Name: אימונוגלובולין G N-גליקן ניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: למדו ניתוח N-גליקנים של אימונוגלובולין G באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד. שיטה זו מספקת רגישות גבוהה, שחזוריות טובה ויכולת הפרדה של איזומרים גליקניים למחקר ביוכימי ואנליטי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מענקים מן הלאומי המדע הטבעי הקרן של סין (81673247 & 81872682) ו אוסטרליה-סין מענק שיתופי (NH & MRC-APP1112767-NSFC 81561128020).

כל הנושאים הכלולים בפרוטוקול אושרו על ידי ועדת האתיקה של האוניברסיטה הרפואית קפיטל, בייג, סין12. הסכמה מושכלת בכתב הושגה מכל נושא בתחילת המחקר.
1. בידוד IgG
<ol><li>הכן את הכימיקלים כולל מאגר מחייב (מתמיסת מלח מאוחסן באגירה, PBS): 1x pbs (ph = 7.4), לנטרל מאגר: 10x pbs (ph = 6.6-6.8), הללויה: 0.1 m החומצה פורמית (ph = 2.5), נטרול פתרון להתחמק: 1 M אמוניום ביקרבונט, מאגר מאוחסן: 20% אתנול + 20 מ"מ טריס + 0.1 M הנאל (pH = 7.4), ניקוי פתרון עבור חלבון G: 0.1 M NaOH + 30% propan-2-ol. הערה: רמת ה-pH היא קריטית בפרוטוקול זה. הנשירה של IgG דורש pH נמוך מאוד, ויש סיכון של אובדן של חומצות סיליות בשל הידרוליזה חומצה. לכן, הימנעות מתרחשת בתוך שניות, ו-pH שוחזר במהירות לנייטרליות, שמירה על שלמות IgG ו חומצות הסילית.</li>
	<li>להכין את הדגימות: להפשיר את מדגם פלזמה קפוא ואז צנטריפוגה ב 80 x g עבור 10 דקות, ולהשאיר את הצלחת g מונוליתית חלבון וכימיקלים הנ ל 30 דקות בטמפרטורת החדר (RT).</li>
	<li>העבר מדגם μL 100 (שניתן להשתמש בו כדי לזהות את 2x כדי למנוע את הכשל הראשון) לתוך צלחת אוסף של 2 מ"ל (כאן, סך של שישה דוגמאות סטנדרטיות, דגימת בקרה אחת [מים אולטרה טהורים], ו 89 דגימות פלזמה תוכננו עבור 96 היטב לוחיות והוקצו באופן אקראי לצלחת).</li>
	<li>לדלל את הדגימות עם 1x PBS ידי 1:7 (v/v).</li>
	<li>נקה 0.45 יקרומטר הידרופילי פוליפרופילן (ghp) מסנן צלחת עם 200 μl של מים אולטרה טהור (לחזור על 2x).</li>
	<li>להעביר את הדגימות מדולל לתוך לוחית הסינון ולסנן את הדגימות לתוך צלחת האוסף באמצעות משאבת ואקום (בקרת לחץ ואקום ב-266.6-399.9 Pa).</li>
	<li>הכנת לוחות מונוליטיים של חלבון G<ol>
<li>מחק את מאגר האחסון.</li>
		<li>נקו את לוחות מונוליטיים עם 2 מ ל של מים אולטרה טהורים, 2 מ ל של 1x pbs, 1 מ ל של 0.1 M החומצה פורמית, 2 מ ל של 10x pbs, 2 מ ל של 1x pbs (ברציפות), ולהסיר נוזל זורם באמצעות משאבת ואקום.</li>
	</ol></li>
	<li>העבר את הדגימות מסוננים כדי חלבון G מונוליטי לוחית עבור כריכת IgG וניקוי, ואז לנקות את לוחות מונוליטיים עם 2 מ ל של 1x PBS (לחזור על ניקוי 2x).</li>
	<li>Elute igg עם 1 מ ל של 0.1 החומצה פורמית ולסנן את הדגימות לתוך צלחת האוסף על ידי משאבת ואקום, לאחר מכן להוסיף 170 μl של 1 M אמוניום ביקרבונט לתוך צלחת האוסף.</li>
	<li>זיהוי הריכוז IgG באמצעות ספקטרוסקופיה ספיגת (אורך הגל האופטימלי = 280 nm).<ol>
<li>פתח את התוכנה ובחר במצב חלבון-CY3.</li>
		<li>לצייר 2 μL של מים אולטרה טהורים ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על ריק בתוכנה כדי לנקות את המסך (לחזור על 1x).</li>
		<li>לצייר 2 μL של מים אולטרה טהורים ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על לדוגמה בתוכנה כדי לזהות את המים אולטרה טהורים.</li>
		<li>לצייר 2 μL של המדגם IgG ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על לדוגמה בתוכנה כדי לזהות את המדגם.</li>
		<li>צייר 2 μL של מים אולטרה טהורים ולטעון אותו לתוך המסך, ולאחר מכן לחץ על ריק בתוכנה כדי לנקות את המסך.</li>
		<li>סגור את התוכנה. הערה: הנוסחה לחישוב ריכוז IgG היא כדלקמן: CIgg = מקדם הכחדה x (13.7) x 1,000 μg/mL</li>
	</ol></li>
	<li>לשים את IgG שחולצו להתייבש בתנור ב 60 ° צ' ולשמר את IgG המחולצים (300 μL שחולצו IgG עבור 4 h).<ol>
<li>הסר 300 μL של חילוץ IgG אם הריכוז גדול מ-1,000 μg/mL.</li>
		<li>הסר 350 μL של חילוץ IgG אם הריכוז הוא בין 500-1000 μg/mL.</li>
		<li>הסר 400 μL של חילוץ IgG אם הריכוז הוא בין 200-500 μg/mL.</li>
		<li>הסר 600 μL של חילוץ IgG אם הריכוז קטן מ 200 μg/mL. הערה: ריכוז IgG צריך להיות רצוי > 200 μg/mL לאיתור הבאים. הסכום הממוצע של IgG צריך להיות רצוי > 1200 μg, אשר ניתן נבדק 2x במקרה הבדיקה הראשונה נכשלת.</li>
	</ol></li>
	<li>ניקוי לוחית מונוליתית בחלבון G לשימוש חוזר<ol>
<li>שטוף את הצלחת עם 2 מ ל של מים אולטרה טהור, 1 מ ל 0.1 M NaOH (להסרת החלבונים של זירז), 4 מ ל של מים אולטרה טהור, ו 4 מ ל של 1x PBS (ברציפות), ואז להסיר נוזל זורם באמצעות משאבת ואקום.</li>
