Name: הערכה לפירעון ביצת אנוש ויישומו הקליני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: למדו הערכת בגרות ביציות אנוש באמצעות מיקרוסקופיית אור מקוטב ללא פולשנות. שיטה זו משפרת תזמון הזרעה תוך-ציטופלזמית ומגבירה סיכויי הצלחה בטיפולי פוריות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנחנו רוצים להודות למעבדה האמבריולוגיה של האינטרנציונל החדש. אנו מכירים גם את מתקן הליבה CELLIM של CEITEC נתמך על ידי MEYS CR (LM2015062 צ'כית-Bioimaging) עבור התמיכה שלהם עם השגת נתונים הדמיה immunofluorescence הציג כאן.

פרוטוקול זה מתאר את ההליך הקליני שהוא ' הרחבה ' לטיפול IVF סטנדרטי. זה צריך להתבצע על ידי כוח אדם מנוסה בהתאם לפרקטיקה מעבדה טובה הנחיות קליניות24,25. מומלץ להשיג הסכמה מושכלת בכתב מהחולים הזכאים. פרוטוקול זה אושר על ידי ועדת האתיקה המוסדית.
1. איחזור ביצים וחסיפה
<ol><li>לגרום גירוי השחלות באמצעות פרוטוקולי גירוי קונבנציונאלי3. כוונן את המינון לתגובה אישית. כאשר שני או יותר זקיקי, דמיינו על ידי סריקת אולטרסאונד, להגיע לקוטר של 18 מ"מ, לגרום התבגרות oocyte עם יישום של 250 μg גונדוטרופין כוריוני אנושי (hCG). לתזמן את האיסוף (OPU) ב 35 לאחר הזרקת hCG הודעה.</li>
	<li>לאסוף מאוחזרים קומולוס-oocyte מתחמי (COCs) ב-CO2-עצמאי טיפול בינונית (טבלת חומרים). בעקבות תקופת דגירה קצרה (10-15 דקות) באינקובטור2-עצמאי, בקצרה (עד 30 s) לחשוף את הפתרונות של החברה לפתרון hyaluronidase (טבלת חומרים). תחת stereomicroscope, להסיר בצורה מכנית תאים קומולוס-קורונה על ידי ליטוף בעדינות COCs עם קצה מסנן 200 μL.</li>
	<li>באמצעות מיקרופיפטות מיקרו עם קוטר יורד בהדרגה (200 יקרומטר, 180 יקרומטר ו 150 יקרומטר), בעדינות להסיר את oocytes מן התאים הזקיקים הנותרים ולשטוף את האוציטים 3x בטיפול בינוני.</li>
	<li>העריכו את המספר והסטטוס ההתפתחותי של האוסטציטים הנסתיות בהתאם לנוכחות או העדר הגרעין והראשון PB (איור 1).</li>
	<li>בדוק את קריטריוני ההכללה עבור בדיקת PLM. לבצע הערכת בגרות ביצה אם יש (1) תגובה גרועה בלתי צפויה לגירוי קונבנציונאלי עם פחות מ 6 MII oocytes שנאסף ב-OPU ו (2) היסטוריה של כשל הפריה קודם או oocyte immaturity.</li>
	<li>מקום GV, MI ו-MII oocytes לתוך בארות נפרדות בצלחת IVF, כל המכיל 500 μL של מדיום בינוני מוצרים2תלויי-משקל (טבלת חומרים) מכוסה שמן מינרלי (לוח חומרים).</li>
	<li>המלון מיועד לתוספת של 3 עד 4 שעות ב-37 ° c באווירה של מחולל לחות של 5% O2 ו-6% CO2.</li>
</ol>2. הכנה לבדיקת plm ולאחריה icsi
הערה: הפרוטוקול המסופק כאן מתאר את הערכת PLM שבוצעה באמצעות מערכת העזרה הקוטבית של OCTAX (טבלת חומרים). לחילופין, ניתן להשתמש במערכות תצוגה מסחרית אחרות של הציר.
<ol><li>הכינו צלחות לטיפוח העובר.<ol style="margin-left: 40px;">
<li>בהתאם למספר של oocytes להיבדק (סך של MII oocytes, ו-MI oocytes הבלטת ממד ב-PB במהלך תקופת הדגירה המוקדמת), להכין את הצלחת 4-הבאר או לוחית 12-באר, למלא כל טוב עם 500 μL או 30 μL של התרבות הבינונית, בהתאמה , ולכסות בשמן מינרלי שולי בעבר.</li>
		<li>ודאו ששמן התרבות והמינרלים בתווך מוקמים בחממה של2 מבני הלילה. שמור את המנה המוכנה ב-CO2-החממה התלויים עבור לפחות 2 h. מספר בארות אם יש צורך לעקוב אחר הגורל ההתפתחותי של oocytes בודדים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכן את הצלחת ICSI.<ol>
<li>השימוש צלחת פלסטיק מוקצה ולעשות 5 μL droplet של בינוני טיפול טרום-שחומם עבור כל PB-הצגת oocyte ועוד droplet אחד עבור כביסה המחט. לעשות droplet נוספת של polyvinylפירולסיים (PVP) פתרון (לוח חומרים) עבור השתק זרע לפני icsi (להוסיף זרע ממש לפני icsi) וכיסוי עם שמן מינרלים prewarmed.</li>
		<li>שמור את הצלחת ICSI מוכן באינקובטור2-עצמאי לפחות 20 דקות. מספר בארות אם יש צורך לעקוב אחר האוציטים לאחר icsi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכן את צלחת הבדיקה PLM.<ol>
<li>השימוש צלחת זכוכית מוקצה התחתון ולעשות 5 μL טיפות של בינונית טיפול טרום שחומם עבור כל PB-הצגת oocyte. שכבת-על עם שמן מינרלי טרום-שחומם.</li>
		<li>שמור את המנה בחממה העצמאית2-CO לפחות 20 דקות. מספר את הטיפות אם יש צורך לעקוב אחר האוציטים לאחר בדיקת plm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכינו את המיקרוסקופ לבדיקת PLM.<ol>
<li>החליפו את הבמה המחוממת על המיקרוסקופ ההפוך, מראש והשיגו את טמפרטורת ההתחממות הנכונה. ודא שההגדרות מותאמות במדויק כדי לשמור על 37 מעלות צלזיוס בטיפות בינוניות בצלחת PLM/ICSI במהלך הליכי המיקרומניפולציה.</li>
		<li>להתאים את המחט מחזיק סטרילי ICSI לתוך מחזיקי מיקרו ולהביא אותם לפוקוס. לחילופין, השתמשו במחט מאינקובטור.</li>
		<li>בחר את המטרה המתאימה (20x ו-25x הם המתאימים ביותר) ולוודא כי הקבל הוא מיקום שדה בהיר.</li>
		<li>הכנס מסנן הפרעות ירוקות (האור הופך לירוק) והגדר את מחוון ניתוח הגביש הנוזלי לתנוחת עבודה.</li>
		<li>הגדר את התריס כדי ~ 50% ולהתאים מקטצר עגול כדי להקטין את רעשי הרקע.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכן את המחשב לבדיקת PLM.<ol>
<li>הפעל את תוכנת הדימות.</li>
		<li>בחר וידאו | מקור וידאו | polarAIDE בתפריט הווידאו בשורת התפריטים העליונה.</li>
		<li>עבור לווידאו בשידור חי על- ידי המעבר לדף וידאו והפעלה של ניתוח הציר והסונה על-ידי הפעלת הסמל (איור משלים 1) בסרגל הכלים של הווידאו.</li>
		<li>בחירת מצב תצוגה לשינוי גודל דינאמי במהלך הדמיית ציר: (1) אדום (שבירה)/ירוק (רקע) תצוגה משולבת, או (2) לבן (שבירה)/and שחור (רקע) נוף. מצב הניקוד הדינמי משמש לניקוד אוטומטי של הסונה פלווצידה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. בחינת בגרות הביצית
<ol><li>לאחר תקופת טרום הדגירה (3-4 שעות), לבצע בדיקה PLM לחשוף את מצב הבגרות oocyte בזמן הסטנדרטי של ICSI (39-40 h לאחר ההדק hCG).</li>
	<li>העבר את כל oocytes לתוך טיפות בודדות על מנת PLM ומניחים אותו תחת המיקרוסקופ הפוך מוכן הדמיה ציר. זכרו להסיר את מכסה הפלסטיק ממנה תחתית הזכוכית לפני תחילת הבדיקה.</li>
	<li>. הביאי את האחד הראשון לפוקוס אם קשה לחפש את התא שמתחת לאור ירוק, משוך את המסנן הירוק באופן זמני. ודא שהמסנן הירוק נוסף לפני הניתוח.</li>
	<li>שימו לב לתמונת האישור המזוהה של oocyte (אדום/כתום על רקע ירוק) כפי שהוא מעובד במחשב ומוצג בזמן אמת על מסך המחשב. זכור כי האות אינו מוצג בעינית.</li>
	<li>אם ההודעה מכריזה על חשיפה באור נמוך מדי/גבוה קופץ למעלה, להתאים את הבהירות לעוצמה המתאימה באמצעות כפתור עוצמת אור של המיקרוסקופ.</li>
	<li>השתמש מחט מחזיק ICSI להפוך את oocyte כך PB הוא במיקום 12 השעה ולהתמקד PB.</li>
	<li>אם שבירה הציר אינו גלוי ממבט ראשון בקרבת PB, בעדינות להפוך את oocyte סביב כל ציר על ידי נגיעה מעט הסונה pellucida כדי להבטיח את היישור של אור מקוטב עם סיבי ציר המערך (וידאו משלים ). הצהר על העדר ציר MII כל עוד ה-oocyte אינו מראה את אות הציר למרות הסיבוב הקפדני.</li>
	<li>מבוסס על דפוס שבירה שנצפו, לסווג את oocytes לתוך הקטגוריות הבאות (איור 2): (א) oocytes עם אות בהיר של ציר דו קוטבית בצורת חבית mii עם גבולות ברורים ואפילו הפצה של שבירה ; (ב) אוציטים עם מכולה, אפאר וציר MII שקוף עם גבולות חריגים והפצה לא אחידה של האות; (ג) האוציטים ללא הגילוי של ציר MII מחזיר שבירה באואופלזמה;   (ד) אנאפיום I/telophase אני oocytes, מראה גשר מיקרוצינורי (סטרנד חיבור בין הראשון PB ו oocyte) במקום ציר MII. הערה: Oocyte עם סימן ציר MII לזיהוי (כיתה א' או ב') מתאימים ל-ICSI מיידי.</li>
	<li>צלם תמונה (F9) או הקלט וידאו עבור דוח ו/או ניתוח תמונה שלאחריו. שמור תיעוד של תבנית תמונה כדי להקטין את הסובייקטיביות של האופרטור.</li>
	<li>מעבר למיקום של oocyte הבא וחזור על שלבים 3.6-3.9.</li>
</ol>4. אופטימיזציה של icsi עיתוי
<ol><li>העבר את כל ציר-חיובי oocytes (כיתה A או B, שלב 3.8) לתוך צלחת icsi והנושא אותם icsi על פי פרוטוקולים סטנדרטיים24,25.</li>
	<li>אם oocytes להראות לא לגילוי אות MII ציר, למקם את הצלחת PLM לתוך החממה2-עצמאי ולהעביר את icsi לתוך זמן מאוחר יותר.</li>
	<li>בצע בדיקה מחודשת של PLM ~ 2-3 לאחר מכן בעקבות השלבים 3.3-3.9. אם קצת oocyte (s) עדיין חסר ציר MII, עיכוב נוסף ICSI עבור תוספת 1-2 h.</li>
	<li>העבר את כל oocytes לתוך הצלחת ICSI ולהזריק להם לפי פרוטוקולים סטנדרטיים24. אם תבשיל PLM תואם את זווית כיפוף של המחט מיקרוהזרקה, לבצע ICSI מיד בצלחת PLM לאחר מעבר למצב שדה בהיר.</li>
	<li>עם ICSI, העברת oocytes לצלחות מוכנות לטיפוח העובר ולתרבות עד לשלב הבלסטוציסטה.</li>
</ol>

