Name: מודל מסרטן העור המושרה כימי באמצעות דימתילבנץ a פחם ו-12-O-טטרדאנואיל פורבול-13-אצטט (DMBA-הסברתי) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 12 s
Description: חקור מודל קרצינוגנזה דו-שלבי בעור באמצעות DMBA ו-TPA לחקר תפקיד הדלקת בסרטן העור. שיטה זו מאפשרת לחקור אתחול וקידום גידולים בניסויים בחיות מודל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

העבודה הזאת ממומנת על ידי האקדמיה של פינלנד (מענקים 25013080481 ו 25013142041 (I.J.), 286377 ו 295814 (שוטרים), 287907 (טי ג'יי), פדאימיקי וקרן סקארי Sohlberg (שוטרים, טי-ג'יי), הקרן הרפואית הפינית (ט), מחקר המדינה התחרותית מימון של התחום אחריות מומחה של אוניברסיטת טמפרה החולים (הענקת 9V049 ו 9V049 (מוסמך), 9V049 ו 9V049 (טי ג'יי), מימון מחקר המדינה תחרותי של שטח אחריות מומחה של מעבדות Fimlab (גרנט X51409 (I.J.)), Tays הקרן לתמיכה (I.J., הבסיס, טי-ג'יי), קרן שחפת טמפרה (I.J., בסיס, טי-ג'יי), קרן התרבות הפינית (M.V.), קרן פאולו (ט), אגודת הסרטן של פינלנד (בסיס), וקרן אמיל אלטונין (ט).