		<li>לשטוף את הצלחת עם 2 מ ל של מים אולטרה טהור, 2 מ ל 30% propan-2-ol (להסרת חלבונים הידרופובי מאוגד), 2 מ ל של מים אולטרה טהורים, ו 4 מ ל של 1x PBS (ברציפות), ואז להסיר נוזל זורם באמצעות משאבת ואקום.</li>
		<li>לשטוף את הצלחת עם 1 מ ל של מאגר (20% אתנול + 20 מ"מ טריס + 0.1 M הנאל) ולהוסיף 1 מ ל של מאגר (20% אתנול + 20 מ"מ טריס + 0.1 M הנאל) לצלחת, ואז לעזוב את הצלחת ב 4 ° c.</li>
	</ol></li>
</ol>2. גליקן לשחרר
<ol><li>הכן את IgG יבשים ולאחסן את הכימיקלים כולל 1.33% SDS, 4% Igepal (החנות הרחק מן האור), ו 5x PBS ב RT.</li>
	<li>הכנת האנזים PNGase F על ידי דילול 250 U אנזים עם 250 μL של מים אולטרה טהורים.</li>
	<li>דנטורציה של IgG<ol>
<li>הוסף 30 μL של 1.33% SDS ולערבב על ידי vortexing, להעביר את המדגם לתוך 65 תנור ° c עבור 10 דקות, ולאחר מכן להסיר אותו מהתנור ולתת לנוח 15 דקות.</li>
		<li>הוסף 10 μL של 4% Igepal ומניחים אותו על האינקובטור רועד עבור 5 דקות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הסרה ושחרור של גליקנים<ol>
<li>הוסף 20 μL של 5x PBS ו 30-35 μL של 0.1 מול/L NaOH כדי לווסת pH של 8.0, ולערבב על ידי vortexing. הוסף 4 μL של האנזים של PNGase F ומערבבים על ידי vortexing. לאחר מכן, מודטה עבור 18-20 h באמבט מים 37 ° c.</li>
		<li>מכניסים את הגליקנים המשוחררים לייבוש בתנור ב-60 ° c עבור 2.5-3.0 h.</li>
		<li>שמרו את הגליקנים המשוחררים ב-80 ° c עד למדידה נוספת. הערה: שלב זה הוא קריטי. המפתח כדי גליקן לשחרר הוא שיפור הפעילות של האנזים PNGase F כדי למקסם את היעילות שלה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. גליקן מתייג ומאפשר טיהור
<ol><li>הכן את 2-האמינאמיד (2-AB) תיוג מגיב עם 0.70 מ"ג של 2-AB, 10.50 μL של חומצה אצטית, 6 מ ג של נתרן cyanoboroהידריד (NaBH3CN), ו 24.50 μl של diמתיל סולפוקסיד (dmso) (נפח כולל = 35 μl). לאחר מכן, להוסיף חומצה אצטית, 2-AB, ו NaBH3CN לתוך dmso בסדר.</li>
	<li>לתייג את הגליקנים באמצעות 35 μL של 2-AB תיוג מגיב, להעביר את הגליקנים המסומנים ל-מתנד עבור 5 דקות, העברה לתנור עבור 3 h ב 65 ° c, לאחר מכן העברה RT עבור 30 דקות. הערה: יש לבצע את השלבים הניתנים לתיוג כולו תוך הגנה מפני אור.</li>
	<li>לטיפול pretreat 0.2 יקרומטר מסנן לוחית עם 200 μl של 70% אתנול, 200 μl של מים אולטרה טהורים, ו-200 μl של 96% acetonitrile (4 ° c), ולאחר מכן להסיר פסולת באמצעות משאבת ואקום.</li>
	<li>טיהור של 2-AB מתויג גליקן<ol>
<li>הוסף 700 μL של 100% aceton, לתוך 2-AB המסומן גליקן והעבר לאינקובטור רועד עבור 5 דקות.</li>
		<li>צנטריפוגה ב 134 x g עבור 5 דקות (4 ° c).</li>
		<li>העבר את המדגם לצלחת מסנן 0.2 יקרומטר ghp עבור 2 דקות ולהסיר את פילטרט (נוזל זורם) באמצעות משאבת ואקום.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לשטוף 2-AB התווית גליקן עם 200 μl של 96% acetonitrile (4 ° c) ולהסיר את פילטרט (נוזל זורם) באמצעות משאבת ואקום 5x-6x.</li>
	<li>לאליוט 2-AB התווית גליקן עם 100 μL של מים אולטרה טהורים 3x.</li>
	<li>להעביר את הגליל 2-AB המסומן לתוך תנור להתייבש ב 60 ° c עבור 3.5 h.</li>
	<li>שמרו את ה- N-גליפחיות המסומנות ב-80 ° c עד למדידה נוספת.</li>
</ol>4. הידרופילי-כרומטוגרפיה וניתוח של גליקנים
<ol><li>מיזוג מכשירי הכנת שלבים ניידים<ol>
<li>הכנת שלבים ניידים כולל ממס A: 100 mM אמוניום (pH = 4.4), ממס B: 100% acetonitrile, ממס C: 90% אולטרה טהור מים (10% מתנול), ומס D: 50% מתנול (אולטרה טהור מים).</li>
		<li>פתח את התוכנה כדי לשלוט בשלבים הניידים.</li>
		<li>לשטוף את הכלים של ה-, הזרמת מכשירים בקצב הזרימה של 0.2 mL/min (50% מממס B ו50%) איזון עבור 30 דקות, ולאחר מכן בקצב זרימה של 0.2 mL/min (25% ממס A ו-75% מומס B) איזון עבור 20 דקות, אז קצב הזרימה של 0.4 mL/min איזון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מפזר את התווית N-גליקנים עם 25 μl של תערובת של 100% acetonitrile ומים אולטרה טהורים ביחס 2:1 (v/v). לאחר מכן, צנטריפוגה ב 134 × g עבור 5 דקות (4 ° c) וטען 10 μl של N-גליקות מתויג לתוך כלי המכשירים.</li>
	<li>הפרד את התוויות N-גליקות בקצב הזרימה של 0.4 mL/min עם מעבר הדרגתי ליניארי של 75% עד 62% acetonitrile עבור 25 דקות. לאחר מכן, בצע ניתוח אנליטי על-ידי סולם כיול תוספי/העמודה גליקואפיד ב-60 ° צ' (כאן, שמרו דגימות ב -4 ° צ' לפני ההזרקה).</li>
	<li>לזהות N-גליניתן זריחה ב עירור ו גל פליטה אורכי של 330 ננומטר ו 420 nm, בהתאמה.</li>
	<li>שילוב הגליקנים המבוססים על מיקום שיא וזמן שמירה.</li>
	<li>לחשב את הערך היחסי של כל גליקן שיא (GP)/כל גליקן פיקס (באחוזים,%) כדלקמן: GP1: GP1/GPs * 100, GP2: GP2/GPs * 100, GP3: GP3/GPs * 100, וכו '.</li>
</ol>

