Name: התגובה האופטימיזציה של Griess עבור UV-Vis ו-עירום עין ההגדרה של אנטי מלאביאל Primaquine (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: למדו שיטה צבעונית פשוטה ומהירה לזיהוי פרימקווין בדגימות שתן וסרום אנושיים באמצעות תגובת Griess. השיטה מציעה חלופה חסכונית ויעילה ל-HPLC מסורתי לצורך הערכת פרמקוקינטיקה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים מכירים את מענק סטארט-Up מאוניברסיטת גואנגג'ואו של הרפואה הסינית והנוער מחקר מדעי הפרויקט של GZUCM (2019QNPY06). אנו מכירים גם את מרכז המחקר הרפואי יגנאן של אוניברסיטת גואנגג'ואו של הרפואה הסינית לתמיכה במתקנים.

1. סינתזה של אזרוס צבעוניים
<ol><li>ב 25 מ"ל בקבוקון תחתון עגול (RBF), לפזר אנילין (0.1 mmol) ו primaquine ביספופוספט (45.5 mg, 0.1 mmol) ל 10 מ ל של H3הפו4 פתרון (5% v/v). לשים את RBF על אמבט קרח, להוסיף בר מהומה עם הגודל הנכון לתוך הפתרון, ולשים את RBF על צלחת מהומה. הערה: לסינתזה של אזו 3g (איור 2), השתמש 0.2 mmol של primaquine ביספושנאה.</li>
	<li>התמוססות NaNO2 (6.9 mg, 0.1 mmol) ב 1 מ ל של מים מקורר ולאחר מכן להוסיף את התערובת התגובה dropwise. הסירו את אמבטיית הקרח ושמרו על תערובת התגובה מעורבב בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>נטר את התגובה בעזרת צלחת סיליקה ג'ל מצופה כרומטוגרפיה בשכבה דקה. השתמש דיכלורומתאן (dcm)/methanol (meoh) תערובת (vol/vol = 5:1) כמו להתחמק עבור האהבה. מוצר אזו מציג כתמים צבעוניים על הצלחת והיא, אשר קל להבחין על ידי עיניים עירומות. להפסיק את התגובה כאשר כתמים PMQ נעלמים על אהבה.</li>
	<li>להתאים את תערובת התגובה ל-pH > 10 על ידי NaOH (2 M) על אמבט קרח. השתמש 50 mL הפרדת משפך כדי לחלץ את התערובת 3 פעמים עם 20 מ ל של אתיל אצטט עבור כל, לשלב ולרכז את השלב האורגני תחת ואקום באמצעות מאייד רוטרי. הערה: לפני החילוץ, להתאים את ערך ה-pH של פתרונות תגובה מעל 10. זה יכול לשמור על האמין העיקרי כצורתו הלא משלה, ובכך להקל על החילוץ.</li>
	<li>לטהר את הפסולת על ידי כרומטוגרפיה פלאש עם הפוך סיליקה ג'ל בשלב הלחץ הרגיל, באמצעות MeOH/H2O כמו להתחמק. לייבש את פתרון המוצר באמצעות ליטוליזציה לתת מוצרים מבוקשת של אזו. הערה: התגובה אותה ניתן גם לבצע בדילול פתרונות HCl (0.2 M).</li>
</ol>2. UV-Vis מדידות וחישוב תיאורטי
<ol><li>התמוססות הטהורה (50 μM) במים מזוקקים או בתוך 5% H3פו4 פתרון (pH 1.1), בהתאמה. שיא ספקטרום הקליטה של UV-vis (250-700 ננומטר) על ספקטרוסקופיה בטמפרטורת החדר (25 ° c). יצא את הנתונים כקבצי xls/. xlsx לצורך ניתוח נוסף.</li>
	<li>
בצע את כל החישובים התיאורטיים עבור PMQ עצמה ומוצרי אזו באמצעות תוכנית ה -16 של גאוס. השתמש בתאוריה פונקציונלית של צפיפות הזמן (TD-DFT) עם ערכת בסיס של 6-31G. כלול אפקטי הממס על ידי מודל הרצף polarizable (PCM) פורמליזם באמצעות מים.
	<ol>
<li>השתמש בתוכנה (לדוגמה, Chemdraw Office) כדי לשרטט את המבנים ולאחר מכן לשמור את המבנה כקובץ קלט גאוסיאני (. gif).</li>
		<li>פתח את קובץ ה-gif עם תצוגת גאוס ולחץ על הלחצן חשב. בחר את הגדרת החישוב של גאוס, Opt + freq והמדינה הקרקעית-dft-B3LYP-6-31g; לאחר מכן לחץ על שלח. האופטימיזציה של הגיאומטריה תיצור קובץ יומן רישום.</li>
		<li>בעקבות ההליך שלעיל, השתמש בתצוגת גאוס כדי לפתוח קובץ יומן רישום זה. לחץ על הגדרת חישוב-גאוסיאנית ובחר אנרגיה ו- TD-SCF-dft-B3LYP-6-31g-סינגרק. . אז תגיש חישוב האנרגיה יפיק קובץ יומן רישום אחר וקובץ קוביה.</li>
		<li>השתמש בתצוגת גאוס כדי לפתוח את קובץ יומן הרישום מחישוב האנרגיה. לחץ על תוצאות-UV/Vis כדי לראות את הספיגה החזוי.</li>
		<li>השתמש בתצוגת גאוס כדי לפתוח את קובץ הקוביה. לחץ על תוצאהs ובחר משטח וקווי המתאר-פעולות משטח חדש כדי לראות את המסלולים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
השוואת התוצאות הן מהמדידה הניסיונית והן מחישוב גאוס. חישוב שגיאת האחוז בין הערכים המחושבים והנמדדים, בהתאם למשוואה הבאה.               שגיאה = | (מקסימום cal.-wמקסexper.) /Wמקסימוםexper. | × 100% כאשר Wmax cal מייצג את אורך הגל המרבי של ספיגה מחישוב תיאורטי ו-wמקס exper. מייצג את אורך הגל מהתוצאה הניסיונית.</li>
</ol>3. קביעת PMQ
<ol><li>PMQ מדידה באמצעות צלחת 96-באר (איור 5)
	<ol>
<li>התמוססות 4-מתיונין ב 0.2 M הHCl עבור פתרון אנילין 200 מ"מ, R1. מפזר סודיום ניטקס במים מזוקקים כדי להשיג פתרון של 5 מ"מ, ארטו. שמרו את כל הפתרונות במקרר ב-4 ° c לפני השימוש.</li>
		<li>הוסף 100 μL של R1 לתוך הצלחת 96-באר, ולהוסיף 50 μL של PMQ המכיל דגימה לתוך הצלחת לערבב עם R1. לאחר מכן, הוסף 50 μL של R2 לתוך הצלחת. מערבבים את הפתרונות על ידי הפיג חוזרות ונשנות.</li>
