Name: מערכת הזרמה אוטומטית לעיבוד תאים בקנה מידה קטן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 49 s
Description: למדו איך לבצע החלפת מכלי אוטומטית בתאים בקנה מידה קטן באמצעות מכשיר צנטריפוגה נגד זרימה. שיטה זו משפרת שיעורי שחזור ומספקת נפח מרוכז קטן בתהליך ייצור תאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי תוכנית התמיכה המבצעית של הממשלה הויקטוריאנית, ושובר הטכנולוגיה הממשלתית הויקטוריאנית שסיפק המחלקה לפיתוח כלכלי, משרות, תחבורה ומשאבים. RL היא המקבלת של מלגת פיתוח קריירה של מועצת הבריאות הלאומית והמחקר הרפואי. אל הוא המקבל של פרס לתארים מתקדמים באוסטרליה.

1. הכנת ריאגנטים ותאים להחלפת מאגר
<ol><li>הכן מאגרים (ראה טבלת חומרים) במכסה זרימה למינארי בדרגה 2. באמצעות מזרק מחט הרכבה, להסיר 50 mL של פתרון מלוחים משקית מלוחים 500 mL. להחליף את זה עם 50 mL של 20% סרום האדם (HSA) לעשות 2% HSA ב מלוחים, אשר ישמש את המאגר לשטוף.</li>
	<li>הסר את התאים מכלי התרבות ובצע ספירת תאים כדי לקבוע את כמות התאים והכדאיות ההתחלתית על-ידי החרגת כחול מטריפי. טען את התאים לשקית העברה. הערה: בפרוטוקול זה התאים של ג'ורקאט היו מתורבתים ב-RPMI ו-MSCs היו מתורבתים ב-Dמאמ: F12. שני התקשורת התבצעה בתוספת של 10% סרום בפרה עוברית (FBS) ו 1% אנטיביוטי-Antimycotic פתרון. תאים היו מתורבתים ב 37 ° c עם 5% CO2. עבור תאים MSCs או מחסיד, הוסף אנזים עיכול (למשל, טריפסין) לכלי התרבות כדי לנתק את התאים, וכיבוי מדיית התרבות ברגע שהתאים מנותקים. בפרוטוקול זה נעשה שימוש בשקית העברה כי התאים הורחבו בכלי התרבות. עם זאת, אם התאים הם מתורבתים בשקית של תרבות התא, זה יכול להיות מחובר ישירות לקיט לשימוש יחיד באמצעות ריתוך צינור סטרילי. בפרוטוקול זה, או 3 x 107 כיוקט תאים או 1 x 107 MSCs שימשו עבור כל לרוץ, שבו תאים הושעו ב 40 mL של מדיית התרבות.<ol>
<li>לטעון תאים לתוך שק העברה (ראה טבלת חומרים) באמצעות מזרק הרכבה מחט אם רתך צינור סטרילי זמין לחבר את שק העברת לערכת עיבוד השימוש היחיד.</li>
		<li>לחלופין, השתמש בזוג מספריים אוטוקלשים כדי לחתוך את הצינור המחבר עם בערך 10 ס מ שנשאר מחובר לשקית העברת ולהוסיף מחבר Luer נקבה לסוף אבובים. השתמש במזרק לניקוי תאים ומדיה, ולאחר מכן חבר את המזרק למחבר Luer וטען תאים לשקית ההעברה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לחבר את התיק המכיל את התאים, לשטוף את התיק מאגר המכיל 500 mL של מאגר לשטוף הכין בשלב 1.1, שקית פסולת, ואיסוף מזרק אל הערכה לשימוש יחיד (איור 1B). הערה: המיקום המחבר של כל תיק תלוי בהגדרות בתוכנית. בפרוטוקול זה, חיברתי את שקית הפסולת בתנוחה א', שטוף מאגר במיקום B, שקית תא במיקום D ו-F, ומזרק לאוסף במיקום H (איור 1ג).</li>
</ol>2. תוכנית לפרוטוקול חילופי מאגרים אוטומטיים
<ol><li>פתח את ממשק המשתמש הגרפי (GUI) של המכשיר ולחץ על כפתור "כוכבT" במחשב נייד או מחשב לוח. לאחר מכן "פתח" פרוטוקול קיים או לחץ על "חדש" כדי ליצור אחד חדש.</li>
	<li>השתמש בלחצן "קדימה" ו-"לאחור" כדי לנווט בכל שלב, בחר את השסתומים שייפתחו/נסגרו, מהירות צנטריפוגליים, מהירות המשאבה, כיוון המשאבה וגורמי פעולה. ההגדרות עבור כל שלב מסוכמות בטבלה 1. . אז שמור את הפרוטוקול</li>
</ol>3. התקנת המכונה
<ol><li>הציבו את ערכת העיבוד החד במחשב ותלו את השקיות המחוברות בהתאם. לחץ על כפתור "עצור/איפוס" האדום כדי לאפס את כל השסתומים לתוך המיקום הסגור המוגדר כברירת מחדל. הערה: המכונה תבצע מבחן כאשר הדלת סגורה כדי להבטיח את הקיט הוצב כראוי וכי כל השסתומים פועלים כראוי.</li>
	<li>חבר את GUI למכשיר עיבוד ולחץ על "חיבור" כפתור. לאחר מכן הורד את התוכנית שנשמרה. כאשר הכפתור "Play" הירוק נדלק, הוא מצביע על כך שהפרוטוקול מוכן להתחיל.</li>
	<li>פתח את התפסים ידנית עבור אבובים שק העברה. הערה: אם המפעיל שוכח לפתוח את התפסים, ההתקן יפסיק והאזהרה לחיישני הלחץ תופיע. לחץ על כפתור "לעצור" כדי לאפס את המכשיר ולפתוח את התפסים כדי להתחיל מחדש.</li>
</ol>4. החלפת מאגר אוטומטית
<ol><li>לחץ על 'התחל' כדי ליזום את תוכנית חילופי המאגרים. הערה: כדי לשנות באופן ידני את התהליך האוטומטי, לחץ על כפתור "הבא" כדי לעבור לשלב הבא לפני שהגיע "ההדק" או לחץ על "השהה" כדי לשים את התהליך בהמתנה. פעולה זו תאחד את התאים באמצעות הערכה תוך שמירה על שסתומים בלבד J ו-K פתוח (איור 1ג).</li>
	<li>בסוף שלב אוטומציה 6 (טבלה 1), התהליך יהיה להשהות כאשר האוויר בשקית רוקנה עכשיו מפעיל את חיישן הבועה. לחץ על "הבא" כדי להעביר את התהליך לשלב הבא אם התיק הוא אכן ריק, או ללחוץ על "השהה" כדי לחדש את העיבוד אם החיישן הופעל על ידי בועה בשורה.</li>
</ol>5. איסוף ודיגום התאים
<ol><li>כאשר התהליך האוטומטי הוא סיים, לסגור את כל התפסים אבובים. פתח את הדלת ולקח את הערכה לשימוש יחיד מתוך המכשיר. נתק את המזרק כדי לאסוף את התאים לתהליכים הבאים. קח דגימה של התאים שנאספו עבור ספירת תאים ובדיקת הכדאיות (ראה שלב 6.2).</li>
</ol>6. אימות תהליך
<ol><li>בצע ניסויים בבקרת באמצעות פרוטוקול חילופי מאגרים ידני.<ol>
<li>תא צנטריפוגה מושעה ב 200 x g עבור 5 דקות. לבטל את supernatant ולהשעות את התאים עם 30 מ ל של מאגר שטיפת תאים. צנטריפוגה את ההשעיה התא שוב ב 200 x g עבור 5 דקות. למחוק את הסופרנטאנט ולהשעות מחדש את התאים עם 10 מ ל של מאגר שטיפת תאים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בצעו ספירת תאים באמצעות מחלת ההדרה הכחולה כדי להעריך את הכדאיות בתאים באמצעות מונה תאים אוטומטי.</li>
	<li>בצע שיטת MTS כדי לכמת את התפשטות התא ב 2, 24, ו 48 h. הערה: השימוש ב-MTS בוצע על צלחת תרבות הרקמה 96 בהתאם להוראות היצרן. A 100 μl סדרת מחלקים של מדיית תרבות התא (המכיל 10,000 בתאים או 1,500) לבאר היו מצופים לאחר תהליך החלפת המאגר. בכל פעם, 20 μL של MTS מריאגנטים נוספו לתוך כל היטב מודבטים עבור 2 h ב 37 ° c. הספיגה הוערך ב 490 ננומטר באמצעות קורא לוחית.</li>
	<li>לבצע מאמר פונקציונלי להשוות את ההשפעה של התהליך האוטומטי לעומת התהליך הידני על התאים והפונקציה MSC.<ol>
<li>התרבות בתאים ב96-צלחת בצפיפות של 1 x 106 תאים/mL מגורה עם 50 Ng/ml פורבול 12-myristate 13-אצטט (pma) ו-1 μg/ml איקונמיצין (קוקטייל גירוי התא) ב-dmem: מדיה F12 המכיל 10% סרום בפרה עוברית (fbs) עבור 24 h. מודדת התאים ב 37 ° c עם 5% CO2.</li>
		<li>מדידת הייצור interleukin-2 מן התרבות supernatant באמצעות מבוסס חרוז מבוססי אליסה (ראה טבלת חומרים) על פי הוראות היצרן.</li>