<ol><li>Kolarich, D., Lepenies, B., Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycomics%2C+glycoproteomics+and+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Glycomics, glycoproteomics and the immune system.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 16, 214(2012).</li>
<li>Cummings, R., Pierce, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Challenge+and+Promise+of+Glycomics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Biology%22%5BJournal%5D)">The Challenge and Promise of Glycomics.</a> Chemistry Biology. 21 (1), (2014).</li>
<li>Shade, K. T. C., Anthony, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+Glycosylation+and+Inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Antibodies%22%5BJournal%5D)">Antibody Glycosylation and Inflammation.</a> Antibodies. 2, 392(2013).</li>
<li>Gudelj, I., Lauc, G., Pezer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulin+G+glycosylation+in+aging+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulin G glycosylation in aging and diseases.</a> Cellular Immunology. 333, 65(2018).</li>
<li>Huffman, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+performance+of+four+methods+for+high-throughput+glycosylation+analysis+of+immunoglobulin+G+in+genetic+and+epidemiological+research%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Comparative performance of four methods for high-throughput glycosylation analysis of immunoglobulin G in genetic and epidemiological research.</a> Molecular Cellular Proteomics. 13, 1598(2014).</li>
<li>Stockmann, H., Adamczyk, B., Hayes, J., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated%2C+high-throughput+IgG-antibody+glycoprofiling+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Automated, high-throughput IgG-antibody glycoprofiling platform.</a> Analytical Chemistry. 85, 8841(2013).</li>
<li>Kristic, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycans+are+a+novel+biomarker+of+chronological+and+biological+ages%5BTitle%5D)+AND+%22Journals+of+Gerontology.+Series+A%2C+Biological+Sciences+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Glycans are a novel biomarker of chronological and biological ages.</a> Journals of Gerontology. Series A, Biological Sciences Medical Sciences. 69, 779(2014).</li>
<li>Nikolac, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+galactosylation+of+immunoglobulin+G+and+body+mass+index%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neuropsychopharmacology+Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The association between galactosylation of immunoglobulin G and body mass index.</a> Progress in Neuropsychopharmacology Biological Psychiatry. 48, 20(2014).</li>
<li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changes+of+immunoglobulin+G+N-glycosylation+in+blood+lipids+and+dyslipidaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">The changes of immunoglobulin G N-glycosylation in blood lipids and dyslipidaemia.</a> Journal of Translational Medicine. 16, 235(2018).</li>
<li>Lemmers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgG+glycan+patterns+are+associated+with+type+2+diabetes+in+independent+European+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+Biophysica+Acta+General+Subjects%22%5BJournal%5D)">IgG glycan patterns are associated with type 2 diabetes in independent European populations.</a> Biochimica Biophysica Acta General Subjects. 1861, 2240(2017).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Association+Between+Glycosylation+of+Immunoglobulin+G+and+Hypertension%3A+A+Multiple+Ethnic+Cross-Sectional+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">The Association Between Glycosylation of Immunoglobulin G and Hypertension: A Multiple Ethnic Cross-Sectional Study.</a> Medicine (Baltimore). 95, e3379(2016).</li>
<li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+stroke+is+associated+with+the+pro-inflammatory+potential+of+N-glycosylated+immunoglobulin+G%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Ischemic stroke is associated with the pro-inflammatory potential of N-glycosylated immunoglobulin G.</a> Journal of Neuroinflammation. 15, 123(2018).</li>
<li>Russell, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+N-glycosylation+of+immunoglobulin+G+as+a+novel+biomarker+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22GLYCOBIOLOGY%22%5BJournal%5D)">The N-glycosylation of immunoglobulin G as a novel biomarker of Parkinson's disease.</a> GLYCOBIOLOGY. 27, 501(2017).</li>
<li>Bones, J., Mittermayr, S., O'Donoghue, N., Guttman, A., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra+performance+liquid+chromatographic+profiling+of+serum+N-glycans+for+fast+and+efficient+identification+of+cancer+associated+alterations+in+glycosylation%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ultra performance liquid chromatographic profiling of serum N-glycans for fast and efficient identification of cancer associated alterations in glycosylation.</a> Analytical Chemistry. 82, 10208(2010).</li>
<li>Pucic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+isolation+and+glycosylation+analysis+of+IgG-variability+and+heritability+of+the+IgG+glycome+in+three+isolated+human+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">High throughput isolation and glycosylation analysis of IgG-variability and heritability of the IgG glycome in three isolated human populations.</a> Molecular Cellular Proteomics. 10, M111(2011).</li>
<li>Berruex, L. G., Freitag, R., Tennikova, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+antibody+binding+to+immobilized+group+specific+affinity+ligands+in+high+performance+monolith+affinity+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24, 95(2000).</li>
<li>Ren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+IgG+galactosylation+as+a+promising+biomarker+for+cancer+screening+in+multiple+cancer+types%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Distribution of IgG galactosylation as a promising biomarker for cancer screening in multiple cancer types.</a> Cell Research. 26, 963(2016).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