		<li>שמרו את הצלחת בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות, ולאחר מכן הקליטו את ספיגת האולטרא-סגול ב504 ננומטר. חזור על 3x עבור כל בדיקה.  מוצר אזו יציב עם חשיפה לאור החדר; אין צורך להשאיר את הצלחת מתחת לחשיכה.</li>
		<li>יצא את הנתונים כקבצי xls/. xlsx לצורך ניתוח נוסף.</li>
	</ol></li>
	<li>עקומת כיול למדידת PMQ ישירה בדגימת שתן
	<ol>
<li>להכין פתרונות PMQ באמצעות שתן סינתטי עם ריכוזי PMQ ב 0, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200 μM, בהתאמה.</li>
		<li>הוסף 100 μL של R1 לתוך הצלחת 96-באר, ולהוסיף 50 μL של פתרון PMQ שתן לערבב עם R1. לאחר מכן, הוסף 50 μL של R2 לתערובת הנ ל. מערבבים את הפתרונות על ידי הפיג חוזרות ונשנות. שמרו את הצלחת בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות, ולאחר מכן הקליטו את ספיגת האולטרא-סגול ב504 ננומטר.</li>
		<li>צור עקומת כיול על בסיס הספיגה I504 ו PMQ ריכוזים. השתמש בערכים מבארות ללא PMQ כריקים, והפחת את הערכים הריקים מכל הבדיקות לפני עיבוד הנתונים.</li>
		<li>בצע התאמה ליניארית כדי ליצור את המשוואות הליניארית כ- y = aX + b, כאשר y הוא עוצמת הספיגה ב-504 nm, X הוא הריכוז של PMQ, a הוא השיפוע, ו- b הוא חיתוך-Y של הקו הליניארי.</li>
	</ol></li>
	<li>עקומת כיול למדידת PMQ ישירה בדגימת נסיוב אדם
	<ol>
<li>להכין פתרונות PMQ באמצעות סרום אנושי עם ריכוזי PMQ ב -0, 1, 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200, μM בהתאמה.</li>
		<li>הוסף 100 μL של R1 לתוך הצלחת 96-באר ולהוסיף 50 μL של פתרון PMQ סרום לערבב עם R1. הוסף 50 μL של R2 לתערובת שלעיל וערבב את הפתרונות על-ידי מלטף חוזר. שמרו את הצלחת בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות ולאחר מכן הקליטו את ספיגת האולטרא-סגול ב504 ננומטר. יצא את הנתונים כקובץ xls/. xlsx לצורך ניתוח נוסף.</li>
		<li>צור עקומת כיול על בסיס הספיגה I504 ו PMQ ריכוזים. השתמש בערכים מבארות ללא PMQ כריקים, והפחת את הערכים הריקים מכל הבדיקות לפני עיבוד הנתונים.</li>
		<li>בצע התאמה ליניארית כדי ליצור את המשוואות הליניארית כ- y = aX + b, כאשר y הוא עוצמת הספיגה ב-504 nm, X הוא הריכוז של PMQ, a הוא השיפוע, ו- b הוא חיתוך-Y של הקו הליניארי.</li>
	</ol></li>
	<li>חילוץ PMQ מנסיוב
	<ol>
<li>להוסיף כמות מסוימת של PMQ לתוך הנסיוב האנושי כדי לדמות סרום המכיל PMQ. להפקת PMQ, להוסיף 6 מ ל של תערובת של אתיל אצטט/הקסאן (7:1 v/v) לתוך 2 מ ל של הסרום PMQ המכיל 15 מ"ל שפופרת צנטריפוגה.</li>
		<li>הוסף 100 μL של נתרן הידרוקסיד (2 M) פתרון למערכת החילוץ. באלימות לנער את הצינור באמצעות מערבל מערבולת עבור 30 s. לאסוף את השכבה האורגנית להתרכז אותו באמצעות מאייד רוטרי תחת ואקום.</li>
		<li>לפזר מחדש את השאריות עם 200 μL של מים מזוקקים ולהסיר רכיבים שומנים מסיסים על ידי סינון דרך ממברנה בצורת דיסק עם 220 גודל הנקבובית ננומטר. השתמש בפתרון הסופי לבדיקה.</li>
	</ol></li>
	<li>קביעת PMQ מהנסיוב באמצעות חילוץ
	<ol>
<li>בצע את השלבים 3.2 או 3.3 כדי ליצור את עקומת הכיול עבור PMQ במים מזוקקים. לחלץ PMQ מ-PMQ המכיל סרומים על פי שלב 3.4.</li>
		<li>הוסף 100 μL של R1 ו 50 μL של פתרון PMQ לצלחת 96-באר. הוסף 50 μL של R2 אל התערובת, וערבב את הפתרונות על-ידי חזרה חוזרת.</li>
		<li>שמרו על הצלחת בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות והקליטו את ספיגת האולטרא-סגול ב504 ננומטר. השתמש בבארות עם R1 ו-R2 אבל בלי PMQ כמו פקדים. יצא את הנתונים כקבצי xls/. xlsx לצורך ניתוח נוסף.</li>
		<li>הפחת את ערכי הבקרה מערכי הספיגה I504 עבור כל בדיקה, ולאחר מכן השתמש בתוצאה לחישובי ריכוז בהתאם למשוואה מתוך עקומת הכיול. הערה: מגבלת הזיהוי (לוד) עבור PMQ בכל המקרים ניתן לחשב לפי שיטה סטנדרטית22. החישוב התבסס על פונקציית הכיול: לוד = 3.3 × SD/b, כאשר SD היא סטיית התקן של הריק ו- b הוא השיפוע של קו הרגרסיה</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primaquine+in+vivax+malaria%3A+an+update+and+review+on+management+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+Journal%22%5BJournal%5D)">Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues.</a> Malar Journal. 10, 351(2011).</li>
<li>Deng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+Artemisinin-Piperaquine+Mass+Drug+Administration+With+or+Without+Primaquine+Dramatically+Reduces+Malaria+in+a+Highly+Endemic+Region+of+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Large-scale Artemisinin-Piperaquine Mass Drug Administration With or Without Primaquine Dramatically Reduces Malaria in a Highly Endemic Region of Africa.</a> Clinical Infectious Diseases. 67 (11), 1670-1676 (2018).</li>
