Name: בציר הטונים הבזליים ובדיקות פסיביות של מערכת הרבייה מורנה באמצעות לחץ מיוגרף (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: חקור את התכונות המכניות הדו-ציריות של איברי הרבייה בעכברים באמצעות מיוגרף לחץ. שיטה זו מאפשרת לבודד את תרומת תאי השריר החלק והמטריצה החוץ-תאית לתפקוד הפיזיולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

העבודה ממומנת על ידי המענק NSF פרס קריירה #1751050.

הפרוטוקול המסופק במאמר זה מציג שיטה לקביעת תכונות מכניות של הנרתיק מורין וצוואר הרחם. התכונות המכאניות שנותחו בפרוטוקול זה כוללות גם את תנאי הטון הפסיבי והבזליים של האברים. תנאי הטון הפסיבי והבזליים ממושרה על ידי שינוי הסביבה הביוכימית שבה האיבר מתחת לגוף. עבור פרוטוקול זה, התקשורת המעורבת בבדיקות בסיס מכילה סידן. בדיקת המצב בסיס הטון מאפשר בידוד של התרומה שרירים חלקה תא מכני בתוך איברי הרבייה נקבה54,55. בעת ביצוע בדיקות פסיבי מכני, התקשורת אינה מכילה סידן. חוסר ...