הוא משמש כשיטה לניתוח יחסי כמותי5,15. התוצאות מצביעות על כך שהוא טכנולוגיית גילוי יציבה עם השגות ודיוק כמותי יחסית. כמות הגליקנים בכל שיא מתבטאת כאחוז של השטח המשולב הכולל באמצעות ה-, המהווה את הערך היחסי. הקוונפיקציה היחסית משפרת את יכולת ההשוואה של דגימות הבדיקה. בנוסף, 96 באיכות חלבון G לוחיות משמשות כדי לטהר IgG עם 96 דגימות בבת אחת עבור זיהוי תפוקה גבוהה. היכולת של חלבון G לאגד igg היא גדולה מזו של חלבון A, כפי שמתואר במחקרים קודמים15...

N-הגליקוזילציה של חלבונים אנושיים הוא שינוי שכיח וחיוני לאחר השינוי1 ועשוי לסייע לחזות את התרחשות ופיתוח של מחלות באופן יחסי יחסית. בשל המורכבות של המבנה שלה, הוא צפוי כי יש יותר מ 5,000 מבנים גליקן, מתן פוטנציאל גדול כמו ביואריטים אבחון חזוי עבור מחלות2. N-גליקנים המחוברים למערכת החיסונית (igg) הוכחו כחיוניים לתפקוד igg, ו-Igg N-הגליסילציה משתתפת באיזון בין המערכות הפרו-דלקתיות3. IgG N-גליסיציה דיפרנציאלית מעורבת בפיתוח מחלות והתקדמות, המייצגים הן מנגנון נטייה ופונקציונלי המעורבים בפתולוגיה של מחלות. התפקיד הדלקתי של IgG N-הגליסיציה נקשר עם הזדקנות, מחלות דלקתיות, מחלות אוטואימוניות, סרטן4.
עם פיתוח של טכנולוגיית האיתור, השיטות הבאות נמצאות בשימוש נרחב ביותר גליקומיס תפוקה גבוהה: הידרופיפילית אינטראקציה כרומטוגרפיה (HILIC) כרומטוגרפיה נוזלית מאוד ביצועים עם גילוי של קרינה פלואורסצנטית (הייטק-FLR), אלקטרופורזה במגה-קרן עם ג'ל לייזר לגילוי קרינה בלייזר (xCGE-אבל), מטריקס בסיוע לייזר בעזרת מטריצות של זמן הטיסה המסה ספקטרומטריה (מאלדי-תוף-MS), וכרומטוגרפיה נוזלית ממסת המסה (LC-ESI-MS) . שיטות אלה התגברו על חסרונות קודמים של שטף נמוך, תוצאות לא יציבות, ורגישות ירודה ספציפיות5,6.
האגודה משמשת רבות לחקר הקשר בין igg N-הגליקוציה ומחלות מסוימות (כלומר, הזדקנות7, השמנה8, דיסליפידמיה9, סוכרת type10, יתר לחץ דם11, איסכמי שבץ12, פרקינסון מחלה13). בהשוואה לשלושת השיטות הנ ל, היתרונות הבאים הם5,14. ראשית, הוא מספק שיטת ניתוח כמותי יחסי, וניתוח הנתונים הכרוך בנרמול השטח הכולל משפר את יכולת ההשוואה של כל דוגמה. שנית, עלות הציוד והמומחיות הנדרשת נמוכה יחסית, מה שמקל על היישום וטרנספורמציה של ביוגליציה ליישומים קליניים. המוצג כאן הוא מבוא ל-, כדי שניתן יהיה להשתמש בו באופן נרחב יותר.