<ol><li>Holubcova, Z., Blayney, M., Elder, K., Schuh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+oocytes.+Error-prone+chromosome-mediated+spindle+assembly+favors+chromosome+segregation+defects+in+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Human oocytes. Error-prone chromosome-mediated spindle assembly favors chromosome segregation defects in human oocytes.</a> Science. 348 (6239), 1143-1147 (2015).</li>
<li>Oudendijk, J. F., Yarde, F., Eijkemans, M. J., Broekmans, F. J., Broer, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+poor+responder+in+IVF%3A+is+the+prognosis+always+poor%3F%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">The poor responder in IVF: is the prognosis always poor?: a systematic review.</a> Human Reproduction Update. 18 (1), 1-11 (2012).</li>
<li>Gautam, N., Allahbadia, Y. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGautam%2C+N+%22Ovarian+Stimulation+Protocols%22">Ovarian Stimulation Protocols</a>. , Springer. India, Mumbai, India. (2016).</li>
<li>Piqueras, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+birth+after+replacement+of+an+embryo+obtained+from+a+spontaneously+in+vitro+matured+metaphase-I+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Systems+Biology+in+Reproductive+Medicine%22%5BJournal%5D)">Live birth after replacement of an embryo obtained from a spontaneously in vitro matured metaphase-I oocyte.</a> Systems Biology in Reproductive Medicine. 63 (3), 209-211 (2017).</li>
<li>Liu, J., Lu, G., Qian, Y., Mao, Y., Ding, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+and+births+achieved+from+in+vitro+matured+oocytes+retrieved+from+poor+responders+undergoing+stimulation+in+in+vitro+fertilization+cycles%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Pregnancies and births achieved from in vitro matured oocytes retrieved from poor responders undergoing stimulation in in vitro fertilization cycles.</a> Fertility and Sterility. 80 (2), 447-449 (2003).</li>
<li>Shu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertilization%2C+embryo+development%2C+and+clinical+outcome+of+immature+oocytes+from+stimulated+intracytoplasmic+sperm+injection+cycles%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Fertilization, embryo development, and clinical outcome of immature oocytes from stimulated intracytoplasmic sperm injection cycles.</a> Fertility and Sterility. 87 (5), 1022-1027 (2007).</li>
<li>Sachdev, N. M., Grifo, J. A., Licciardi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+intracytoplasmic+sperm+injection+%28ICSI%29+with+trophectoderm+biopsy+and+preimplantation+genetic+screening+%28PGS%29+show+increased+aneuploidy+rates+but+can+lead+to+live+births+with+single+thawed+euploid+embryo+transfer+%28STEET%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Assisted+Reproduction+and+Genetics%22%5BJournal%5D)">Delayed intracytoplasmic sperm injection (ICSI) with trophectoderm biopsy and preimplantation genetic screening (PGS) show increased aneuploidy rates but can lead to live births with single thawed euploid embryo transfer (STEET).</a> Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 33 (11), 1501-1505 (2016).</li>
<li>De Vos, A., Van de Velde, H., Joris, H., Van Steirteghem, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vitro+matured+metaphase-I+oocytes+have+a+lower+fertilization+rate+but+similar+embryo+quality+as+mature+metaphase-II+oocytes+after+intracytoplasmic+sperm+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">In-vitro matured metaphase-I oocytes have a lower fertilization rate but similar embryo quality as mature metaphase-II oocytes after intracytoplasmic sperm injection.</a> Human Reproduction. 14 (7), 1859-1863 (1999).</li>
<li>Holubcova, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egg+maturity+assessment+prior+to+ICSI+prevents+premature+fertilization+of+late-maturing+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Assisted+Reproduction+and+Genetics%22%5BJournal%5D)">Egg maturity assessment prior to ICSI prevents premature fertilization of late-maturing oocytes.</a> Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 36 (3), 445-452 (2019).</li>
<li>Montag, M., Schimming, T., van der Ven, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spindle+imaging+in+human+oocytes%3A+the+impact+of+the+meiotic+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Spindle imaging in human oocytes: the impact of the meiotic cell cycle.</a> Reproductive BioMedicine Online. 12 (4), 442-446 (2006).</li>
<li>Montag, M., van der Ven, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symposium%3A+innovative+techniques+in+human+embryo+viability+assessment.+Oocyte+assessment+and+embryo+viability+prediction%3A+birefringence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Symposium: innovative techniques in human embryo viability assessment. Oocyte assessment and embryo viability prediction: birefringence imaging.</a> Reproductive BioMedicine Online. 17 (4), 454-460 (2008).</li>
<li>Keefe, D., Liu, L., Wang, W., Silva, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+meiotic+spindles+by+polarization+light+microscopy%3A+principles+and+applications+to+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Imaging meiotic spindles by polarization light microscopy: principles and applications to IVF.</a> Reproductive BioMedicine Online. 7 (1), 24-29 (2003).</li>
<li>Caamano, J. N., Munoz, M., Diez, C., Gomez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarized+light+microscopy+in+mammalian+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction+in+Domestic+Animals%22%5BJournal%5D)">Polarized light microscopy in mammalian oocytes.</a> Reproduction in Domestic Animals. 45, 49-56 (2010).</li>
<li>Eichenlaub-Ritter, U., Shen, Y., Tinneberg, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulation+of+the+oocyte%3A+possible+damage+to+the+spindle+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Manipulation of the oocyte: possible damage to the spindle apparatus.</a> Reproductive BioMedicine Online. 5 (2), 117-124 (2002).</li>
<li>Wang, W. H., Meng, L., Hackett, R. J., Odenbourg, R., Keefe, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spindle+observation+and+its+relationship+with+fertilization+after+intracytoplasmic+sperm+injection+in+living+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">The spindle observation and its relationship with fertilization after intracytoplasmic sperm injection in living human oocytes.</a> Fertility and Sterility. 75 (2), 348-353 (2001).</li>
<li>Wang, W. H., Meng, L., Hackett, R. J., Keefe, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+ability+of+human+oocytes+with+or+without+birefringent+spindles+imaged+by+Polscope+before+insemination%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Developmental ability of human oocytes with or without birefringent spindles imaged by Polscope before insemination.</a> Human Reproduction. 16 (7), 1464-1468 (2001).</li>
<li>Moon, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+the+metaphase+II+meiotic+spindle+in+living+human+oocytes+using+the+Polscope+enables+the+prediction+of+embryonic+developmental+competence+after+ICSI%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Visualization of the metaphase II meiotic spindle in living human oocytes using the Polscope enables the prediction of embryonic developmental competence after ICSI.</a> Human Reproduction. 18 (4), 817-820 (2003).</li>
<li>Cohen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spindle+imaging%3A+a+new+marker+for+optimal+timing+of+ICSI%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Spindle imaging: a new marker for optimal timing of ICSI?</a> Human Reproduction. 19 (3), 649-654 (2004).</li>
<li>Rama Raju, G. A., Prakash, G. J., Krishna, K. M., Madan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meiotic+spindle+and+zona+pellucida+characteristics+as+predictors+of+embryonic+development%3A+a+preliminary+study+using+PolScope+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Meiotic spindle and zona pellucida characteristics as predictors of embryonic development: a preliminary study using PolScope imaging.</a> Reproductive BioMedicine Online. 14 (2), 166-174 (2007).</li>
<li>Heindryckx, B., De Gheselle, S., Lierman, S., Gerris, J., De Sutter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficiency+of+polarized+microscopy+as+a+predictive+tool+for+human+oocyte+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Efficiency of polarized microscopy as a predictive tool for human oocyte quality.</a> Human Reproduction. 26 (3), 535-544 (2011).</li>
<li>Kilani, S., Cooke, S., Tilia, L., Chapman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+meiotic+spindle+normality+predict+improved+blastocyst+development%2C+implantation+and+live+birth+rates%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Does meiotic spindle normality predict improved blastocyst development, implantation and live birth rates?</a> Fertility and Sterility. 96 (2), 389-393 (2011).</li>
<li>Kilani, S., Chapman, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meiotic+spindle+normality+predicts+live+birth+in+patients+with+recurrent+in+vitro+fertilization+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Meiotic spindle normality predicts live birth in patients with recurrent in vitro fertilization failure.</a> Fertility and Sterility. 101 (2), 403-406 (2014).</li>
<li>Tilia, L., Venetis, C., Kilani, S., Cooke, S., Chapman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+oocyte+meiotic+spindle+morphology+associated+with+embryo+ploidy%3F+A+prospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Is oocyte meiotic spindle morphology associated with embryo ploidy? A prospective cohort study.</a> Fertility and Sterility. 105 (4), 1085-1092 (2016).</li>
<li>ESHRE Guideline Group on Good Practice in IVF Labs, De los Santos, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guidelines+for+good+practice+in+IVF+laboratories+%282015%29%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Revised guidelines for good practice in IVF laboratories (2015).</a> Human Reproduction. 31 (4), 685-686 (2016).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Principles+of+IVF+Laboratory+Practice%3A+Optimizing+Performance+and+Outcomes%22">Principles of IVF Laboratory Practice: Optimizing Performance and Outcomes</a>. Montag, M., Morbeck, D. , Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2017).</li>
<li>Chamayou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meiotic+spindle+presence+and+oocyte+morphology+do+not+predict+clinical+ICSI+outcomes%3A+a+study+of+967+transferred+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Meiotic spindle presence and oocyte morphology do not predict clinical ICSI outcomes: a study of 967 transferred embryos.</a> Reproductive BioMedicine Online. 13 (5), 661-667 (2006).</li>
<li>Rienzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+meiotic+spindle+location+with+regard+to+the+polar+body+position+and+oocyte+developmental+potential+after+ICSI%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Relationship between meiotic spindle location with regard to the polar body position and oocyte developmental potential after ICSI.</a> Human Reproduction. 18 (6), 1289-1293 (2003).</li>
<li>Woodward, B. J., Montgomery, S. J., Hartshorne, G. M., Campbell, K. H., Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spindle+position+assessment+prior+to+ICSI+does+not+benefit+fertilization+or+early+embryo+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Spindle position assessment prior to ICSI does not benefit fertilization or early embryo quality.</a> Reproductive BioMedicine Online. 16 (2), 232-238 (2008).</li>
<li>Kilani, S., Cooke, S., Chapman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+meiotic+spindle+development+in+MII+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">Time course of meiotic spindle development in MII oocytes.</a> Zygote. 19 (1), 55-62 (2011).</li>
<li>Wang, W. H., Meng, L., Hackett, R. J., Odenbourg, R., Keefe, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+recovery+of+meiotic+spindles+in+living+human+oocytes+after+cooling-rewarming+observed+using+polarized+light+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Limited recovery of meiotic spindles in living human oocytes after cooling-rewarming observed using polarized light microscopy.</a> Human Reproduction. 16 (11), 2374-2378 (2001).</li>
<li>Sun, X. F., Wang, W. H., Keefe, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overheating+is+detrimental+to+meiotic+spindles+within+in+vitro+matured+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">Overheating is detrimental to meiotic spindles within in vitro matured human oocytes.</a> Zygote. 12 (1), 65-70 (2004).</li>
<li>Mullen, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+osmotic+stress+on+the+metaphase+II+spindle+of+human+oocytes%2C+and+the+relevance+to+cryopreservation%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">The effect of osmotic stress on the metaphase II spindle of human oocytes, and the relevance to cryopreservation.</a> Human Reproduction. 19 (5), 1148-1154 (2004).</li>
<li>Swearman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH%3A+the+silent+variable+significantly+impacting+meiotic+spindle+assembly+in+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">pH: the silent variable significantly impacting meiotic spindle assembly in mouse oocytes.</a> Reproductive BioMedicine Online. 37 (3), 279-290 (2018).</li>
<li>Rienzi, L., Vajta, G., Ubaldi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictive+value+of+oocyte+morphology+in+human+IVF%3A+a+systematic+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Predictive value of oocyte morphology in human IVF: a systematic review of the literature.</a> Human Reproduction Update. 17 (1), 34-45 (2011).</li>
<li>Miao, Y. L., Kikuchi, K., Sun, Q. Y., Schatten, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+aging%3A+cellular+and+molecular+changes%2C+developmental+potential+and+reversal+possibility%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Oocyte aging: cellular and molecular changes, developmental potential and reversal possibility.</a> Human Reproduction Update. 15 (5), 573-585 (2009).</li>
<li>Pujol, A., Garcia, D., Obradors, A., Rodriguez, A., Vassena, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+there+a+relation+between+the+time+to+ICSI+and+the+reproductive+outcomes%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Is there a relation between the time to ICSI and the reproductive outcomes?</a> Human Reproduction. 33 (5), 797-806 (2018).</li>
<li>Yanagida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+oocyte+preincubation+time+on+fertilization+after+intracytoplasmic+sperm+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Influence of oocyte preincubation time on fertilization after intracytoplasmic sperm injection.</a> Human Reproduction. 13 (8), 2223-2226 (1998).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