<li>Pavic, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primaquine+hybrids+as+promising+antimycobacterial+and+antimalarial+agents%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Medical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Primaquine hybrids as promising antimycobacterial and antimalarial agents.</a> European Journal of Medical Chemistry. 143, 769-779 (2018).</li>
<li>McQueen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+characterization%2C+and+cellular+localization+of+a+fluorescent+probe+of+the+antimalarial+8-aminoquinoline+primaquine%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Synthesis, characterization, and cellular localization of a fluorescent probe of the antimalarial 8-aminoquinoline primaquine.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 27 (20), 4597-4600 (2017).</li>
<li>Ashley, E. A., Recht, J., White, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primaquine%3A+the+risks+and+the+benefits%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">Primaquine: the risks and the benefits.</a> Malaria Journal. 13 (1), 418(2014).</li>
<li>Watson, J., Taylor, W. R., Menard, D., Kheng, S., White, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+primaquine-induced+haemolysis+in+G6PD+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Modelling primaquine-induced haemolysis in G6PD deficiency.</a> Elife. 6, (2017).</li>
<li>Beutler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-6-phosphate+dehydrogenase+deficiency%3A+a+historical+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: a historical perspective.</a> Blood. 111 (1), 16-24 (2008).</li>
<li>Endoh, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+pamaquine%2C+primaquine+and+carboxy+primaquine+in+calf+plasma+using+electrochemical+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%3A+Biomedical+Sciences+and+Applications%22%5BJournal%5D)">High-performance liquid chromatographic determination of pamaquine, primaquine and carboxy primaquine in calf plasma using electrochemical detection.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 579 (1), 123-129 (1992).</li>
<li>Dua, V. K., Kar, P. K., Sarin, R., Sharma, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+primaquine+and+carboxyprimaquine+concentrations+in+plasma+and+blood+cells+in+Plasmodium+vivax+malaria+cases+following+chronic+dosage+with+primaquine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%3A+Biomedical+Applications%22%5BJournal%5D)">High-performance liquid chromatographic determination of primaquine and carboxyprimaquine concentrations in plasma and blood cells in Plasmodium vivax malaria cases following chronic dosage with primaquine.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Applications. 675 (1), 93-98 (1996).</li>
<li>Miranda, T. A., Silva, P. H. R., Pianetti, G. A., César, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+quantitation+of+chloroquine+and+primaquine+by+UPLC-DAD+and+comparison+with+a+HPLC-DAD+method%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">Simultaneous quantitation of chloroquine and primaquine by UPLC-DAD and comparison with a HPLC-DAD method.</a> Malaria Journal. 14, 29(2015).</li>
<li>Tatsuno, M., Nishikawa, M., Katagi, M., Tsuchihashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+illicit+drugs+in+human+urine+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Analytical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of illicit drugs in human urine by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Analytical Toxicology. 20 (5), 281-286 (1996).</li>
<li>Erni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+high-performance+liquid+chromatography+in+the+pharmaceutical+industry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+A%22%5BJournal%5D)">Use of high-performance liquid chromatography in the pharmaceutical industry.</a> Journal of Chromatography A. 507, 141-149 (1990).</li>