קיר הנרתיק מורכב מארבע שכבות, האפיתל, לאמנה קינאה, מוסקולריס, ו אדואדטיה. האפיתל מורכב בעיקר של תאים אפיתל. לאמינה קינפה יש כמות גדולה של סיבי קולגן גמישים וfibrillar. המוקולאריס מורכב גם מאלסטין ומסיבי קולגן, אך יש לו כמות מוגברת של תאי שריר חלקים. האדואדטיה מורכבת מאלסטין, קולגן ופיברותקיעות, אם כי בריכוזים מופחתים בהשוואה לרבדים הקודמים. התאים השרירים החלקים הם עניין של קבוצות מחקר ביוחנונית מוטיבציה כפי שהם משחקים תפקיד בטבע הקונקטילה של האיברים. ככזה, לכמת את החלק באזור התא שריר חלקה והארגון הוא המפתח להבנת הפונקציה מכני. חקירות קודמות מצביעים על כך שהתוכן השרירי החלק בתוך קיר הנרתיק מאורגן בעיקר בציר האורכי והאורך. ניתוח היסטולוגית עולה כי השבר החלק באזור השריר הוא כ 35% עבור שני סעיפים הקרוב ביותר של הקיר1.
צוואר הרחם הוא מבנה הקולגן מאוד, כי עד לאחרונה, היה נחשב להיות מינימלי שרירים חלקים תא תוכן2,3. מחקרים אחרונים, עם זאת, הציעו כי תאים שריר חלק עשוי להיות שפע גדול תפקיד בצוואר הרחם4,5. צוואר הרחם מציג הדרגתי של תאים שריר חלק. מערכת ההפעלה הפנימית מכילה 50-60% תאי שריר חלקים שבהם מערכת ההפעלה החיצונית מכילה רק 10%. לימודי העכבר, עם זאת, לדווח על צוואר הרחם להיות מורכב של 10-15% תאים שריר חלקה ו 85-90% סיבי רקמת חיבור ללא אזכור של הבדלים אזוריים6,7,8. בהתחשב בכך שמודל העכבר שונה מהמודל האנושי המדווח לעתים קרובות, יש צורך בחקירות נוספות הנוגעות לצוואר הרחם של העכבר.
מטרת פרוטוקול זה הייתה להבהיר את התכונות המכאניות של הנרתיק המורין וצוואר הרחם. זה הושג על ידי שימוש במכשיר לחץ מיוגרף המאפשר הערכה של תכונות מכניות בכיוונים מכניים וצירית בו תוך שמירה על אינטראקציות תאים מטריצה מקורית וגיאומטריה של איברים. האיברים נטענו על שני צינורית מותאמת אישית ומאובטחת בתפרים מ6-0 משי. בדיקות בקוטר הלחץ נערכו סביב מתיחה פיסיולוגיים מוערך כדי לקבוע את התאימות ואת המשיק מודוללי9. בדיקות באורך הכוח נערכו על מנת לאשר את המתיחה המשוערת של הציר ולהבטיח שתכונות מכניות כללו את הטווח הפיזיולוגי. הפרוטוקול הניסיוני בוצע על הנרתיק מורצין שאינו בהריון וצוואר הרחם ב 4-6 חודשים של גיל ב estrus.
הפרוטוקול מחולק לשני סעיפים עיקריים של בדיקות מכניות: הטון בסיס ובדיקות פסיביות. צליל בסיס מוגדר כחלק בסיסי של תאי השריר החלקים, גם בהיעדרויות של גירוי מקומי, הורמונלי ועצבי חיצוני10. הטבע הבסיסי הזה של הנרתיק וצוואר הרחם תשואות התנהגויות מכניות אופייני אשר נמדד אז על ידי מערכת הלחץ מיוגרפיה. המאפיינים פסיבי מוערך על ידי הסרת הסידן הבין-תאית אשר שומר על מצב הבסיסית של התכווצות, וכתוצאה מכך הרפיה של תאים שריר חלק. במצב פסיבי, סיבי קולגן ואלסטין לספק את התרומות דומיננטי עבור המאפיינים המכניים של האיברים.
מודל murine משמש בהרחבה כדי ללמוד פתווגיות בבריאות הרבייה של נשים. העכבר מציע מספר יתרונות לכמת את היחסים המתפתחים בין התכונות ecm ו מכני בתוך מערכת הרבייה11,12,13,14. יתרונות אלה כוללים מחזורים קצרים ומאופיינים היטב, עלות נמוכה יחסית, קלות הטיפול, וזמן הריון קצר יחסית15. בנוסף, הגנום של עכברי מעבדה הוא היטב ממופה ומהונדסים גנטית עכברים הם כלים יקרי ערך כדי לבדוק השערות מכניסטיות16,17,18.
מערכות לחץ מסחרית זמינים משמשים באופן נרחב כדי לכמת את התגובות המכאניות של רקמות שונות ואיברים. כמה מבנים בולטים שנותחו על מערכת הלחץ מיוגרפיה כוללים עורקים גמישים19,20,21,22, ורידים ורקמות הנדסה כלי דם שתלי23,24, הוושט25, ואת המעי הגדול26. טכנולוגיית הלחץ מיוגרפיה מאפשרת הערכה בו של נכסים בצירי הציר והכיוון ההיקפי תוך שמירה על אינטראקציות התא-ECM המקוריות ובגיאומטריה vivo. למרות השימוש הנרחב במערכות מיוגרפיה ברקמות רכות ובמכניקה של איברים, פרוטוקול ניצול טכנולוגיית הלחץ מיוגרפיה לא פותחה בעבר עבור הנרתיק וצוואר הרחם. חקירות קודמות לתוך תכונות מכניות של הנרתיק וצוואר הרחם העריכו uniaxially27,28. האברים הללו, לעומת זאת, חווים העמסה רב-צירית בתוך הגוף29,30, ובכך מכמת את התגובה המכנית הביוצירית שלהם.
יתר על כן, העבודה האחרונה מציע תאים שריר חלק עשוי לשחק תפקיד פוטנציאלי בפתווגיות רקמות רכות5,28,31,32. זה מספק עוד משיכה של ניצול הטכנולוגיה מיוגרפים הלחץ, כפי שהוא משמר את האינטראקציה מקורית של תאים מטריקס, ובכך לאפשר תיחום של התרומה כי תאים שרירים חלקה לשחק פיסיולוגיים ופתופסולוגית תנאים. בזאת, אנו מציעים פרוטוקול לכמת את התכונות המכאניות רב-צירית של הנרתיק וצוואר הרחם תחת שני הטונים הבזליים והתנאים הפאסיביים.

