הדור של מודל עכברוש של אי ספיקת כבד חריפה על ידי שילוב 70% כריתת הריאה חלקית ופרצטמול

אי ספיקת כבד חריפה או ALF מוגדר בדרך כלל התפתחות מהירה של פגיעה בכבד בכבד בריא מלווה פגיעה חמורה של הפונקציות העיקריות שלה. השתלת כבד אורתוטופית היא התרופה הזמינה היחידה ברוב המקרים. אבל בשל מחסור של תורמי כבד, שיעור התמותה של חולי ALF הוא גבוה מאוד.

כדי לחקור את הפוטנציאל של גישות טיפוליות חלופיות ולהבין טוב יותר את הפתופיזיולוגיה של ALF, מודלים של בעלי חיים של המחלה מועסקים. רבים מדגמי ALF מבוססים על ההשפעות hepatotoxic של פרצטמול, פחמן tetrachloride, קונקאנבלין A, lipopolysaccharide, D-גלקטוזאמין ו thioacetamide. עם זאת, אלה יש כמה חסרונות כגון רבייה ירודה והפיכות, רעילות לאיברים חיוניים אחרים, השתקפות לקויה של פתולוגיה של מחלות אנושיות וריאציה מינים.

לפיכך, יש צורך במערכת מודל טובה יותר כי הוא לשכפל ומאפשר מרווח זמן מספיק כדי ללמוד את ההשפעות של התערבות טיפולית. במחקר הנוכחי, מודל ALF בחולדות נוצר על ידי שילוב השפעות של כריתת hepatectomy חלקית ו פרצטמול hepatotoxicity. האונה האולטראלית החציונית והשמאלית של הכבד מוסרים כדי לסמל 70% מסת כבד, ויותר מכך, פרצטמול ניתן כדי לגרום ALF.

הפיתוח של ALF במודל התאפיין בניתוח ביוכימי והיסטולוגי והיהפיכה של נזק לכבד אושרה על ידי השתלת hepatocytes חולדה בריאה סינגנית. חולדות Wistar בעל משקל גוף בטווח של 180 עד 250 גרם שימשו במחקר הנוכחי. השלבים הבאים מתארים את ההליך הכירורגי לגיוס של ALF בחולדה.

החיה היא הרדמה על ידי הזרקת תערובת קטמין-Xylazine תוך-אפית. הרדמה מלאה מאושרת על ידי צביטת בוהן החיה, ונהלים נוספים מתבצעים רק כאשר אין רפלקס דוושה. כדי למנוע התפלת קרנית, טיפת עיניים מבוססת מתיל-תאית carboxy מוחלת על שתי העיניים.

החיה מרוסנת ללוח הניתוחים באמצעות סרט לבן. השיער מוסר מהאזור הכירורגי של הבטן הימנית העליונה באמצעות קוצץ חשמלי. לחטא את האתר הכירורגי על ידי שלושה קרצוף לסירוגין של 70% אתנול ו povidone יוד באמצעות רפידות כותנה מעקרות בתנועה מעגלית.

העור שיש לחתוך מסומן ממש מתחת לעצם החזה בניצב לשיפויד ומקביל לצלעות. גיליון וילון סטרילי בעל פתח של כשלושה סנטימטרים על סנטימטר אחד ממוקם מעל העור המסומן. חתך רוחבי של כשני עד שלושה סנטימטרים נעשה לאורך הקו המסומן בעזרת אזמל.

ההחזקה של העור עם שכבת השריר הבסיסית בקרבת האזור חתוך מוסר בעדינות על ידי קצות כותנה לחים סטריליים. לאחר מכן, חתך רוחבי נעשה באמצעות שכבה צפי ממש מתחת לתהליך xiphoid. האונה השמאלית של הכבד נחשפת על ידי מתן לחץ עדין לבית החזה בעזרת שני קצות כותנה לחים מלוחים.

לולאת חוט ניילון סטרילית מחליקה סביב אונה הכבד החשופה. הלולאה נלקחת בזהירות לבסיס האונה בעזרת מטלות ניתוח מיקרו או ניצני כותנה. בעזרת מחזיק מחט מיקרוכירורגיה ומטסות מיקרו, שני הקצוות של הלולאה קשורים, הצבת הקשר קרוב ככל האפשר לבסיס האונה.