<li>Tsikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nitrite+and+nitrate+in+biological+fluids+by+assays+based+on+the+Griess+reaction%3A+Appraisal+of+the+Griess+reaction+in+the+l-arginine%2Fnitric+oxide+area+of+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Analysis of nitrite and nitrate in biological fluids by assays based on the Griess reaction: Appraisal of the Griess reaction in the l-arginine/nitric oxide area of research.</a> Journal of Chromatography B. 851 (1), 51-70 (2007).</li>
<li>Zurcher, D. M., Adhia, Y. J., Romero, J. D., McNeil, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modifying+a+known+gelator+scaffold+for+nitrite+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications%22%5BJournal%5D)">Modifying a known gelator scaffold for nitrite detection.</a> Chemical Communications. 50 (58), 7813-7816 (2014).</li>
<li>Kunduru, K. R., Basu, A., Tsah, T., Domb, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+with+pendant+diazo-coupling+functionality+for+colorimetric+detection+of+nitrates%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+and+Actuators+B%3A+Chemical%22%5BJournal%5D)">Polymer with pendant diazo-coupling functionality for colorimetric detection of nitrates.</a> Sensors and Actuators B: Chemical. 251, 21-26 (2017).</li>
<li>Li, D., Ma, Y., Duan, H., Deng, W., Li, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Griess+reaction-based+paper+strip+for+colorimetric%2Ffluorescent%2FSERS+triple+sensing+of+nitrite%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Griess reaction-based paper strip for colorimetric/fluorescent/SERS triple sensing of nitrite.</a> Biosensors and Bioelectronics. 99, 389-398 (2018).</li>
<li>Deng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+strategy+for+colorimetric+detection+of+hydroxyl+radicals+based+on+a+modified+Griess+test%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">A novel strategy for colorimetric detection of hydroxyl radicals based on a modified Griess test.</a> Talanta. 195, 152-157 (2019).</li>
<li>Pang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+photo-responsive+macroscopic+switch+constructed+using+a+chiral+azo-calix%5B4%5Darene+functionalized+silicon+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">A photo-responsive macroscopic switch constructed using a chiral azo-calix[4]arene functionalized silicon surface.</a> Chemical Communications (Camb). 54 (24), 2978-2981 (2018).</li>
<li>Kaur, N., Dhaka, G., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+naked-eye+ratiometric+and+colorimetric+receptor+for+anions+based+on+azo+dye+featuring+with+benzimidazole+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Tetrahedron+Letters%22%5BJournal%5D)">Simple naked-eye ratiometric and colorimetric receptor for anions based on azo dye featuring with benzimidazole unit.</a> Tetrahedron Letters. 56 (9), 1162-1165 (2015).</li>
<li>Liu, F., Lou, J., Hristov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-Ray+responsive+nanoparticles+with+triggered+release+of+nitrite%2C+a+precursor+of+reactive+nitrogen+species%2C+for+enhanced+cancer+radiosensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">X-Ray responsive nanoparticles with triggered release of nitrite, a precursor of reactive nitrogen species, for enhanced cancer radiosensitization.</a> Nanoscale. 9 (38), 14627-14634 (2017).</li>
<li>Deng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+unexpected+Griess+reaction+on+the+important+anti-malarial+drug+primaquine+and+its+application+for+drug+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">An unexpected Griess reaction on the important anti-malarial drug primaquine and its application for drug determination.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 171, 8-14 (2019).</li>
<li>Shrivastava, A., Gupta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+determination+of+limit+of+detection+and+limit+of+quantitation+of+the+analytical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Chronicles+of+Young+Scientists%22%5BJournal%5D)">Methods for the determination of limit of detection and limit of quantitation of the analytical methods.</a> Chronicles of Young Scientists. 2 (1), 21-25 (2011).</li>
</ol>