הציר הגבוה ביותר של האוציטים בתאי האדם הוא דינמי מאוד ומבנה עדין1. בתנאים מיטביים, הסיבים המיקרוכדורית מהירים במהירות וצירים מיוכטיים מכילים30,31,32,33. מכאן, חשוב באופן ביקורתי כדי להבטיח כי התרבות oocyte ותנאי המיקרומניפולציה, כלומר טמפרטורה ו-pH הם בטווח האופטימלי. כדי למזער את הסיכון של שיבוש ציר, את oocytes יש לשמור בסביבה טמפרטורה מבוקרת שמירה על 37 ± 0.5 ° צ' במדיה oocyte. השימוש במיקרוסקופים ובכיוונון מיקרוהזרקה המצויד בשלב מחומם הינו נדרש בלבד. כל מניפולציה עם oocytes מחוץ לחממה חייב להתבצע ב HEPES/מחלק מדיה באגירה כדי למנוע האוספים של pH. כדי למנוע תופעות לוואי פוטנציאליות של oocyte מוגזמת מסירת במצב הסביבה, הזמן הכולל של בדיקת PLM לא יעלה על 10 דקות. Oocytes צריך להיות מנותח על הצלחת התחתונה זכוכית עם מכסה פלסטיק הסיר מכיוון מיקום של פלסטיק רגיל בנתיב הקורה פוגע בניתוח תמונה. מכיוון פלסטיק זכוכית מנות בתחתית יש מאפיינים תרמיים שונים, הטמפרטורה יש לבדוק ישירות טיפות של טיפול בינוני בצלחת הבדיקה.
בנוסף לתנאי מעבדה, הבדלים פרוצדורליים וכישורי המיקרומניפולציה של המפעיל יכולים להשפיע על דיוק הבדיקה PLM. רק הצירים דו קוטבית מורכבים ביותר יכולים להיות מאוד לא פולשני. האות הנצפה פרופורציונאלית לדרגת הארגון המבני של הציר. נייסנט, אפאר, שחרר או עיוות הצירים מציגים רק שבירה מטושטשת או כלום בכלל (איור 3 ואיור 4). מלבד זאת, יישור לא מושלם של אור מקוטב עם מערכים זעירים מייצר רק מעבר שקוף ומוגדר למחצה, למרות הנוכחות הממשית של ציר דו-קוטבי מפותח (איור 4). אלא אם כן מונחה כראוי, אות הציר עשוי להיות מחמיץ בקלות הבגרות oocyte שאובחנו (וידאו משלים). עבור הדמיה הציר האופטימלי, oocyte צריך להיות כראוי סובב סביב כל ציר. מאז שבירה אינו גלוי בחתיכות עיניים, המפעיל צריך לצפות במסך המחשב תוך ביצוע סיבוב של oocyte. הניסיון הקודם עם מיקרומניפולציה והכשרה של הדמיה ציר העודף בתוך מבחנה הבשיל מתורבת הוא רצוי לפני מעבר ליישום קליני.
מלבד הציר, התאים קומולוס המקיפים את oocyte, oocyte, השכבה הפנימית של הסונה pellucida וכמה מבנים cytoplasmic (למשל, גופים שבירה, וחללים) התערוכה שבירה (איור 5A-D). אלא אם הוסר ביסודיות מן oocyte לפני הדמיה, תאים הזקיקים מחובר היטב לייצר רעשי רקע ולהתפשר זיהוי ציר meiotic. היזהרו לא לטעות גוף שבירה גדול עבור ציר. הכללות cytoplasmic רבים המתגוררים בציטופלסמה להציג בהירות גבוהה אשר ניגודים בחדות עם הרקע הכהה. הציר המיוטי, מצד שני, מוצג אות מתון בלבד, גבולות מטושטשים ובדרך כלל מתחבר ל-oolema מתחת או בסמוך ל-PB הראשון. מדי פעם, בדיקת PLM חושף סטייה ציר גולמי ממיקומה הסטנדרטי (איור 5E, F). אם יש חוסר התאמה משמעותי בין מנגנון החילוק ו PB, PLM עוזר לכוון את oocyte כדי למנוע את הסיכון של פציעה ציר במהלך מיקרוהזרקה. המיקום היחסי של הציר בתוך ה-oocyte אינו משפיע על הפוטנציאל ההתפתחותי של העוברים הנובעים17,34. עם זאת, כאשר הציר מתנתק מהאורמה, מומים דישון מתרחשים. באופן מעניין, כמה אוציטים באיכות ירודה עוברים ניתוח כרומטין מיד לאחר שחול ה-PB במקום להתחיל בתהליך המיקרו-כדורית (איור 4F). באמצעות מיקרוסקופ אור קונבנציונלי ו-PB כמו הסמן היחיד של בגרות oocyte, כגון זה sub-המוסמכת oocytes ייחשב fertilizable. כך, על גבי הערכה מורפולוגית שגרתית, הדמיה ציר מוסיף מידע חשוב על בגרות של ביצה יכול לשמש כסמן עקיף של האיכות שלה.
השכיחות של מסתובב MII oocytes הוא עשוי להיות מושפע מאפיינים של אוכלוסיית המחקר (למשל, רקע גנטי, מצב רפואי, גיל אימהי). בנוסף, החלק של הפיתוח התעכב oocytes בתוך הקוציטים ישפיע על מספר בפועל של הציר השלילי של כישור-שליליהתשעה,27. הדמיה ציר מיוטיק מאפשר לזהות בבירור fertilizable oocytes נעצר בשלב MII. יתר על כן, הבדיקה השנייה במועד מאוחר יותר עשוי לגלות אם הציר השלילי של הפלך הוא חריג או רק לאחרונה התקדמה באמצעות MI/mii מעבר9,10,11. כאשר מותר לפתח ציר לפני ICSI, אפילו אוציטים בוגרות, אשר מושלך באופן שגרתי, יכול לייצר עוברים קיימא9. במחזורים עם מעטים מאוד oocytes זמינים עבור הפריה, דק מתוזמן ICSI של הבלטת ממד של oocytes בתוך PB יכול לשמש כאסטרטגיית הצלה חלופה לביטול מחזור.
עם זאת, הארכת זמן טרום הדגירה לא צריך להיות כללית על כל האוציטים. ב vivo התבגר oocytes מן המגיבים הנורמליים בדרך כלל התערוכה מיאני ציר9,20,21,27. כאן, הסיכוי של הדמיה מוצלחת הציר פוחתת עם הזמן כתוצאה של post-ovulatory בהזדקנות מבחנה35. אם אפשרי, icsi יש לבצע ביום של אחזור ולא יעלה על 9 שעות (45 שעות פוסט hCG), התקופה המשויכת עם ירידה באיכות העובר כתוצאה36,37. Oocytes הצגת הצירים דו קוטבית ברורים צריך להיות נתון ICSI ללא עיכוב נוסף. לסיכום, אופטימיזציה אישית של העיתוי ICSI כדאי בחולים פרוגנוזה נמוכה להוציא כל סיכון של הזרקת זרע מוקדמת. עם זאת, זה לא נחוץ, זמן רב מדי ומפרך להתבצע בכל מחזורי IVF.
ניתוח PLM מגלה אם oocyte הגיע לשלב MII. עם זאת, הדמיה לא פולשנית של ציר meiotic אינו מספק מידע אודות ארגון כרומוזום. יכול להיות חמור בכרומוזום שגוי ו/או הקשורים גיל הקשורות כרומאטיד הקשור oocytes הכולל ציר דו קוטבית (איור 5). גורמים אחרים שונים יש השפעה משמעותית על הצלחה רבייה (למשל, גורם זרע, המיטוקטורים, הפעלת הגנום העובריים, מחשוף סדיר, אפיגנטיקה, רירית הספר, חסינות אימהית). לכן, זיהוי ציר MII למשל, אינו מבטיח תוצאה קלינית חיובית של הליך IVF.