<table><tbody><tr><td>2-aminobenzamide, 2-AB</td><td>Sigma, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96-באר איסוף צלחת</td><td>AXYGEN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96-באר צלחת סינון</td><td>Pol</td><td>0.45 אום GHP</td><td></td></tr><tr><td>96-באר צלחת מונוליטית</td><td>BIA הפרדות</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96-באר צלחת</td><td>רוטור Eppendorf Co., Ltd, גרמניה</td><td>T_1087461900</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td>סיגמאסין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אמוניום ביקרבונט</td><td>Shenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אמוניום פורמט</td><td>בייג'ינג Minruida Technology Co., Ltd.</td>,<td></td><td></td></tr><tr><td>חממת טלטול מתמדת / נדנדה</td><td>Zhicheng מכשיר אנליטי ייצור ושות', בע"מ, סין</td><td>ZWY-10313</td><td></td></tr><tr><td>Dextran כיול סולם / גליקופפטיד עמוד</td><td>וואטס טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>BEH עמוד</td><td></td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO)</td> <td>סיגמא, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דיסודיום פוספט</td><td>Shenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תנורים חשמליים</td><td>מכשירי בודק ושות', בע"מ</td><td>202-2AB</td><td></td></tr><tr><td>העצמה 3.0</td><td>ווטרס טכנולוגיה ושות', בע"מ, אמריקה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Huihai Keyi טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומצה פורמית</td><td>סיגמה, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GlycoProfile 2-AB ערכת תיוג</td><td>סיגמא, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Junrui Biotechnology Co., Ltd, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה במהירות גבוהה</td><td>Eppendorf Co., Ltd, גרמניה</td><td>5430</td><td></td></tr><tr><td>Igepal</td><td>Sigma, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה</td><td>Eppendorf Co., Ltd, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקרר בטמפרטורה נמוכה</td><td>צ'ינגדאו Haier ושות', בע"מ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סעפת 96-באר צלחת</td><td>טכנולוגיית וואטס ושות', בע"מ, סין</td><td>186001831</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>Huihai Keyi טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q מד מים טהורים</td><td>Millipore ושות', בע"מ, אמריקה</td><td>יתרון A10</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Shenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>בודק PH</td><td>Sartorius ושות', בע"מ, גרמניה</td><td>PB-10</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח, PBS</td><td>Shenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette</td><td>Eppendorf Co., Ltd, גרמניה</td><td>4672100, 0.5-10&mu; l & 10-100&mu; l & 20-200&mu; l & 1000&mu; l</td><td></td></tr><tr><td>PNGase F אנזים</td><td>סיגמא, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אשלגן דימימן פוספט</td><td>Shenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פרופן-2-ol</td><td>Huihai Keyi טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>סיגמא, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלוריד</td><td>Shenggong הנדסה ביולוגית ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נתרן ציאנובורוהידריד (NaBH3CN)</td> <td>סיגמא, סין</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר</td><td>שנחאי Yuanxi מכשיר ושות', בע"מ</td><td>B-500</td><td></td></tr><tr><td>העברת אקדח נוזלי</td><td>Smer Fell מדע וטכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>4672100</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Amresco, אמריקה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקרר בטמפרטורה נמוכה במיוחד</td><td>Thermo Co., Ltd, אמריקה</td><td>MLT-1386-3-V; MDF-382E</td><td></td></tr><tr><td>כרומטוגרפיה נוזלית אולטרה ביצועים</td><td>וואטס טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>Acquity MLtraPerformance LC</td><td></td></tr><tr><td>משאבת ואקום</td><td>וואטס טכנולוגיה ושות', בע"מ, סין</td><td>725000604</td><td></td></tr><tr><td>מכונת נידוף / מייבש</td><td>Eppendorf ושות', בע"מ, גרמניה</td><td>T_1087461900</td><td></td></tr><tr><td>מערבולת</td><td>צ'אנגג'ואו Enpei מכשיר ושות', בע"מ, סין</td><td>NP-30S</td><td></td></tr><tr><td>מים-אמבטיית</td><td>בודק מכשירים ושות', בע"מ</td><td>DK-98-IIA</td><td></td></tr><tr><td>איזון שקילה</td><td>שנחאי Jingke Scientific Instrument Co., Ltd.</td><td>MP200B</td><td></td></tr></tbody></table>

אימונוגלובולין g n-גליקן ניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד

Immunoglobulin G N-Glycan Analysis by Ultra-Performance Liquid Chromatography

גלילקומיקס הוא התמחות משנה חדשה ב-omics מחקר מערכת המציעה פוטנציאל משמעותי בגילוי בסמנים הדור הבא עבור הרגישות למחלות, גילוי התרופה היעד, ואת התרופה דיוק. אלטרנטיבי IgG N-גליקנים דווחו במספר מחלות כרוניות נפוצות, הציע פוטנציאל גדול ביישומים קליניים (כלומר, ביוארקרס לאבחון וחיזוי של מחלות). IgG N-גליקנים מאופיינים באופן נרחב באמצעות שיטה של אינטראקציה הידרופיפילית (hilic) כרומטוגרפית נוזלית במיוחד. היחידה היא טכנולוגיית גילוי יציבה עם שגיאות מידע ודיוק כמותי קרוב יחסית. בנוסף, המבנה של IgG N-גליקן מופרד בבירור, וניתן לאפיין את ההלחנה והשפע היחסי בפלזמה.