		<li>תרבות MSCs בצלחת 12 היטב בצפיפות של 10,000 תאים/cm2 ב 1 מ ל של Dמאמ: מדיה F12 המכיל 10% fbs שיושלם עם אינטרפרון-γ 50 יחידות/mL עבור 48 h. לאסוף supernatant על היכולת ריכוז kynurenine למדוד האינאמין 2, 3-diחמצון (עידו) פעילות אנזים של MSCs כפי שתוארה בעבר21.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Lopes, A. G., Sinclair, A., Frohlich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost+Analysis+of+Cell+Therapy+Manufacture%3A+Autologous+Cell+Therapies%2C+Part+1%5BTitle%5D)+AND+%22BioProcess+International%22%5BJournal%5D)">Cost Analysis of Cell Therapy Manufacture: Autologous Cell Therapies, Part 1.</a> BioProcess International. 16 (3), (2018).</li>
<li>Hampson, B., Ceccarelli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factories+of+the+future%3A+Can+Patient-Specific+Cell+Therapies+Get+There+from+Here%3F%5BTitle%5D)+AND+%22BioProcess+International%22%5BJournal%5D)">Factories of the future: Can Patient-Specific Cell Therapies Get There from Here?</a> BioProcess International. 14 (4), (2016).</li>
<li>Preti, R., Daus, A., Hampson, B., Sumen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+success+for+commercial+cell+therapy+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22BioProcess+International%22%5BJournal%5D)">Mapping success for commercial cell therapy manufacturing.</a> BioProcess International. 13 (9), 33-38 (2015).</li>
<li>Heathman, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+translation+of+cell-based+therapies%3A+clinical+landscape+and+manufacturing+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">The translation of cell-based therapies: clinical landscape and manufacturing challenges.</a> Regenerative Medicine. 10 (1), 49-64 (2015).</li>
<li>Lipsitz, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+roadmap+for+cost-of-goods+planning+to+guide+economic+production+of+cell+therapy+products%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">A roadmap for cost-of-goods planning to guide economic production of cell therapy products.</a> Cytotherapy. 19 (12), 1383-1391 (2017).</li>
<li>Lopes, A. G., Sinclair, A., Frohlich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost+Analysis+of+Cell+Therapy+Manufacture%3A+Autologous+Cell+Therapies%2C+Part+2%5BTitle%5D)+AND+%22BioProcess+International%22%5BJournal%5D)">Cost Analysis of Cell Therapy Manufacture: Autologous Cell Therapies, Part 2.</a> BioProcess International. 16 (4), 12-19 (2018).</li>
<li>Hanley, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+manufacturing+of+therapeutic+mesenchymal+stromal+cells+with+the+use+of+the+Quantum+Cell+Expansion+System%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Efficient manufacturing of therapeutic mesenchymal stromal cells with the use of the Quantum Cell Expansion System.</a> Cytotherapy. 16 (8), 1048-1058 (2014).</li>
<li>Leong, W., Nakervis, B., Beltzer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automation%3A+what+will+the+cell+therapy+laboratory+of+the+future+look+like%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Gene+Therapy+Insights%22%5BJournal%5D)">Automation: what will the cell therapy laboratory of the future look like?</a> Cell Gene Therapy Insights. 4 (9), 679-694 (2018).</li>
<li>Galipeau, J., Sensebe, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Stromal+Cells%3A+Clinical+Challenges+and+Therapeutic+Opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Stromal Cells: Clinical Challenges and Therapeutic Opportunities.</a> Cell Stem Cell. 22 (6), 824-833 (2018).</li>
<li>Salmikangas, P., Kinsella, N., Chamberlain, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+Antigen+Receptor+T-Cells+%28CAR+T-Cells%29+for+Cancer+Immunotherapy+-+Moving+Target+for+Industry%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Chimeric Antigen Receptor T-Cells (CAR T-Cells) for Cancer Immunotherapy - Moving Target for Industry?</a> Pharmaceutical Research. 35 (8), 152(2018).</li>
<li>James, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+short-term+gain+can+lead+to+long-term+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Gene+Therapy+Insights%22%5BJournal%5D)">How short-term gain can lead to long-term pain.</a> Cell Gene Therapy Insights. 3 (4), 271-284 (2017).</li>
<li>Rafiq, Q. A., Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolving+role+of+automation+in+process+development%2C+manufacture+of+cell%2C+gene-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Gene+Therapy+Insights%22%5BJournal%5D)">The evolving role of automation in process development, manufacture of cell, gene-based therapies.</a> Cell Gene Therapy Insights. 2 (4), 473-479 (2016).</li>
<li>Rafiq, Q. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+Automated+Approaches+for+Cell+and+Gene+Therapy+Manufacture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Gene+Therapy+Insights%22%5BJournal%5D)">Emerging Automated Approaches for Cell and Gene Therapy Manufacture.</a> Cell Gene Therapy Insights. 4 (9), 911-914 (2018).</li>
<li>Contreras, T. J., Jemionek, J. F., French, J. E., Shields, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Granulocyte+Isolation+by+Continuous+Flow+Centrifugation+Leukapheresis+and+Counterflow+Centrifugation+Elutriation+%28CFCL%2FCCE%29%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Human Granulocyte Isolation by Continuous Flow Centrifugation Leukapheresis and Counterflow Centrifugation Elutriation (CFCL/CCE).</a> Transfusion. 19 (6), 695-703 (1979).</li>
<li>Berger, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+elutriation+of+monocytes+within+a+closed+system+%28Elutra%E2%84%A2%29+for+clinical-scale+generation+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient elutriation of monocytes within a closed system (Elutra™) for clinical-scale generation of dendritic cells.</a> Journal of Immunological Methods. 298 (1), 61-72 (2005).</li>
