Name: משלוח פנימי של אנטי-סנס וליגונו, במערכת העצבים המרכזית של חולדה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: למד שיטה לשילוח אוליגונוקלאוטידים אנטי-סנס ישירות למערכת העצבים המרכזית של חולדה דרך החלל התוך-שדרתי. פרוטוקול בטוח ויעיל ללא ציוד יקר לחקר פרמקוקינטיקה ופרמקודינמיקה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנחנו רוצים להודות Ionis פרמצבטיקה על אספקת אסוס המתואר במאמר.

כל בהליכים vivo בוצעו תחת השימוש המוסדי Biogen בעלי חיים והוועדה טיפול (IACUC) מאושר פרוטוקולים אשר לעקוב אחר ההנחיות שנקבעו על ידי ארצות הברית הלאומי המכון לבריאות מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה.
1. הכנת חומרים וכלים
<ol><li>הכינו את הצינורית המיוחדת למדריך.<ol>
<li>השתמש בכלי רוטרי עם גלגל חתוך (או מסור חד) כדי לחתוך את שני הקצוות של המחט G 19, וכתוצאה מכך באמצעות צינורית מדריך ארוך של ~ 1.5-2 ס מ (איור 1aiii). להשתמש בגלגל לטחינת של הכלי רוטרי להחליק את שני הקצוות. הערה: ניתן לרכוש באמצעות ספק מסחרי ובאמצעות צינורית מדריך מוכן וסטרילי (רשימת חומרים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכינו את הקטטר/הרכבת תיל.<ol>
<li>גזור פיסת 8 ס"מ ארוך של צינורות PE-10 (פוליאתילן אבובים, קוטר 0.011 אינץ ') כדי לשמש צנתר התוך הפנימי. לעשות סימן 2 ס מ מקצה אחד עם עט הסמן עמידים בפני אתנול. לחתוך כבל מצופה באורך 11 ס מ מחוטי נירוסטה. הכנס את התיל stylet (איור 1הכל) לתוך לומן של הצנתר PE-10 (איור 1Ai). הערה: מערכת קטטר/תיל אחת (איור 1באב) נדרשת עבור כל חיה. לחילופין, קטטרים ומוצרי קטלייט ניתנים לרכישה מספק מסחרי (טבלת חומרים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>להכין צנתר משלוח הרכבה.<ol>
<li>חותכים פיסת קטטר PE-50 (5-10 ס מ, אבובים פוליאתילן, קוטר 0.023 אינץ ') (איור 1Bi). לקצה אחד של הקטטר PE50 להוסיף 23 G אבובים מתאם (איור 1באלה). קצה זה יהיה מחובר למזרק 100 μL (טבלת חומרים) במהלך הניתוח. הוספת המחט שונה 30 G עם הרכזת לחתוך (איור 1biii) לתוך כ 0.5 ס מ בחתיכה של הצינורות Pe-10 (איור 1biii) ולחבר את הצינורות pe-10 לקצה השני של הצנתר.</li>
		<li>The 30 המחט הקצה של הרכבה קטטר המסירה (איור 1Bv) יהיה מחובר לקצה המרוחק של הצנתר המושתל PE-10 בחולדה במהלך הניתוח. הערה: לחלופין, ניתן לרכוש את הרכבת קטטר המסירה (איור 1Bv) מספק מסחרי (טבלת חומרים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכינו את מכלול המחט המנחה (איור 1אבי) על-ידי הצבת צינורית מדריך (איור 1aiii) בסוף מחט של 23 גר'.</li>
	<li>לחטא את כל כלי הניתוח כולל צינורית המדריך ואת ערכות התיל/קטטר באמצעות מעקר תחמוצת אתילן עבור 12 h. הערה: כל כלי הניתוח מלבד הקטטר יכול להיות אוטומטית; קטטר ימס בטמפרטורה גבוהה.</li>
</ol>2. הכנת כירורגיה
הערה: הליך זה מבוצע באופן שגרתי על גברים ועכברים מג הנשי משחק עם משקולות הגוף בין 200 g ו 400 g. שני חולדות ממוקמים לכלוב תחת 12 h מחזור אור/כהה עם גישה חופשית למזון ולמים.
<ol><li>משקל חולדה ומניחים אותו בחדר isofלבנה כדי לגרום להרדמה (1-5% isofלוריאן ב O2, טיטרציה כדי להשפיע). הערה: העכברוש מורדם ברציפות עם isof, כדי לשמור על הרדמה עמוקה באמצעות חרוט אף לאורך כל ההליך. שיטת הרדמה חלופית (למשל, ניהול של קטמין 100 mg/ק"ג ו xylazine 10 מ"ג/ק"ג) ניתן להשתמש כפי שאושרו על ידי IACUC.</li>