כדי להיות ביצת fertilizable פלואידי, את דיפלואידי oocyte יש להפוך את חצי המידע הגנטי שלה לתא הסמוך, נקרא גוף הקוטב הראשון (PB), וליישר כרומוזומים בתוך המשווה של מטשלב השני הדו (mii) ציר. בעוד PB יכול להיות בבירור נצפתה על ידי מיקרוסקופ אור קונבנציונאלי, זיהוי של חומרים גנטיים מבנים ציטולדים בדרך כלל דורש הכנה פולשנית שאינם תואמים את השימוש הנוסף של oocyte לטיפול בפוריות. מכאן, בפרקטיקה הקלינית, הנוכחות של PB הוא נחשב סימן ההיכר של בגרות oocyte. עם זאת, הדמיה חיה של מיקרוכדורית ודינמיקה כרומוזום במהלך התבגרות האדם oocyte גילה כי PB הופך להיות גלוי כמה שעות לפני ציר MII דו-קוטבית מורכב וכרומוזומים מיושרים1. עם זאת, באור המשודר, MII עצרה ביצים הם לא להבחין האוסטציטים אשר נכנס רק לתהליך של הפרדה כרומוזום. כך, קבוצה של oocytes, מסווג כ MII oocytes מבוסס רק על נוכחות PB, יכול להכיל latematuring רפתקאות oocytes שעדיין לא השלימו את התפתחותם ובכך אינם מוכנים הפריה.
עיכוב של התבגרות oocyte צפוי להשפיע על האוכלוסייה של המגיבים עניים עם מספר נמוך של MII oocytes ושיעור גבוה של oocytes בוגר שנאסף במפתיע ב מחזורי גירוי2. בvivo, רק ביצה אחת, באיכות הטובה ביותר משיגה בגרות והופכת ovulated. ב-הפריה חוץ גופית (IVF) מחזורים, השחלה מבוקרת חלתי משמש לגייס אוציטים מרובים להבשלה. גל גונדוטרופין מפעיל חידוש של התוכנית meiotic ואת ושלתי ביצה אמורים להגיע לשלב מעצר MII בתוך 36 שעות3. עם זאת, oocytes שאוחזרו preovulatory זקיקי לעתים קרובות מהווים מבחר של PBdisplaying MII oocytes ובלתי בוגר oocytes, או במטא I (MI) או שלפוחית העין בשלב (GV) (איור 1). רק MII oocytes חשופים הזרקת זרע תאיים (ICSI) בעוד oocytes בלתי בוגר הם בדרך כלל מושלך. עם זאת, כאשר מעובד בתוך מבחנה, MI oocytes משמשים בדרך כלל כדי הבלטת PB ב מבחנה. למרות הנחיתות הכללית שלהם, התבגרות מאוחרת oocytes אשר השלימה באופן ספונטני את החטיבה meiotic הראשון במהלך תרבות הלילה השתמשו בהצלחה כמשאב האחרון oocytes, ו לידות חי דווחו4,5 ,6,7,8. מכאן, ההזרקה בטרם עת של הזרע עשוי להיות הסיבה העיקרית בבסיס התוצאות התפתחותיות עניות של oocytes התבגרות מאוחרת דיווחו במחקרים קודמים9,10,11.
מיקרוסקופ אור מקוטב (PLM) בשילוב עם תוכנת עיבוד תמונה מאפשר הדמיה לא פולשנית של ציר meiotic ב-oocyte חי. השתקפות כפולה נוצרת על ידי אינטראקציה של קרן אור מקוטב עם הרכבה מסודרת מאוד של microtubules בניית הציר הדו. מאז אור מקוטב הוא בעוצמה נורמלית, הטכניקה יכולה לשמש בבטחה הגדרות קליניות כדי לראות את הדינמיקה של מנגנון החלוקה11,12,13,14. הנוכחות של ציר mii שבירה בתוך oocyte זוהה כסמן של יכולת התפתחותית של ביצה9,15,16,17,18, . 19,20,21,22,23 כך, הוצע כי הדמיה לא פולשנית הציר meiotic יכול לשמש לבקרת איכות ביצה בפרקטיקה קלינית11,14,20.
מאז ציר הזמן עבור הדינמיקה המיקרוצינורי במהלך מוזיקה oocyte נפתרה1, דפוס plm נצפתה יכול להיות קשור יותר לקורס הזמן של MI כדי mii המעבר. זמן קצר לאחר פליטת PB, הציר MII המתהווה הופך להיות בלתי ניתן לגילוי על ידי PLM. עם זאת, אם האוזציטים נשמרות בתרבות, האות השבירה עשוי לצוץ מאוחר יותר כאשר ציר של mii דו-קוטבית פורס9,10,11. כך, ב אוציטים הבלטת ממד PB ב מבחנה, העדר ציר יכול להיות רק זמני המתאים המעבר הפיזיולוגי של oocyte התבגרות מאוחרת מ-MI לשלב MII. אם אות MII הציר אינו ניתן לגילוי, הזרקת זרע יכול להיות נדחה לנקודת זמן מאוחרת יותר מתן זמן נוסף עבור היווצרות ציר MII. אופטימיזציה PLM בסיוע של זמן ICSI למקסם את הסיכוי של התבגרות מאוחרת oocytes להיות מנוצל קלינית ולעשות הבדל לחולים פרוגנוזה נמוכה9.
להלן, אנו מספקים פרוטוקול צעד אחר צעד של איך לבצע דימות ציר פולשני של האדם oocytes. אנו גם להדגים כיצד PLM יכול להיות מועסק כדי למנוע את הסיכון של הפריה מוקדמת של התבגרות מאוחרת oocytes.