<li>Chen, Y., Hoecker, P., Zeng, J., Dettke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+Cobe+AutoPBSC+and+Gambro+Elutra+as+a+platform+for+monocyte+enrichment+in+dendritic+cell+%28DC%29+therapy%3A+Clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Apheresis%22%5BJournal%5D)">Combination of Cobe AutoPBSC and Gambro Elutra as a platform for monocyte enrichment in dendritic cell (DC) therapy: Clinical study.</a> Journal of Clinical Apheresis. 23 (5), 157-162 (2008).</li>
<li>Whitford, W. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWhitford%2C+WG+%22Continuous+Processing+in+Pharmaceutical+Manufacturing%22">Continuous Processing in Pharmaceutical Manufacturing</a>. Subramanian, G. , (2014).</li>
<li>Scinogy. SMALL BATCH CELL SEPARATION, WASH & CONCENTRATION. , https://www.scinogy.com/projects (2019).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Jurkat+T+Lymphocyte+Leukemia+Cells+by+an+Engineered+Interferon-Alpha+Hybrid+Molecule%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Targeting Jurkat T Lymphocyte Leukemia Cells by an Engineered Interferon-Alpha Hybrid Molecule.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 42 (2), 519-529 (2017).</li>
<li>Moharram, S. A., Shah, K., Kazi, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+Acute+Lymphoblastic+Leukemia+Cells+Display+Activation+of+Different+Survival+Pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">T cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells Display Activation of Different Survival Pathways.</a> Journal of Cancer. 8 (19), 4124(2017).</li>
<li>Ling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+use+IDO+to+regulate+immunity+in+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells use IDO to regulate immunity in tumor microenvironment.</a> Cancer Research. 74 (5), 1576-1587 (2014).</li>
<li>Tanzeglock, T., Soos, M., Stephanopoulos, G., Morbidelli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mammalian+cell+death+by+simple+shear+and+extensional+flows%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Induction of mammalian cell death by simple shear and extensional flows.</a> Biotechnology and Bioengineering. 104 (2), 360-370 (2009).</li>
<li>Aguado, B. A., Mulyasasmita, W., Su, J., Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+viability+of+stem+cells+during+syringe+needle+flow+through+the+design+of+hydrogel+cell+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+engineering.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Improving viability of stem cells during syringe needle flow through the design of hydrogel cell carriers.</a> Tissue engineering. Part A. 18 (7-8), 806-815 (2012).</li>
<li>Zhu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydroxyethyl+starch+as+a+substitute+for+dextran+40+for+thawing+peripheral+blood+progenitor+cell+products%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Hydroxyethyl starch as a substitute for dextran 40 for thawing peripheral blood progenitor cell products.</a> Cytotherapy. 17 (12), 1813-1819 (2015).</li>
<li>Schwandt, S., Korschgen, L., Peters, S., Kogler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cord+blood+collection+and+processing+with+hydroxyethyl+starch+or+non-hydroxyethyl+starch%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Cord blood collection and processing with hydroxyethyl starch or non-hydroxyethyl starch.</a> Cytotherapy. 18 (5), 642-652 (2016).</li>
<li>Stroncek, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counter-flow+elutriation+of+clinical+peripheral+blood+mononuclear+cell+concentrates+for+the+production+of+dendritic+and+T+cell+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Counter-flow elutriation of clinical peripheral blood mononuclear cell concentrates for the production of dendritic and T cell therapies.</a> Journal of Translational Medicine. 12, 241(2014).</li>
<li>Mfarrej, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+assessment+of+the+Lovo+device+for+dimethyl+sulfoxide+removal+and+cell+concentration+in+thawed+hematopoietic+progenitor+cell+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical assessment of the Lovo device for dimethyl sulfoxide removal and cell concentration in thawed hematopoietic progenitor cell grafts.</a> Cytotherapy. 19 (12), 1501-1508 (2017).</li>
<li>Abonnenc, M., Pesse, B., Tissot, J. D., Barelli, S., Lion, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+washing+of+thawed+haematopoietic+progenitor+cell+grafts%3A+a+preclinical+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sanguinis%22%5BJournal%5D)">Automatic washing of thawed haematopoietic progenitor cell grafts: a preclinical evaluation.</a> Vox Sanguinis. 112 (4), 367-378 (2017).</li>
<li>Panes, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+allogeneic+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+%28Cx601%29+for+complex+perianal+fistulas+in+Crohn%27s+disease%3A+a+phase+3+randomised%2C+double-blind+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Expanded allogeneic adipose-derived mesenchymal stem cells (Cx601) for complex perianal fistulas in Crohn's disease: a phase 3 randomised, double-blind controlled trial.</a> Lancet. 388 (10051), 1281-1290 (2016).</li>
<li>Lim, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First-In-Human+Administration+of+Allogeneic+Amnion+Cells+in+Premature+Infants+With+Bronchopulmonary+Dysplasia%3A+A+Safety+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">First-In-Human Administration of Allogeneic Amnion Cells in Premature Infants With Bronchopulmonary Dysplasia: A Safety Study.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (9), 628-635 (2018).</li>
</ol>