	<li>כאשר החולדה נכשלת להגיב לצביטה בבוהן, לגלח את גבו מן הזנב אל השדרה החזה של caudal ולמקם את העכברוש מגולח על סדין סטרילי הניח על גבי כרית חימום.</li>
	<li>מיקום שפופרת צנטריפוגה חרוטי 50 ml מתחת לבטן החולדה כדי לכופף את עמוד השדרה באזור המותניים (איור 2א) ולהחיל משחה אופטלמולוגית על העיניים.</li>
	<li>הכנס בופרינורפין שחרור מתמשך (1.0 מ"ג/ק"ג; רשימת חומרים) . תת-עורי בחולדה לנקות את העור חשוף עם povidone לסירוגין וחלוק אלכוהול ולחזור על זה שלוש פעמים. הערה: ניתן להשתמש בשיכוך כאבים חלופיים כמאושרים על-ידי פרוטוקול IACUC.</li>
	<li>לעטוף את החיה עם העטוף שקוף סטרילי כי כבר מדורגים על האתר כירורגי.</li>
</ol>3. כירורגיה
<ol><li>עם עכברוש נתמך על ידי צינור 50 mL, לזהות את שני בורות טבעיות בין השרירים מעל האגן (חיצים באיור 2א). עם יד אחת מחזיק את הבורות האלה, להשתמש ביד השנייה כדי ללחוץ בעדינות ולהרגיש את עמוד השדרה של caudal לכיוון rostral ולמצוא את הכניסה הגדולה הראשונה בין החוליות וזה החלל הבין החוליות בין S1 ו L6 חוליות (איור 2B ).</li>
	<li>העבר מעט rostrally כדי לזהות את ההזחה הבאה, את המרחב הבין החוליות בין L5 ו L6 חוליות ואת אתר ההזרקה (* באיור 2א). השתמש אזמל לעשות חתך לא יותר 2 ס"מ ארוך בעור לאורך קו האמצע מ rostral כדי caudal כך באתר ההזרקה היא במרכז החתך (קומנוקד באיור 2א).</li>
	<li>השתמשו במספריים לחיתוך כדי לנתח את רקמת החיבור כדי להמחיש את שכבת השריר. ואז לעשות חתך 1 ס מ בקפסולה שריר מיד לרוחב לתהליך השדרה הצדדית של חוליית המותניים L6. הערה: העצמות של חוליית המותניים של L6 יכולות להיות מדמיינו בשלב זה.</li>
	<li>מקמו את מכלול המחט של המדריך בסמוך להיבט הקדמי של חוליית המותניים השישית ודחפו אותו לתוך החלל הבין-חולייתי לאורך ההיבט הקדמי של החוליה השישית, כך שסוף המחט חודר לתעלת השדרה. לחצו על צינורית המדריך במקום לאורך המחט והסירו את המחט של 23 גר' שעוזבת רק את צינורית ההנחיה במקומה. הערה: מומלץ להשתמש בלקחיים בוטים כדי לאתר את התהליך הL6 של חוליית המותניים לפני החדרת המחט. באופן כללי, נוזל שדרתי הנוזלים ניתן לראות כניסה לרכזת מחט (נוזל זה עשוי להיות מעובד עם רמז של דם, אבל זה לא מעיד כי הנזק נעשה או כי המחט אינה ממוקמת כראוי). המחברים לא ראו כמות גדולה של דם או דימום חמור במהלך הליך זה. אם זה קורה, יש ליצור קשר עם וטרינר כדי לקבוע את הטיפול המתאים, ואם יש לקבל בעלי חיים מורדמים.</li>
	<li>הכנס את הרכבת הקטטר. לתוך צינורית המדריך זווית למטה צנתר-תיל הרכבה בקירוב זווית 45 ° לתעלת השדרה ולאלץ את הסוף כ 0.3 ס מ לתוך תעלת השדרה.</li>
	<li>הסירו את צינורית המדריך, והשאירו את הקטטר במקום. הסר את התיל stylet כ 2.5 ס מ מהקצה הפנימי של הצנתר ולקדם את הקטטר לתוך תעלת השדרה עד 2 ס"מ סימן הוא בכניסה של התעלה (רק גלוי מתחת לשריר) כפי שמוצג באיור 1bvi. הערה: הקטטר שהוכנס צריך להאריך rostrally לתוך מרחב התת-מזהה. מיקום מוצלח צריך לאפשר תנועה חופשית של הצנתר בחלל זה.</li>
	<li>משיכת לחלוטין את חוט התיל, ו שדרתי נראה להיכנס הצנתר מושתל.</li>
	<li>לחבר את הרכבת קטטר מסירה לקצה המרוחק של הצנתר מושתל דרך המחט 30 G (איור 1Bv, vi).</li>
