Name: הדור של מודל עכברוש של אי ספיקת כבד חריפה על ידי שילוב 70% כריתת הריאה חלקית ופרצטמול (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: למד ליצור מודל עכברוש לאי ספיקת כבד חריפה באמצעות שילוב של כריתת כבד חלקית ופרצטמול. מודל זה מאפשר הערכת טיפולים חדשניים ומחקה טוב יותר את פתולוגיית המחלה האנושית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מענק הליבה שהתקבל מהמחלקה לביוטכנולוגיה, ממשלת הודו למכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי.

ההליך המתואר להלן אושר על ידי ועדת האתיקה של בעלי החיים המוסדי של המכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי. מספר האסמכתא הטורית של האישור מהווה המשך 355/14.
1. הכנה
<ol><li>היכונו להליך הכירורגי כמתואר קודם על ידי Das B et al.26.</li>
	<li>השתמש 6 – 8-שבוע בן המטבעי חולדות Wistar עם משקל הגוף של 200 – 250 g.</li>
	<li>בית בעלי החיים תחת תנאים סטנדרטיים טיפול בבעלי חיים ולהאכיל אותם עם החולדה העכבר libitum לפני ואחרי ההליך.</li>
	<li>בעת ביצוע 70% PHx, להשתמש בשילוב קוקטייל סטנדרטי של קטמין הידרוכלוריד (100 מ"ג/ק"ג משקל הגוף) ו xylazine (10 מ"ג/ק"ג משקל הגוף), אשר מוזרק intraperitoneally. הערה: סוג ההרדמה שבשימוש יכול להיות השפעות פוסט-אופרטיביות על התמותה והתחלואה.</li>
	<li>במהלך השתלת התא, השתמשו בהרדמה ממסים נדיפים (2-כלורט-2-(difluoromethoxy)-1, 1, 1-trifluoro-ethane) כדי להקטין את זמן ההחלמה של בעל החיים לאחר ניתוח ההשתלה.</li>
	<li>לגרום ולתחזק את ההרדמה הבין-משתמשים במערכת הרדמה אישית. שמור על זרימת החמצן ב-4 ליטר/דקות. לשימוש האינדוקציה isofלאנה ב 4% לשימוש תחזוקה 2 – 3% במהלך הניתוח.</li>
</ol>2. הליכים מוקדמים
<ol><li>הintraperitoneally את החולדה על ידי הזרקת התערובת הקטמין-xylazine שתוארה בשלב 3.1. לאשר את ההרדמה המלאה על ידי צובט את הבוהן של החיה. הליכים נוספים מתבצעים רק כאשר אין רפלקס דוושה.</li>
	<li>על מנת למנוע התייבשות, יש למרוח לשתי העיניים שטיפת מתיל מבוססת-תאית.</li>
	<li>רסן את בעל החיים ההרדמה. ללוח כירורגי באמצעות קלטת לבנה מניחים את בעל החיים עם צד הבטן הפונה כלפי מעלה, ומבטיחים שהפה הוא בצד המרוחק מהאדם המבצע את המבצע.</li>
	<li>להסיר את השיער מאזור כירורגי הימנית העליונה באמצעות קוצץ חשמלי.</li>
	<li>לחטא את האתר כירורגי על ידי שלושה חלוקים לסירוגין של povidone יוד ו 70% אתנול באמצעות רפידות כותנה מעוקר בתנועה מעגלית.</li>
</ol>3. כריתת הלוע חלקית (PHx) כדי להסיר 70% ממסת הכבד
הערה: בצע את ההליך הכירורגי כולו תחת סביבה סטרילית במכסה זרימה למינארי. השתמש רק כלי ניתוח סטרילי כדי למזער את הסיכון של זיהום בניתוח. הסרת 70% של מסת הכבד, המכונה 70% כריתת hepatectomy (70% PHx), בוצעה כמתואר על ידי ג ' מיטשל ו-H. וילאנביא, 200827.
<ol><li>לפני תחילת הניתוח, לאשר את ההרדמה המלאה של החיה על ידי צובט את הבוהן שלה. הליכים נוספים מתבצעים רק כאשר אין רפלקס דוושה.</li>
	<li>סמן את העור להיות נחתך ממש מתחת עצם החזה, בניצב xiphoid, ובמקביל לחזה.</li>
	<li>מניחים סדין סטרילי נקי שיש לו פתח של כ 3 ס"מ x 1 ס מ מעל העור המסומן.</li>
	<li>בצע חתך רוחבי של סביב 2 – 3 ס מ לאורך הקו המסומן עם אזמל. . השתמש בלהב כירורגי מס ' 22 הסירו בעדינות את ההחזקה של העור לשכבת השריר הבסיסית בקרבת האזור המעוקר תוך שימוש בתיאורי כותנה עקרים.</li>
	<li>לאחר מכן, בצע חתך רוחבי דרך שכבת הצפק בדיוק מתחת לתהליך xiphoid.</li>
	<li>בעזרת שני טיפים מלוחים להתשחת כותנה, לחשוף את האונה השמאלית של הכבד על ידי הפעלת לחץ עדין על החזה. מניחים קצה כותנה אחד על האזור הסרמטי של החלק המבוקר וקצה הכותנה השני מתחת לאזור המגורש כדי להרים את אונה הכבד.</li>
	<li>להחליק 8 – 10 ס מ לולאה לאורך חוט ניילון סטרילי (גודל 4 – 0, 0.15 מ"מ קוטר) סביב אונה הכבד חשוף. קח את הלולאה לבסיס של האונה קרוב hilum בעזרת מלקחיים מיקרובתר או ניצנים לחלח כותנה.</li>
	<li>בעזרת מחזיק המחט יקרוסקופיים מיקרו מלקחיים, לקשור את שני הקצוות של הלולאה, הצבת הקשר קרוב לבסיס של האונה ככל האפשר כדי לצמצם את כלי הדם ולהפחית את הדימום לאחר האונה הכבד מוסר. . קשור שני קשרים נוספים בצד השני</li>
	<li>נקוט זהירות לא לקשור את הקשר קרוב מדי לכלי הדם הסמוכים, אשר עלול אחרת לגרום חסימה בורידים (היצרות).</li>
	<li>השימוש מספריים יקרוסקופיים לחתוך את האונה הקשורה ממש מעל הקשר, אשר משאיר מסה דהוי של רקמה הנקרא גדם האיסכמי במקום האונה. הערה: כבד חולדה, כמו אלה של עכברים, מחולק לארבע אונות נפרדות: האונה החציוני, האונה הימנית לרוחב, שמאל האונה השמאלית, ואת האונה מזונבת, אשר מייצגים כ 40%, 20%, 30%, ו 7% ממסת הכבד הכולל, בהתאמה. כל שילוב של האונות האלה ניתן להסיר לבלו 70% הכבד מסה. במחקר הנוכחי, האונה החציוני ואת האונות הצדדיים השמאלית הוסרו.</li>