SW, IF, ו-DJ הם סמנכ ל תפעול, סמנכ ל ומנכ Scinogy Pty. Ltd. הגישה למכשיר CFC סיפקה גם את Scinogy.

פרוטוקול חילופי המאגרים האוטומטיים המתואר הוא פשוט וידידותי למשתמש. עם זאת, קיימים מספר צעדי מפתח בפרוטוקול זה הקריטיים ודורשים תשומת לב מיוחדת. בניסיון שלנו, בעת עיבוד תאים גדולים כגון MSCs (קוטר ממוצע 10 – 15 μm) כל הפעלה צריכה לכלול לפחות 1 x 107 תאים כדי להשיג שחזור תאים אופטימלי (איור 4B). עיבוד תאים קטנים יותר, כגון תאים של ג'ורקאט (ממוצע ~ 10 יקרומטר קוטר), דורש סביב 3 x 107 תאים כדי להשיג מיטה תא פלואידיזד יציבה (איור 4</str...

הנוף של הרפואה המודרנית השתנה במהירות באמצעות ההתפתחויות האחרונות בגנים ובטיפולים מבוססי תא (GCT). כאחד התחומים הגדלים המהיר ביותר במחקר הטרנסלטיטי, המגזר GCT גם מתמודד עם אתגרים ייחודיים וחסרי תקדים. בנוסף התוצאות הקליניות חזקים, יעיל וחסכוני תהליכי הייצור חיוניים הצלחה מסחרית של GCT, אשר קשה במיוחד להשיג בקנה מידה קטן של ייצור1. עלות הזמן, העבודה, הבטחות איכות מוגדלים כאשר כל קבוצה של תאים מייצרת רק כמה מינונים עבור מטופל אחד במקום מאות או אלפים. בניגוד לטיפולים בתאי האלוגנאית בהם תהליכי הייצור הם יותר דומה לייצור של נוגדנים וחלבונים רקומביננטי, הטיפולים בתאי האוטוולוגי מיוצרים בדרך כלל כפעולות בקנה מידה קטן1. כתופעה חדשה יחסית בייצור ביופרמקולוגיה2, אפשרויות עיבוד תא בקנה מידה קטן מוגבלות כיום.
החלפת מאגר חיונית לייצור תאים. זהו אחד התהליכים במורד הזרם שבו התאים מוסרים ממדיית התרבות ומרוכז עבור קריוגנית או אינפוזיה. כיום, ייצור תאים בקנה מידה קטן מחיל לעתים קרובות תהליכים דומים לאלה בהגדרת המחקר האקדמי ומסתמך על חדרים נקיים מיוחדים כדי לשמור על עקרות3. תהליכי במורד הזרם ידני להשתמש בצנטריפוגות שחקן הראש כדי גלולה להשעות את התאים להפחתת נפח והחלפת מאגר. התהליכים הפתוחים הללו יקרים (כלומר, עבודה ותחזוקה בחדר נקי) ויש להם יכולת ייצור מוגבלת, שאינם אידיאליים לייצור מסחרי2,3.
יישום האוטומציה הוצע כפתרון לשיפור יעילות הייצור והשגת הפקות בקנה מידה מסחרי2. אין אפשרות להשיג עקרות במוצרים מבוססי-תא באמצעות שיטות מסורתיות המשמשות למוצרי ביולוגי, כגון הקרנה גאמה או סינון קצה מסוף. במקום זאת, מערכת סגורה אוטומטית נפרס כדי להפחית את הסיכונים של זיהום ואופרטורים המתבססים על חדרים נקיים כדי לשמור על עקרות4. אוטומציה של תהליך גם מטפלת בנושא המדרגיות על-ידי הפעלת מערכות מרובות הפועלות במקביל (היקף) או הגדלת קיבולת העיבוד של התקן בודד (היקף), אשר בתורו ממזער את השונות בין אופרטורים. יתרה מזאת, ניתוח מודל העלות של טיפולים עצמיים עולה כי אוטומציה עשויה להפחית את העלות של ייצור5,6. עם זאת, אין תועלת בעלות נמצא בתא גזע אוטוולוגי בניסוי קליני שבו פלטפורמת ייצור אוטומטית שימש7, רומז כי העלות היתרון של האוטומציה עשויה להיות תלויה בתהליך הייצור הפרטני.