	<li>טען 60 μL של תמיסת מלח סטרילית לתוך מזרק 100 μL (מזרק השטיפה). טען את המנה של 30 μL של מתחם הבדיקה (למשל, פתרון ASO) למזרק שני (מזרק הזרקה).</li>
	<li>לחבר את מזרק השטיפה (טעון עם מלוחים) אל המתאם אבובים הקצה של הרכבת קטטר מסירה (איור 1Bv). הכנס 20 μL של תמיסת מלח סטרילית לתוך המרחב הפנימי (הזרקה לפני ההזרקה).</li>
	<li>לחבר את מזרק ההזרקה (טעון עם מתחם בדיקה) למתאם אבובים בקצה של הרכבת קטטר מסירה (איור 1Bv). הכנס 30 μL של תרכובת הבדיקה לחלל הפנימי מעל 30 s. הערה: נפח ההזרקה השגרתי של ASO הוא 30 μL כדי להשיג הסתרה טוב בחוט השדרה ובקליפת המוח. דווח כי אמצעי האחסון להזרקה עלולים להשפיע על התפלגות מורכבת12, למרות שאמצעי אחסון שונים של הזרקה לא נבדקו. אם נעשה שימוש בתרכובת או באמצעי אחסון אחרים, הבטיחות והיעילות צריכים להיקבע באמצעות הסדר האמפירי.</li>
	<li>חזור על שלב 3.10 ו לשטוף את הקטטר עם אחר 40 μL של תמיסת מלח סטרילי (שלאחר הזרקה שטיפה). ואז לנתק את הרכבת קטטר המסירה מן הצנתר מושתל. הערה: ריקון מראש ולאחר הזרקה הוא חשב להפחית את הקיבוע על המקומית של תרכובות ולשפר את ההפצה שלהם למבנים rostral12.</li>
	<li>חתך aseptically ומחממים את הצנתר מושתל: מקום זוג של מלקחיים לחיתוך סטרילי בתוך עיקור חרוז עד שהם חמים מאוד, אז מלקחיים על אבובים עם קצה חם של מלקחיים. הערה: פעולה זו ממיסה את הצנתר. כך, החור בצינור מתמוטט וכל הצדדים נדבקים זה לזה, איטום אבובים באופנה אספטי ולאחר מכן הוא ממוקם לתוך החלל התת עורית.</li>
	<li>השתמש בתפרים מונופינט לספיגה כדי לאבטח את הצנתר שנותר אטום החום לרקמת החיבור. לאחר מכן השתמש בתפרים מונופינט לא נספגים כדי לסגור את העור על הצנתר המאובטח אטום החום. הערה: ניתן להשתמש בקליפי הפצע גם כמאושרים על-ידי פרוטוקול IACUC. הטכניקה תואמת לזריקות חוזרות ונשנות למרות שהיא משמשת רק לזריקות חד פעמי בידינו. הכדאיות של זריקות חוזרות צריך להיות מוערך במידה מדעית עם אישור IACUC.</li>
	<li>השתמש גזה ותמיסת מלח לשטוף כל דם מן העור ולאפשר לבעל החיים להתאושש מן ההרדמה בחממה מחוממת עד הנייד, ובשלב זה הוא חזר כלוב הבית שלה (שני חולדות לכל כלוב). הערה: בעת ביצוע ניתוחים על חולדות מרובות באותו יום, כלים נקיים המשתמשים במים כדי להסיר דם ולעקר מחדש תוך שימוש בעיקור מחומם יבש מחוטא (לפחות 20 s, עם זמן להתקרר) בין בעלי חיים. סט חדש של מכשירים משמש כל 5 בעלי חיים.</li>
	<li>עקוב אחר בעלי החיים מדי יום לפחות 3 ימים לאחר הניתוח ולהמשיך לעקוב אחר החיות לשבוע לאחר התאוששות מהניתוח בהתאם לפרוטוקול IACUC. הערה: אם מתרחשים סיבוכים כלשהם (החזקת שתן, דלקות חתך, הפרעה נוירולוגית כגון תפיסה או שיתוק), יש ליצור קשר עם וטרינר כדי לקבוע את הטיפול המתאים, ואם יש להמתו בעלי חיים. אם שחרור מתמשך בופרנורפין אינו משמש, הקלה בכאב יש להינתן מדי יום לאחר הניתוח בהתאם לפרוטוקול IACUC.</li>
</ol>4. הערכה של המחנוק מסוים לאחר הזרקת הנייר
<ol><li>שבועיים לאחר הזרקת ההזנה של אסוס, לאסוף אזורים שונים של המוח (כלומר, קליפת מוחין, סטריאטום והמוח) כמו גם קטעים שונים של חוט השדרה (כלומר, צוואר הרחם, החזה, והמותניים). לחלץ את ה-RNA רקמות הכולל באמצעות ערכת החילוץ RNA מסחרי ולבצע תגובת סינתזה cDNA כמתואר בעבר13. הערה: ריאגנטים רגיל שימשו ל-qPCR עם מספר השורות הבאות: עכברוש Malat1 ועכבר. רמות התעתיק היחסיות חושבו באמצעות השיטה 2-ΔΔCt (CT = מחזור הסף).</li>
</ol>

