמל כדי להפעיל ניתוח ציר וזונה. כדי לקבוע את הבשלות של כל בוציטים, מעבירים את כל הוציטים לטפטפים בודדים על המנה המוכנה עם תחתית הזכוכית, ומ מניחים את המנה שנחשפה תחת המיקרוסקופ ההפוך המוכן. הכניסו את ה-oocyte הראשון לפוקוס, והתבוננו בתדמית birefringence oocyte שזוהתה, כפי שהיא מעובדת במחשב ומוצגת בזמן אמת על מסך המחשב.

השתמש במחטי ההחזקה והזרקת הזרע כדי להפוך את האוציטים כך שגוף הקוטב יהיה במצב של השעה 12 ויתמקד בגוף הקוטב. אם birefringence ציר אינו נראה בבירור ממבט ראשון בקרבת PB, מעט לגעת zona pellucida בעדינות להפוך את oocyte סביב כל ציר כדי להבטיח את היישור של האור מקוטב עם סיבי ציר מערך. לאחר זיהוי כל oocytes חיובי ציר, להעביר את oocytes לתוך טיפות בודדות בתוך צלחת ICSI מוכן, ולחשוף את oocytes הזרקת זרע intracytoplasmic על פי פרוטוקולים סטנדרטיים.

אם oocytes להפגין שום אות ציר metaphase II לגילוי, למקם את צלחת מיקרוסקופ אור מקוטב לתוך החממה פחמן דו חמצני עצמאי במשך 2 עד 3 שעות. לפני ביצוע מחדש של בדיקת מיקרוסקופית האור המקוטבת כפי שהוכח, לאחר ההזרקה, מעבירים את הוציטים לצלחות הטיפוח המוכנות של העוברים לתרבותם עד להגעת שלב ההדף. יש לדאוג להבטיח כי כל micromanipulation של oocyte האנושי מתבצעים בסביבת שליטה, ב 37 מעלות, ב pH בינוני תרבות אופטימלית.

הדמיית ציר מאפשרת אפליה של בוציטים בוגרים לחלוטין שנעצרו בשלב המטה-פאזה II, מאלה שעברו מעבר התבגרות חשוב. בוציטים מושהים התפתחותית המגלים גופי קוטב במבחנה, היעדר אות הציר של metaphase II אולי לא בהכרח משקף הפרעה תאית, אך יכול להצביע על התקדמות הבוטה מהמטאפאזה I לשלב המטה-פאזה II. הנוכחות של ציר meiotic הוא סמן חיובי של ביצים יכולת התפתחותית.

דחיית ICSI מספקת oocytes מושהה התפתחותית עם זמן נוסף כדי להשלים את תהליך ההבשלה ולהרכיב את ציר metaphase II לפני הזריקה שלהם. באמצעות גישה זו, אפילו oocytes בשלים כי הם מושלכים באופן שגרתי יכול להיות מנוצל קלינית, ולוותר הריונות מוצלחים.