קיימות אסטרטגיות שונות שבהן ניתן להציג אוטומציה בתהליך ייצור קיים. ניתן להשיג זאת גם על ידי יישום פלטפורמה משולבת מלאה או שרשרת עיבוד מודולרית מודולרי. קיימות מספר פלטפורמות משולבות באופן מלא הזמינות מסחרית עבור ייצור תאים אוטוולוגי, כגון הפלא של הדיג (Miltenyi Biotec), קוקון (ביוטכנולוגיה), ו קוונטום (טרמו BCT). פלטפורמות משולבות אלה, המתוארות לעתים קרובות כ-GMP-in-box, הן בעלי דרישות נמוכות לגבי תשתיות והן קלות לתפעול. עם זאת, יכולת הייצור של התקנה משולבת מלאה עשויה להיות מוגבלת על-ידי החממה המצורפת למערכת. לדוגמה, יכולת ה-culturing של הפרודיג'י מוגבלת לחדר 400 mL שלו8 ולמחסנית הקוונטית יש שטח מוגבל למשטח שהוגדר ל-2.1 m2 (שווה ערך ל 120 T175 מבחנות)7, שייתכן שלא יספיק למטופלים המחייבים מינונים גבוהים יותר של תאים9,10. בנוסף, הפלא והקוונטים יש תכונה נפוצה המגבילה את השימוש בהם: היחידה המבצעית מאוכלס על ידי קבוצה אחת של תאים לאורך תקופת התרחבות התא, ובכך להגביל את מספר הקבוצות שניתן לייצר על ידי כל יחידה11. הגישה המודולארית לאוטומציה היא יצירת שרשרת ייצור עם יחידות מודולריות מרובות המדמה את תהליך הייצור המסחרי12,13. גישה זו, אשר מפרידה את מכשיר התרבות ממכשיר הכביסה התא, יכול ובכך למקסם את יעילות הייצור. התקן עיבוד אידיאלי יהיה אחד כי הוא הסתגלות ומדרגי לייצור צרכים12.
הטכנולוגיה הצנטריפוגה (CFC), שתחילתה בשנות ה-70, היתה היסטוריה ארוכה בעיבוד תאים14. היא משיגה ריכוז והפרדה של תאים על-ידי איזון כוח צנטריפוגלי עם כוח זרימה נגדית. בדרך כלל, השעיית תא נכנס מהקצה הצר של תא התא תחת קצב זרימה קבוע תוך נתון לכוח צנטריפוגלי (איור 1א). זרימת הנוזל מופעל בכיוון ההפוך אל הכוח הצנטריפוגלי. הדבר נקרא כוח הזרימה הנגדית, היוצר מעבר צבע בתוך תא התא. כוח הזרימה הנגדית פוחת כאשר תא התא מתרחב מקצה תא התא המעוצב בצורת חרוט. תאים עם צפיפות גבוהה יותר קוטר גדול יותר יש קצב משקעי גבוה יותר, ולכן הם מגיעים כוח שיווי משקל לכיוון קצה של תא בצורת חרוט. חלקיקים קטנים יותר עלולים להגיע לשיווי האיזון כלפי בסיס החדר, או להיות קטנים מדי כדי להישמר בחדר והוא יישטף. הטכנולוגיה CFC ידועה בעיקר היישום שלה בעיבוד מוצרי apheresis כגון בידוד מונוציטים עבור טיפולים סלולריים הדנדריטים15,16. במונחים של חילופי מאגר, הטכנולוגיה CFC הוחלה רק בייצור בקנה מידה גדול17 ועדיין לשמש לייצור בקנה מידה קטן יותר של טיפולים אוטוולוגיים.
כדי לטפל בצורך בהתקן מתאים לייצור תאים בקנה מידה קטן, התקן CFC אוטומטי (ראה טבלת חומרים), פותח לאחרונה18. מכשיר העיבוד האוטומטי של התא משתמש בטכנולוגיה צנטריפוגה של זרימה נגדית כדי להסיר פסולת תאים ולהקל על החלפת מאגר. המכשיר מבצע חילופי מאגר עם ערכת שימוש יחיד שניתן לתקן באמצעות שקית העברת תאים, דבר המאפשר עיבוד תאים בתוך מערכת סטרילית ותחומה. כאן, אנו חוקרים את השימוש במכשיר מתקן צנטריפוגלי לבצע חילופי מאגרים בתרביות תאים של מיונקים בפרוטוקולים אוטומטיים. במחקר זה, בדקנו את פרוטוקול חילופי מאגר באמצעות תאים ויוקאט ותאי סטרומה mesenchymal (MSCs) כדי לדגמן סוגים שאינם מחסיד ותאי תאים, בהתאמה. התאים של ג'ורקאט הם תאים מונצח לעתים קרובות משמש למחקר של לוקמיה תא T חריפה19,20. MSCs הם תאי גזע למבוגרים אשר נחקרו בניסויים קליניים אנושיים עבור מגוון רחב של מחלות9.