הפרוטוקול המתואר כאן אושר על ידי ועדת האתיקה של בעלי החיים הלאומית של פינלנד (פרוטוקול מספר Eסאווי/23659/2018).
1. ניסויים בבעלי חיים, ריאגנטים וציוד
<ol><li>להשתמש בגיל ועכברים מתאימים למין. התחל את המחקר בגיל 7 עד 9 שבועות, כי העור ברוב העכברים הוא בתוך הזמן (שלב המנוחה) סביב גיל2.</li>
	<li>שימו לב להתנהגות של בעלי החיים במהלך הלימודים ואם הם נלחמים, אשר לעיתים קרובות מתרחשים אצל זכרים, הבית אותם בנפרד. קרבות עלולים לגרום חתכים בעור, אשר לקדם את היווצרות הגידול. עכברים נשיים העדיפו בשל ההתנהגות פחות אגרסיבית שלהם. גודל קבוצה ניסיוני טיפוסי משתנה בין 8 – 20 בעלי חיים לכל קבוצה24,25,26,27. הערה: חישובי צריכת חשמל המבוססים על השונות הביולוגית הנראית במחקרים קודמים מסייעים בבחירת גודל קבוצה גדול מספיק. זנים המשמשים כדוגמאות במאמר זה כוללים Balb/c ו C57BL/6. עם זאת, רבים אחרים העכבר זנים כגון sencar ו-fvb כבר בשימוש עם dmba-הסברתי-model, כמו גם וכוכב ו ג ' ספראג-דאולי2,28,29. יש צורך ברישיון מהוועדה הלאומית או המקומית לעבודת בעלי חיים לפני החניכה של המחקר. בנוסף שיקולי רווחה כלליים, נקודות הקצה הספציפיות לדגם הן בדרך כלל קרצינומה של תאים קשקשיים (SCC) וזיהום של העור. שריטות בעור בשל גירוד לאחר היישום של כימיקלים tumorigenic אצטון הוא אופייני, אבל אחרת בעלי החיים צריכים להראות שום סימנים של אי נוחות. שקילה קבועה (למשל, 2x בחודש) עוזר להעריך את רווחתם של בעלי החיים.</li>
	<li>השתמש DMBA ו הסברתי, שניהם מדולל אצטון. ריכוז העבודה של DMBA הוא 250 g/L. מנה עבור בעל חיים אחד הוא 50 μg של DMBA ב 200 μL של אצטון. ריכוז המניה של הסברתי הוא 125 g/L וריכוז הטיפול 25 g/L. מינון הסברתי עבור בעל חיים אחד הוא 5 μg ב 200 μL של אצטון. זהירות: dmba הוא מזיק אם בלע ועלול לגרום לסרטן. אצטון מתאדה במהירות. והוא דליק זה עלול לגרום לסחרחורת. ולהרגיז עיניים השתמש במסכת נשימה ו/או בעבודה מתחת לזרימת ואקום. שינוי כפפות לאחר טיפול בכל הכימיקלים האלה. כלובים מאווררים באופן אינדיבידואלי מונעים את התפשטות הכימיקלים בזמן הדיור של העכברים. לאחר היישום, לאסוף את הטיפים הצינורות המשמשים לטיפול DMBA ולהיפטר בזבוז מסוכן. הערה: dmba חייב להיות מוגן מפני אור. הסברתי מדולל מאוחסן ב-20 ° c, רצוי מוגן מפני אור.</li>
	<li>להשיג את הציוד הבא: קנה מידה, מכונת גילוח רגילה עבור הפרווה, פיפטות וטיפים של גודל מתאים, סרגל רגיל, מצלמה דיגיטלית, פנקס או עט או מחשב עבור הקלטת הפפילומה, מערכת הרדמה שואף או הרחקה עכבר עם פתח בחלק האחורי, ומערכת הרדמה פחמן דו חמצני להקריב עכברים.</li>