<table><tbody><tr><td>תרבית בודדת רציפה עם סרום אנושי אלבומין</td><td>אירווין סיינטיפיק</td><td>90164</td><td>מבוסס ביקרבונט חד שלבי <חזק>מדיום תרבית</חזק> לתרבית עוברית</td></tr><tr><td>הפחתת מיקרופיפטה 150 ומיקרו; m</td><td>מיקרוטק IVF</td><td>005-150C</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטה דנודינג 180 ומיקרו; m</td><td>Microtech IVF</td><td>005-180B</td><td>מתאים להעברת ביציות בין כלים</td></tr><tr><td>מיקרופיפטה 200 ומיקרו; m</td><td>Microtech IVF</td><td>005-250-A</td><td>מתאים להעברת ביציות בין כלים</td></tr><tr><td>FluoroDish</td><td>World Precision Instruments</td><td>FD 5040-100</td><td>צלחת תחתית זכוכית</td></tr> <tr><td>(אלטרנטיבה: WillCo-dish GWST-5040 WillCo Wells)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>מחזיק מיקרופיפטה Microtech</td><td></td><td>001-120-30</td><td>זכוכית סטרילית microneeds</td></tr><tr><td>תמיסת Hyaluronidase Irvine</td><td> Scientific</td><td>90101</td><td>להסרת ביציות</td></tr><tr><td>ICSI micropipette</td><td>Microtech</td><td>002-5-30</td><td>מיקרו-מחטי זכוכית סטריליות</td></tr><tr><td>צלחת תרבית מיקרו טיפות</td><td>Vitrolife</td><td>16003</td><td>צלחת 12 בארות לתרבית עוברים</td></tr><tr><td>רב תכליתי <חזק>טיפול בינוני </חזק> (MHM) עם מדיום טיפול בגנטמיצין</td><td>אירווין סיינטיפיק</td><td>90163</td><td>, MOPS/HEPES חוצץ</td></tr><tr><td>Nikon Eclipse TE 2000-U</td> מיקרוסקופ הפוך <td>של ניקון</td><td></td><td>עם שלב מחומם</td></tr><tr><td>צלחת פטרי Nunc IVF, 60 מ"מ</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>150270</td><td>צלחת ICSI מפלסטיק</td></tr><tr><td>Nunc צלחת IVF 4 בארות לא מטופלת</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>179830</td><td>צלחת 4 בארות לתרבית עוברים</td></tr><tr><td>OCTAX polarAide</td><td>MTG</td><td></td><td>מערכת PLM משולבת</td></tr><tr><td>שמן לתרבית עוברים</td> שמן <td>אירווין סיינטיפיק</td><td>9305</td><td>לכיסוי</td></tr><tr><td>פוליוויניל פירולידון</td><td>אירווין סיינטיפיק</td><td>90123</td><td>לקיבוע זרע לפני ICSI</td></tr></tbody></table>