כפי שמוצג באיור 1, מנתחים Igg N-גליקנים לתוך 24 הראשונים igg גליקן הפסגות (GPs) מבוסס על מיקום שיא וזמן השמירה. מבני N-גליקן זמינים דרך זיהוי ספקטרומטר המסה לפי מחקר קודם (שולחן 1)15. כדי להבטיח כי התוצאות היו דומות, החלה נורמליזציה בשטח כולל, שבה כמות הגליקנים בכל שיא ביטאו כאחוז מהשטח המשולב הכולל.
כדי להעריך את החזרה והיציבות של השיטה, הד...

אימונוגלובולין G (IgG) N-גליקן מאופיין באמצעות כרומטוגרפיה של אינטראקציה הידרופילית. בנוסף, המבנה של IgG N-גליקן מופרד בבירור. המוצג כאן הוא מבוא לשיטה ניסיונית זו, כך שניתן להשתמש בה באופן נרחב בהגדרות מחקר.

אימונוגלובולין G N-גליקן ניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד

Glycomics is a new subspecialty in omics system research that offers significant potential in discovering next-generation biomarkers for disease ...

כרומטוגרפיה נוזלית אולטרה ביצועים הוקמה טכנולוגיה לניתוח מדויק של IgG n-glycan בשל הרגישות שלה נראה ויש לו את היכולת לספק מידע ספציפי של גליצן שיטה זו היא קלה לשימוש ויש לו מספר שונים עלות נמוכה יחסית של במרווחים, רבייה גבוהה היכולת isomers גליצן. המדידות של חלבון בפלזמה יכול להיות אטרקטיבי. ברפואה.קשור גם עם IgG בבסיס גליקוז כזה ביולוגי המכיל את האוכלוסייה. אתה יודע של מצב טמא משמש לבדיקת IgG בגליקנים. למעשה, זה יכול לבדוק n-גלייקנים של חלבון.זה נחוץ בחלבון חוצה גבולות של שני מצבים טהורים ניתן להחיל על חלבון תהליך הניסוי OR הוא פשוט יחסית בעוד התהליך הניסיוני צריך להיות סטנדרטי. תהליך הניסוי מקצה לקצה אורך שלושה ימים, ויש לשנן את הצעדים הניסיוניים כדי לשלוט במיומנויות הניסוי. כדי להכין את הדגימות, להפשיר את דגימת הפלזמה הקפואה.ואז, צנטריפוגה ב 80 פעמים G במשך 10 דקות. השאירו את צלחת החלבון G מונוליטית בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. מעבירים 100 מיקרומטרים של דגימה לכל באר של צלחת האיסוף של שני מיליליטר.הוסף מים טהורים במיוחד כדגימה אחת לבקרה. לדלל את הדגימות עם X PBS אחד על ידי אחד עד שבעה נפח לפי יחס נפח. נקה צלחת מסנן פוליפרופילן הידרופילית 0.45 מיקרון עם 200 מיקרוליטרים של מים טהורים במיוחד.חזור על הניקוי פעמיים נוספות. מעבירים את הדגימות המדוללים לתוך לוחית המסנן, ומסננים את הדגימות לתוך הצלחת הקולקטיבית באמצעות משאבת ואקום בלחץ של 266.6 עד 399.9 פסקל. כדי להכין את החלבון G צלחות מונוליטיות, תחילה להשליך את מאגר האחסון.נקה את הלוחות המונוליתיים עם שני מיליליטר של מים טהורים במיוחד, שני מיליליטר של X PBS אחד, מיליליטר אחד של חומצה פורמית טוחנת 0.17, שני מיליליטר של 10 X PBS, ושני מיליליטר של X PBS אחד ברצף. הסר את הנוזל הבא באמצעות משאבת ואקום. בעזרת צינור רב-ערוצי, מעבירים את הדגימות המסוננים לצלחת המונוליטית G של החלבון לצורך כריכה וניקוי של IgG.לאחר מכן, להוסיף שני מיליליטר של X PBS אחד כדי לנקות את הלוחות מונוליטיים. הסר את ה- PBS באמצעות משאבת ואקום, וחזור על הניקוי פעמיים נוספות. Illute IgG עם מיליליטר אחד של חומצה פורמית טוחנת 0.17, ולסנן את הדגימות לתוך צלחת האיסוף על ידי משאבת ואקום.לאחר מכן, מוסיפים 170 מיקרוליטרים של אמוניום ביקרבונט טוחן אחד לתוך צלחת האיסוף. זהה את ריכוז IgG באמצעות ספקטרופטומטר ספיגה באורך הגל האופטימלי של 280 ננומטר. מניחים את IgG המופק בתנור להתייבש ב 60 מעלות צלזיוס במשך שלוש שעות.לקבוע את הכמות שיש לראות על פי הריכוז שלה כמתואר בכתב היד, ולשמר אותו מינוס 80 מעלות צלזיוס. אסוף את ה- IgG המיובש ואחסן כימיקלים כולל 1.33% SDS, ארבעה אחוזים IgePal ו- 5% PBS בטמפרטורת החדר. הכן אנזים אינדוליקוזה F על ידי דילול 250 יחידות של אנזים עם 250 מיקרוליטרים של מים טהורים במיוחד.כדי להפוך את IgG, להוסיף 30 microliters של 1.33% SDS ומערבבים על ידי מערבולת. מעבירים את הדגימה לתנור של 65 מעלות למשך 10 דקות. לאחר מכן, להסיר אותו מהתנור, ולתת לו להתקרר במשך 15 דקות.הוסיפו 10 מיקרוליטרים של ארבעה אחוזים של IgePal לאותה דגימה, והצבו אותה על חממה רועדת במשך חמש דקות. הוסף 20 מיקרוליטרים של חמישה X PBS ו 30 עד 35 microliters של 0.1 נתרן הידרוקסיד טוחן לווסת את ה- pH ל 8.0, ומערבבים על ידי מערבולת. מוסיפים ארבעה מיקרוליטרים של אנזים אנדוליקוסידאז F, ומערבבים על ידי מערבולת.