</ol>2. העור הפפילומה האינדוקציה וקידום
<ol><li>תגלח את העור האחורי. ותשקול את החיה מאוחר יותר, לגלח את העור בכל פעם שצריך, אבל לא בזמן החשיפה הכימית. הערה: להיזהר בעת גילוח סביב הפפילומה ולהימנע מלעשות חתכים על העור. שוקלים כל חיה כל 2 שבועות כדי להבחין בכל הפסד פוטנציאלי במשקל.</li>
	<li>החל 50 μg של DMBA ב 200 μL של אצטון למריחה על האזור מגולח באמצעות פיפטה 48 h לאחר גילוח הפרווה. אם צריך, לרסן את החיה באמצעות הרדמה שאיפת אור או הרחקה עכבר.</li>
	<li>לאחר 7 ימים, לתת את המינון הראשון הסברתי. החל 5 μg של הסברתי ב 200 μL של אצטון למריחה על הראש עם פיפטה 2x בשבוע, עדיף בימים שני וחמישי או שלישי ושישי.</li>
	<li>לספור, להקליט, ולצלם. את הפפילומה כל שבוע מסה ממשית גדולה מ-1 מ"מ נחשבת לפפילומה אם הוא נשאר יותר משבוע אחד. סמנו כל הפפילומה האישי על המפה ולפרט את גודלה כל שבוע. לאחסן תצלומים דיגיטליים.</li>
</ol>3. הקרבת בעלי חיים ואוסף דוגמאות
<ol><li>המשך הטיפול עד תגובת הגידול מגיע לרמה. באופן כללי, נטל הפפילומה צפוי להגדיל 10 – 20 שבועות לאחר החניכה, בהתאם למתח העכבר המשמש. המישור צפוי בתוך 15 – 20 שבועות. חלק קטן של הפפילומה (תחת 3%) יכול להתפתח SCCs בתוך 20 – 50 שבועות2.</li>
	<li>להקריב את החיות 24 שעות אחרי היישום האחרון הסברתי. השימוש הרדמה פחמן דו חמצני עם פריקה צוואר הרחם או שיטה אחרת מתאים.</li>
	<li>בהתאם לשאלת המחקר, אסוף חומר מתאים לדוגמה מבעלי החיים30,31.<ol>
<li>לדוגמה, קחו דגימות דם לפני ההקרבה והפרידו את הפלזמה.</li>
		<li>גזור פיסות העור עבור אימונוהיסטוכימיה (IHC) כתמים (למשל, המטאוקסילין ואאוזין, תאים מתרבים או דלקתיים).</li>
		<li>השתמש באגרופים ביופסיה כדי לאסוף חתיכות עור עם רקמת הפפילומה או לא הפפילומה (מטופלים) העור עבור ביטוי גנים (g., qPCR) ו/או חלבונים (g., כתם מערבי או אליסה).</li>
		<li>לאסוף פיסת הטחול ואת בלוטות הלימפה ניקוז העור עבור הניתוח cy, הזרמת להזרים לזרום אם ניתוח מפורט יותר של אוכלוסיות תא החיסון רצוי. ניתן גם להפריד שכבות באפידרמיס והעורי לניתוח נוסף.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. סטטיסטיקות
<ol><li>לצייר עקומת קפלן-מאייר הישרדות של זמן הפפילומה החופשי ולהשתמש במבחן בדרגה של היומן-קוקס להישרדות. צייר עיקול ליניארי של מספר הפפילומה בשבוע. מכיוון שזהו נתוני ספירה, השתמש במודל רגרסיה לא לינארית. להתייעץ עם סטטיסטיקאי במידת הצורך.</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