	<li>אתר בקפידה את האונה החציוני מבלי לפגוע בגדם הנותר של האונה הצדדית השמאלית. בעדינות למשוך את זה מתוך חלל הבטן, ובבסיס של עניבה האונה 8-10 ס מ החוט ניילון ארוך (גודל 4-0) הקשר כפי שהוזכר קודם לכן. . קשור שני קשרים נוספים בצד השני בסדר בזהירות ולהסיר את האונה החציוני קשור לקחת את כל אמצעי הזהירות שהוזכרו.</li>
	<li>לאחר הסרת האונות, תפר את הצפק באמצעות כרוממית 4-0 תפר עם תפרים מתמשך ואחריו העור בתפירה עם תפר קטוע.</li>
	<li>החל povidone יוד על העור המקיף את התפרים כדי למנוע זיהום.</li>
	<li>הסר את הסדין העטוף והוצא את בעל החיים מלוח הניתוח.</li>
</ol>4. טיפול פוסט-פעיל בבעלי חיים
<ol><li>Intraperitoneally להזריק את בעל החיים עם מנה של 12 mg cefo, 1 מ ל של 5% גלוקוז פתרון עם מזרק 1 mL כדי להגן עליו מפני הסיכון של זיהום לאחר הניתוח.</li>
	<li>ניהול הזרקה תת עורית של מלוקסיאם כאבים (1 מ"ג/ק"ג משקל הגוף) להקלה על הכאב לאחר הניתוח ולעקוב אחר זה על ידי שתי מינונים יותר, שמירה על משטר כמנה אחת ליום.</li>
	<li>הבית בעלי החיים המופעלים תחת תנאים סטנדרטיים של 12 h מחזור אור/כהה וניטור במרווחי זמן קבועים.</li>
</ol>5. הזרקת סם בעלי חיים בעלי מערכת חלקית כדי לגרום לכשל בכבד
<ol><li>לאחר 24 שעות הניתוח, כאשר בעלי החיים התאושש בהצלחה מ 70% PHx, למדוד את משקל הגוף של בעל החיים ואחריו הזריקות.</li>
	<li>הכנס 750 מ"ג/ק"ג משקל הגוף של APAP intraperitoneally בחיות hepatectomized תוייזציה באופן חלקי 24 שעות לאחר 70% PHx בעקבות בעלי החיים ' התאוששות מוצלחת מההליך כירורגי. חזור על המינון שוב לאחר 24 שעות. הערה: שתי מינונים של APAP מנוהלים intraperitoneally לבעל החיים (כלומר, 24 h ו 48 h לפרסם את ההליך 70% PHx, בהתאמה).</li>
	<li>בכל פעם לאחר ההזרקה של APAP, למדוד את משקל הגוף של החיה להתאושש. הערה: APAP (biocetamol) הוא מוזרק בעלי חיים כפתרון 150 mg/mL ב 2% אלכוהול בנזיל.</li>
</ol>6. השתלת הפציטים בריאות בדגמי אלף בעלי חיים
הערה: כדי ללמוד את הסבירות של אלף בחולדות, השתלת מלשין בריא לעכברושים בעלי חיים בתוך הבשר המושרה ביחד עםמנה אחת של apap. במחקר הנוכחי, כדי לספק זמן רב לתאים המושתלים עבור ביות ו העפילו, ההשתלה נעשתה רק לאחר לתת אתהמינון 1 של apap. החולדה הפטציטים מבודדת על ידי פרוטוקול שפורסם לראשונה על ידי ברי וחברים ואח '28 ומאוחר יותר הותאם במחקרים שונים29,30,31 עם כמה שינויים. עבור השתלת הטחול של תאים בדגם אלף בעלי חיים, בצע את השלבים שהוזכרו להלן.
<ol><li>מניחים את העכברוש לתוך תא פולי (מתיל מתיונין) עבור אינדוקציה של הרדמה עם 4% isof, ו 4 זרימת חמצן L/min עבור חולדה של 250 – 350 גרם משקל הגוף. בדוק את עומק ההרדמה על ידי חוסר רפלקסים פדלים כאשר צובט את הבוהן של החיה.</li>
	<li>הניחו את העכברוש הרדימים על הלוח הכירורגי, כך שהחלק השמאלי שלו פונה כלפי מעלה. שמרו על הרדמה בשעה 2-3% משאיפת האינהלציה באמצעות דובר מתאים.</li>
	<li>לגלח את העור על האזור לרוחב שמאל לעקר אותו על ידי הפתרון יוד povidone.</li>
	<li>לעשות חתך רוחבי על האזור מגולח של העור.</li>
	<li>בצע חתך של 1 – 2 ס מ בשכבת הצפק כדי לחשוף את הטחול.</li>
	<li>הסירו בעדינות את הטחול של חלל הצפק והרימו אותו בעזרת שתי עצות לגבי כותנה.</li>
	<li>שמור את התאים (בדרך כלל 107 לכל בעל חיים) להיות מושתלים מושעה 50 ΜL imdm מדיה במזרק 1 מ"ל אינסולין עם מחט של 29 G.</li>
	<li>בעדינות לנקב את המחט לתוך קליפת הטחול ולשחרר את ההשעיה התא לתוך הטחול בתוך 2 – 3 דקות.</li>
	<li>לאחר השתלת התא הושלמה, בזהירות להוציא את המחט ולחלק את האזור של ניקוב המחט עם קצה כותנה לחלח כדי למנוע דליפה של ההשעיה התא מהאתר.</li>
	<li>סגרו את הצפק והעור באמצעות תפר של 4-0 שנספג באופן רציף ובלתי פוסק בהתאמה.</li>
	<li>החל povidone פתרון יוד על העור במקום התפרים כדי למנוע זיהום באתר המופעל.</li>
	<li>Intraperitoneally להזריק 1 מ"ל נפח של 12 מ"ג/mL של אנטיביוטיקה (למשל, cefoסעה) פתרון ותת-עורי להזריק כאבים (g., מלוקסיעם) 1 מ"ג/ק"ג משקל הגוף לחיה כחלק טיפול פוסט-פעיל. הזיזו את החיה לכלוב חם ומתאושש.</li>
	<li>לשמור על החיה המופעלת בבידוד בתנאים נורמליים של 12 h מחזור אור/כהה עד הפצעים המנתחים החלימו לחלוטין. הדבר עשוי להימשך שלושה – ארבעה ימים.</li>
</ol>7. אפיון ההתפתחות של אלף
<ol><li>המתת חסד בעלי חיים על ידי מנת יתר של פתרון קטמין-xylazine 2 h לאחרהמינון 2 של apap טיפול ולאסוף דגימות דם ורקמות.</li>
	<li>איסוף סרום מדם למחקרים ביוכימיים32.</li>
	<li>עיבוד דוגמיות של רקמת הכבד עבור לימודי היסטולוגית וגנים ביטויים33,34,35.</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