. למחברים אין מה להצהיר

תיארנו שיטת צביעה עבור כימות PMQ נוח. זה פוטנציאל השיטה הפשוטה והחסכונית ביותר. חשוב מכך, שיטה זו מציעה מאפשר מדידה PMQ בעין עירומה מבלי להשתמש בציוד כלשהו.
תגובת Griess אופטימיזציה עבור זיהוי PMQ יכול ליצור בצבע אדום אזו עם ספיגה מקסימלית ב 504 ננומטר. ההשפעה הפוטנציאלית מפני קליטת UV-vis של biomolecules אנדוגני מוגבל, ובכך עושה את השיטה מבטיחה מדידה ישירה של PMQ בנוזלים ביולוגיים. כפי שצוין על ידי התוצאה, קשר מצוין ליניארי (R2 = 0.998) נמצא לזיהוי שתן PMQ על טווח הריכוז של 0-200 μ...

PMQ הוא אחד התרופות החשובות ביותר למניעת מלריה, זה עובד לא רק כschizontocide רקמות כדי למנוע נסיגה אלא גם כמו משחטוציטוסייד כדי להפריע שידור המחלה1,2,3,4. Intravascular המוליזה הוא אחד הקשורים לתופעות לוואי של PMQ, אשר הופך להיות רציני מאוד לקויה בG6PD. ידוע כי ההפרעה הגנטית G6PD מופץ ברחבי העולם עם תדר גנטי בין 3-30% באזורים אנדמיים מלריה. חומרת החולשה PMQ תלוי במידה של מחסור G6PD, כמו גם את המינון ואת משך החשיפה PMQ5,6. כדי להקטין את הסיכון, מי המליץ מינון נמוך אחד (0.25 mg בסיס/ק"ג) של PMQ לטיפול במלריה. עם זאת, זה עדיין מאתגר על ידי וריאציות של רגישות התרופה החולה5,7. ניטור המינון הכרחי כדי להעריך את הפרמקוקינטיקה לאחר PMQ הממשל, אשר יכול להשפיע על המינון התאמה לטיפול מוצלח עם רעילות מוגבלת.
כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים היא הטכניקה הנפוצה ביותר לקביעת PMQ קלינית. אנדוh ואח ' דיווח על מערכת מערכות המדידה עם גלאי UV לPMQ הסרום באמצעות מערך C-18 של ג'ל פולימרישמונה. במערכת שלהם, חלבונים הנסיוב היו זירז הראשון עם acetonitrile, ולאחר מכן PMQ בתוך הסופרנטאנט הופרד לצורך הערכות. עקומת הכיול היה ליניארי מעל טווח הריכוז מ 0.01-1.0 μg/mL8. שיטה נוספת המבוססת על בדיקות בשלב הפוך עם זיהוי UV ב 254 nm דווחה עבור הכמת של PMQ ואת מטבוליטים העיקריים שלה9. עקומת הכיול עבור PMQ היה ליניארי בטווח בין 0.025-100 μg/mL. מיצוי נוסף נוזלי נוזלי עם הקסאן מעורב ו אתיל אצטט כמו שלב אורגני שימש הפרדת PMQ עם שחזור אחוז הגיע 89%9. לאחרונה, מירנדה ואח ' פיתחה שיטת ה-, עם זיהוי UV ב 260 nm עבור ניתוח PMQ ב ניסוחים לוח עם מגבלת זיהוי ב 3 μg/mL10.
למרות ששיטות הזיהוי הללו מבטיחות רגישות מבטיחה בקביעת התרופה, והרגישות יכולה להשתפר עוד יותר אם השימוש בספקטרומטר ביטוולי מצויד בספיטוגרפיות מסה, עדיין יש כמה חסרונות. מדידות הסמים הישירות בנוזלים הביולוגיים אינן נגישות בדרך כלל באמצעות האבחון, מכיוון שbiomolecules רבים יכולים להשפיע רבות על האנליזה. שעקירות נוספים נדרשים להסרת מולקולות אנדוגנילפני ניתוחהאנליזה 11,12. יתר על כן, זיהוי PMQ על ידי גלאי האבחון-UV מבוצע בדרך כלל על אורך הגל המרבי שלה (260 nm).; עם זאת, ישנם מולקולות אנדוגניים רבים בנוזלים ביולוגיים עם ספיגה חזקה ב 260 ננומטר (למשל, חומצות אמינו, ויטמינים, חומצות גרעין פיגמנטים אורוכרום), ובכך מפריעה PMQ UV זיהוי. יש צורך לפתח שיטות פשוטות וחסכוניות לקביעת PMQ עם רגישות סבירה וסלקטיביות.
תגובת griess הוצגה לראשונה ב 1879 כמבחן צביעה לזיהוי חנקיתי13,14,15,16. לאחרונה, תגובה זו נחקרו בהרחבה כדי לזהות לא רק חנקיתי אלא גם אחרים מולקולות רלוונטיות ביולוגית17,18,19,20. בעבר דיווחו על המחקר הסיסטמטי הראשון של תגובת Griess בלתי צפויה עם PMQ (איור 1). במערכת זו, PMQ מסוגל ליצור azos צבעוניים כאשר ביחד עם אנינים הוחלף בנוכחות של יונים ניטקסים בתנאים חומצי. גילינו כי הצבע של azos מגוון מצהוב לכחול כאשר מגביר את השפעת האלקטרון לתרומת האפקט של מתמיר על אנירינס21. שיטת הספיגה המבוססת על הקליטה UV-vis עבור PMQ פיקציה פותחה באמצעות התגובה אופטימיזציה בין 4-methoxyaniline ו PMQ. שיטה זו הראתה פוטנציאל רב לזיהוי רגיש וסלקטיבי של PMQ בנוזלים הרלוונטיים לביו. כאן, אנו מכוונים לתאר את ההליכים המפורטים לקביעת PMQ בהתבסס על אסטרטגיית הצביעה הזאת.