<table><tbody><tr><td>קטטר 2F</td><td>Millar</td><td>SPR-320</td><td>קטטר למדידת לחץ צוואר הרחם</td></tr><tr><td>6-0 תפר</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-60</td><td>קשרי תפרים גדולים יותר</td></tr><tr><td>CaCl2 (נטול מים)</td> <td>VWR</td><td>97062-590</td><td>ריכוז HBSS: 140 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>CaCl2-2H20</td><td>כימיקל פישר</td><td>BDH9224-1KG</td><td> ריכוז KRB: 3.68 גרם/ליטר</td></tr><tr><td>דקסטרוז (D-גלוקוז)VWR</td><td></td> <td>101172-434</td><td>ריכוז HBSS: 1000 מ"ג/מ"ל ריכוז KRB: 19.8 גרם/ליטר</td></tr><tr><td>Dumont #5/45 מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>מלקחיים מעוקלים</td></tr><tr><td>Dumont SS מלקחיים</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11203-25</td><td>מלקחיים ישרים</td></tr><tr><td>Eclipse</td><td>מיקרוסקופ Nikon</td><td>E200</td><td>המשמש להדמיה</td></tr><tr><td>מד זרימה</td><td>דנית MyoTechnologies</td>מד זרימה <td>161FM</td><td>בתוך מכשיר הבדיקה</td></tr><tr><td>מתמר כוח - 110P</td><td></td><td>מתמר כוח</td><td>100079 הדני MyoTechnologies</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>SciJava</td><td>ImageJ1</td><td>המשמש למדידת נפח</td></tr><tr><td>מארזי מכשירים</td><td>Fine Science Tools</td><td>20830-00</td><td>מעטפת להחזקת כלי דיסקציה</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Chemical</td><td>97061-566</td><td>ריכוז HBSS: 400 מ"ג/מ"ל ריכוז KRB: 3.5 גרם/ליטר</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>G-Biosciences</td><td>71003-454</td><td>ריכוז HBSS: 60 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>VWR</td><td>97064-150</td><td> ריכוז KRB: 1.14 גרם/ליטר</td></tr><tr><td>MgCl2-6H2O</td><td>VWR</td><td>BDH9244-500G</td><td>ריכוז HBSS: 100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>MgSO4-7H20</td><td>VWR</td><td>97062-134</td><td>ריכוז HBSS: 48 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>תוכנית Mircosoft excel</td><td>Microsoft</td><td>6278402</td><td>המשמשת לגיליון אלקטרוני</td></tr><tr><td>Na2HPO4 (דו-בסיסי נטול מים)</td><td>VWR</td><td>97061-588</td><td>ריכוז HBSS: 48 מ"ג/מ"ל ריכוז KRB: 1.44 גרם/ליטר</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>VWR</td><td>97061-274</td><td>ריכוז HBSS: 8000 מ"ג/מ"ל ריכוז KRB: 70.1 גרם/ליטר</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>VWR</td><td>97062-460</td><td>ריכוז HBSS: 350 מ"ג/מ"ל ריכוז KRB: 21.0 גרם/</td></tr><tr><td>ליטר מערכות מיוגרף לחץ</td><td>דנית MyoTechnologies</td><td>110P ו-120CP</td><td>מערכת מיוגרף לחץ: prorgram, מכשיר קנולציה, ויחידת בקר</td></tr><tr><td>מתמר לחץ</td><td>דני MyoTechnologies</td><td>100106</td><td>מתמר לחץ</td></tr><tr><td>סטודנט Dumont #5 מלקחיים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>91150-20</td><td>מלקחיים ישרים</td></tr><tr><td>סטודנטים Vannas מספריים אביב</td><td>Fine Science Tools</td><td>91500-09</td><td>מיקרו-מספריים</td></tr><tr><td>צבע רקמות</td><td>Bradley Products</td><td>1101-3</td><td>דיו למדידה in vivo מתיחה</td></tr><tr><td>מתמר אולטרסאונד</td><td>FujiFilm Visual Sonics</td><td>LZ-550</td><td>מתמר אולטרסאונד בשימוש; 256 אלמנטים, תדר מרכזי 40 מגה-הרץ</td></tr><tr><td>VEVO2100</td><td>FujiFilm Visual Sonics</td><td>VS-20035</td><td>אולטרסאונד המשמש להדמיית</td></tr><tr><td>Wagner מספריים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14069-12</td><td>מספריים גדולים יותר</td></tr></tbody></table>