DMBA-הסברתי-סרטן העור המושרה הוא אחד הדגמים הנפוצים ביותר של סרטן, כי הוא מאוד מאפשר ומספק מידע על התקדמות הגידול מפני חניכה ממאירות. מדידת תוצאת המפתח, היווצרות הפפילומה, היא בקלות ובאמינות כמותית. המודל מטפל הן בייזום הגידול (הישרדות ללא גידול) והתקדמות (מספרי גידול וגדלים) בו זמנית. המודל מתאים לחקר תרכובות שונות, כגון therapeutics פוטנציאליים, ואת ההשפעות של גנים בודדים על התקדמות הגידול בבעלי חיים מהונדסים גנטית. כאשר מיישמים את המודל עבור כל זן נתון, מומלץ ללמוד את הספרות הקיימת כדי להשיג מושג איך המתח מגיב במודל (...

סרטן הוא אחד הגורמים המובילים למוות בעולם. לכן, יש דרישה לפתח מודלים אמין של מחלות נסיוניות כדי להשיג הבנה טובה יותר של המחלה, כמו גם לחקור גישות טיפוליות פוטנציאליות. אחד הניסויים הנפוצים ביותר ב vivo מודלים לחקר התפתחות סרטן העור הוא המושרה כימית שני בשלב העור קרצינובגנזה דגם1,2. המודל מספק כלי לחקר ייזום הגידול, קידום, והתקדמות בנוסף אירועים ספציפיים כגון הסתננות התא החיסונית אנגיוגנזה.
כדי להשתמש במודל העור של שני השלבים, העור האחורי של עכברים מטופל עם שני כימיקלים שונים, כי ביחד לגרום להיווצרות הגידול. המודל הוא יזם עם מינון נמוך של המוטגן, DMBA, ואחריו חשיפה ממושכת למקדם הגידול, הסברתי3 (איור 1). Dmba מוטציה דנ א באופן אקראי על ידי יצירת הפונקציות הקווננטי עם ה-dna של תאים עוריות ותאי גזע העיקרי keratinocyte4,5,6,7. כמה מוטציות אקראיות אלה להתרחש במקום הפרוטו-אונאוגן, כגון Hras1 (מוטציות ב קראס ו Nras מזוהים גם) ואת ההמרה של פרוטו-אונגנים כדי אונגנים כוננים את היווצרות הגידול תחת גירויים נכונה. הסברתי, בתורו, הוא הגידול הנפוץ ביותר בשימוש בצמיחה-הסוכן לקדם. המטרה המולקולרית שלה היא קינאז חלבון (PKC)8. הסברתי גם מפעיל Wnt/β-catenin איתות כי הוא חיוני להיווצרות הגידול במודל9. חשיפה חוזרת וממושכת אל הסוכן לקדם מוביל איתות התא משופר, הגדלת הייצור של גורמי גדילה, תגובה דלקתית מקומית, אשר ברור בשל סינתזה מוגברת DNA וחדירת תאים דלקתיים בעור המטופל.
מתווכים דלקתיים מפתח במודל DMBA-הסברתי זוהו10. Interleukin-17a (IL-17a) ידוע להיות טווריגניים במיוחד במודל dmba-הסברתי11,12. היא פועלת בסינרגיה עם אינטרלוקין 6 (IL-6) ומשתתפת ב-מקרופאג ובגיוס נויטרופילים13,14. בנוסף, CD4+ T תאים נויטרופילים הוכחו להיות tuמוריגניים במודל dmba-הסברתי. לבסוף, מקרופאגים יכולים גם לקדם tuמוריגנזה במודל15,16,17.
במהלך שלב הקידום, התפשטות התא של התאים מוטציה הוא משופר והיפרפלזיה מתמשכת של האפידרמיס נשמר1. זה מוביל התפתחות הפפילומה בעור בתוך 10 – 20 שבועות, אחרי אשר הפפילומה להתחיל להמיר גידולים ממאירים, קרצינומה של תאים קשקשיים (SCCs)2. עם זאת, פחות מ 10% של התקדמות הפפילומה כדי ממאירות, למרות אחוז זה גם תלוי ברקע גנטי של עכברים2,18. במשך עשורים זה לא היה ידוע איזה סוג של תאים היו בתחילה מוטציה בגידולים המובילים ממאירות, אף על פי מחקרים מסוימים דיווחו בבירור תכונות נפרדות של גידולים ממאירים בהשוואה שפיר הפפילומה19,20. עם זאת, מחקרים שנעשו לאחרונה הגדילו מאוד את ההבנה שלנו על מקור המשובטים של היווצרות הגידול ב-DMBA-הסברתי מודל21. . בסדר, 22 23. זה הוכח כי הן מח עצם נגזר האפיתל תאים ותאי גזע שיער זקיק לתרום את היווצרות הגידול22. מחקרים ספציפיים השושלת שושלת היוחסין חשפה כי הפפילומה השיפיר הם של מקור חד שבטיים, אבל הם לגייס אוכלוסיות חדשות אפיתל החדש21,23. עם זאת, רק אחד של שיבוטים תא מתפקד כמנהל התקן עבור קרצינופוגנזה; הוא מכיל מוטציה של Hras23. ההתקדמות ליצירת קרצינומה קשורה. לסריקת שבטיים23
DMBA מסרטן יוזם היווצרות הפפילומה ו הסברתי מקדמת צמיחת הגידול. מכאן, את החניכה הגידול ניתן ללמוד בנפרד מן הקידום על ידי הפרעה בניסוי לפני תקופת הטיפול הסברתי. כמו התקדמות הגידול הוא למד שבועי הוא מציע הזדמנות גדולה לניתוח מפורט הגידול בגידולים במהלך המחקר. בגלל הגידולים מופקים על ידי כימיקלים חיצוניים, מוטציה אונגניים ב germline היא מיותרת. כך, לימוד ההשפעות של רקע גנטי (למשל, הסתרה/העברה לעומת סוג פראי) על tuמוריגנזה הוא פשוט2. בסכום, DMBA/הסברתי מודל סרטן העור היא גישה שימושי במיוחד עבור לימוד התפקיד של מערכת החיסון בהתקדמות הגידול, כמו גם להערכת ייזום הגידול וקידום צעדים עצמאית או באופן בלתי תלוי.