הערכה לפירעון ביצת אנוש ויישומו הקליני

Human Egg Maturity Assessment and Its Clinical Application

העיתוי האופטימלי של הזרקת הזרע התאיים (ICSI) הוא דאגה רצינית לתוכניות הפוריות, משום שערך זרע בטרם עת מצמצם את היכולת ההתפתחותית של הביצית. נוכחות של גוף הקוטב הראשון (PB) יחד עם ציר meiotic מציין השלמה של התבגרות oocyte ואת המוכנות של הביצה להפריה. בפרקטיקה הקלינית, נהוג להניח כי כל האוציטים המציגים PB הם בוגרים (MII) oocytes. עם זאת, PB ההבלטה לפני היווצרות של ציר MII דו-קוטבית. זה הופך את הנוכחות של PB לסמן לא אמין של בגרות oocyte. הדמיה של ציר שאינו פולשני באמצעות מיקרוסקופ אור מקוטב (PLM) מאפשר בדיקה קלה ומהירה של האם PB-הצגת oocyte למעשה הרכבנו ציר meiotic לפני ICSI. כאן, אנו מציגים פרוטוקול סטנדרטי כדי לבצע הערכה לפירעון ביצים אנושיים במעבדה הקלינית. אנו גם מראים כיצד למטב את הזמן של ICSI ביחס לשלב ההתפתחותי של oocyte על מנת למנוע הזרקת זרע מוקדמת של התבגרות מאוחרת oocytes. שימוש בגישה זו, אפילו בלתי בוגר הבלטת מיכל PB בתוך מבחנה יכול להיות מנוצל קלינית. הצהרה כי ציר MII נוכח לפני הזרקת זרע והתאמה אינדיבידואלית של הזמן של ICSI הוא חשוב במיוחד בפרוגנוזה נמוכה הפריה חוץ גופית (IVF) מחזורים עם מספר נמוך של oocytes זמין עבור הפריה.

מיקרוסקופ אור מקוטב מאפשר באופן מיידי לבדוק אם ההבשלה הגרעינית השלימה והתאספו ציר MII לפני ICSI. בשל אופיו הלא פולשני שלה, זה יכול לשמש כדי להעריך בבטחה את המוכנות של ביצת האדם להפריה בהגדרות הקליניות11,12,13,14. בנוסף, יש סיכוי גבוה יותר להצמיח מעבר לעוברים קיימא מאשר באוציטים ללא ציר9,15,16,17,18,19, מיכל בן 20 , מיכל בן 21 , מיכל בן 22 , 23. גם, oocytes שמציעות ציר דו קוטבית ברורים נראה שיש יכולת התפתחותית גבוהה יותר מאשר oocytes עם הצירים מנוונת9,21,22. יחד, הדמיה ציר יכול לשמש ככלי כדי לזהות את oocytes עם הפוטנציאל הגדול ביותר להיות מופרית בהצלחה, לעבור פיתוח טרום השרשה ותמיכה לטווח מלא הריון9,15, מיכל בן 16 , מיכל בן 17 , מיכל בן 18 , מיכל בן 19 , מיכל בן 20 , מיכל בן 21 , מיכל בן 22 , . עשריםואחד
השכיחות המדווחת של הציר משתנה (44-97%) המשקף את הגיוון של האוכלוסייה למדו9,15,16,17,18,19,20,21, מיכל בן 22 , מיכל בן 23 , מיכל בן 26 , בן 27 , 28. ב vivo התבגר oocytes מתוך המגיבים הנורמליים בדרך כלל להציג ציר mii דו-קוטבית ב 40 h לאחר ההדק hCG9,18,27,29. עם זאת, במגיבים איטי, הבריכה של oocytes שאוחזרו מ preovulatory זקיקי מושפע התבגרות עיכוב9,27. כאן, הדמיה ציר צריך להתבצע כדי להפלות את האוסטציטים נעצר בשלב MII מאלה שעברו מעבר מורדתי חשוב (איור 3). אנו ממליצים על הסרת תאים פוליקולרית מיד עם אחזור, ואת הדגירה של MI ו-MII oocytes בארות נפרדות כדי להיות מסוגל להבחין ב vivo oocytes הבשיל ו התבגרות מאוחרת הבלטת ממד PB בתוך מבחנה, זמן קצר לפני ICSI. במקרה של מבוצעת בדיוק לפני ICSI, שתי אוכלוסיות אלה של oocytes מבוססים על מראה PB.
יש לפרש את השינויים הספציפיים לפאזה בתבנית PLM בהקשר של הידע על הדינמיקה של ציר הזמן במהלך ההבשלה המיוטית. במהלך הinterkinesis, מנגנון החלוקה עובר התארגנות מבנית נרחבת ואות plm מאוד נעלם1,9,10,11. כך, בהתפתחות נפשית מושהית הבלטת ממד PB בתוך מבחנה, העדר אות MII ציר עשוי לא בהכרח לשקף הפרעה תאית, אבל זה יכול להצביע על ההתקדמות של oocyte מ-MI לשלב MII (איור 3). אם הזרע מוזרק בנקודת זמן בלתי פיזיולוגית, הפוטנציאל ההתפתחותי של הביצית נחשף. דחיית icsi מספק התבגרות מאוחרת oocytes עם יותר זמן להרכיב ציר mii שנוכחותו קשורה עם תוצאות קליניות טוב יותר9,10,11. במחקר קליני מעורבים איטי/עני המגיבים, כמעט 60% של בתחילה הציר-שלילי אוציטים פיתח אות הציר לפני PLM מחדש בדיקה כ 2 h מאוחר יותר9. בהתאם לשלב ההתפתחותי והכושר הכולל של התבגרות מאוחרת, מראה ציר MII לאחר PB ההבלטה בדרך כלל לוקח 2-6 h (התבוננות שלא פורסמה). Oocytes מציג גשר מיקרוכדורית (אנאפיום/telophase כיתה D) במהלך הבדיקה PLM הראשון דורשים זמן רב יותר לפתח אות MII ציר מאשר oocytes ללא צירים גלויים (הצירים המתעוררים, כיתה C). התאמה אישית של הזמן של ICSI לשלב ההתפתחותי של הביצית מונע הפעלה מוקדמת של oocyte ותוצאות שיעור הדישון משופר ופיתוח העובר מוצלחת9.
למרות מאוחר התבגרות oocytes הבלטת ממד ב-PB באופן כללי יש יכולת התפתחותית נמוכה יותר מאשר ב vivo התבגר oocytes, שיעור התפתחות העובר מקובל אם הם מצליחים להרכיב ציר לזיהוי לפני העיכוב ICSI (הבלסטלציה קצב של41.32%) באמצעות גישה זו, אפילו oocytes בוגרים, אשר נדחים בדרך כלל לטיפול בפוריות, יכול להיות מנוצל קלינית, לייצר עוברים הניתנים להעברה, ולהצמיח לטווח מלא הריונות. הערכה של השלב המטוריאני של כל oocyte הפרט הוא מועיל במיוחד במחזור פרוגנוזה נמוכה מניב מספר קטן של MII oocytes ו/או לאחר ביצוע הצלה התבגרות מתורבת של ooציטים בלתי בוגרים9.
מלבד הערכת בגרות ביצה, הדמיה ציר מומלץ גם לפני ביופסיה PB כדי למנוע השמדת הצירים בתוך האני/telophase האוציטים. באמבריולוגיה ניסיוני, ההדמיה של הציר המיוטי משמשת במהלך העברת ביצים ו/או הליך העברה של ציר13.
<img alt="התבגרות ביציות, קומפלקס קומולוס-ביצית לשלב MII, תרשים ביציות GV, MI, MII, מחקר מיקרוסקופי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60058/60058fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1: ההבשלה של האדם האנושי. ב vivo הבשיל oocytes (MII) מוצג PB בזמן האחזור. בלתי בוגר oocytes (GV, MI) יכול להשלים באופן ספונטני התבגרות מבחנה. סרגל קנה מידה = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60058/60058fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="זיהוי ציר MII בתמונות מיקרוסקופיות, המציג נוכחות והיעדר אותות; מיקרוסקופיה פלואורסצנטית." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60058/60058fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> איור 2: סיווג Oocyte מבוסס על תבנית PLM-זיהה. דוגמאות מייצגות של ציונים בעלי כישור (A-D) לפי המראה של אות הציר. תבנית מזוהה PLM: (A) אות בולטת של ציר דו קוטבי, (ב) שקוף ציר הציר mii, (ג) לא לזיהוי ציר, ו (ד) מיקרוטובית גשר. סרגל קנה מידה = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60058/60058fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="שלבי חלוקת תאים באמצעות שדה בהיר ומיקרוסקופ אור מקוטב; DNA, הדמיית ציר." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60058/60058fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> איור 3: שלבים של MI כדי מעבר MII בהבשלה האוסטטה. המראה של oocytes בשדה בהיר (בשורה העליונה), בשילוב עם אות פלואורסצנטית של כרומוזומים (ציאן) ו microtubules (מגנטה) (שורה אמצעית), ו באור מקוטב (בשורה התחתונה) מוצג. כל אוסטליט היה הראשון PLM בדק ומיד תוקן. אוציטים קבוע (אימונוcytes) עם תווית הופסט (DNA) ו anti-α-טובולין נוגדן (microtubules). החץ הצהוב מציין את הנוכחות של PB ואת החץ הלבן מדגיש את המיקום של microtubules ביניים. סרגל קנה מידה = 20 μm. דמות זו שונתה מ הולבטיקובה ואח ', JARG 20199. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60058/60058fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="מיקרוסקופ אור מקוטב; זיהוי ציר MII; ברייטפילד, ציר DNA בחקר ביציות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60058/60058fig4.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> איור 4: הקורלציה של הארגון כרומוזום מיקרוטוכדורית עם דפוס שבירה זוהה על ידי מיקרוסקופ אור מקוטב. המראה של האוציטים בשדה בהיר בשילוב עם אות פלורסנט עבור כרומוזומים (ציאן) ו microtubules (מגנטה) (השורה העליונה), ו באור מקוטב (בשורה התחתונה) מוצג. כל האוציט תוקן מיד לאחר בחינת PLM. דנ א (הואכסט) ומיקרוטוכדורית (α-טובולין) היו מוכתמים. (A-C) oocytes עם ציר plm לזיהוי כרומוזומים לא מיושרים (a, B) או מעמודי צירים ממוקדים באופן רופף (C); (D-F) לא נורמלי האוציטים ללא הצירים plm-לגילוי mii מראה לא מפותח (ד), אפאר (E) או לא ציר (F). החץ הלבן מדגיש את המיקום של microtubules מיקרו, ו כוכבית (*) מציין את המיקום של פירוק כרומטין. סרגל קנה מידה = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60058/60058fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="דיאגרמת מיקרוסקופיה פלואורסצנטית של הבשלת הביציות, המציגה יעוד והיווצרות גוף קוטבי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60058/60058fig5v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> איור 5: שבירה מבנים באוציטים אנושיים. דוגמאות מייצגות של (A-D) מבנים שבירה שזוהו על ידי plm ב-האדם האוציטים. ZP = סונה פלידה; PM = ממברנה פלזמה (oolema); . גוף שבירה, שואבי אבק חץ לבן, ציר מיוטי. בשלבים שונים של התבגרות (ה) mii ציר שגוי עם גוף הקוטב (PB). (ו) ציר התנתקות מקרום הפלזמה. סרגל קנה מידה = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60058/60058fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
משלים איור 1: פריסת שולחן העבודה של תוכנת ניתוח תמונה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60058/desktop_layout.jpg">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>
וידאו משלים: הליך בדיקה PLM. סיבוב של oocyte נדרש כדי להוציא את הנוכחות של ציר (חץ). סרגל קנה מידה = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60058/Supplementary_video.avi">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הקובץ.</a>