התפתחותו של דגם בעלי חיים מתאים לאלף היא החשובה ביותר להבנת הפתוגנזה וההתקדמות של אלף. מודל מאופיין היטב של אלף בעלי חיים גם מספק את ההזדמנות לפיתוח ולניסוי של גישות טיפוליות חדשות נגד אלף. ניסיונות רבים נעשו לפתח מודל רלוונטי קלינית של אלף6,12,21,23,46,47,48. רוב מחקרים אלה או לנצל הליכים כ...

אי ספיקת כבד חריפה (אלף) מוגדר על ידי האגודה האמריקנית לחקר מחלות כבד כהתפתחות מהירה של פגיעה בכבד חריפה ללא סימנים קודמים של נזק מאופיין ליקוי חמור של סינתטי, מטבולית, ו הרעלים פונקציות של הכבד1. אלף שונה מכשל כבד כרוני שבו הכישלון מתרחש כתוצאה של פגיעה בכבד הנגרמת על פני תקופה ארוכה של זמן מ ספיקת כבד כרונית חריפה (aclf), שבו נזק לכבד פתאומי מתרחש כתוצאה של מחלות כבד כרונית2,3,4. התרופה הזמינה היחידה עבור אלף היא השתלת כבד אורתוטופית (OLT), או מוות עלול להתרחש. בשל המחסור של תורמי הכבד, שיעור התמותה בחולים הסובלים מאלף הוא גבוה מאוד.
כדי ללמוד את הפוטנציאל של גישות טיפוליות חלופיות ולהבין טוב יותר את הפתופסיולוגיה של אלף, מודלים בעלי חיים שיכולים לשקף את אלף המתרחשים בבני האדם הם זקוקים. רבים מדגמי החיות הזמינים שכבר הינם בעלי מספר חסרונות. ההשפעות של פרצטמול (APAP) קשות להתרבות, אך יש להן את הדמיון הקרוב ביותר במונחים של הערכים הטמפורלית, הקליניים, הביוכימיים והפתולוגיים. Apap מודלים בעלי חיים המושרה לעתים קרובות בעיות בשל נוכחותם של טהמוגלובינמיה נגרמת על ידי חמצון של המוגלובין על ידי apap ו intermediates שלה5,6,7. בעיה נוספת היא חוסר ביכולת התגובה המשתקף על ידי תגובות מינון בלתי צפויות ואת זמן המוות. אלף מודלים בעלי חיים המיוצרים באמצעות פחמן טטרהכלוריד(ccl4) יש שיקול העוני המסכן8,9,10,11. קונקבלנה (קון a) וליפוסכריד (lps)-המושרה אלף בעלי חיים מודלים לא משקפים את הדפוס הקליני של המחלה האנושית, למרות שיש להם יתרונות במחקר של מנגנונים סלולריים המעורבים מחלות בכבד אוטואימוניות במחקר של אלח דם בהתאמה12,13,14,15. באופן דומה, thioacetamide (TAA) גם דורש ביוטרנספורמציה כדי מטבוליזם פעיל thioacetamide סולפוקסיד ומראה וריאציה מינים16,17,18,19. ד-גלטוסמיטין (d-Gal) מייצרת מספר שינויים ביוכימיים, מטבוליים ופיסיולוגיים הדומים לאלף, אך אינו מסוגל לשקף את כל המצב הפתולוגי של אלף20,21,22,23. היו מעט מאוד נסיונות לשלב שתיים או יותר מהשיטות האלה כדי לפתח דגם אלף שמסוגל לשקף את תסמונת אלף בצורה טובה יותר13. לכן, מחקרים נוספים נדרשים לפתח מודל שיכול לשקף את הפרמטרים של המחלה, יש התפתחות טובה יותר, ומספק מספיק זמן כדי ללמוד את ההשפעות של התערבות טיפולית.
במחקר הנוכחי, המודל האלטרנטיבי של אלף בחולדות נוצר על ידי שילוב ההשפעות של כריתת hepatectomy (PHx) ומינונים נמוכים יותר של מגיב hepatoרעילים. Apap יש תפקיד מבוסס היטב גרימת פציעה בכבד5,24,25. זהו כאבים בשימוש נרחב הוא רעיל לכבד במינון supratherapeutic על ידי יצירת מטבוליטים רעילים. APAP הוא הגורם למותם של רבים במדינות מפותחות. פגיעה גופנית נגרמת על ידי כריתת hepatectomy יוזם הפעלה של תהליכים שונים המעורבים דלקת, כמו גם התחדשות הכבד. הזרקה של הסוכן hepatotoxic APAP גורם לסביבה עוינת בכבד, מניעת התפשטות של hepatציטים. זה מפחית את תקופת הלחץ על בעל החיים, אשר כאשר בשילוב עם מינונים קטנים יותר של hepatotoxin, מוביל לשגות טוב יותר של ההליך. לכן, באמצעות מודל זה, השפעה שוללת של שני סוגים של פציעות בכבד נחקרו. כדי לאפיין את דגם אלף החי המפותח, הפרמטרים הפיזיולוגיים והביוכימיים נחקרו. ההיבישה המוצלחת של אלף אושרה על ידי השתלת החולדה בריאה syngeneic.