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60445/60445fig1a.jpg"> איור 1: DMBA-הסברתי-המושרה העור קרצינואוגנזה מודל המתאר. DMBA מסרטן הוא למריחה על הראש כדי לגרום למוטציות DNA בשלב החניכה של המודל. הצמיחה-קידום הסוכן הסברתי מנוהל 2x בשבוע כדי לשפר את התפשטות התא במהלך שלב הקידום, המוביל להתפתחות של הפפילומה בעור. בעלי חיים הם הקריבו לאחר תגובת הפפילומה מגיע לרמה, בדרך כלל בתוך שבועות 15 – 20, בהתאם לרקע הגנטי של העכברים. חלק קטן של הפפילומה יכול עוד להתפתח SCCs בתוך 20 – 50 שבועות. כדי ללמוד אירועים מוקדמים בטקס החניכה ובשלב הקידום המוקדם, ניתן לאסוף דגימות (למשל, זמן קצר לאחר הסברתי השני). צילום מייצג והמטאוקסילין וחתך אאוזין ויטראז ' של הפפילומה על העור C57BL/6 לאחר 19 שבועות של טיפול מוצגים. סרגל קנה מידה = 0.1 מ"מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60445/60445fig1large.jpg" target="_blank">נא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<table><tbody><tr><td>מילוי 1000 ul RPT XL קצה מסנן מדורג (סטרילי), מילוי</td><td>Starlab</td><td>S1182-1730-C</td><td></td></tr><tr><td>300 ul RTP קצה מסנן מדורג (סטרילי), מילוי</td><td>Starlab</td><td>S1180-9710-C</td><td></td></tr><tr><td>7,12-Dimethylbenz[a]anthracene (DMBA)</td><td>Sigma</td><td>D3254-100MG</td><td>מזיק בבליעה ועלול לגרום לסרטן. יש לאחסן מוגן מפני אור.</td></tr><tr><td>אצטון</td><td>סיגמא</td><td>1000141011</td><td>מתאדה במהירות ודליק.</td></tr><tr><td>Attane vet 1000 mg/g</td><td>Piramal טיפול קריטי מוגבל</td><td></td><td>נוזלי isoflurane לשאיפה</td></tr><tr><td>קוצץ מופעל על ידי סוללה איזיס</td><td>אלברט Kerlb GmbH</td><td>GT421</td><td>לגילוח הפרווה</td></tr><tr><td>CONTRAfluran-Restgasfilter</td><td>ZeoSys GmbH</td><td></td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>Linex Nature N1030 סרגל 30 ס"מ</td><td>סיכות יתרון עסקי</td><td>60383</td><td>למדידת פפילומות</td></tr><tr><td>תא CO2 בינוני 300 x 200 x 200 מ"מ - Red</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN045AR</td><td>להקרבה</td></tr><tr><td>Mekasoft</td><td>Mekalasi</td><td>23008</td><td>עכברי כיסוי שולחן</td></tr><tr><td>(Balb/c JRj)</td><td>מעבדות</td><td></td> Janvier <td>זנים אחרים אפשריים גם</td></tr><tr><td>עכברים (C57BL/6JRj)</td><td>Janvier labs</td><td></td><td>זנים אחרים אפשריים גם</td></tr><tr><td>Panasonic Lumix DMC-FS5 מצלמה דיגיטלית</td><td>Panasonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Merck</td><td>30525-89-4</td><td>לדגימות היסטולוגיה</td></tr><tr><td>Phorbol 12-myristate 13-acetate aka 12-Otetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)</td> <td>Enzo</td><td>BML-PE160-0001</td><td></td></tr><tr><td>איזון מדויק PLJ-C/PLJ-G</td><td>KERN & SOHN GmbH</td><td>PLJ 600-3CM</td><td></td></tr><tr><td>מערכת CO2 מוגדרת מראש -2 Chamber-S / S דיור</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN044BX</td><td>להקרבה</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Qiagen</td><td>76104</td><td>לדגימות חומצות גרעין</td></tr><tr><td>Tacta pipette 100-1000 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729070</td><td></td></tr><tr><td>Tacta pipette 20-200 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729060</td><td></td></tr><tr><td>UNO מילוי מפתח הרדמה</td><td>Scintica Instrumentation Inc.</td><td></td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>מסכת פנים UNO לעכבר</td><td>Scintica מכשור בע"מ.</td><td></td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>UNO FM2200 מד זרימה</td><td>Scintica מכשור בע"מ.</td><td></td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>יחידת פליטת גז UNO</td><td>Scintica מכשור בע"מ</td><td></td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>UNO Induction Box</td><td>Scintica מכשור בע"מ</td><td></td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>UNO200VAP וופורייזר</td><td>Scintica מכשור בע"מ.</td><td></td><td>להרדמה</td></tr></tbody></table>