<ol><li>Abbott, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+CNS+barriers%3A+evolution%2C+differentiation%2C+and+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Dynamics of CNS barriers: evolution, differentiation, and modulation.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 25 (1), 5-23 (2005).</li>
<li>Greene, C., Campbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+junction+modulation+of+the+blood+brain+barrier%3A+CNS+delivery+of+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Barriers%22%5BJournal%5D)">Tight junction modulation of the blood brain barrier: CNS delivery of small molecules.</a> Tissue Barriers. 4 (1), e1138017(2016).</li>
<li>Daneman, R., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+barriers+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Brain barriers in health and disease.</a> Neurobiology of Disease. 107, 1-3 (2017).</li>
<li>Ballabh, P., Braun, A., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%3A+an+overview%3A+structure%2C+regulation%2C+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier: an overview: structure, regulation, and clinical implications.</a> Neurobiology of Disease. 16 (1), 1-13 (2004).</li>
<li>Cardoso, F. L., Brites, D., Brito, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+at+the+blood-brain+barrier%3A+molecular+anatomy+and+possible+investigation+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Looking at the blood-brain barrier: molecular anatomy and possible investigation approaches.</a> Brain Research Reviews. 64 (2), 328-363 (2010).</li>
<li>Larsen, J. M., Martin, D. R., Byrne, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+delivery+through+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Recent advances in delivery through the blood-brain barrier.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 14 (9), 1148-1160 (2014).</li>
<li>Brinker, T., Stopa, E., Morrison, J., Klinge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+look+at+cerebrospinal+fluid+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">A new look at cerebrospinal fluid circulation.</a> Fluids Barriers CNS. 11, 10(2014).</li>
<li>Standifer, K. M., Chien, C. C., Wahlestedt, C., Brown, G. P., Pasternak, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+loss+of+delta+opioid+analgesia+and+binding+by+antisense+oligodeoxynucleotides+to+a+delta+opioid+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Selective loss of delta opioid analgesia and binding by antisense oligodeoxynucleotides to a delta opioid receptor.</a> Neuron. 12 (4), 805-810 (1994).</li>
<li>Wahlestedt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligodeoxynucleotides+to+NMDA-R1+receptor+channel+protect+cortical+neurons+from+excitotoxicity+and+reduce+focal+ischaemic+infarctions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Antisense oligodeoxynucleotides to NMDA-R1 receptor channel protect cortical neurons from excitotoxicity and reduce focal ischaemic infarctions.</a> Nature. 363 (6426), 260-263 (1993).</li>
<li>Wahlestedt, C., Pich, E. M., Koob, G. F., Yee, F., Heilig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+anxiety+and+neuropeptide+Y-Y1+receptors+by+antisense+oligodeoxynucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Modulation of anxiety and neuropeptide Y-Y1 receptors by antisense oligodeoxynucleotides.</a> Science. 259 (5094), 528-531 (1993).</li>
<li>Mazur, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+simple%2C+rapid%2C+and+robust+intrathecal+catheterization+method+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a simple, rapid, and robust intrathecal catheterization method in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 280, 36-46 (2017).</li>
<li>Wolf, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+dual-isotope+molecular+imaging+elucidates+principles+for+optimizing+intrathecal+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation+Insight%22%5BJournal%5D)">Dynamic dual-isotope molecular imaging elucidates principles for optimizing intrathecal drug delivery.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (2), e85311(2016).</li>
<li>Becker, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+reduction+of+ataxin-2+extends+lifespan+and+reduces+pathology+in+TDP-43+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Therapeutic reduction of ataxin-2 extends lifespan and reduces pathology in TDP-43 mice.</a> Nature. 544 (7650), 367-371 (2017).</li>
<li>Zhang, X., Hamblin, M. H., Yin, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+long+noncoding+RNA+Malat1%3A+Its+physiological+and+pathophysiological+functions%5BTitle%5D)+AND+%22RNA+Biology%22%5BJournal%5D)">The long noncoding RNA Malat1: Its physiological and pathophysiological functions.</a> RNA Biology. 14 (12), 1705-1714 (2017).</li>
<li>Crooke, S. T., Witztum, J. L., Bennett, C. F., Baker, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA-Targeted+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">RNA-Targeted Therapeutics.</a> Cell Metabolism. 27 (4), 714-739 (2018).</li>
<li>DeVos, S. L., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+intraventricular+delivery+of+drugs+to+the+rodent+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), e50326(2013).</li>
<li>McCampbell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+extend+survival+and+reverse+decrement+in+muscle+response+in+ALS+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides extend survival and reverse decrement in muscle response in ALS models.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (8), 3558-3567 (2018).</li>
<li>Schoch, K. M., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+Oligonucleotides%3A+Translation+from+Mouse+Models+to+Human+Neurodegenerative+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Antisense Oligonucleotides: Translation from Mouse Models to Human Neurodegenerative Diseases.</a> Neuron. 94 (6), 1056-1070 (2017).</li>
<li>Lane, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+Antisense+Technology+into+a+Treatment+for+Huntington%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Translating Antisense Technology into a Treatment for Huntington's Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1780, 497-523 (2018).</li>
<li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+in+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Advances+in+Neurological+Disorders%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides in neurological disorders.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li>
<li>Haché, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+Injections+in+Children+With+Spinal+Muscular+Atrophy%3A+Nusinersen+Clinical+Trial+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Child+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intrathecal Injections in Children With Spinal Muscular Atrophy: Nusinersen Clinical Trial Experience.</a> Journal of Child Neurology. 31 (7), 899-906 (2016).</li>
<li>Goodkey, K., Aslesh, T., Maruyama, R., Yokota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nusinersen+in+the+Treatment+of+Spinal+Muscular+Atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Nusinersen in the Treatment of Spinal Muscular Atrophy.</a> Methods in Molecular Biology. 1828, 69-76 (2018).</li>
<li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nusinersen+for+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Advances+in+Neurological+Disorders%22%5BJournal%5D)">Nusinersen for spinal muscular atrophy.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li>
</ol>