<table><tbody><tr><td>פרצטמול (ביוצטמול)</td><td>EG Pharmaceuticals</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>ערכת פוספטאז אלקליין (DEA)</td><td>מערכת קלינית אלמוגים, הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>מנתח אוטומטי</td><td>טוליפ, אלטו סנטרקרוז, הודו</td><td>מנתח ביוכימי Screen Maaster 3000</td><td>לבדיקת תפקודי כבד</td></tr><tr><td>בטדין ( תמיסת פובידון-יוד)</td><td>Win-Medicare; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>ארון בטיחות ביולוגי (Class I)</td><td>קרטוס בינלאומי; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שדה בהיר</td><td>אולימפוס, יפן</td><td>LX51</td><td></td></tr><tr><td>Cefotaxime (טקסים&reg;)</td><td>אלקם; הזרקת</td><td>נתרן cefotaxime בהודו, ללא מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td>מסננת תאים סיגמא;<td></td></tr><tr><td></td><td> ארה"ב</td><td>CLS431752</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז סוג I</td><td>Gibco מאת Life Technologies</td><td>17100-017</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Buds</td><td>Pure Swabs Pvt Ltd; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>גיליון וילונות</td><td>JSD כירורגיות, דלהי, הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>DPX Mountant</td><td>Sigma; US</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת Eosin Y,</td><td>סיגמא אלכוהולית; HT110132 ארה"ב</td><td></td> מלקחיים ניתוחים גדולים;<td></td></tr><tr><td></td><td> הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>מערכת הרדמת גז</td><td>Ugo Basile; איטליה</td><td>211000</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>היימדיה, הודו</td><td>GRM077</td><td></td></tr><tr><td>קרם להסרת שיער (Veet&reg;)</td><td>רקיט בנקיזר, הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>תמיסת המטוקסילין,</td><td>הסיגמא של מאייר; ארה"ב</td><td>MHS16</td><td></td></tr><tr><td>מלח נתרן הפרין</td><td>Himedia; הודו</td><td>RM554</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase מאשכי כבשים</td><td>סיגמא; ארה"ב</td><td>H6254</td><td></td></tr><tr><td>I.V. צינורית (Plusflon)</td><td>Mediplus, הודו</td><td>Ref 1732411420</td><td></td></tr><tr><td>מזרקי אינסולין</td><td>BD; ארה"</td><td>ב REF 303060</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן (פוראן&reg;)</td><td>Asecia Queenborough</td><td>No B506</td><td>קטמין הרדמה באינהלציה</td></tr><tr><td>(Ketamax&reg;)</td><td>טרויקה פרמצבטיקה בע"מ</td><td></td><td>קטמין הידרוכלוריד IP, ללא מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr> <tr><td>מלוקסיקם (Melonex&reg;)</td><td>אינטס פרמצבטיקה בע"מ; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr> <tr><td>מחזיקי מחטים מיקרו ישר & מרסיאן מעוקל</td><td>; אנגליה</td><td>BS-13-8</td><td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחט מיקרו ישר & מרסיאן מעוקל</td><td>; אנגליה</td><td>BS-13-8</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Histo-Line Laboratories, איטליה</td><td>MRS3500</td><td></td></tr><tr><td>חוט ניילון</td><td>Mighty; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>הימדיה; הודו</td><td>GRM 3660</td><td></td></tr><tr><td>Percoll&reg;</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Refresh Tears/Eyemist Gel</td><td>Allergan India Private Limited/Sun Pharma, India</td><td>P3060</td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Himedia; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>אזמל</td><td>כירורגיה גדולה; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>ניתוחים גדולים; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr> <tr><td>ערכת SGOT (ASAT)</td><td>מערכת קלינית אלמוגים, הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr> <tr><td>ערכת SGPT (ALAT)</td><td>מערכת קלינית אלמוגים, הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>Shandon Cryotome E Cryostat</td><td>Thermo Electron Corporation; ארה"ב</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי</td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא; ארה"ב</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>להב כירורגי מס' 22</td><td>La Medcare, הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr> <tr><td>מועצה כירורגית</td><td>מתוצרת</td><td></td> מקומית <td>ללא מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr> <tr><td>סרט לבן כירורגי</td><td>3M הודו; הודו</td><td>1530-1</td><td>סרט כירורגי מיקרופור</td></tr><tr><td>תופר</td> את <td>Ethicon, Johnson & ג'ונסון, הודו</td><td>NW 5047</td><td></td></tr><tr><td>מזרקים (1 מ"ל, 26 גרם)</td><td>דיספו ואן; הודו</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>גוזם (קליפר)</td>מכונת שקילה <td>של פיליפס</td><td>NL9206AD-4 DRACHTEN QT9005</td><td></td></tr><tr><td></td><td>בראון</td><td></td><td>אין מספר קטלוגי ספציפי (רכש מקומי)</td></tr><tr><td>William's E Media</td><td>Himedia; הודו</td><td>AT125</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין (Xylaxin&reg;)</td><td>Indian Immunologicals Limited</td><td></td><td>תרופות הרגעה, טרום הרדמה, משככי כאבים ומרפי שרירים</td></tr></tbody></table>

הדור של מודל עכברוש של אי ספיקת כבד חריפה על ידי שילוב 70% כריתת הריאה חלקית ופרצטמול

Generation of a Rat Model of Acute Liver Failure by Combining 70% Partial Hepatectomy and Acetaminophen

אי ספיקת כבד חריפה (אלף) היא מחלה קלינית הנגרמת על ידי חבלות שונות וכתוצאה מכך אובדן מטבולית, ביוכימית, סינתזה, ו הרעלים פונקציות של הכבד. במקרים של נזק בלתי הפיך ביותר בכבד, השתלת כבד אורתוטרופי (OLT) נשאר הטיפול היחיד הזמין. כדי ללמוד את הפוטנציאל התרפויטי של טיפול באלף, הבדיקה המוקדמת במודל החי של אלף היא חיונית. במחקר הנוכחי, מודל אלף בחולדות פותחה על ידי שילוב 70% כריתת hepatectomy חלקית (PHx) וזריקות של פרצטמול (APAP) המספק חלון טיפולי של 48 h. חציון ואת האונות לרוחב השמאלי של הכבד הוסרו לבלו 70% ממסת הכבד APAP ניתנה 24 שעות בניתוח עבור 2 ימים. הישרדות בבעלי חיים באלף המושרה נמצאה בירידה חמורה. ההתפתחות של אלף אושרה על ידי שינוי רמות הסרום של האנזימים אלטין העברת אמינו (ALT), אספרטט העברת אמינו (AST), פוספטאז אלקליין (ALP); שינויים בזמן הפרותרומבין (PT); והערכה של היחס המנורמל הבינלאומי (INR). המחקר של הפרופיל ביטוי הגן על ידי qPCR חשף עלייה ברמות הביטוי של גנים המעורבים אפופטוזיס, דלקת, ובהתקדמות של פציעה בכבד. התנוונות מניוון של hepatocytes וחדירה של תאים חיסוניים נצפתה על ידי הערכה היסטולוגית. הסבירות של אלף אושרה על ידי שיקום של רמות ההישרדות והסרום של ALT, AST, ו-ALP לאחר השתלת הטחול של החולדה בריאה syngeneic. מודל זה מציג חלופה אמינה למודלים הזמינים בעלי חיים כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של אלף, כמו גם להעריך את הפוטנציאל של טיפול הרומן של אלף. השימוש בשתי גישות שונות מאפשר גם לבחון את ההשפעה המשולבת של פגיעה בכבד ובתרופות הנובעות מסמים. השגות והכדאיות של ההליך הנוכחי הוא יתרון נוסף של המודל.