מודל מסרטן העור המושרה כימי באמצעות דימתילבנץ [a] פחם ו-12-o-טטרדאנואיל פורבול-13-אצטט (dmba-הסברתי)

Chemical-Induced Skin Carcinogenesis Model Using Dimethylbenz[a]Anthracene and 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

סרטן היא אחת ממחלות האדם ההרסניות ביותר. מודלים של סרטן ניסיוני חשוב לקבל תובנה לתוך הגומלין המורכבים של סוגי תאים שונים וגנים בקידום התקדמות הגידול כדי לספק פלטפורמה לבדיקת יעילות של גישות טיפוליות שונות. אחד הדגמים הנפוצים ביותר בשימוש בסרטן דלקתיות הניסויים הוא DMBA-הסברתי שני בשלב העור קרצינופוגנזה מודל. היווצרות הגידול הוא המושרה במודל זה על ידי יישום מקומי של שני כימיקלים שונים, 7, 12-diמתילבנץ [a] פחם (DMBA) ו 12-O-טטרדאנואיל פורובול-13-אצטט (הסברתי), כי ביחד לגרום היווצרות הפפילומה בעור. כמו התוצאה העיקרית היא היווצרות הפפילומה בעור, המודל הוא אידיאלי, אמין, הדרך הניתן ליישום לטפל בשני הגידול (הישרדות ללא הגידול) ואת התקדמות הגידול (מספר וגודל של גידולים גלויים). ההשפעות של הטיפול DMBA-הסברתי מועברים באמצעות מנגנון דלקתי, מה שהופך את המודל הזה מתאים במיוחד ללמוד את התפקיד של מערכת החיסון במערך הגידול. עם זאת, מודל זה מוגבל לעור ומשטחים אחרים שבהם ניתן להחיל את הכימיקלים. פרוטוקול מפורט מסופק במאמר זה כדי להשתמש במודל בהצלחה.

התוצאה העיקרית היא ההישרדות (כלומר, הפפילומה החופשי) הזמן בין קבוצות הטיפול או הגנוטיפ. התוצאה המשנית היא מספר הפפילומה בשבוע בכל קבוצה (איור 2). התוצאות הצפויות הן הבדל משמעותי מבחינה סטטיסטית בזמן הפפילומה החופשי ובמספר הפפילומה בין קבוצות הניסוי (שתיים או יותר). מומלץ לספור את מספר הפפילומה ולצייר עיקול במהלך הקידום (הסברתי) השלב כדי לקבל מושג על ההבדלים בין הקבוצות בשלב זה. הפסקת הניסוי מוקדם מדי עלולה להסתיר הבדל משמעותי סטטיסטית.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page...

שני השלבים העור קרצינונוספגנזה נגרמת על ידי שני כימיקלים למריחה על הגוף. מוטגן 7, 12-diמתילבנץ [א] פחם) גורם מוטציות בתאים עוריות ויישום מתמשך של מקשה צמיחה כללית 12-O-טטרדקליאיל פורובול-13-אצטט מאיץ הפפילומה העור היווצרות.

מודל מסרטן העור המושרה כימי באמצעות דימתילבנץ [a] פחם ו-12-O-טטרדאנואיל פורבול-13-אצטט (DMBA-הסברתי)

Cancer is one of the most devastating human diseases. Experimental cancer models are important to gain insight into the complex interplay of different ...