המחברים הם כל העובדים של Biogen, Inc. או ביולס פרמצבטיקה. המחברים מקבלים את התרופות האנטי-הגיוניות המתוארות במאמר מ-Ionis פרמצבטיקה.

המאמר הנוכחי מראה שיטה רבת עוצמה כדי לספק סוכנים טיפוליים ישירות לתוך ה-CN של החולדה. בתאוריה, טכניקה דומה יכולה להתבצע גם בעכברים, אם כי במידה הקטנה יותר, השיטה יכולה להיות מאתגרת יותר. לכן, הקבוצה שלנו מבצעת הזרקת המוח התאיים (ICV) בעכברים עבור העברת תרופות ה-CN, המגיעות לאותן מטרות באמצעות תוואי אחר של המינהל. שיטה זו תוארה במחקר אחר16.
יתרון השיטה המתואר כאן הוא שהוא אינו דורש ציוד יקר, או כלים מיוחדים. אנו ממליצים על הכנת מכלול הקטטר/התיל המוצג <strong class="xfig"...

מערכת כלי הדם של מערכת העצבים המרכזית (CN) התפתחה כרגולטור קריטי של הומאוסטזיס, שליטה על התנועה של מולקולות, אספקת חומרים מזינים ולהיפטר פסולת. מערכת זו היא גם קו ההגנה הראשון מפני תקיפות של פתוגנים חיצוניים, הודות לחלוקה צפופה של צמתים הדוקים לאורך קירות התאים האנדותל. הצמתים הצמודים האלה מפצות על היבט אחד של מחסום מוח הדם (BBB). בעוד bbb מאפשר את ההובלה של מולקולות הדרושות כדי להגשים דרישות התזונתיים והאנרגיה (g., יוני, גלוקוז), זה גם מגביל באופן סלקטיבי את המעבר של פתוגנים, כמו גם כימיקלים רעילים1,2,3.
באופן אירוני, אותו תפקיד מגן של BBB כי מגביל מעבר של פתוגנים וכימיקלים רעילים גם הוא המכשול העיקרי ליכולתנו לגשת בקלות את ה-CN עם טיפולים טיפוליים לאחר הממשל מערכתית לאורגניזם2, 4,5. תפקיד זה של BBB מבקש פיתוח של שפע של טכנולוגיות חדשות להפצת סמים וגישות6.
אחת הדרכים להתגבר על מכשול זה היא להזריק את התרופות ישירות לתוך הנוזל המוחי-שדרתי (שדרתי) כי ברציפות הן המוח והן חוט השדרה7,8,9,10. במאמר זה, אנו מתארים שיטה כדי לספק בהצלחה סוכנים לתוך החלל המותני המותניים על ידי הצבת הקצה הפנימי של הקטטר לחלוטין בחלל תסמונת זנב של עמוד השדרה חולדה. תיאור של הליך זה פורסם בעבר על ידי מזור ואח'.
הפרוטוקול הוא יעיל מאוד ומייצרת גדול מ 90% שיעור הצלחה של antilig, משלוח כמותי (ה-ASO) המסירה ל-CN כאשר מוערך על ידי תגובת שרשרת פולימראז כמותית (qPCR) ניתוח של היעד הגנטי הסתרה8. ההליך גורם אי-נוחות מינימלית לבעלי החיים, כמו 100% של חולדות לשרוד את הניתוח ולהראות נפיחות מינימלית סביב הפצע כירורגי ואין סימנים של מצוקה (למשל, היפראקטיביות, התייבשות, מקיפים, אובדן של איזון, ירידה צריכת המזון, ו התייבשות) במהלך התבוננות שלאחר ניתוח. יתרון נוסף של השיטה המתוארת כאן הוא שהוא אינו דורש ציוד יקר, או כלים מיוחדים.

<table><tbody><tr><td>3M Steri-Drape וילון קטן עם צמצם דבק</td><td>3M</td><td></td><td>1020</td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>Decon Laboratories, Inc</td><td></td><td>8416-160Z</td></tr><tr><td>מקלות ספוגית אלכוהול</td><td>Dynarex</td><td></td><td>NO 1204</td></tr><tr><td><a href="https://punchout.fishersci.com/shop/products/bd-general-use-syringes-5/22124967?crossRef=BD%20302830#?keyword=BD+302830">BD מזרקים לשימוש כללי 1 מ"ל טיפ Luer-Lok</a></td><td>BD</td><td>1 מ"ל TB קצה Luer-Lok</td><td>BD 302830</td></tr><tr><td>BD צינורות PE אינטרמדיק</td><td>BD</td><td>צינורות פוליאתילן PE50 קוטר 0.023</td><td>ב-BD 427400 (10ft, Fischer Scientific 22-204008) או 427401 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12P)</td></tr><tr><td>BD Intramedic PE Tubing</td><td>BD</td><td>צינורות פוליאתילן PE10 קוטר 0.011 ב-BD</td><td>427410 (10ft, Fischer Scientific 14-170-11B) או 4274011 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12B)</td></tr> <tr><td>BD Intramedic PE Tubing Adapters</td><td>BD</td><td>23 gauge intramedic luer stub adaper</td><td>BD 427565 או Fisher Scientific 14-826-19E</td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide מחטים חד פעמיות 30G</td><td>BD</td><td></td><td>BD</td></tr> 305128 <tr><td>בופרנורפין שחרור מתמשך מעבדה</td><td>ZooPharm</td><td>מרשם נדרש</td><td></td></tr><tr><td>מעקר אתילן אוקסיד</td><td>אנדרסן סטרילייזר INC.</td><td>74i, מעקר גז</td><td>צינורית מדריך 74i</td></tr> BD <tr><td></td><td></td><td>19G x 1 WT (1.1 מ"מ x 25 מ"מ) מחט</td><td>BD 305186</td></tr><tr><td>מזרק המילטון 100ul</td><td>חברת המילטון</td><td>מזרק המילטון 100ul</td><td></td></tr><tr><td>חרוז חם מעקר</td><td>כלי מדע עדינים STERILIZER</td><td></td><td>MODELNO FST 250</td></tr><tr><td>משחת עיניים</td><td>Dechra veterranery מוצר</td><td></td><td>17033-211-38</td></tr><tr><td>Pocket Pro Pet Trimmer</td><td>Braintree Scientific</td><td></td><td>CLP-9931 B</td></tr><tr><td>Povidone scrub</td><td>PDI</td><td></td><td>S48050</td></tr><tr><td>מי מלח</td><td>בקסטר</td><td>נתרן כלוריד 0.9% עירוי תוך ורידי BP 50 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>FE1306G</td><td>אזמל נוצות</td><td>אזמל חד פעמי</td><td>מס' 10</td></tr><tr><td>כרית חימום לבעלי חיים קטנים</td><td>K& H ייצור</td><td></td><td>דגם # 1060</td></tr><tr><td>Stylet Wire</td><td>McMaster-Carr</td><td>1749T14</td><td>LH-36233780</td></tr><tr><td>וילון מגבת ניתוח</td><td>Dynarex</td><td></td><td>4410</td></tr><tr><td>מספריים ומלקחיים כירורגיים</td><td>FST ו-Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Setures</td><td>Ethicon</td><td></td><td>4-0 או 5-0</td></tr><tr><td>כלי להכנת המדריך הקנולרי</td><td>Grainger</td><td>כלי סיבובי (דרמל)</td><td>14H446 (Mfr: EZ456)</td></tr> <tr><td></td><td></td><td>מנעול EZ מנותק גלגל</td><td>1PKX5 (Mfr: 3000-1/24)</td></tr> <tr><td></td><td></td><td>גלגל השחזה, תחמוצת אלומיניום</td><td>38EY44 (Mfr: EZ541GR)</td></tr> <tr><td></td><td></td><td>ציר מנעול EZ</td><td>1PKX8 (Mfr: EZ402-01)</td></tr> <tr><td></td><td></td><td>אריח רצפת גלגל יהלום</td><td>3DRN4 (Mfr: EZ545)</td></tr><tr><td><חזק>מקור חלופי לחומרים מוכנים מראש ומעוקרים להליך זה</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת צנתר מינון</td><td>SAI מערכות</td><td></td> עירוי מדריך SAI <td>RIDC-01</td></tr><tr><td>צינורית</td><td>מדריך SAI מערכות</td><td></td> עירוי <td>RIDC-GCA</td></tr><tr><td>צנתרים פנימיים</td><td>SAI מערכות עירוי SAI</td><td>RIDC-INC</td><td></td></tr><tr><td>Stylet חוט</td><td>SAI מערכות</td> <td>עירוי</td><td>RIDC-STY</td></tr></tbody></table>