אחוז ההישרדות במודלים של בעלי חיים של אלף המינון האופטימלי של APAP לגרום אלף בשילוב עם 70% PHx היה מתוקננת כמו 750 מ"ג/ק"ג משקל הגוף. משטר הטיפול החל 24 שעות לאחר 70% PHx, כאשר בעלי החיים התאושש לחלוטין מהניתוח, וכללה שתי מנות APAP במרווחי זמן 24 h. התמותה נצפתה בשיעור של 80% לאחר הממשל של המינון השני של APAP, 48 h לאחר הניתוח. אחוז ההישרדות נותח והותווה דרך שיטת קפלן-מאייר (איור 1). השגות בזמן המוות ותקופת הזמן המסופקים על ידי מודל זה הופכת אותו למועמד מתאים לחקר התערבות...

ספיקת כבד חריפה מודל בעלי חיים שפותחה במחקר הנוכחי מציג חלופה אפשרית למחקר של טיפולים פוטנציאליים. המודל הנוכחי מעסיק את ההשפעה המשולבת של פציעה פיזית ומושרה בתרופות בכבד ומספק חלון זמן מתאים כדי ללמוד את הפוטנציאל של טיפולים חדשניים.

Acute liver failure (ALF) is a clinical condition caused by various etiologies resulting in the loss of metabolic, biochemical, synthesizing, and ...