לאחר מכן, דגירה במשך 18 עד 20 שעות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. למחרת, מניחים את gylcans שוחרר בתנור ב 60 מעלות צלזיוס להתייבש במשך שעתיים וחצי עד שלוש שעות. שמור את הגליקנים לשחרר במינוס 80 מעלות צלזיוס עד מדידה נוספת.הכן את שני אמינו בנזימיד תיוג reagent עם 24.5 microliters של DMSO, 10.5 microliters של חומצה אצטית, 0.7 מיליגרם של שני אמינו בנזימיד, ושישה מיליגרם של נתרן ציאנובורוהידריד. לאחר מכן, בחדר חשוך, תייג את הגליקנים על ידי הוספת 35 מיקרוליטרים של שני אמינו בנזימיד תיוג reagent. מעבירים את הגלקאנים המסווים לתנוד לחמש דקות, ואז מעבירים אותו לתנור לשלוש שעות ב-65 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להעביר אותו לטמפרטורת החדר במשך 30 דקות. IgG n-גליקאז, אנו לתייג אותו עם על מנת להיות מזוהה על ידי גילוי פלואורסצנטי של מצב טמא. יש להצטייד בצלחת מסנן GHP של 0.2 מיקרון עם 200 מיקרוליטרים של 70% אתנול, 200 מיקרוליטרים של מים טהורים במיוחד ו-200 מיקרוליטרים של 96% אצטו ניטריל בארבע מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להסיר את הפסולת באמצעות משאבת ואקום. כדי לטהר את שני אמינו בנזימיד שכותרתו גליקנים, להוסיף 700 microliters של 100% אצטוניטריל לדגימה, ולהעביר אותו אינקובטור רועד במשך חמש דקות. צנטריפוגה ב 134 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס.מעבירים את העל-טבעי לצלחת מסנן GHP של 0.2 מיקרון למשך שתי דקות, ומסירים את הסינון באמצעות הוואקום. לשטוף את שני אמינו בנזימיד שכותרתו גליקן עם 200 microliters של 96% אצטוניטריל בארבע מעלות צלזיוס, ולהסיר את הסינון באמצעות משאבת ואקום חמש עד שש פעמים. Illute שני אמינו בנזימיד שכותרתו גליצן עם 100 microliters של מים טהורים במיוחד שלוש פעמים.מעבירים את שני אמינו בנזימיד שכותרתו גליצן לתנור להתייבש ב 60 מעלות צלזיוס במשך שלוש וחצי שעות. שמור את n-glycans שכותרתו במינוס 80 מעלות צלזיוס עד מדידה נוספת. ראשית, פתח את התוכנה כדי לשלוט בשלבים הניידים.לשטוף מכשירי UPLC עם 50% ממס B ו 50% ממס C בקצב זרימה של 0.2 מיליליטר לדקה במשך 30 דקות. לאחר מכן, לשטוף עם 25% ממס A ו 75% ממס B בקצב זרימה של 0.2 מיליליטר לדקה במשך 20 דקות. לאחר מכן, להוסיף קצב זרימה של 0.4 מיליליטר לדקה.ממיסים את ה-n-glycans המסומנים ב-25 מיקרוליטרים של תערובת של 100% אצטוניטריל ומים טהורים במיוחד ביחס נפח של שניים לאחד. לאחר מכן, צנטריפוגה ב 134 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס, ולהשתמש בצינור יבש לטעון 10 microliters של supernatent לתוך מכשירי UPLC. הפרד את ה-n-glycans המסומנים בקצב זרימה של 0.4 מיליליטר לדקה עם שיפוע ליניארי של 75%-62% אצטוניטריל למשך 25 דקות.לאחר מכן, לבצע ניתוח המנוהל על ידי דקסטרן כיול סולם גליקופפטיד עמוד על UPLC ב 60 מעלות צלזיוס. זהה פלואורסצנטיות n-glycan ב X צל"ש אורכי גל פליטה של 330 ננומטר ו 420 ננומטר, בהתאמה. כפי שמוצג בנתון זה, IgG n-glycans נותחו לתוך 24 פסגות IgG גליצן ראשוניות המבוססות על מיקום שיא וזמן שמירה.המבנים n-glycan זמינים ב 24 סוגים באמצעות גילוי ספקטרומטריית מסה. כדי לתחת את החוזרות והיציבות של השיטה, המדגם הסטנדרטי נבדק במקביל שש פעמים. פסגות הגליקן עם פרופורציות קטנות יחסית הראו שגיאות מדידה גבוהות של יותר מ -10% מקדם הווריאציה.ביצירה וחשוב להרכיב מבנה IgG n-glycan, במיוחד להקמת מסוף לכן, במקום 3.3 IgG n-glycase נמצא הוא קריטי זה החשיבות של IgG. גליקנים מ ידועים להיות שונים. עם ההתפתחויות פרוטוטומיה גליקן, בשילוב גליקנים כדי לחקור מידע זה כך שזה יכול לשמש כפוטנציאל לאבחון של היום.לאחר פיתוח טכניקה זו, הוא מספק דרך חדשה לחקור את

immunoglobulin-g-n-glycan-analysis-ultra-performance-liquid

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

שיטה ספציפית ורגישה לגיבוש תובנה לפרופיל הביטוי של אנטיגנים glycosphingolipid באיברים ותאי חיסון מתוארת. השיטה מנצלת את ספקטרומטריית מסות מלכודת היונים המאפשר פיצול צעד חכם של מולקולות glycosphingolipid לניתוח מבני בהשוואה לסטנדרטים מסונתזים כימי.