זה כדי לצמצם את כלי הדם ולהפחית את הדימום לאחר האונה הכבד מוסר. שני קשרים נוספים קשורים בצד השני. האונה הקשורה נחתכת ממש מעל הקשר באמצעות מספריים מיקרו-כירורגיים שמשאירים גדם איסכמי.

באופן דומה, האונה החציונית של הכבד מורמת באמצעות קצות כותנה. לזהות את הצורה הייחודית של האונה החציונית של הכבד. מניחים לולאת חוט ניילון מעל האונה, לקשור בחוזקה את הקצוות שלה.

שני קשרים נוספים קשורים בצד השני וחותלים את האונה. לאחר הסרת האונות, הלידונום נתפר באמצעות תפר כרום קטגוט 4/0 נספג עם תפרים רציפים ואחריו תפר עור עם תפר פשוט מופרע. לאחר סגירת העור, פתרון יוד povidone מוחל סביב האתר הכירורגי.

יריעת הווילון מוסרת והבעל חיים נלקח ממועצת הניתוחים. מנה אנטיביוטית של 12 מיליגרם cefotaxime ב מיליליטר אחד של 5% פתרון גלוקוז ניתנת תוך ניתוחית לחיה כדי להגן עליו מפני הסיכון של זיהום לאחר הניתוח. להקלה על הכאב לאחר הניתוח, meloxicam משכך כאבים, בדרך כלל 1 מ"ג לכל קילוגרם משקל הגוף ניתנת תת עורית לחיה, ואחריו מנה כל יום במשך יומיים.

החיה מועברת לכלוב התאוששות חם. החיה נעשית בהכרה תוך 30 עד 40 דקות ומתחיל לזוז. החיה המופעלת מוחזקת בבידוד עד לריפוי מלא של פצעים כירורגיים, דבר שעשוי להימשך שלושה עד ארבעה ימים.

עבור גרימת ALF, 750 מיליגרם לק"ג משקל גוף של פרצטמול ואת המנה השנייה של meloxicam מוזרק תוך אפית 24 שעות לאחר הליך כריתת שומן חלקית. משטר מינון זה חוזר על עצמו לאחר 24 שעות. לאחר אינדוקציה של ALF, ההישרדות בבעלי חיים נמצאה ירידה חמורה.

כדי לאפיין את התפתחות ALF, בעלי חיים המופעלים היו המתת לחץ ים לאחר מנה שנייה של פרצטמול, מחקרים ביוכימיים והיסטולוגיים שונים נעשו. התוצאות מתוארות קדימה בסרטון. אחוז ההישרדות בקבוצה המושרה ALF נמצאה ירידה חמורה עד 80% תמותה נצפתה בתוך 24 שעות של מנה שנייה של פרצטמול.

נזק לכבד ניכר ברמה המורפולוגית בקבוצה הנגרמת על ידי ALF ורק 70% קבוצת כריתת כבד חלקית. בעוד קבוצת הביקורת ורק קבוצת טיפול פרצטמול היה מראה בריא. רמות האנזים של אלנין אמינו transferase, אספרטט אמינו transferase ו phosphatase אלקליין נמצאו גבוהות מאוד בקבוצה המושרה ALF בהשוואה לקבוצות אחרות.

ניתוח של פרופיל ביטוי גנים על ידי qPCR הראה ביטוי גבוה של גנים המעורבים אפופטוזיס, דלקת והתקדמות של פגיעה בכבד. המטוקסילין וכתמי אאוסין של חלקי רקמת הכבד חשפו בעיקר hepatocytes נורמלי בקבוצת הביקורת. בקבוצת ALF, בעיקר ניוון שומן כלי רכב מאקרו מתון נצפתה.

זמן פרותרומבין ויחס מנורמל בינלאומי נמצאו מוגבהים בקבוצה המושרה ALF, המציין תהליך קרישת דם מעוכב. אחוז ההישרדות נמצאה משוחזרת בקבוצה המושרה ALF לאחר השתלת hepatocytes חולדה בריאה סינגנית. רמות סרום של אנזימים אלנין אמינו transferase, אספרטט אמינו transferase ו phosphatase אלקליין נמצאו משוחזרים בבעלי חיים המושרה ALF לאחר השתלת תאים.

שיטה זו של גרימת ALF בחולדות היא לשחזור, מראה היפוך טוב ומספק חלון זמן מתאים כדי לבדוק טיפולים חדשים. לפיכך, מודל זה יכול לשמש מודל מחלה יעיל להערכת גישות טיפוליות פוטנציאליות לטיפול ALF.