משלוח פנימי של אנטי-סנס וליגונו, במערכת העצבים המרכזית של חולדה

Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System

מחסום מוח הדם (BBB) הוא הגנה חשובה מפני הכניסה של גורמים רעילים או גורמי הרסניות מהדם אל מערכת העצבים המרכזית (CN). עם זאת, קיומה גם מוריד באופן דרמטי את הנגישות של סוכנים רפואיים מנוהלים בצורה מערכתית ל-CN. שיטה אחת להתגבר על זה, היא להזריק את הסוכנים האלה ישירות לתוך הנוזל השדרתי (שדרתי), ובכך לעקוף את BBB. זה יכול להיעשות באמצעות השרשה של קטטר עבור אינפוזיה רציפה באמצעות משאבת אוסמוטי, או עבור משלוח בודד. במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול כירורגי למסירה של מערכת היעד האנטי הגיונית פורוזימטר (אסוס) באמצעות קטטר מושתל ישירות לחלל תסמונת זנב של עמוד השדרה למבוגרים חולדה. כתוצאות מייצגות, אנו מראים את היעילות של בודד באמצעות הזרקת הרכב (IT) באמצעות המערכת הזאת מערכת להפיל את RNA היעד באזורים שונים של ה-CN של החולדה. ההליך הוא בטוח, יעיל ואינו דורש ציוד יקר או כלים כירורגיים. ניתן להתאים את הטכניקה המתוארת כאן לאספקת סמים גם באופנים אחרים.

באמצעות השיטה המתוארת כאן, הזרקנו שתי קבוצות של חולדות נשים בוגרות (250-300 גרם; n = 10/קבוצה) עם מנת אחת של מלוחים באגירה של פוספט-PBS או 300 μg של ASO מיקוד ארוך שאינו קידוד (לינק) RNA Malat1; במעבדה שלנו אנו משתמשים באופן שגרתי Malat1 ASO כמו מתחם כלי, כי Malat1 מתבטאת אוביקוויטיות ברמות גבוהות בכל הרקמות14, כולל המוח חוט השדרה. Malat1 ASO עובד באמצעות מנגנון RNaseH1 בתיווך15 כי מבזה את RNA, המוביל לנוק (KD). בניסוי שמתואר כאן, אספנו אזור...

כאן, אנו מתארים שיטה להעברת תרופות למערכת העצבים המרכזית העכברוש על ידי שתילת קטטר לתוך החלל המותני הפנימי של עמוד השדרה. אנו מתמקדים במסירת מחלת האנטי-הגיונית, למרות ששיטה זו מתאימה גם לאספקה של שיטות טיפוליות אחרות.

The blood brain barrier (BBB) is an important defense against the entrance of potentially toxic or pathogenic agents from the blood into the central ...