<table><tbody><tr><td>4-מתוקסיאנילין</td><td>אלאדין</td><td>K1709027</td><td></td></tr><tr><td>2,4-דימתוקסיאנילין</td><td>Heowns</td><td>10154207</td><td></td></tr><tr><td>3,4-דימתוקסיאנילין</td><td>בידפארם</td><td></td> BD21914-4-מתילאנילין <td></td></tr><tr><td></td><td>אדמאס-בטא</td><td></td> P1414526-4-ניטרואנילין <td></td></tr><tr><td></td><td>מקלין</td><td>C10191447</td><td></td></tr><tr><td>96 בארות, Flat</td><td>Botton Labserv</td><td></td><td></td></tr><tr><td>310109008 Gaussian@16 תוכנה</td><td>Gaussian, Inc</td><td></td><td>גרסה: x86-64 מופעל SSE4_2</td></tr><tr><td>/ לינוקס חומצה הידרוכלורית</td><td>GCRF</td><td>20180902</td><td></td></tr><tr><td>מרווין סקיצה (תוכנה)</td> <td>CHEMAXON</td><td></td><td>מהדורה חופשית: 15.6.29</td></tr><tr><td>חומצה זרחתית</td><td>מקלין</td><td>C10112815</td><td></td></tr><tr><td>פרימקווין ביסיפוספט</td><td>3A כימיקלים</td><td></td><td></td>CEBK200054</tr><tr><td>נתרן ניטריט</td><td>אלפא Aesar</td><td>5006K18R</td><td></td></tr><tr><td>סולפונאמידים</td><td>TCI (שנחאי)</td> <td>GCPLO-BP</td><td></td></tr><tr><td>Varioskan LUX קורא צלחת</td><td>תרמו פישר</td><td></td><td>מסופק עם תוכנת SkanIt 4.1</td></tr></tbody></table>

התגובה האופטימיזציה של griess עבור uv-vis ו-עירום עין ההגדרה של אנטי מלאביאל primaquine

Optimized Griess Reaction for UV-Vis and Naked-eye Determination of Anti-malarial Primaquine

Primaquine (PMQ), סם חשוב נגד מלריה, הומלץ על ידי ארגון הבריאות העולמי (מי) לטיפול בזיהומים סכנת חיים שנגרמו על ידי P. vivax ו ovale. עם זאת, PMQ יש תופעות לוואי לא רצויות להוביל המוליזיס חריפה בחולים עם גלוקוז-6-פוספט דהידרוגנאז (G6PD) מחסור. יש צורך לפתח שיטות פשוטות ואמינות לקביעת PMQ במטרה של ניטור המינון. בתחילת 2019, אנו דיווחו על גישה UV-Vis ו-עירום עין מבוסס על הקוונפיקציה מטרי צביעה PMQ. הזיהוי היה מבוסס על תגובה כמו Griess בין PMQ ו אנירינס, אשר יכול ליצור מוצרים בצבע אזו. מגבלת הזיהוי למדידה ישירה של PMQ בשתן סינתטי היא בטווח nanomolar. יתר על כן, שיטה זו הראתה פוטנציאל גדול עבור PMQ פיקציה מדגימות של סרום אנושי בריכוזים רלוונטיים קלינית. בפרוטוקול זה נתאר את הפרטים הטכניים לגבי הסינתזות והאפיון של מוצרי אזו צבעוניים, ההכנה הכימית וההליכים לקביעת PMQ.