אנו מספקים מיתאר של הפרוטוקול הקליני להערכת לא פולשנית של בגרות ביצה אנושית באמצעות מיקרוסקופ אור מקוטב.

The optimal timing of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is of a serious concern for fertility programs because untimely sperm entry diminishes the ...

בתרגול הקליני, נהוג להניח שכל ביצית המציגה גוף קוטבי מוכנה להפריה. הדמיה של החיים של התבגרות ביצית אנושית מגלה כי גוף הקוטב הופך גלוי הרבה לפני ציר metaphase II דו קוטבי מורכב, יצירת הסיכון של הזרקת זרע בטרם עת. מיקרוסקופ אור מקוטב מאפשר הדמיה לא פולשנית של הציר המיוטי ביציות אנושיות, והוא יכול להיות מנוצל בבטחה IFV כדי להעריך את בגרות הביצית לפני הזרקת זרע intracytoplasmic.אופטימיזציה של העיתוי של ICSI חשוב במיוחד פרוגנוזה ירודה של מחזורי הפריה חוץ גופית, עם מספר נמוך של ביציות זמין להפריה. הליך קליני זה הוא טכניקת הרחבה לטיפול סטנדרטי בהפריה חוץ גופית, ויש לבצעו מראש על ידי כוח אדם מנוסה, בהתאם לנוהגים מעבדתיים טובים. 35 עד 36 שעות לאחר הזרקת גונדוטרופין כוריוני אנושי, לאסוף את קומולוס-oocyte מאוחזר קומפלקסים ב פחמן דו חמצני עצמאי טיפול בינוני.לצייד את oocytes במשך 10 עד 15 דקות באינקובטור פחמן דו חמצני עצמאי ב 37 מעלות צלזיוס. חשוף את הוציטים לתספורת היאלואורונידה גבוהה, מדוללת במדיום הטיפולי. לאחר 30 שניות, השתמשו בפיפיטה של 200 מיקרוליטר כדי להסיר באופן מכני תאי קומולוס-קורונה.להעריך את המספר ואת המצב ההתפתחותי של oocytes denuded על פי נוכחות או היעדר הגרעין וגוף הקוטב הראשון. מניחים שלב ורידים נביטתי, ו metaphase אני ו metaphase II שלב oocytes לתוך טיפות בודדות של פחמן דו חמצני עצמאי תרבות בינונית, מכוסה בשמן מינרלי. לאחר מכן, מניחים את oocytes ב 37 מעלות צלזיוס, 5%פחמן דו חמצני ו 6% חמצן עם לחות במשך 3 עד 4 שעות.כדי להכין צלחות טיפוח לתרבות העוברים, הוסיפו את הנפח המתאים של תרבות מוגדרת מראש בינונית לבאות בודדות של צלחת תרבות בגודל מתאים. מכסים את טיפות בשמן מינרלי שווה ערך, מתייגים את הצלחת במזהה ייחודי ומ מניחים אותה בחוסר ודאות תלוי פחמן דו-חמצני למשך 20 דקות לפחות. להכנת צלחת ה-ICSI, הוסיפו 5 טיפות מיקרוליטר של מדיום טיפול מחומם מראש לכל בוציט מציג גוף קוטבי, וטיפה נוספת אחת לשטיפת מחטים לצלחת פלסטיק נקייה.הוסף טיפה נוספת של פתרון PVP עבור קיבוע הזרע לפני הזרקת הזרע intracytoplasmic, ו כיסוי טיפות עם שמן מינרלי מחומם מראש. הקפד לתייג את המנה. לאחר מכן, מניחים את צלחת הזרקת הזרע באינקובטור פחמן דו חמצני עצמאי לפחות 20 דקות.בעוד הצלחת היא שיווי משקל, להוסיף 5 טיפות microliter של מדיום טיפול מחומם מראש עבור כל גוף קוטב מציג oocyte לצלחת תרבות תחתית זכוכית. כיסוי כל טיפות עם שמן מינרלי מחומם מראש. הקפד לתייג את המנה.לאחר מכן, מניחים את הצלחת באינקובטור פחמן דו חמצני עצמאי לפחות 20 דקות. בעוד הצלחות הן שיווי משקל, לעבור על הבמה מחוממת על מיקרוסקופ הפוך להתאים את החזקה סטרילית ומחט הזרקת זרע למחזיקי מיקרו הזרקת. להביא את המחטים לפוקוס, ולבחור את המטרה המתאימה, דואג כי מעבה הוא במצב שדה בהיר.הכנס את מסנן ההפרעה הירוק והגדר את מחוון ניתוח הגביש הנוזלי למצב עבודה. הגדר את התריס לכ- 50% והתאם מקטב מעגלי כדי להפחית רעשי רקע. כדי להגדיר את המחשב לבדיקת מיקרוסקופיית אור מקוטבת, הפעל את תוכנת ההדמיה ובחר וידאו, מקור וידאו ו- polarAIDE בתפריט וידאו.לאחר מכן, עבור לסרטון בשידור חי על-ידי מעבר לדף וידאו ובחר את הסמל כדי להפעיל ניתוח ציר וזונה. כדי לקבוע את הבשלות של כל בוציטים, מעבירים את כל הוציטים לטפטפים בודדים על המנה המוכנה עם תחתית הזכוכית, ומ מניחים את המנה שנחשפה תחת המיקרוסקופ ההפוך המוכן. הכניסו את ה-oocyte הראשון לפוקוס, והתבוננו בתדמית birefringence oocyte שזוהתה, כפי שהיא מעובדת במחשב ומוצגת בזמן אמת על מסך המחשב.השתמש במחטי ההחזקה והזרקת הזרע כדי להפוך את האוציטים כך שגוף הקוטב יהיה במצב של השעה 12 ויתמקד בגוף הקוטב. אם birefringence ציר אינו נראה בבירור ממבט ראשון בקרבת PB, מעט לגעת zona pellucida בעדינות להפוך את oocyte סביב כל ציר כדי להבטיח את היישור של האור מקוטב עם סיבי ציר מערך. לאחר זיהוי כל oocytes חיובי ציר, להעביר את oocytes לתוך טיפות בודדות בתוך צלחת ICSI מוכן, ולחשוף את oocytes הזרקת זרע intracytoplasmic על פי פרוטוקולים סטנדרטיים.אם oocytes להפגין שום אות ציר metaphase II לגילוי, למקם את צלחת מיקרוסקופ אור מקוטב לתוך החממה פחמן דו חמצני עצמאי במשך 2 עד 3 שעות. לפני ביצוע מחדש של בדיקת מיקרוסקופית האור המקוטבת כפי שהוכח, לאחר ההזרקה, מעבירים את הוציטים לצלחות הטיפוח המוכנות של העוברים לתרבותם עד להגעת שלב ההדף. יש לדאוג להבטיח כי כל micromanipulation של oocyte האנושי מתבצעים בסביבת שליטה, ב 37 מעלות, ב pH בינוני תרבות אופטימלית.הדמיית ציר מאפשרת אפליה של בוציטים בוגרים לחלוטין שנעצרו בשלב המטה-פאזה II, מאלה שעברו מעבר התבגרות חשוב. בוציטים מושהים התפתחותית המגלים גופי קוטב במבחנה, היעדר אות הציר של metaphase II אולי לא בהכרח משקף הפרעה תאית, אך יכול להצביע על התקדמות הבוטה מהמטאפאזה I לשלב המטה-פאזה II. הנוכחות של ציר meiotic הוא סמן חיובי של ביצים יכולת התפתחותית.דחיית ICSI מספקת oocytes מושהה התפתחותית עם זמן נוסף כדי להשלים את תהליך ההבשלה ולהרכיב את ציר metaphase II לפני הזריקה שלהם. באמצעות גישה זו, אפילו oocytes בשלים כי הם מושלכים באופן שגרתי יכול להיות מנוצל קלינית, ולוותר הריונות מוצלחים.

