מבוזרים (Ex Vivo) מורלין מודל שלפוחית השתן עם השריר הדטראאור הוסר עבור גישה ישירה Suburothelium במהלך מילוי שלפוחית השתן

מודל שלפוחית השתן שלנו עם שריר detrusor הוסר היא גישה ניסיונית חדשה ללמוד בו זמנית את הזמינות של מתווכים urothelial ב propria lamia ולומן שלפוחית השתן במהלך מילוי שלפוחית השתן. מודל זה יכול לספק תובנות חדשות על מנגנוני האיתות בין אורותליום, תת-אורותל ושריר דטרוסור המווסת את עצבנות שלפוחית השתן במהלך המילוי. התחל על ידי הצבת דגימת שלפוחית השתן מורין שלם לתוך צלחת ניתוח תחת מיקרוסקופ ניתוח המכיל 10 מעלות צלזיוס מחומצן KBS וניקוי רקמות החיבור והשומן סביב שלפוחית השתן.

הצמד חלק קטן של הכיפה של שלפוחית השתן המבודדת לאורך כל הדרך דרך הקצה החיצוני ביותר של שריר detrusor הרחק מהקצה הפנימי ביותר של השריר כי מול תת-אורותל למיה פרופריה כדי צלחת ניתוח מכוסה sylgard מלא KBS, ולהצמיד את השופכים ואת צוואר שלפוחית השתן כדי להציג את הכנת שלפוחית השתן שלם. בעזרת ממטרות עדינות, מושכים בעדינות חתיכת סרוסה בפינה שבין השופן לגוף שלפוחית השתן ומתאימים את אור המיקרוסקופ כדי להגביר את השקיפות ולהבדיל את שולי התת-מארז שמתחת לשריר הדיטרוסור. כדי למנוע ניקוב קיר ההכנה, הקפד לחתוך את שריר detrusor רק בעוד הקצה האחורי של רירית שלפוחית השתן גלוי בבירור.

באמצעות מספריים עדין, להתחיל לחתוך את קיר שלפוחית השתן לאורך המשטח הפנימי של שכבת שריר detrusor תוך משיכת בעדינות את קטע לחתוך מן ההכנה דואג כי הקצה האחורי של רירית ניתן לראות תוך הימנעות נגיעה בקצה הרקמה. השאירו חתיכה קטנה של שריר detrusor על גבי כיפת שלפוחית השתן כדי לאפשר הכנה להיות משותק במהלך השלבים הנותרים של הפרוטוקול ולמלא חתיכה של שני סנטימטרים של צינורות פוליאתילן 20 עם 37 מעלות צלזיוס מחומצן KBS. לאחר החדרת הקטטר לתוך פתח השופכה של שלפוחית השתן, בעדינות לדחוף את הקטטר עד קצה הקטטר מגיע לאמצע המשוער של שלפוחית השתן.

לאחר מכן לאבטח את הקטטר ברקמה שמסביב של צוואר שלפוחית השתן עם לולאה כפולה 6.0 תפר ניילון. לאחר בדיקת הרקמה עבור דליפות, מניחים את הכנת שלפוחית השתן denuded לתוך תא שלושה מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס מים מעיל תבשיל איברים עם תחתית sylgard ולאבטח את הקטטר לצד התא, כך ההכנה אינה צפה מעל פני השטח של פתרון חליטה. חבר את קטטר שלפוחית השתן לחתיכת צינורות פוליאתילן 20 המחוברים לפטופקוק תלת-סטרי ומזרק עירוי מלא ב- KBS מחומצן של 37 מעלות ולהתחיל את משאבת העירוי כדי למלא את שלפוחית השתן ב- KBS תוך כדי טיפול כדי לפקח על נפח המילוי בלחץ התוך-רווי במהלך המילוי.

כדי לזהות מתווכים בתוך היבט suburothelium למינה פרופריה של ההכנה, לאסוף aliquots של פתרון האמבטיה בנקודות זמן ניסיוניות מתאימות שונות לעבד את הדגימות על פי הניתוח המתוכנן במורד הזרם. קיר ההכנה של שלפוחית השתן מכיל את האורותל ואת הסובורותליום אך לא את השריר החלק. יחסי נפח הלחץ דומים להפליא בהכנות שלמות ומוזגות.

התאמת המודל למדידת מתווכים שמקורם באורוטליום המשתחררים בצד הפרובריה של תת-אורותליום למינה במהלך המילוי יכולה להיבדק על ידי מדידת שחרורם של מתווכים פורין לתוך הפתרון רחצה פרובריה lamina suburothelium של ההכנה denuded. כפי שהוכח, כמויות זניחות של purines ניתן לזהות באמבטיה המכילה הכנת שלפוחית השתן מבודדת עם שריר detrusor שלם;ואילו כמויות של purines אלה גבוהים באופן משמעותי בדגימות שנאספו מהאמבטיה המכיל הכנת שלפוחית השתן denuded. יש לציין, התפלגות של purines ו מטבוליטים בדגימות שנאספו מן לומן ואת propria למינה suburothelium בסוף מילוי שונים באופן משמעותי.

תוספת של אתנו ATP, אנלוגי פלואורסצנטי מאוד של ATP, לצד suburothelial של ההכנה detrusor חינם תוצאות ירידה אתנו ATP ועלייה במוצרי ATP אתנו, אתנו ADP, אתנו AMP, ואתנו ADO. כמו כן, התוספת של אתנו ATP להכנת לומן גורמת לירידה באתנו ATP ולעלייה באתנו ADP, אתנו AMP ואתנו ADO בלומן. יתר על כן, התוספת של אתנו ATP לצד פרובריה lamina suburothelium של ההכנה denuded תוצאות המראה של אתנו AMP ואתנו ADO בתוך לומן.

כמו כן, הוספת אתנו ATP ללומן גורמת להופעתם של אתנו AMP ואתנו ADO בסובורותל למינה פרופריה. בעקבות הליך זה, ניתן למדוד את הזמינות של מתווכים רגשנים ומעכבים בלמינה פרופריה ובלומן שלפוחית השתן בשלבים שונים של מילוי שלפוחית השתן. תחבורה transurethral דו-צדדית של מתווכים ומטבוליזם של מתווכים ניתן גם ללמוד באמצעות מודל זה.

שימוש במודל חדש זה של שלפוחית השתן יגרום להבנה חדשה של איתות פנימי, מכני מקומי בין urothelium ושריר חלק detrusor לשלוט רגישות שלפוחית השתן בבריאות ומחלות.