פרוטוקול זה מאפשר אספקה ישירה של טיפולים למערכת העצבים המרכזית של החולדה כדי להעריך את הפרמקוקינטיקה, הפרמקודינמיקה והיעילות של טיפולים חדשניים במודלים של מחלות עכברושים. הליך זה בטוח, יעיל ואינו דורש ציוד יקר או כלים כירורגיים. הדגמת ההליך יהיו יי חן יי לואו, מדעני מחקר מהמעבדה שלי.כדי להכין את המדריך המיוחד cannulas, להשתמש בכלי סיבובי עם גלגל לחתוך כדי לחתוך את שני הקצוות של מחט מד 19 כדי לקבל בערך אחד וחצי עד שני סנטימטר ארוך מדריך cannula. לאחר מכן השתמש בגלגל השחזה של הכלי הסיבובי כדי להחליק את שני הקצוות. כדי להכין את מכלול חוט הקטטר, לחתוך חתיכה אחת באורך שמונה ס"מ של צינורות PE10 בקוטר 011 אינץ 'כדי לשמש קטטר תוך-פתקל עבור כל בעל חיים.השתמש בעט סמן עמיד באתנול כדי לסמן שני סנטימטרים מקצה אחד של כל פיסת צינורות. עבור כל חיה, הכנס חוט 11 ס"מ ארוך סגנון לחתוך מ polytetrafluoroethylene מצופה חוט נירוסטה לתוך הלומן של קטטר PE10 שמונה ס"מ. כדי להכין את מכלול קטטר המסירה, לחתוך חתיכה של חמישה עד 10 ס"מ 023 אינץ ' קוטר PE50 קטטר ולהכניס מתאם צינורות מד 23 לתוך קצה אחד של הקטטר.לאחר מכן הכנס מחט 30 מד עם רכזת חתוכה לחתיכה כ 0.5 ס"מ של צינורות PE10 ולחבר את צינורות PE10 לקצה השני של הקטטר. כדי להכין הרכבה מדריך מחט cannula, מניחים cannula מדריך על קצה של מחט 23 מד. לפני תחילת הניתוח, מניחים כרית חימום על שולחן הניתוחים ומכסים את הפנקס עם גיליון וילון סטרילי.מניחים צינור צנטריפוגה חרוט 50mL על הסדין ולאשר חוסר תגובה קמצוץ הבוהן בחולדה ניסיונית הרדמה. לאחר שקילה של החיה, לגלח את הגב מהזנב אל עמוד השדרה החזי caudal ולהמקם את החולדה מגולחת על הסדין הסטרילי במצב נוטה. מקם את צינור 50mL מתחת לבטן כדי להגמיש את עמוד השדרה באזור המותני, ולהחיל משחה עיניים על העיניים.לאחר מכן, להזריק תת עורית מיליגרם אחד לקילוגרם של Buprenorphine שחרור מתמשך ולנקות את העור החשוף עם povidone רציף וקרצוף אלכוהול. עוטף את החיה עם סדין שקוף סטרילי. למיקום הקטטר והזרקת המתחם, זהה את שני הבורות הטבעיים בין השרירים שמעל האגן המגולח, וביד אחת החזקת הבורות, השתמש ביד השנייה כדי ללחוץ בעדינות ולהרגיש את עמוד השדרה מן caudal לכיוון rostral כדי לאתר את הכניסה הגדולה הראשונה בין החוליות.לאחר זיהוי הרווח הבין חולייתי בין חוליות S1 ו- L6, לנוע מעט rostrally כדי לזהות את החלל הבין חולייתי בין חוליות L5 ו L6 חוליות. השתמש אזמל לעשות חתך ארוך לא יותר משני סנטימטר בעור ובקפסולה שרירים באתר זה לאורך קו האמצע מן rostral לכיוון caudal, כך אתר ההזרקה יהיה במרכז החתך. השתמש מספריים ניתוח לנתח את רקמת החיבור עד שכבת השריר ניתן לדמיין.בצע חתך של סנטימטר אחד בקפסולת השריר מיד בצלבי לתהליך עמוד השדרה הגבי של חוליית המותני L6. מקם את מכלול מחט המדריך ליד ההיבט הראשון של החוליה המותנית השישית ודחוף את ההרכבה לחלל הבין חולייתי לאורך ההיבט הראשון של החוליה השישית כך שסוף המחט חודר לתעלת עמוד השדרה. השתמש מדחפים קהה כדי לאתר את תהליך עמוד השדרה הגבי של חוליית המותני L6 ואז לדחוף את המחט לאורך ההיבט הראשון של החוליה השישית לתוך החלל invertebrata.לדחוף את המדריך cannula במקום לאורך המחט, להסיר את המחט, ולהכניס את הרכבת חוט קטטר לתוך cannula מדריך. הריסת הקטטר בזווית של כ-45 מעלות לתעלת עמוד השדרה, כפתה את קצה הקטטר כ-0.3 ס"מ לתוך התעלה. הסר את חוט הסגנון כ -2.5 ס"מ מהטיפ התוך-תת-תאי של הקטטר וקדם את הקטטר לתעלת עמוד השדרה עד שסימון שני הס"מ על הקטטר נראה ממש מתחת לשריר.כאשר הקטטר נמצא במקום, להסיר את המדריך cannula להשאיר את קטטר חוט סגנון במקום. מקדמים את הקטטר לתעלת עמוד השדרה עד שסימן שני סנטימטרים נמצא בכניסה לתעלה ומושכים לחלוטין את חוט הסגנון. נוזל השדרה המוחי עשוי להיות חזותי נכנס קטטר מושתל.לאחר מכן חבר את מכלול קטטר המסירה לקצה הדיסטלי של הקטטר המושתל דרך קצה המחט 30 מד. לאחר מכן, לטעון 60 microliters של מלוחים סטריליים לתוך מזרק 100 microliter ולהעמיס בולוס של 30 microliters של תרכובת הבדיקה לתוך מזרק שני. חבר את מזרק מלוחים לקצה מתאם צינורות של הרכבה קטטר משלוח לשטוף 20 microliters של מלוחים סטריליים לתוך החלל התוך-תיאה.כאשר כל תמיסת מלח כבר סמוק, להחליף את מזרק מלוחים עם מזרק טעון בולוס ולהזריק 30 microliters של תרכובת הבדיקה לתוך החלל התוך-תיאה על פני תקופה של 30 שניות. כאשר כל הבולוס נמסר, להחליף את המזרק טעון בולוס עם מזרק טעון מלוחים אחר לשטוף את הקטטר עם 40 microliters נוספים של מלוחים. כאשר הנפח השני של מלוחים נמסר, לנתק את הרכבה קטטר משלוח מן קטטר מושתל ולהשתמש בזוג מלקחיים מאוד חם חום מעוקר ניתוח כדי להדק על הצינור לחתוך באופן בלתי מתאים ולאטום את הקטטר המושתל.השתמש תפרים monofilament לספוג כדי לאבטח את קטטר אטום בחום לרקמת החיבור ולאחר מכן להשתמש תפרים nonabsorbable כדי לסגור את העור. לאחר מכן השתמש גזה מלוחים לשטוף כל דם מן העור ולה מניחים את החולדה באינקובטור מחומם עם ניטור עד הגינות מלאה. בניסוי מייצג זה, נוקאאוט טוב מאוד הושג בכל האזורים שנאספו לאחר משלוח אחד של בולוס אנטיסנס אוליגונוקלאוטיד כפי שהוכח.עם זאת, מידה מסוימת של שונות אזורית נמדדה כאשר חוט השדרה מציג את האחוז הגבוה ביותר של הפלה. לאחר זריקה מוצלחת של אוליגונוקלאוטיד antisense, או טיפולים אחרים, לתוך מודל מתאים, אפשר להעריך את פרמקוקינטיקה, פרמקודינמיקה, ויעילות של טיפולי.

intrathecal-delivery-antisense-oligonucleotides-rat-central-nervous

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מקור: Chen, Y., et al. אספקה תוך-תקלית של אוליגונוקלאוטידים אנטיסנס במערכת העצבים המרכזית של החולדה. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את העברת תרכובת הבדיקה לנוזל המוח השדרתי (CSF) דרך קטטר המושתל בעמוד השדרה המותני של מודל חולדה. התרכובת מסתובבת לאורך ה- CSF למוח ולחוט השדרה, נכנסת לתאי עצב ומציעה פוטנציאל טיפולי.