כדי לייעל את תנאי התגובה (איור 2), השתמשו באנינים שונים לזוג עם PMQ באמצעות תגובת griess. השגנו סדרה של azos עם צבעים שונים. זה כבר נמצא כי אנינים עם אלקטרון תורם מתמיר יכול לגרום משמרת אדומה בספקטרום הקליטה של UV-vis. חישובים תיאורטיים בוצעו באמצעות התיאוריה הפונקציונלית צפיפות הזמן (TD-DFT). כפי שהוצג באיור 2A, תוצאת החישוב היתה בהסכמה טובה עם מדידות אופטית עם השגיאה הממוצעת של 3.1%. 4-methoxyaniline היה להשתמש לאחר מכן לנהל את תגובת זיהוי PMQ בשל ביצועים טובי...

פרוטוקול זה מתאר שיטה מטרית מקורית לאיתור מלריה (PMQ) בprimaquine הסינתטי ובסרומים האנושיים.

התגובה האופטימיזציה של Griess עבור UV-Vis ו-עירום עין ההגדרה של אנטי מלאביאל Primaquine

Primaquine (PMQ), an important anti-malarial drug, has been recommended by the World Health Organization (WHO) for the treatment of life-threatening ...

פרימיקין היא תרופה ידועה נגד מלריה. הקביעה של primaquine בנוזלים ביולוגיים נדרשת לעתים קרובות כדי להעריך את הפרמקוקינטיקה. נכון לעכשיו, הטכניקות העיקריות לקביעת Primaquine מבוססות על HPLC.ההליכים של HPLC יכולים להיות די מסובכים וגוזלים זמן. אז שיטה זו מציעה דרך פשוטה לגילוי מהיר של Primaquine. שיטת Griess זו היא אולי הדרך הפשוטה והחסכונית ביותר לכמיית Primaquine.יתר על כן, שיטה זו יכולה להציע אפשרויות לגילוי Primaquine בעין בלתי ללא דרישה של כל ציוד. מלבד דגימות סרום ושתן, שיטה זו יכולה לשמש גם כדי לקבוע כמותית Primaquine ניסוחים התרופות, למשל, קביעת Primaquine בטבליות לייצור בקרת איכות. הדגמת ההליך תהיה מיס וו יאלן וו שנגג'ון, שני סטודנטים לתואר שני מהמעבדה שלי.התחל על ידי המסת 0.1 מילימולים של אנילין ופרימיקין ביפוספט לתוך 10 מיליליטר של 5%תמיסת חומצה זרחנית בבקבוקון תחתון חום 25 מיליליטר. מניחים את הבקבוק על אמבט קרח, ומוסיפים בר ערבוב. ואז לשים את אמבט הקרח על צלחת ערבוב.ממיסים 6.9 מיליגרם של נתרן חנקתי ומיליליטר אחד של מים מקוררים ומוסיפים אותו לבקבוקון מבחינת טיפה. הסר את אמבט הקרח ולשמור על תערובת התגובה תוך ערבוב בטמפרטורת החדר. נטר את התגובה באמצעות כרומטוגרפיה מצופה ג'ל סיליקה או צלחת TLC, באמצעות תערובת מתנול דיכלורומתאן כאלונט.מוצר האזו מציג כתמים צבעוניים על צלחת TLC.

optimized-griess-reaction-for-uv-vis-naked-eye-determination-anti

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים בדיקת פאגוציטוזיס מבוססת ציטומטריה של זרימה הכוללת אריתרוציטים נגועים בפלסמודיום פלציפרום מסומנים ואופסוניים על ידי מונוציטים. ציטומטריית זרימה מזהה פלואורסצנטיות במונוציטים, המאשרת את הזיהוי המוצלח של אריתרוציטים opsonized באמצעות phagocytosis.

בדיקה לכימות פגוציטוזה בתיווך נוגדנים של אריתרוציטים נגועים בטפילים

הסרטון מדגים בדיקה מבוססת תאים לזיהוי אימונוגלובולין G נגד אקוופורין-4 באמצעות שבב ביולוגי המכיל תאים לא נגועים ותאים נגועים המבטאים אקוופורין-4. שיטה זו יש יישומים באבחון הפרעות ספקטרום neuromyelitis optica, אושר על ידי פלואורסצנטיות ירוקה חזקה על השבב.

בדיקה לזיהוי סרום אנטי אקוופורין-4 אימונוגלובולין G

מדידת פונקצית נוגדן היא מפתח להבנה חסינות למלרית falciparum Plasmodium. שיטה זו מתארת ​​את הטיהור של merozoites קיימא, ומדידה של phagocytosis opsonization תלוי על ידי cytometry זרימה.