<table><tbody><tr><td>20 מ"ל מזרקי Luer Lock</td><td>BD</td><td>302830</td><td></td></tr><tr><td>20% אלבומין בסרום אנושי (HSA)</td><td>CSL Behring</td><td>AUST R 46283</td><td></td></tr><tr><td>4-(Dimethylamino)benzaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>156477-25g</td><td></td></tr><tr><td>500 מ"ל שקית מלח IV</td><td>Fresenius Kabi</td><td>K690521</td><td></td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה-אנטי-מיקוטית</td><td>תרמו פישר 15240112</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מונה תאים אוטומטי (רוזנת)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות תא ספירת תאים</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>קוקטייל גירוי תאים (500x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>00-4970-93</td><td></td></tr><tr><td>שקיות העברת תאים</td><td>Terumo</td><td>T1BBT060CBB</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter AQueous בדיקת התפשטות תאים עם פתרון אחד (MTS)</td> צנטריפוגה <td>Promega</td><td>G3582</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>DMEM: F12 מדיה</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11320082</td><td></td></tr><tr><td>EnVision קורא צלחות</td><td>Perkin Elmer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10099141</td><td></td></tr><tr><td>Human Interleukin 2 (IL2) ערכת</td><td>Perkin Elmer</td><td>Al221C</td><td></td></tr><tr><td>אביזרי Luer (נקבה)</td><td>CPC</td><td>LF41</td><td></td></tr><tr><td>PC מחשב נייד או מכשיר טאבלט מחשב</td><td>ASUS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>קורא צלחות (SpectraMax i3)</td> <td>מכשיר מולקולרי</td><td>N/A</td> IFN-&gamma <td></td></tr><tr><td>אנושי רקומביננטי;</td><td>PeproTech</td><td>300-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotea מכשיר לעיבוד תאי צנטריפוגה נגד זרימה</td><td>Scinogy</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>ערכת עיבוד לשימוש חד פעמי של Rotea</td><td>Scinogy</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>RPMI מדיה</td><td>תרמו פישר מספריים</td> כירורגיים <td>11875119</td><td></td>מדעי</tr><tr><td></td><td>ProSciTech</td><td>420SS</td><td></td></tr><tr><td>חומצה טריכלורואצטית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T6399-250 גרם</td><td></td></tr><tr><td>טריפאן כתם כחול</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>אנזים עיכול טריפסין (אנזים TrypLE אקספרס)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12604013</td><td></td></tr></tbody></table>

מערכת הזרמה אוטומטית לעיבוד תאים בקנה מידה קטן

Automated Counterflow Centrifugal System for Small-Scale Cell Processing

מסחור מוצלח של גנים וטיפולים מבוססי תאים דורש תהליכי ייצור יעילים ומדרגיים. המרת מאגר וריכוז המוצר הם רכיבים חיוניים עבור רוב תהליכי הייצור. עם זאת, בשלבים המוקדמים של פיתוח המוצר, שלבים אלה מבוצעים לעתים קרובות באופן ידני. צנטריפוגה מבוי סתום ידני עבור חילופי מאגרים היא אינטנסיבית לעבודה, יקרה ולא מדרגית. מערכת אוטומטית סגורה יכולה לבטל ביעילות את שלב העמל הזה, אך ההטמעה יכולה להיות מאתגרת. כאן, אנו מתארים מכשיר חדש לעיבוד תאים מפותח המתאים לעיבוד תאים קטנים עד בינונית בקנה מידה ומטרתו לגשר על הפער בין עיבוד ידני ואוטומציה בקנה מידה גדול. פרוטוקול זה ניתן להחיל בקלות על סוגי תאים שונים ותהליכים על ידי שינוי קצב הזרימה ומהירות צנטריפוגה. הפרוטוקול שלנו הפגין שחזור תאים גבוה עם זמני עיבוד קצרים בהשוואה לתהליך הידני. תאים ששוחזרו מהתהליך האוטומטי שמרו גם על שיעורי ההתפשטות שלהם. ניתן להחיל את ההתקן כרכיב מודולרי בתהליך ייצור סגור כדי להתאים לשלבים כגון חילופי מאגרים, ניסוח תאים והקפאה קריוגנית.