בציר הטונים הבזליים ובדיקות פסיביות של מערכת הרבייה מורנה באמצעות לחץ מיוגרף

Biaxial Basal Tone and Passive Testing of the Murine Reproductive System Using a Pressure Myograph

איברי הרבייה הנשיים, במיוחד הנרתיק וצוואר הרחם, מורכבים מרכיבים סלולאריים שונים ומטריצה ייחודית לחילוץ (Ecm). תאי שריר החלקה מציגים פונקציה בתוך קירות הנרתיק וצוואר הרחם. בהתאם לסביבה הביוכימית והדינסיון המכני של קירות העוגב, תאי השריר החלקים משנים את תנאי הקונקטילה. התרומה של תאי שריר חלקה תחת תנאים פיסיולוגיים בסיסית מסווג כטון בסיס. באופן ספציפי יותר, הטון הבסיסי הוא מכווץ חלקית בסיסית של תאי שריר חלקה בהעדר גירוי הורמונלי ועצבי. בנוסף, ה-ECM מספקת תמיכה מבנית לדפנות האיברים ומשמשת כמאגר לאותות ביוכימיים. הרמזים הביוכימיים הללו חיוניים לתפקודי איברים שונים, כגון הסתה לצמיחה ושמירה על הומאוסטזיס. ECM של כל איבר מורכב בעיקר של סיבי קולגן (בעיקר סוגי קולגן אני, III, ו-V), סיבים גמישים, ו גליקוזאינואנגליקנים/פרוטאוגליקנים. ההרכב והארגון של ה-ECM מכתיבים את התכונות המכאניות של כל איבר. שינוי בקומפוזיציה ECM עשוי להוביל להתפתחות של הפתווגיות הרבייה, כגון התפתחות איבר האגן או שיפוץ צוואר הרחם מוקדם. יתרה מזאת, שינויים במיקרו-מבנה ECM ונוקשות עשויים לשנות את הפעילות החלקה של תאי השריר ואת הפנוטיפים, ובכך לגרום לאבדן כוח התנועה.
בעבודה זו, הפרוטוקולים שדווחו משמשים כדי להעריך את הטון בסיס מאפיינים פסיבי מכני של הנרתיק מורצין שאינו בהריון ואת צוואר הרחם בשנת 4-6 חודשים של גיל estrus. האיברים היו מורכבים בלחץ מסחרית זמין, ושניהם בקוטר הלחץ ובדיקות אורך הכוח בוצעו. נתונים לדוגמה טכניקות ניתוח נתונים עבור האפיון המכני של איברי הרבייה נכללים. מידע כזה עשוי להועיל לבניית מודלים מתמטיים ולעצב באופן רציונלי התערבויות טיפוליות לפתווגיות בריאות הנשים.

ניתוח מוצלח של התכונות המכאניות של איברי הרבייה הנשיים מותנה בניתוח מתאים, בצינורית ובבדיקות. חובה לחקור את קרני הרחם אל הנרתיק ללא פגמים (איור 1). בהתאם לסוג האיבר, גודל הצינורית ישתנה (איור 2). הצינורית חייבת להיעשות כך שהעוגב לא יוכל לנוע במהלך הניסוי, אלא גם לא לפגוע בקיר העוגב במהלך ההליך (איור 3). כישלון של אחד הצעדים יגרום לחוסר יכולת של כלי להחזיק לחץ. בדיקת סטנדרטיזציה של הליכים חיונית להצלחת הפרוטוקול על מנת להניב תוצאות עקביות ולשחזור.
<p ...