אספקה תוך-תקלית של תרכובת בדיקה למערכת העצבים המרכזית של החולדה

מקור: Li, D., et al. הזרקה תוך-תקלית ישירה של נגיפים רקומביננטיים הקשורים לאדנו בעכברים בוגרים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את הליך ההזרקה התוך-תקלית של נגיפים הקשורים לאדנו (AAV) לנוזל המוח (CSF) של עכבר ער, המכסה הכנת מזרק, יישור עמוד השדרה והחדרת מחט מדויקת. שיטה זו מאמתת העברת גנים ממוקדת, ותומכת בפוטנציאל שלה לטיפולים במערכת העצבים המרכזית.

העברה תוך-תקלית של וירוסים במודל עכבר לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית

אנו מתארים שיטה למקד תרופות למערכת העצבים המרכזית או על ידי השתלת קטטר או ביצוע הזרקת בולוס לתוך החדר לרוחב הנכון בעכברים. אנו מתמקדים באופן ספציפי על המשלוח של אנטיסנס. טכניקה זו היא להתאמה בקלות לתרופות אחרות ולחולדות.

משלוח תוך חדרי ישיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית מכרסם

דו"ח זה מתאר טכניקה פשוטה ומהירה של נקב מחט intrathecal עבור transfection מקומי של siRNA בחוט השדרה המותני בעכבר תחת הרדמה קצרה אור בר קיימא.

בVivo siRNA Transfection וג&#39;ין מציאה בחוט השדרה באמצעות ראפיד פולשנית מותני intrathecal זריקות בעכברים

שיטות משלוח הגן רחב היקף מערכת העצבים המרכזית בחולדה מכוסים. בדוגמה זו, המטרה היא לחקות מחלה המשפיעה על חוט השדרה כולו. התמרה חושית רחבה יכול לשמש כדי לספק חלבון טיפולית מערכת העצבים מהמינהל, היקפי חד פעמי.

שיטות וטיפים על עירוי לוריד של Adeno-הקשורים וירוס חולדות והערכה של מערכת העצבים המרכזית התמרה חושית

כאן אנו מציגים טכניקה הזרקה ישירה במחלה באמצעות הידרוכלוריד לידוקאין 1% פתרון ויראלי להבטיח משלוח וירוס יעיל adeno-הקשורים לבעלי חיים קטנים ולהקים מערכת הניקוד לחזות התמרה חושית יעילות המרכזי מערכת העצבים על פי מידת חולשה חולפת הנגרמת על ידי לידוקאין.

במחלה ישירה הזרקה של וירוסים Adeno-הקשורים רקומביננטי בעכברים מבוגרים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול באמצעות התקן מיקום העכבר המאפשר את המיקום המתאים של עכברים עבור המינהל intranasal של המוח מיקוד פפטיד-siRNA המאפשר גנים יעילים השתקה במערכת העצבים המרכזית.

מתקן מיקום להצבת עכברים במהלך המסירה Intranasal siRNA למערכת העצבים המרכזית

הפרוטוקול הנוכחי מתווה הוראות שלב אחר שלב לביצוע זריקות תוך-תיקליות בעכברים יילודים לצורך עריכת גנים והעברת תרופות.

הזרקה תוך-תטית של עכבר שזה עתה נולד לצורך עריכת גנום ואספקת תרופות

מתואר הליך כירורגי לביצוע זריקות לתוך בור המים המותני של החולדה הצעירה. גישה זו שימשה להעברה תוך-תאית של וקטורים של ריפוי גנטי, אך צפוי כי גישה זו תוכל לשמש למגוון טיפולים, כולל תאים ותרופות.

משלוח וקטורי תוך-תאי בחולדות צעירות באמצעות הזרקת בור מים מותני

זריקה תוך-מותנית מייצגת דרך מתן רלוונטית לתרגום למתן טיפול גנטי למערכת העצבים המרכזית. פרוטוקול סטנדרטי מקיף זה לזריקות תוך-מותניות בעכברים וחולדות בילודים, צעירים ובוגרים נועד להנחות חוקרים באימוץ טכניקה זו למחקרי ריפוי גנטי פרה-קליניים.

הזרקה תוך-מותנית של וקטורים של ריפוי גנטי למיקוד מערכת העצבים המרכזית בעכברים וחולדות

מאמר זה מפרט את שיטות המתן התוך-אתקלית לטיפולים ממוקדים במערכת העצבים המרכזית בעכברים בוגרים, תוך התמקדות בדיוק בפרוטוקול ובאפשרות הזרקה חוזרת. הוא כולל ממצאים ממחקר אימות שבו אוליגונוקלאוטידים אנטיסנסיים הפחיתו ביטוי SOD1 מוטנטי בעכברי מודל SOD1-ALS, מה שתומך בתועלת הגישה במחקר פרה-קליני במחלות נוירודגנרטיביות.

הזרקה תוך-ראשית מותנית של SOD1-ASO למטרות מיקוד מדויק במערכת העצבים המרכזית (CNS) ויעילות חיזוי בעכברי ALS בני אדם עם SOD1-G93A

למד שיטה לשילוח אוליגונוקלאוטידים אנטי-סנס ישירות למערכת העצבים המרכזית של חולדה דרך החלל התוך-שדרתי. פרוטוקול בטוח ויעיל ללא ציוד יקר לחקר פרמקוקינטיקה ופרמקודינמיקה.

משלוח פנימי של אנטי-סנס וליגונו, במערכת העצבים המרכזית של חולדה

גלה סרטונים נוספים