בפרוטוקול זה, השתמשנו בתאים של ג'ורקאט ובMSCs כדוגמאות מייצגות כדי להדגים את תהליך החלפת המאגר האוטומטי. במהלך התהליך, שיתפו התאים של ג'ורקאט ו-MSCs את אותם שלבי עיבוד עם הבדלים בכוח צנטריפוגלי ובמהירות המשאבה השולטים בקצב הזרימה (שולחן 1). איור 2 מראה תמונות הנציגה שנתפסו על ידי המצלמה של איך מיטת התאים fluidized עשוי להופיע במהלך תהליך חילופי מאגר. בדרך כלל, המיטה התאים flu, ידמה את התמונה באיור 2A, שבו התאים לצבור באמצע לכיוו...

אוטומציה היא המפתח לשינוי קנה מידה וניהול עלויות בייצור תאים. כתב יד זה מתאר את השימוש בהתקן זרימת תאים צנטריפוגליים לאוטומציה של החלפת מאגר ושלבי הריכוז של התא לצורך ביוביוטינג בקנה מידה קטן.

Successful commercialization of gene and cell-based therapies requires manufacturing processes that are cost-effective and scalable. Buffer exchange and ...

פרוטוקול זה מספק פתרון לחילופי מאגרים אוטומטיים סגורים ולריכוז עבור ייצור תאים בקנה מידה קטן. חשוב לציין, חילופי חיץ הוא מסוגל להתבצע עם התאוששות גבוהה משלוח של נפח קטן מאוד של מוצר מרוכז. משתמשים חדשים עשויים להיאבק כדי לבצע את כל שלבי האוטומציה.תרגול תכנות שלבים אלה וביצוע ריצות בדיקה עם מדיום הן דרכים טובות להכיר את המכשיר. לפני תחילת חילופי החיץ, בדרגה 2 ראש זרימה למינארית, להשתמש מזרק ומחט הרכבה כדי להסיר 50 מיליליטר של תמיסת מלח משקית מלוחים 500 מיליליטר. החלף כרך זה ב-50 מיליליטר של אלבומין סרום אנושי של 20%, וקצר את תאי העניין מכלי התרבות שלהם.לאחר הספירה, השתמש במזרק כדי לטעון את התאים לתוך שקית העברה, ולהשתמש במנעול לולר כדי לחבר את תיק ההעברה ערכת עיבוד חד-שימושית. לאחר מכן חבר את השקית שהוכנה בעבר של מאגר לשטוף את ערכת עיבוד חד שימוש. כדי להגדיר חילופי מאגרים אוטומטיים, פתח את ממשק המשתמש הגרפי של ההתקן ולחץ על לחצן התחל.לחץ על חדש כדי ליצור פרוטוקול חדש, ולחץ על פקד כדי לבחור את השסתומים להיפתח ולסגור, מהירויות צנטריפוגלי ומשאבה, כיוון המשאבה, ואת הגורמים המפעילים פעולה. לאחר הגדרת כל הפרמטרים, לחץ על שמור. תלה את השקיות המתאימות המחוברות במכשיר והצב את ערכת העיבוד החד-פעמית במחשב.לאחר מכן לחץ על לחצן התחבר והורד את התוכנית השמורדת. כאשר לחצן ההפעלה נדלק, הפרוטוקול מוכן להפעלה. כדי לבצע את חילופי המאגר האוטומטיים, פתח את המהדקים הידניים עבור צינורות תיק ההעברה ולחץ על התחל כדי ליזום את תוכנית חילופי המאגרים.בסוף שלב אוטומציה שש, התהליך יושהה עקב הפעלת חיישן הבועה על ידי האוויר בשקית ריקה עכשיו. אם התיק אכן ריק, לחץ ליד כדי להעביר את התהליך לשלב הבא. לאחר סיום התהליך האוטומטי, סגור את כל מהדקי הצינורות ופתח את דלת ההתקן.לאחר מכן הסר את הערכה החד-שימושית מההתקן ונתק את המזרק כדי לאפשר איסוף של התאים לצורך ניתוח עוקב. בדרך כלל, מיטת התא הנוזלי תופיע כמיוצגות בתמונה זו כאשר התאים מצטברים באמצע ולכיוון חזית הקונוס, חלל קטן בקצה התא שבו התאים אינם מצטברים ופתח גלוי בתוך תא טעינת הכניסה. המיטה הסלולרית הנוזלית עשויה להיות דחוסה בעת הצגת מאגר חדש כי הוא צמיגות שונה או צפיפות.קצב זרימה גבוה עשוי להיות מיושם כדי לבחור עבור תאים חיים כמו תאים מתים הם קטנים וקלים יותר והוא יכול להיות נאלץ לצאת מהתא על ידי הגדלת קצב הזרימה. התהליך האוטומטי של זמן העיבוד של חילופי מאגרים קצר יותר מזה של תהליך חילופי המאגר הידני. בניתוח זה, שיעורי השחזור בין המדריך לתהליכים האוטומטיים היו דומים עבור שני סוגי התאים שנבדקו, וכדאיות התא לא הושפעה משני התהליכים.התאים שנמצאו הפגינו שיעורי התפשטות דומים, יכולות לייצר ציטוקינים ופעילויות איידיאו, ללא קשר לסוג העיבוד. חשוב לזכור כי פרוטוקול זה משמש רק כקווי מנחה, ולכן משתמשים צריכים לתכנת את קצב הזרימה ואת מהירות הצנטריפוגה בהתאם לסוג התא והמאגר שלהם. חילופי מאגרים הם שלב ביניים בייצור תאים שעשויים לעקוב אחר הרחבת תרבות התאים או הקפאה וניסוח.המטרה היא לפתח דרכים להקיף את התהליך כולו. צנטריפוגה נגדית היא פלטפורמה רב-תכליתית מאוד. מחקרים עתידיים יחקרו יישומים בבחירת תאים, כגון הסרת תאים מתים ובידוד תאי מונונוקלוס ממוצר chorisis.

automated-counterflow-centrifugal-system-for-small-scale-cell

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

אנחנו פיתחו תרבות תא אוטומטית וחקירת פלטפורמה לניסויי גירוי תא מיקרו בקנה מידה. הפלטפורמה מציעה שליטה פשוטה, תכליתית, ומדויקת בטיפוח ועידוד אוכלוסיות קטנות של תאים, ומחל lysates לניתוחים מולקולריים. הפלטפורמה מתאימה גם למחקרים המשתמשים בתאים ו / או חומרים כימיים יקרים.