ניתוח ספקטרומטריה של אנטיגנים Glycosphingolipid

סרטון זה מדגים את עקרון ההפרדה של תרכובות קוטביות הידרופיליות באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית של אינטראקציה הידרופילית. טכניקה זו מסייעת בטיהור של אנליטים קוטביים שונים, כולל N-גליקנים.

אינטראקציה הידרופילית כרומטוגרפיה נוזלית: טכניקה להפרדת אנליטים קוטביים הידרופיליים באמצעות חרוזים הידרופיליים

פרוטוקול בעל תפוקה גבוהה פותח לטיהור משולב של פרוטאומיקה וגליקומיקה וכימות LC-MS/MS בפלזמה. ניתוח Deamidation של מוטיבים של גליקוזילציה המקושרים ל-N היה ספציפי לאתרים דה-גליקוזיליים. כימות מדויק של N-גליקנים הושג על ידי צימוד הפרדת N-גליקן בסיוע מסנן לנורמליזציה של האינדיבידואליות בעת תיוג עם אסטרטגיית תגי גליקן הידרזיד.

Glycomics כמוני ואסטרטגית טיהור המשולבת פרוטאומיקה

מאמר זה מציג צורה משופרת של טכניקת גליקומיקה חדשה מלמטה למעלה שנועדה לנתח את פרופיל ההרכב המאוגד של גליקנים בנוזלים ביולוגיים לא מפוצלים באמצעות פירוק כימי של גליקנים לחד-סוכרים ספציפיים לקישור המרכיב אותם לזיהוי על ידי GC-MS. יישומים פוטנציאליים כוללים גילוי מוקדם של סרטן והפרעות אחרות הנוגעות לגליקן.

ניתוח צומת glycan: גישה מלמטה למעלה כדי glycomics

Assay microarray sialoglycan ניתן להשתמש כדי להעריך נוגדנים נוגדי Neu5Gc ב sera האדם, מה שהופך אותו assay אבחון תפוקה גבוהה פוטנציאל לסרטן ומחלות כרוניות אחרות מתווך דלקת כרונית.

פרופילינג נגד Neu5Gc IgG ב Sera האדם עם Assay Microarray Sialoglycan

עבודה זו מציגה את הפוטנציאל של טכנולוגיית מערך (PGA) glycan המודפס על הניתוח של מחזורי נוגדנים אנטי-פחמימות בבעלי חיים קטנים.

מערך Glycan המודפס: טכניקה רגישה לניתוח של הרפרטואר של מחזורי נוגדנים אנטי-פחמימות בבעלי חיים קטנים

פרוטוקול מפורט לטיהור וניתוח מאוחר יותר של נוגדן חד שבטיים מתוך נוזל שנקטפו לתרבות התא (HCF) של microbioreactors חקנים אוטומטיים תוארה. השימוש בניתוח כדי לקבוע תכונות איכות קריטיות (CQAs) ולמקסם את נפח מדגם מוגבל כדי לחלץ מידע חיוני מוצג גם.

טיהור וניתוח של נוגדן חד שבטיים מן הסינית שחלות אוגר תאים באמצעות מערכת Microbioreactor חקן אוטומטי

דפוס הגליקוזילציה של הנוגדן קובע את ביצועיו הקליניים, ולכן נמשכים המאמצים התעשייתיים והאקדמיים לשלוט בגליקוזילציה. מאחר שקמפיינים טיפוסיים של גליקו-הנדסה הם עתירי זמן ועבודה, יצירת פרוטוקול מהיר לאפיון ההשפעה של גנים של גליקוסילציה באמצעות השתקה חולפת תתברר כיעילה.

גליקו-הנדסה מהירה של נוגדנים בתאי שחלת אוגר סיניים

פרוטוקול זה מפרט את שיטת הגליקופרוטאומיקה מונחית הגליקומיקה, טכנולוגיית אומיקס משולבת המציעה תובנות מקיפות על הגליקופרוטאום ההטרוגני במיקרו-סביבות גידוליות מורכבות הדרושות להבנה טובה יותר של הגליקוביולוגיה של סרטן.

גליקופרוטאומיקה מונחית גליקומיקס מאפשרת יצירת פרופיל מקיפה של הגליקופרוטאום במיקרו-סביבות גידוליות מורכבות 

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט לשחרור O-גליקנים ממוצין, והתפלה, פרמתילציה וניתוח לאחר מכן באמצעות ספקטרומטריית מסה MALDI-TOF.

פרופיל של מוצין O-גליקנים פרמתילציה באמצעות ספקטרומטריית מסה של זמן טיסה בלייזר בעזרת מטריצה

למדו ניתוח N-גליקנים של אימונוגלובולין G באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד. שיטה זו מספקת רגישות גבוהה, שחזוריות טובה ויכולת הפרדה של איזומרים גליקניים למחקר ביוכימי ואנליטי.

אימונוגלובולין G N-גליקן ניתוח באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית במיוחד

גלה סרטונים נוספים