פרוטוקול זה ניצל מערכת לחץ זמין מסחרית לבצע הלחץ מיוגרפיה בדיקות על הנרתיק murine וצוואר הרחם. באמצעות מדיה עם ובלי סידן, התרומות של תאי השריר החלקה (SMC) הטון בסיס מטריצה פסיבית (ECM) היו מבודדים עבור האיברים תחת תנאים פיסיולוגיים מוערך.

The female reproductive organs, specifically the vagina and cervix, are composed of various cellular components and a unique extracellular matrix (ECM). ...

פרוטוקול זה בוחן את המאפיינים המכניים הדו-מיניים של איברי הרבייה המבהירים את התרומה מתאים השריר החלקים ומהמטריצה הפסיבית. טכניקה זו שומרת על גיאומטריית איברים ותא שריר חלק מקורי לאינטראקציות מטריצה המאפשרות סובייקטיביות של האיבר לטווח פיזיולוגי של לחצים והרחבות שרירים. חקירת תפקוד האיבר הדו-מיני תחת עומסים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית עשויה לסייע בהבנה טובה יותר של האטיולוגיה של פתולוגיות הרבייה.בדיקת צוואר הרחם והנרתיק מספקת תובנה בתחומי בריאות האישה והביומכניקה. שיטות דומות מנוצלות לחקר כלי הדם, הוושט והמעי הגס. בעת עבודה עם איבר חדש, זה עלול לקחת זמן כדי לסיים את הפרטים הטכניים כגון כיצד לתפור את הרקמה בצורה הטובה ביותר או כיצד לקבוע את האורך שנפרק.כדי לאסוף את מערכת הרבייה מהחיה הניסיונית, מניחים את העכבר על כרית סופגת מתחת למיקרוסקופ ניתוח ולהשתמש פינצטה זוויתית ומספריים כדי להרים את העור סביב הבטן. בצע חתך ראשוני בבסיס הבטן מעל עצם הערווה רדוד מספיק כדי לא לנקב את דופן שריר הבטן ולהמשיך את החתך מעולה לכיוון כלוב הצלעות ועמוק דרך שרירי הבטן. לאחר הסרת השומן השטחי וחיתוך בזהירות של סימפיזיס הערווה, השתמש פינצטה ישר לתפוס את שלפוחית השתן כדי ליצור מתח ולהשתמש ניתוח קהה להפריד את הרקמה שמסביב מן הנרתיק.ואז לחתוך את הבסיס של מערכת הרבייה כדי להסיר את הרקמות מן חלל הגוף. לאחר קביעת קנולה בגודל המתאים עבור המערכת שנקטפו, הר את הצד הצווארי על חלק מתמר הכוח של התקן ההתמרה ולהוות את הקצה הנגדי של האיבר על החלק מיקרומטר של המכשיר. ואז להדק את שני הקצוות עם תפרים.כדי למצוא את האורך הלא טעון של הרקמה הרכובה, תחילה למתוח את האיבר, כך הקיר אינו במתח. עבור הנרתיק, להתבונן החריצים על דופן הנרתיק. עבור צוואר הרחם, לחתוך מיד מתחת לנקודות הדיו הממוקם מעל ומתחת סימן צוואר הרחם המרכזי.השתמש calipers כדי למדוד את אורך המערכת מתפר לתפר ולהגדיל את הלחץ של מערכת myograph מאפס ל 10 מילימטרים של כספית במילימטר אחד של מרקורית במרווחים. הלחץ שבו האיבר כבר לא התמוטט יכול להיקבע כמו הקפיצה הגדולה ביותר בקוטר החיצוני בלחץ נתון. לאחר הקלטת הלחץ ואת הקוטר החיצוני, שים לב לנתונים אלה כנקודה הראשונה שבה האיבר אינו מכווץ ואפס את הכוח.