אי ספיקת כבד חריפה או ALF מוגדר בדרך כלל התפתחות מהירה של פגיעה בכבד בכבד בריא מלווה פגיעה חמורה של הפונקציות העיקריות שלה. השתלת כבד אורתוטופית היא התרופה הזמינה היחידה ברוב המקרים. אבל בשל מחסור של תורמי כבד, שיעור התמותה של חולי ALF הוא גבוה מאוד.כדי לחקור את הפוטנציאל של גישות טיפוליות חלופיות ולהבין טוב יותר את הפתופיזיולוגיה של ALF, מודלים של בעלי חיים של המחלה מועסקים. רבים מדגמי ALF מבוססים על ההשפעות hepatotoxic של פרצטמול, פחמן tetrachloride, קונקאנבלין A, lipopolysaccharide, D-גלקטוזאמין ו thioacetamide. עם זאת, אלה יש כמה חסרונות כגון רבייה ירודה והפיכות, רעילות לאיברים חיוניים אחרים, השתקפות לקויה של פתולוגיה של מחלות אנושיות וריאציה מינים.לפיכך, יש צורך במערכת מודל טובה יותר כי הוא לשכפל ומאפשר מרווח זמן מספיק כדי ללמוד את ההשפעות של התערבות טיפולית. במחקר הנוכחי, מודל ALF בחולדות נוצר על ידי שילוב השפעות של כריתת hepatectomy חלקית ו פרצטמול hepatotoxicity. האונה האולטראלית החציונית והשמאלית של הכבד מוסרים כדי לסמל 70% מסת כבד, ויותר מכך, פרצטמול ניתן כדי לגרום ALF.הפיתוח של ALF במודל התאפיין בניתוח ביוכימי והיסטולוגי והיהפיכה של נזק לכבד אושרה על ידי השתלת hepatocytes חולדה בריאה סינגנית. חולדות Wistar בעל משקל גוף בטווח של 180 עד 250 גרם שימשו במחקר הנוכחי. השלבים הבאים מתארים את ההליך הכירורגי לגיוס של ALF בחולדה.החיה היא הרדמה על ידי הזרקת תערובת קטמין-Xylazine תוך-אפית. הרדמה מלאה מאושרת על ידי צביטת בוהן החיה, ונהלים נוספים מתבצעים רק כאשר אין רפלקס דוושה. כדי למנוע התפלת קרנית, טיפת עיניים מבוססת מתיל-תאית carboxy מוחלת על שתי העיניים.החיה מרוסנת ללוח הניתוחים באמצעות סרט לבן. השיער מוסר מהאזור הכירורגי של הבטן הימנית העליונה באמצעות קוצץ חשמלי. לחטא את האתר הכירורגי על ידי שלושה קרצוף לסירוגין של 70% אתנול ו povidone יוד באמצעות רפידות כותנה מעקרות בתנועה מעגלית.העור שיש לחתוך מסומן ממש מתחת לעצם החזה בניצב לשיפויד ומקביל לצלעות. גיליון וילון סטרילי בעל פתח של כשלושה סנטימטרים על סנטימטר אחד ממוקם מעל העור המסומן. חתך רוחבי של כשני עד שלושה סנטימטרים נעשה לאורך הקו המסומן בעזרת אזמל.ההחזקה של העור עם שכבת השריר הבסיסית בקרבת האזור חתוך מוסר בעדינות על ידי קצות כותנה לחים סטריליים. לאחר מכן, חתך רוחבי נעשה באמצעות שכבה צפי ממש מתחת לתהליך xiphoid. האונה השמאלית של הכבד נחשפת על ידי מתן לחץ עדין לבית החזה בעזרת שני קצות כותנה לחים מלוחים.לולאת חוט ניילון סטרילית מחליקה סביב אונה הכבד החשופה. הלולאה נלקחת בזהירות לבסיס האונה בעזרת מטלות ניתוח מיקרו או ניצני כותנה. בעזרת מחזיק מחט מיקרוכירורגיה ומטסות מיקרו, שני הקצוות של הלולאה קשורים, הצבת הקשר קרוב ככל האפשר לבסיס האונה.זה כדי לצמצם את כלי הדם ולהפחית את הדימום לאחר האונה הכבד מוסר. שני קשרים נוספים קשורים בצד השני. האונה הקשורה נחתכת ממש מעל הקשר באמצעות מספריים מיקרו-כירורגיים שמשאירים גדם איסכמי.