human-egg-maturity-assessment-and-its-clinical-application

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

קלות הנגישות של העובר אפשרה לניסויים למפות גורלות התא באמצעות גישות שונות, כולל חומוס שליו מפלצות וסימון צבע מוקד. במאמר זה אנו מדגים אחד הכנת ביצה שיטה כי כבר מותאם במיוחד פעמים הישרדות ארוכה.

עוף Windowing ביצים למחקרים התפתחותיים

Chorioallantoic חומוס קרום (רמ"א) הוא ייחודי, immunodeficient באופן טבעי בסביבה תומכת תרבות ללמוד אנגיוגנזה tumorigenesis. מאמר זה וידאו מדגים את השלבים השונים...

אפרוח אובו לשעבר תרבות אובו לשעבר CAM Assay: איך זה באמת עובד

המאמר מתאר פרוטוקול ליצירת עוברים של דגי זברה באמצעות הזדווגות טבעית ומיון שלבי ההתפתחות שלהם. הפרוטוקול משמש גם לניתוח תאי β בלבלב באמצעות דגים טרנסגניים.

הזדווגות וביציות בימוי: שיטה ליצירת עוברים ומייונם לפי שלב התפתחותי

בסרטון זה, אנו מתארים טכניקה לפתיחת קליפת הביצה של ביצת תרנגולת מופרית כדי לחשוף את הקרום הכוריאואלנטואי שלה או CAM הנושא רשת של כלי דם מסתעפים. ה- CAM החשוף יכול לשמש במידול גידולי ביצו.

חלון ביצים: שיטה לפתיחת קליפת ביצי תרנגולת מופרית לחשיפת כלי הדם של הממברנה הכוריאואלנטואית

כתב יד זה מתאר גישה ניסיונית מורפולוגית וביוכימית לאפיין ביציות סוסים. באופן ספציפי, העבודה הנוכחית מדגימה כיצד לאסוף ביציות של בוגר בוגרת ובוגרת על ידי אולטראסאונד מונחה איסוף ביצית (OPU) וכיצד לחקור הפרדה כרומוזום, מורפולוגיה ציר, acetylation היסטון גלובלי, ביטוי mRNA.

ניתוח של הפרדת כרומוזום, אצטון היסטון, ומורפולוגיה ציר ב סוס ביציות

כאן, אנו מציגים עבור הערכה בלתי פולשני של מיומנות התפתחותית oocyte שבוצעה במהלך שלהם במבחנה ההבשלה של שלפוחית germinal לשלב השני מפה של פרוטוקול. שיטה זו משלבת הדמיה בצילום מואץ עם חלקיקים תמונה velocimetry (PIV) וניתוחים רשת עצבית.

מזהה מבוססי-רשת עצבית של Oocytes וחוה עכבר נכה כשיר או לא מוכשר

במחקר זה, אנו מתארים מערכת ב- ovo ככלי מבטיח לבדוק אינסולין-מימטי תרכובות אורגניזם חי. היתרונות העיקריים כוללים תפוקה הולמת ועלויות מקובל, המאפשרים הזיהוי של פיטוכימיקלים עם אינסולין-מימטי מאפיינים.

מודל ב Ovo לבדיקת תרכובות מימטי-אינסולין

אנו מציגים את המודל ממברנה העוף כוראואליאלי כחלופה, השתלה שולחן, במודל vivo עבור החרט של גינקולוגית ואורולוגית תאים לסרטן וגידולים הנגזר החולה.

שימוש בקרום כוראלאלי ממברנה במודל Vivo כדי ללמוד גינקולוגית ואורולוגיים סרטן

פרוטוקול זה מתאר שלוש שיטות כיצד להשיג ולהשתמש בעוברי עוף בני 5 עד 8 ימים ובממברנה הכוריאואלנטואית שלהם (CAM) כמודל in vivo לחקר הדמיית אולטרסאונד משופרת ניגודיות ואספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות.

הכנת עוברי עוף אקס אובו וכלי קרום כוריואלנטואיים כמודל In Vivo להדמיית אולטרסאונד משופר ניגודיות ומחקרי אספקת תרופות בתיווך מיקרו-בועות

עוברים עוף, כמודל התפתחותי קלאסי, משמשים במעבדה שלנו להערכת cardiotoxicic התפתחותי בעקבות חשיפה מזהמים סביבתיים שונים. שיטות חשיפה ושיטות הערכה מורפולוגיות/פונקציונליות שנקבעו מתוארות בכתב יד זה.

שימוש בעובר עוף ככלי רב עוצמה להערכת לב-קרדיוקסיות התפתחותית

בדיקת החרוזים הספוגים כוללת אספקה ממוקדת של ריאגנט הבדיקה בכל נקודת זמן התפתחותית כדי לחקור את ויסות התמיינות התאים והמורפוגנזה. מוצג פרוטוקול מפורט, החל על כל מודל ניסיוני של בעלי חיים, להכנת שלושה סוגים שונים של חרוזים מושרים והשתלתם באינטרדיגיט של עובר עוף.

ניתוח התמיינות תאים, מורפוגנזה ותבניות במהלך עוברי עוף באמצעות בדיקת החרוזים המושרים

למדו הערכת בגרות ביציות אנוש באמצעות מיקרוסקופיית אור מקוטב ללא פולשנות. שיטה זו משפרת תזמון הזרעה תוך-ציטופלזמית ומגבירה סיכויי הצלחה בטיפולי פוריות.

הערכה לפירעון ביצת אנוש ויישומו הקליני

גלה סרטונים נוספים