טיהור תשואה גבוהה של<em&gt; Falciparum Plasmodium</em&gt; Merozoites לשימוש בOpsonizing נוגדן מבחני

ביטוי של חלבוני מלריה במערכות תא מבוסס נותר מאתגר. אנו מדגימים שתי מערכות ביטוי תא חופשי צעד וIVT צעד אחד (בתרגום חוץ גופית) לביטוי חלבוני rhoptry רקומביננטי מלריה מתאי הלה. אנו משתמשים במערכת לטיהור מבוססת זיקת Ni-שרף לטהר את חלבוני rhoptry.

מערכות ביטוי חופשי הנייד מבוסס הלה לביטוי של<em&gt; Plasmodium</em&gt; Rhoptry חלבונים

ריאגנטים לזיהוי חזקים הם בעלי צורך הולך וגובר לפיתוח כלים חדשים לאבחון מלריה. תוכנן בדיקה אירידיום (III) הפולטת אות זוהר לאורך זמן בנוכחות סמן ביולוגי של חלבון מלריה עשיר בהיסטידין. זיהוי החלבון בתמיסה או מקובע על חלקיק מגנטי מאפשר גמישות ביישום.

אירידיום (III) פלורסנט בדיקה לאיתור של חלבון המלריה ביומרקר היסטידין העשיר החלבון-II

קשה לשכפל הדבקה משותפת בבני אדם במבחנה. עם זאת, טפילי מלריה אנושיים ניתנים לתרבית בקלות במבחנה, כמו גם תאים חד-גרעיניים מבודדים מדם היקפי אנושי שנדבקו באופן טבעי ב-HIV. זה מספק מודל מצוין לחקר תגובות חיסוניות מוקדמות לטפילי מלריה בהקשר של הדבקה משותפת ב-HIV.

<em&gt; במבחנה</em&gt; מודל למדידה של מערכת חיסונית למלריה בהקשר של HIV Co-זיהום

בכתב יד זה מוצגות שיטות חמצון תקופתי וקישור צולב גלוטרלדהיד לקיבוע קוולנטי של נוגדנים על דיסקיות נייר. הוערכה פעילות הקישור של נוגדנים משותקים. בהתבסס על תוצאות אלה, נעשה שימוש בשיטת קישור צולב גלוטראלדהיד לפיתוח בדיקה חיסונית חדשה מבוססת נייר לזיהוי אימונוגלובולין G (IgG).

קשר הקוולנטי של נוגדני דיסקי נייר תאיים ואת היישומים שלהם ב Immunoassays מדד-צבע Naked-עין

כאן, אנו מציגים פרוטוקול זיהוי, כימות של הפלזמודיום falciparum מימית אדום דם תאים נגועים באמצעות ספקטרומטר אינפרא-אדום השתקפות הכולל הקלוש של ניתוח נתונים רב משתנית.

זיהוי, כימות של הפלזמודיום falciparum ב מימית כדוריות דם אדומות על ידי הקלוש הכולל השתקפות ספקטרוסקופית אינפרא אדום וניתוח נתונים Multivariate

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לספק הוראה כיצד למדוד את היכולת של נוגדנים הנוכחי סרה או פלזמה של אנשים, באופן טבעי חשוף Plasmodium זיהום falciparum, כדי opsonize ו לגרום phagocytosis של אריתרוציטים נגועים טפילים (IEs).

מדידת נוגדנים הרום Phagocytosis-באופן טבעי כדי Plasmodium falciparum טפילי על ידי אסאי מבוסס ציטומטריה זרימה

אנו מתארים גישה של מולקולה אחת למדידות זיקה לאנטיגן-נוגדנים באמצעות פוטומטריה המונית (MP). הפרוטוקול מבוסס MP הוא מהיר, מדויק, משתמש בכמות קטנה מאוד של חומר, ואינו דורש שינוי חלבון.

נחישות מהירה של זיקה נוגדנים אנטיגן על ידי פוטומטריה המונית

פרוטוקול זה מתאר בדיקת אימונוסורבנט המקושרת לאנזים סנדוויץ' כדי לזהות ספורוזואיטים של בלוטת הרוק ביתושים. באמצעות נוגדנים חד-שבטיים הזמינים בקלות, השיטה מאפשרת זיהוי חסכוני ובתפוקה גבוהה של יתושים הנושאים פלסמודיום פלציפרום או פלסמודיום ויוואקס. השיטה מתאימה לחקר העברת מלריה, כולל סקרים וקטוריים.

איתור פלסמודיום ספורוזואיטים ביתושי אנופלס באמצעות בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים

למדו שיטה צבעונית פשוטה ומהירה לזיהוי פרימקווין בדגימות שתן וסרום אנושיים באמצעות תגובת Griess. השיטה מציעה חלופה חסכונית ויעילה ל-HPLC מסורתי לצורך הערכת פרמקוקינטיקה.

התגובה האופטימיזציה של Griess עבור UV-Vis ו-עירום עין ההגדרה של אנטי מלאביאל Primaquine

גלה סרטונים נוספים