באופן דומה, האונה החציונית של הכבד מורמת באמצעות קצות כותנה. לזהות את הצורה הייחודית של האונה החציונית של הכבד. מניחים לולאת חוט ניילון מעל האונה, לקשור בחוזקה את הקצוות שלה.שני קשרים נוספים קשורים בצד השני וחותלים את האונה. לאחר הסרת האונות, הלידונום נתפר באמצעות תפר כרום קטגוט 4/0 נספג עם תפרים רציפים ואחריו תפר עור עם תפר פשוט מופרע. לאחר סגירת העור, פתרון יוד povidone מוחל סביב האתר הכירורגי.יריעת הווילון מוסרת והבעל חיים נלקח ממועצת הניתוחים. מנה אנטיביוטית של 12 מיליגרם cefotaxime ב מיליליטר אחד של 5% פתרון גלוקוז ניתנת תוך ניתוחית לחיה כדי להגן עליו מפני הסיכון של זיהום לאחר הניתוח. להקלה על הכאב לאחר הניתוח, meloxicam משכך כאבים, בדרך כלל 1 מ"ג לכל קילוגרם משקל הגוף ניתנת תת עורית לחיה, ואחריו מנה כל יום במשך יומיים.החיה מועברת לכלוב התאוששות חם. החיה נעשית בהכרה תוך 30 עד 40 דקות ומתחיל לזוז. החיה המופעלת מוחזקת בבידוד עד לריפוי מלא של פצעים כירורגיים, דבר שעשוי להימשך שלושה עד ארבעה ימים.עבור גרימת ALF, 750 מיליגרם לק"ג משקל גוף של פרצטמול ואת המנה השנייה של meloxicam מוזרק תוך אפית 24 שעות לאחר הליך כריתת שומן חלקית. משטר מינון זה חוזר על עצמו לאחר 24 שעות. לאחר אינדוקציה של ALF, ההישרדות בבעלי חיים נמצאה ירידה חמורה.כדי לאפיין את התפתחות ALF, בעלי חיים המופעלים היו המתת לחץ ים לאחר מנה שנייה של פרצטמול, מחקרים ביוכימיים והיסטולוגיים שונים נעשו. התוצאות מתוארות קדימה בסרטון. אחוז ההישרדות בקבוצה המושרה ALF נמצאה ירידה חמורה עד 80% תמותה נצפתה בתוך 24 שעות של מנה שנייה של פרצטמול.נזק לכבד ניכר ברמה המורפולוגית בקבוצה הנגרמת על ידי ALF ורק 70% קבוצת כריתת כבד חלקית. בעוד קבוצת הביקורת ורק קבוצת טיפול פרצטמול היה מראה בריא. רמות האנזים של אלנין אמינו transferase, אספרטט אמינו transferase ו phosphatase אלקליין נמצאו גבוהות מאוד בקבוצה המושרה ALF בהשוואה לקבוצות אחרות.ניתוח של פרופיל ביטוי גנים על ידי qPCR הראה ביטוי גבוה של גנים המעורבים אפופטוזיס, דלקת והתקדמות של פגיעה בכבד. המטוקסילין וכתמי אאוסין של חלקי רקמת הכבד חשפו בעיקר hepatocytes נורמלי בקבוצת הביקורת. בקבוצת ALF, בעיקר ניוון שומן כלי רכב מאקרו מתון נצפתה.זמן פרותרומבין ויחס מנורמל בינלאומי נמצאו מוגבהים בקבוצה המושרה ALF, המציין תהליך קרישת דם מעוכב. אחוז ההישרדות נמצאה משוחזרת בקבוצה המושרה ALF לאחר השתלת hepatocytes חולדה בריאה סינגנית. רמות סרום של אנזימים אלנין אמינו transferase, אספרטט אמינו transferase ו phosphatase אלקליין נמצאו משוחזרים בבעלי חיים המושרה ALF לאחר השתלת תאים.שיטה זו של גרימת ALF בחולדות היא לשחזור, מראה היפוך טוב ומספק חלון זמן מתאים כדי לבדוק טיפולים חדשים. לפיכך, מודל זה יכול לשמש מודל מחלה יעיל להערכת גישות טיפוליות פוטנציאליות לטיפול ALF.

generation-rat-model-acute-liver-failure-combining-70-partial

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השתלת הכבד orthotopic בחולדות היא מודל ניסיון הכרחי למחקר ביו. כאן אנו מציגים הניתוחים שלנו להשתלת כבד חולדת orthotopic עם שחזור עורק כבד באמצעות 50% שתל חלקי.