כדי למצוא את הניסוי במתיחה vivo, להתאים את האיבר לאורך vivo המשוער בזמן בלחץ לא טעון ולחץ להתחיל להעריך את ערכי הלחץ לעומת כוח עבור ערכי הלחץ החל הלחץ שנפרק ללחץ המרבי. לאחר מכן לחץ על עצור ושמור את הקובץ. עבור קוטר לחץ מראש מיזוג, להגדיר את הלחץ לאפס מילימטרים של כספית, האורך לאורך vivo ניסיוני, ואת שיפוע ל 1.5 מילימטרים של כספית לשנייה.הפעל רצף שלוקח את הלחץ מאפס מילימטרים של כספית ללחץ המרבי בתוספת הלחץ שנפרק, החזק למשך 30 שניות וחזור לאפס מילימטרים של כספית עם תקופת אחיזה נוספת של 30 שניות. לאחר חזרה על רצף זה במשך חמישה מחזורים בסך הכל, לחץ על עצור ושמור את הקובץ. לקבלת אורך כוח טרום מיזוג, הזן 1/3 של הלחץ המרבי בתוספת הלחץ שנפרק הן עבור הלחצים הכניסה ואת השקע ולהתאים את האיבר למינוס 2% של אורך in vivo.לחץ על התחל והתאם את האורך לאורך vivo של plus 2% ובחזרה למינוס 2% בקצב של 10 מיקרומטר לשניה. חזור על הסיומת הסרבית במשך חמישה מחזורים בסך הכל לפני שתלחץ על עצור ותציל את הקובץ. לבדיקה בקוטר לחץ של אורך in vivo, לחץ על התחל והתאם את האיבר לאורך in vivo, הגדר את הלחץ לאפס מילימטרים של כספית, והגדר את המילוי ההדרגתי ל-1.5 מילימטרים של כספית לשנייה.הגבר את הלחץ מאפס מילימטרים של כספית ללחץ המרבי לפני שתחזיר את הלחץ לאפס מילימטרים של כספית עם תקופת החזקה של 20 שניות. לאחר מכן חזור על הבדיקה במשך חמישה מחזורים לפני עצירת המערכת ושמירת הנתונים. לבדיקת אורך כוח של 1/3 מהלחץ המרבי בתוספת הלחץ שנפרק, הגדר את הלחץ ל-1/3 מהלחץ המרבי בתוספת הלחץ שנפרק והתאם את האיבר למינוס 2% מאורך ה-in vivo.לאחר לחיצה על התחל, למתוח את האיבר פלוס 2% של אורך in vivo ובחזרה למינוס 2% של אורך in vivo בקצב של 10 מיקרומטר לשנייה. לאחר מכן חזור על הבדיקה במשך שלושה מחזורים בסך הכל לפני עצירת המערכת ושמירת הנתונים. לאחר הבדיקה האחרונה, להסיר את המדיום בדיקת KRB ולשטוף את האיבר עם מדיום KRB ללא סידן.לאחר הכביסה, הדגירה את האיבר עם פתרון KRB טרי ללא סידן בתוספת שני EGTA מילימול במשך 30 דקות לפני החלפת פתרון הטיפול עם KRB טרי ללא סידן. עם השלמת בדיקת הטון הבסיסי, עבור קוטר לחץ מראש מיזוג, לחץ להתחיל ולהגדיר את הלחץ לאפס מילימטרים של כספית, האורך כמו מוערך באורך vivo, ואת שיפוע ל 1.5 מילימטרים של כספית לשנייה. התחל לרוץ רצף שלוקח את הלחץ מאפס מילימטרים של כספית ללחץ המרבי ובחזרה לאפס מילימטרים של כספית.