מודל זה של סרטן עור דו-שלבי מאפשר לחקור את תפקיד הדלקת בסרטן העור ומאפשר למחקר את התחלת הגידול כתהליך נפרד מהתקדמות הגידול. היווצרות הגידול במודל זה היא המושרה כימית ומאפשרת את השימוש זנים נוקאאוט ללמוד את ההשפעות של גורמים סביבתיים או מועמדים טיפוליים. המודל מתאים היטב לחקר תפקידה של המערכת החיסונית ואנגיוגנזה בסרטן.זה מדגים פתולוגיה מחלה דומה קרצינומה של תאים קשקשיים בחולים אנושיים. למרות שיטה זו היא יחסית קלה לנהל, תזמון מדויק הוא חיוני. חשוב גם לנקוט אמצעי בטיחות מתאימים בעת טיפול DMBA, שהוא מסרטן.לפני תחילת הניסוי, בית כל עכברים אגרסיביים בני שבעה עד תשעה שבועות בכלובים נפרדים כדי למנוע לחימה ונגעים בעור. עבור אינדוקציה פפילומה העור, הראשון לגלח את העורות האחוריים של בעלי החיים הניסיוניים ולשקול את העכברים בנפרד. 48 שעות לאחר הגילוח, להשתמש פיפטה להחיל 50 מיקרוגרם של DMBA ב 200 microliters של אצטון על האזור המגולח של כל עכבר הרדמה.לקידום פפילומה בעור, שבעה ימים לאחר יישום DMBA לטפל בעור עם חמישה מיקרוגרם של TPA ב 200 microliters של אצטון פעמיים בשבוע עד סוף הניסוי. בחן את בעלי החיים עבור papillomas ולצלם ולתזמן את הגודל של כל פפילומה בודדת על המפה בכל שבוע. מסה מוחשית בקוטר של יותר ממילימטר אחד נחשבת לפפילומה אם היא נשארת ארוכה משבוע.כאשר תגובת הגידול מגיעה לרמה, לקצור את חומר המדגם המתאים מן החיות 24 שעות לאחר יישום TPA האחרון ולאסוף חתיכות עובי מלא של העור לניתוח אימונוהיסטוכימי. השתמש אגרוף ביופסיה כדי לאסוף חתיכות עור מ papilloma ודגימות עור שאינן papilloma עבור ביטוי גנים או אנאילים חלבון ולהשתמש אזמל כדי לאסוף חתיכות מעור papilloma ולא papilloma לניתוח אימונוהיסטוכימי. לאחר מכן לאסוף את העור ניקוז בלוטות הלימפה חתיכת הטחול לניתוח ציטומטרי זרימה כרצונו.הבדל מובהק סטטיסטית בזמן הפנוי של הפפילומה ובמספר הפפילומות בין קבוצות הניסוי נצפה בדרך כלל במודל הגידול DMBA TPA. ניתוחים היסטולוגיים מתאימים לחקר מבנה הפפילומות, המורפולוגיה של העור או חדירת תאי החיסון המעניינים. זה חיוני כדי להחיל את DMBA ו TPA באופן שווה על העור כדי להחיל TPA במרווחי זמן עקביים.חשוב גם לספור את הפפילומות באופן קבוע. ניתן ללמוד את המנגנונים המשפיעים על מספר ושעה היווצרות הגידול בשיטות שונות, כולל אימונוהיסטוכימיה, ציטומטריית זרימה, PCR כמותי וניתוח חלבונים. טכניקה קונבנציונלית זו יכולה להיות מותאמת בקלות ליישם כדי ללמוד את ההשפעות של גנים שונים, גורמים סביבתיים, או טיפולי עניין על חניכת הגידול והתקדמות.זהירות נדרשת בעת ביצוע הטכניקה מאז DMBA הוא מסרטנים אצטון מתאדה במהירות. מומלץ להשתמש במסכת נשימה מתאימה ובשימוש בארונות זרימה.

chemical-induced-skin-carcinogenesis-model-using

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

אנחנו מדגימים את פרוטוקול שבו ממשל של azoxymethane הסוכן genotoxic (AOM) ואחרי שלושה מחזורים של נתרן פרו דלקתי סוכן dextran סולפט (DSS) במהירות ובעקביות יוצר גידולים במעי גס בעכברים עם דמיון מורפולוגיים ומולקולרי לאלו שנראו בקוליטיס האנושי -קשור לסרטן.

דוגמנות סרטן קוליטיס-Associated עם Azoxymethane (AOM) ונתרן סולפט dextran (DSS)

טיפול פוטודינמי (PDT) הוא שיטה לא פולשנית ולא ניתוחית לטיפול בסרטן ריאות. פוטוסנסיטיזרים מצטברים באופן סלקטיבי ברקמת הגידול ומובילים למוות תאי הגידול בנוכחות חמצן ואורך גל תקין של אור. בסרטון פרוטוקול זה, שיטה מבוססת PDT משמשת להערכת הפוטנציאל הפוטוטוקסי של פוטוסנסיטיזר פוטנציאלי בתאי סרטן ריאות.

בדיקת פוטוטוקסיות חוץ גופית: שיטה מבוססת PDT להערכת הפוטנציאל הפוטוטוקסי של פוטוסנסיטיזר בתאי סרטן ריאות

סרטון זה מתאר את ההליך לגרימת סרטן עור דו-שלבי כדי לחקור את התחלת הגידול על ידי יישום מקומי של כימיקלים. בשלב הראשון, מוטגן, DMBA, מוחל על העור של מודל עכבר אשר יוזם היווצרות הגידול על ידי גרימת מוטציות בתאי הגזע, ואחריו יישום של ממריץ גדילה, TPA, אשר מאיץ היווצרות פפילומה העור.

מודל קרצינוגנזה דו-שלבית של העור המושרה על ידי כימיקלים: מודל ניסיוני של סרטן העור בעכבר Vivo

סרטון וידאו זה מתאר שיטה למדידת רגישות לקרינת UV במודל עכבר אנושי – מודל עכבר המחקה עור אנושי. אנו קובעים את המינון המינימלי של קרינת UV (MED) שעלולה לגרום לאריתמה או בצקת על העור. השיטה יכולה לעזור לגלות את היעילות של תרופות המשמשות להפחתת רגישות UV.