ניתוחים למודל חולדה של השתלה כבדה orthotopic חלקית עם שחזור עורקית כבדיה

השתלה כבד עזר מספקת תמיכה זמנית בכשל כבד אקוטי, עד התחדשות של הכבד הכושל. השתלת heterotopic עזר הכבד (אלט) עם arterialization וריד שער (PVA) הופכת את תפקוד כבד מספיק. פיתחנו טכניקה דומה בעכברים, כדי לבחון את ההשפעה של arterialization וריד שער על המורפולוגיה והתפקוד של השתל.

Heterotopic עזר עכברוש כבד השתלה עם זרימה מוסדר פורטל וריד Arterialization בכישלון חריף כבדית

אנו מתארים שיטה ליצירת מודל חייתי של פיברוזיס בכבד בחולדה, ומעריכים את מידת הפיברוזיס על ידי בדיקה היסטולוגית של הכבד. המודל יכול לשמש לחקר התפתחות מחלות כבד וכן לבדיקת יעילותם של חומרים אנטי-פיברוטיים פוטנציאליים.

מודל הפיברוזיס Dimethylnitrosamine מושרה בחולדה

מודל מהדק hilar כבד עכברוש ייחודי שפותח עבור הבוחנים את שפעת מולקולות תרופתיות לטיוב פגיע reperfusion-איסכמיה. מודל זה כולל cannulation ישיר של אספקת הפורטל למגזר הכבד איסכמי באמצעות סניף של וריד השער, המאפשר למסירה כבדה ישירה.

שיטה של ​​המגזרים הישירים Intra-כבדית משלוח באמצעות מודל קלאמפ עכברוש הכבד hilar

גרימת היפרטרופיה הכבד מהירה באמצעות שיוך מחיצה הכבד, וריד שער הכבד מצדו hepatectomy בשלבים (ALPPS) הוצע עבור כריתה של גידולים בכבד resectable גבוליים. מודל זה עשוי להבהיר המנגנונים המעורבים היפרטרופיה מהיר ומאפשר בדיקות סמים לקדם או לחסום את ההאצה של התחדשות.

עכברוש מודל של שיוך מחיצה בכבד, וריד שער הכבד מצדו לניתוח בשלבים Hepatectomy (ALPPS)

כאן אנו מתארים שיטה נפוצה כדי לגרום נזק כבד כרונית בעכברים על ידי האכלה של תזונה לקויה כולין, בתוספת ethionine (CDE). נדגים לניטור תקינות זלוף בכבד, בידוד, שימור. קורס זמן של 6 שבועות ניתן להודיע על פגיעה בכבד, pathohistology, פיברוזיס, דלקתיות, ותגובות תא קדמון בכבד.

מאתר כולין לקויה, בתוספת Ethionine (CDE) דיאטה מודל של פגיעה כרונית בכבד

כאן, מוצג פרוטוקול מעורבים השתלת כבד חלקית עכברוש arterialized מחדש. באופן ספציפי, 70% הכבד היה resected ויוו באמצעות טכניקת מעודכן של hepatectomy מונחה כלי השיט. עורק הכבד שוחזר בצורה הקצה לצד. הטכניקה השרוול שונה כדי לקצר את זמן השקה של infrahepatic את הווריד הנבוב.

מחדש Arterialized השתלת הכבד חלקית עכברוש עם ויוו מונחה כלי 70% Hepatectomy

כאן, אנו מציגים שיטה חדשה עבור כריתה חלקית של האונה השמאלית הכבד בעכברים neonatal (יום 0). פרוטוקול חדש זה מתאים ללמוד פציעת כבד חריפה ותגובה פציעה בהגדרת neonatal.

Hepatectomy Lobular חלקית: מודל ניתוח עבור התחדשות הכבד מורפולוגיות

פרוטוקול זה מתאר שיטה נפוצה ומקובלת לגרימת פגיעה בכבד חריפה (ALI) באמצעות החשיפה של CCl4 דרך צינור הקיבה. החשיפה CCl4 גורמת ALI דרך היווצרות של מינים חמצן תגובתי במהלך ביומרה בכבד. שיטה זו משמשת כדי לנתח את הפתופסולוגיה של עלי ולבחון אסטרטגיות hepatop, שונים.

גרימת פגיעה חמורה בכבד חולדות באמצעות פחמן טטרכללוריד (CCl4) חשיפה באמצעות צינורית אורוקיבה

מודל העכבר של כריתת כבד חלקית 2/3 (66%) מתואר היטב בספרות, אך לעתים רחוקות נעשה שימוש בכריתת כבד ממושכת יותר המחקה תסמונת קטנה לגודל לאחר השתלת כבד. אנו מתארים הליך מורחב של 78% כריתת כבד במודל עכבר שמביא לכ-50% קטלניות לאחר הניתוח בעכברים בריאים.

כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר

למד ליצור מודל עכברוש לאי ספיקת כבד חריפה באמצעות שילוב של כריתת כבד חלקית ופרצטמול. מודל זה מאפשר הערכת טיפולים חדשניים ומחקה טוב יותר את פתולוגיית המחלה האנושית.

הדור של מודל עכברוש של אי ספיקת כבד חריפה על ידי שילוב 70% כריתת הריאה חלקית ופרצטמול

גלה סרטונים נוספים