חזור על תהליך זה לאורך חמישה מחזורים עם זמן החזקה של 30 שניות. לקבלת אורך כוח מראש מיזוג, להתאים את האיבר לאורך in vivo והזן באופן ידני את הלחץ שנפרק עבור שני הלחצים. לחץ על התחל והגדר את המילוי ההדרגתי ל- 1.5 מילימטרים של כספית ואת הלחץ ל- 1/3 מהמקסימום.מתחו את האיבר עד פלוס 2% וחזרו למינוס 2% מתחו ב-10 מיקרומטר לשנייה וחזרו על המחזור במשך חמש פעמים בסך הכל. לבדיקות קוטר לחץ, כאשר האיבר במינוס 2% מאורך ה-vivo שנקבע בניסוי והלחץ באפס מילימטרים של כספית, לחץ על התחל והגדל את הלחץ מאפס מילימטרים של כספית ללחץ המרבי ובחזרה לאפס מילימטרים של כספית. החזק את אפס מילימטרים של צעד כספית במשך 20 שניות ולחזור על המחזור חמש פעמים.לבדיקת אורך כוח, כוון את הלחץ ללחץ נומינלי והתאם את האיבר למינוס 2% מאורך ה-in vivo. למתוח את האיבר עד פלוס 2% של אורך in vivo ובחזרה למינוס 2% של אורך in vivo בקצב של 10 מיקרומטרים לשנייה. לאחר שלושה מחזורים בסך הכל, שמרו את הנתונים וחזרו על בדיקות אורך הכוח עבור 1/3 מהלחץ המקסימלי, 2/3 מהלחץ המרבי ובלחץ המרבי.לניתוח מוצלח של המאפיינים המכניים של איברי הרבייה הנשיים, חובה להחציל את קרני הרחם לנרתיק ללא פגמים. בהתאם לסוג האיבר, גודל ה Cannula ישתנה. ההתרמילים חייבים להתבצע כך האיבר לא יכול לזוז במהלך הניסוי אבל בלי לפגוע בקיר האיבר במהלך ההליך.מערכת מיוגרף הלחץ יכול לשמש כדי לפקח על היבטים שונים של האיבר כפי שהוא עובר בדיקות מכניות ואת מערכת אולטרסאונד ניתן להשתמש כדי למדוד את עובי האיברים במצב לא טעון עם וללא טון בסיסי. לאחר בדיקה מכנית, ניתן לחשב את המודולי המשיק עבור הכיוונים ההיקפים והציריים. הן בדיקות גוון בסיס והן בדיקות פסיביות מניבות תכונות מכניות מרכזיות של מערכת הרבייה עם וללא תרומה מתכווץ של תאי שריר חלקים.קנה המידה בין האיברים דורש כמה התאמות לפרוטוקולים כמו צוואר הרחם ואת הנרתיק לחוות עומסים שונים ב vivo. זה המפתח לבצע את הניתוח במהירות כדי לשמור על הכדאיות של תאי שריר חלקים אבל בזהירות לא לנקב את האיבר הרצוי. ניסויי זווית פתיחה המודדים את שאריות הזן של האיבר עשויים להתבצע לאחר הליכי בדיקה מכניים, כמו גם בדיקות היסטולוגיות וביוכימיות שונות.לאחר התפתחותה וחקירה של תרומתו הבסיסית של תא השריר החלק, טכניקה זו מאפשרת גם להעריך את תגובת השרירים החלקה של מערכת הרבייה להתכווצות מקסימלית תחת עומסים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית.