בדיקת מינון אריתמטי מינימלי: שיטה למדידת רגישות UV במודלים עכבריים

הסרטן הוא תהליך כרוך אינטראקציות בין תאים סרטניים וmicroenvironment הסרטן. כדי לנתח את האירועים המולקולריים, צריך לבודד את אוכלוסיות תאים שונות בשלבים שונים במהלך התפתחות הסרטן. שימוש במודל עכבר לקרצינומה של תאי בסיס, אנו מתארים פרוטוקול עבור ניתוחי תא במהלך היווצרות הסרטן.

ניתוח אוכלוסיית תאים בעור Carcinogenesis

המלנין עוריות הוא מושרה על ידי יישום מקומי של forskolin במודל עכברי של אדם UV רגיש בהיר עור. מניפולציה תרופתי של רמות cAMP בעור ואפידרמיס המחשיכים מאוד להגן מפני דלקות בתיווך UV (כוויות שמש), כפי שנמדד על ידי מינון erythematous מינימום assay (MED).

אינדוקציה תרופתי של עוריות מלנין והגנה מפני כוויות שמש בדגם מואנש מאוס

פרוטוקול זה מתאר טכניקה העברה לצבוע אזמל-ניאון טעינת מודד תקשורת בין תאית בערוצי צומת פער. תקשורת בין תאית גאפ junctional היא תהליך הסלולר עיקרי שבאמצעותו הומאוסטזיס רקמות מתוחזק שיבוש איתות התא הזה יש השפעות בריאותיות שליליות.

גאפ junctional אינטר תקשורת: ביומרקר פונקציונלית להערכת תופעות לוואי של toxicants ורעלים, ואת היתרונות הבריאותיים של מוצרים טבעיים

כאן אנו מציגים פרוטוקול בידוד תאי הלבלב איון העכבר לסינון את inductions ROS מאת ואינטראקציות על מנת לזהות פוטנציאל diabetogenic xenobiotic כימיקלים.

הקרנה מבוססת תא מאתר הלבלב איון Diabetogenic כימיקלים סביבתיים

הפרוצדורה הבאה מתארת שיטה לשליטה מרחבית וטמפורלית של ייזום גידול מלנוציטוטי בעור מוראני, באמצעות דגם עכבר מהונדס גנטית. פרוטוקול זה מתאר מאקרוסקופי כמו גם חניכה מיקרוסקופיים עורית מלנומה.

שליטה מרחבית וטמפורלית של מלנומה מורין ייזום מוטציה תאי גזע מלנוציט

מטרת פרוטוקול זה היא לגרום לייצור חולף in vivo של רמות לא קטלניות של מיני חמצן תגובתי (ROS) בעור העכבר, ולקדם עוד יותר תגובות פיזיולוגיות ברקמה.

גירוי נישות תאי גזע והתחדשות רקמות בעור עכבר על ידי פוטוגנרציה תלוית פרוטופורפירין IX ניתנת להחלפה של מיני חמצן תגובתי באתרם

פרוטוקול סטנדרטי להשראת הזדקנות מוקדמת ב-HNM באמצעות tBHP, פרוטוקולים סטנדרטיים לניתוח סמנים מרכזיים של הזדקנות, כולל עצירת גדילה, פעילות SA-β-גלקטוזידאז וגורמי SASP.

פרוטוקול סטנדרטי להשראת הזדקנות מוקדמת הנגרמת מלחץ במלנוציטים ראשוניים בבני אדם באמצעות טרט-בוטיל הידרופרוקסיד

חקור מודל קרצינוגנזה דו-שלבי בעור באמצעות DMBA ו-TPA לחקר תפקיד הדלקת בסרטן העור. שיטה זו מאפשרת לחקור אתחול וקידום גידולים בניסויים בחיות מודל.

מודל מסרטן העור המושרה כימי באמצעות דימתילבנץ [a] פחם ו-12-O-טטרדאנואיל פורבול-13-אצטט (DMBA-הסברתי)

גלה סרטונים נוספים