פלטפורמה אוטומטית צדדי לניסויים בגירוי תא מיקרו בקנה מידה

פרוטוקול זה מתאר ארכיטקטורת מערכת לביצוע הפרדות חלקיקים אוטומטיות בנפח קטן (0.15-1.5 מ"ל) באמצעות מכשיר מיקרופלואידי, ודן בשיטות לייעול הביצועים והתפעול של מכשיר אקוסטופלואידי.

פלטפורמת microfluidic לעיבוד מדגם Precision הקטן-נפח ושימוש בו לגודל חלקיקים הביולוגיים נפרדים עם Microdevice אקוסטי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד ותרבות תאים בודדים עם פלטפורמה מיקרופלואידית, המשתמשת בתפיסת עיצוב מיקרו-באר חדשה כדי לאפשר בידוד תא בודד ביעילות גבוהה ותרבית משובטת לטווח ארוך.

פלטפורמת Microfluidic עבור בידוד תפוקה גבוהה מתא בודד ותרבות

פרוטוקול זה מתאר את השימוש של אסטרטגיית מיקרופלואידיקה מבוסס אינרציאלית חיץ החליפין לטהר תאים מהונדסים מיקרו / ננו-חלקיקים עם דלדול יעיל של חלקיקים מאוגד.

Microfluidic מאגר Exchange להנדסת תאים ללא התערבות מיקרו / Nanoparticle

פרוטוקול זה מתאר את השימוש elutriation צנטריפוגלי כדי להפריד בין תאים לוקמיה לימפובלסטית חריפה העיקרי לשלבים שונים של מחזור התא.

הכנה של תאים לוקמיה לימפובלסטית חריפה העיקרית בשלבים שונים של מחזור התא על ידי צנטריפוגלי Elutriation

מאמר זה מציג שיטה לבנייה והפעלה של מערכת תרבית תאים רב-ערוצית רב-ערוצית בעלות נמוכה למדידת הדינמיקה של הפרשה וקצבי ספיגה של מומסים בתהליכים תאיים. המערכת יכולה גם לחשוף תאים לפרופילי גירוי דינמיים.

ביוריאקטור פרפוזיה מרובה זרמים משולב עם פיצול מוצא לתרבית תאים דינמית

פרוטוקול זה מספק שיטת בידוד מהירה וספציפית לגודל עבור בועיות חוץ-תאיות קטנות על ידי מיטוב גודל פיית ריסוס האוויר, לחץ נוזל הנדן, לחץ זרימת הדגימה, מתח, רווח ופרמטרי סף הפעלה.

אופטימיזציה של פרמטרים למיון ציטומטרי של זרימה לבידוד וטיהור של בועיות חוץ-תאיות קטנות בתפוקה גבוהה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקצירת תאים דבקים מצלוחיות רב-שכבתיות באופן סגור חצי אוטומטי באמצעות מערכת צנטריפוגות נגד הזרמה. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם עבור קצירת תאים דבקים ותרחיפים מפלטפורמות הרחבת תאים אחרות עם שינויים מעטים בשלבים הקיימים.

עיבוד תאי גזע מזנכימליים אנושיים ליישומים קליניים באמצעות זרימת עבודה סגורה חצי אוטומטית

שלפוחיות חוץ-תאיות טומנות בחובן הבטחה עצומה ליישומים ביו-רפואיים, אך שיטות הבידוד הנוכחיות גוזלות זמן רב ואינן מעשיות לשימוש קליני. במחקר זה אנו מציגים מכשיר מיקרופלואידי המאפשר בידוד ישיר של בועיות חוץ-תאיות מכמויות גדולות של נוזלים ביולוגיים באופן רציף ובמינימום צעדים.

בידוד חד-שלבי של בועיות חוץ-תאיות מדגימות בנפח גדול באמצעות התקן מיקרופלואידי A4F מפוצל

פרוטוקול זה מתאר שיטה חסכונית להאצת חילוץ DNA מפלסמיד. באמצעות מדפי תלת-ממד מותאמים אישית התואמים לרוטורים סטנדרטיים עם פלטות דלי מתנדנדות, חוקרים יכולים לעבד עד 48 עמודי סיבוב עם פקקים או עד 116 עמודות סיבוב ללא פקקים בו-זמנית, מה שמקצר משמעותית את זמן הטיפול בהשוואה לשיטות מיקרוצנטריפוגה ידניות.

חילוץ DNA בעמודה בקצב בינוני באמצעות מדפי 24 בארות

למדו איך לבצע החלפת מכלי אוטומטית בתאים בקנה מידה קטן באמצעות מכשיר צנטריפוגה נגד זרימה. שיטה זו משפרת שיעורי שחזור ומספקת נפח מרוכז קטן בתהליך ייצור תאים.

מערכת הזרמה אוטומטית לעיבוד תאים בקנה מידה קטן

גלה סרטונים נוספים