biaxial-basal-tone-passive-testing-murine-reproductive-system-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

דלקת של הערמונית עלולה להיות גורם תורם בתיווך כאב באגן בערמונית כרונית. אנו מתארים את הליך ההכנה של בידוד חיידקים טופל, החדרה של חיידקים לתוך השופכה של עכברי זכרים ומתודולוגיה למדידת allodynia מישוש בעכברים לאורך זמן.

מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי

בmyography לחץ, קטע קטן בשלמות של כלי הוא רכוב על גבי שני cannulas קטן ודחוס כדי luminal לחץ מתאים. כאן, אנו מתארים את השיטה כדי למדוד את התגובה של vasorelaxation העכבר...

הערכת תפקוד עורקי התנגדות Murine באמצעות לחץ Myography

כ 3-8,000,000 אנשים בארצות הברית סובלים מתסמונת כאב ביניים דלקת שלפוחית ​​השתן / שלפוחית ​​השתן (IC / BPS), מצב של חולשה מתאפיינת בחלקו על ידי כאבים באגן. על מנת ללמוד תרומות מערכת עצבים למצב, מודל פיסיולוגי של כאב שלפוחית ​​שתן נמצא בשימוש בעכברים וחולדות.

תגובות שתן בשלפוחית ​​השתן ההתנפחות העוררת Visceromotor כמודל לשלפוחית ​​שתן כאב בעכברים

כתב יד זה מספק פרוטוקול להשתלת טלמטרים בעכבר לצורך מדידת לחצים תוך רחמיים במהלך ההריון.

טלמטריה תוך רחמי למדידת לחץ עכבר התכווצות<em&gt; In vivo</em

אנו מודדים הפעלת perigenital מכאנית רגישות ותורן תא בערמונית של C57BL / 6 עכברי זכרים שעברו הפרדיגמה מתח בתחילת חיים - הפרדה אימהית יילודים, על מנת לגרום למודל פרה-קליני של תסמונת ערמונית כרונית / כרוני כאבים באגן.

הערכה של הפעלת תא Perigenital רגישות וערמונית תורן במודל עכבר של הפרדה אימהית עובריים

מחקר זה מתאר את ההליכים כירורגית וטכניקות ניסיוני לביצוע cystometry ער בעכבר נע בחופשיות. בנוסף, הוא מספק ראיות ניסוייות לתמוך אופטימיזציה וסטנדרטיזציה.

הערכת הנוהל לביצוע Cystometry ער במודל עכבר

כתב יד זה מתאר את התועלת של שבוצעה על חולדות נקבות לעצב ניסיוניות לחקירה הרבייה, הגינקולוגית. הסבר צעד אחר צעד כיצד לבצע הערכה ultrasonographic מוצג.

בדיקת אולטרה סאונד בחקירות הרבייה ניסויים על חולדות

פרוטוקול זה כרוך אפיוני עלעלים שסתום atrioventricular עם כוח מבוקר, מבוקר הזחה, ובדיקות מכני biaxial מתח-הרפיה הליכים. תוצאות רכשה עם פרוטוקול זה יכול לשמש לפיתוח מודל מכוננת לדמות את התנהגות מכאנית של שסתומים מתפקדים תחת מסגרת סימולציה סופיים.

אפיוני מכני biaxial של מסתמי הלב Atrioventricular

התכווצויות הרחם חשובים לרווחתם של הנקבות. עם זאת, באופן פתולוגי הגדילה הפתולוגית עלולה לגרום לדיסנוריאה, במיוחד לנשים צעירות. כאן, אנו מתארים הכנה vivo ex פשוטה המאפשרת הערכה מהירה של היעילות של מרפה שרירים חלקה שניתן להשתמש בהם לטיפול בדינוריאה.

שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

הפרוטוקול מתאר יעיל ומלא מתיחה שיטות בדיקה ביומכנית עבור הגידים murine באמצעות שימוש מותאם אישית התאמה תלת-ממד גופי מודפס.

בדיקה ביומכנית של הגידים של מורנה

כדי לפתח התערבויות טיפוליות חדשניות למניעה וניהול של כאבי גב, נדרשים מודלים של בעלי חיים לבחון את המנגנונים והיעילות של טיפולים אלה מנקודת מבט תרגומית. הפרוטוקול הנוכחי מתאר את בדיקת BMS, שיטה סטנדרטית להערכת רגישות מכנית אחורית בחולדה.

הערכת רגישות מכנית של הגב בחולדה לחקירה מכניסטית של כאבי גב כרוניים

חקור את התכונות המכניות הדו-ציריות של איברי הרבייה בעכברים באמצעות מיוגרף לחץ. שיטה זו מאפשרת לבודד את תרומת תאי השריר החלק והמטריצה החוץ-תאית לתפקוד הפיזיולוגי.

בציר הטונים הבזליים ובדיקות פסיביות של מערכת הרבייה מורנה באמצעות לחץ מיוגרף

גלה סרטונים נוספים