שיטה מתוקנת לגרימת ימפתית משנית בתוך הגפיים של עכברים
2 בנובמבר 2019
מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.
המטרה הכוללת של שיטה זו היא לגרום בצקת לימפתית משנית עקבית בדיעבד של עכברים מבלי לגרום לתחלואה חמורה. שיטה זו יכולה לשמש כדי לגרום בצקת לימפתית משנית בדיעבד של עכברים. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא פותרת בצקת לימפתית חסרת משמעות שתימשך לפחות שמונה שבועות מבלי לגרום לתחלואה חמורה.
מישהו חדש בהליך עשוי להיאבק בטכניקות המיקרוכירורגיות. לכן אנו ממליצים על אימון מיקרוכירורגי וכמה הליכי תרגול כדי להבטיח תוצאה מוצלחת, אלא גם כדי להכין את החוקר כך שהוא או היא יוכלו לבצע את ההליך בצורה יעילה יותר. הגדר את מקור הקרינה והרס את העכבר כמתואר בפרוטוקול.
מניחים כרית עופרת בעובי 1.5 מ"מ כדי להבטיח שרק האזור שעובר ניתוח מוקרן. הדוגמה המוצגת היא של עכבר לאחר הניתוח כדי להבהיר את האזור. מתן מנה של 10 הקרנה אפורה.
החוקרים חייבים לנקוט אמצעי זהירות בעת עבודה עם קרינה. במהלך ניסוי זה כל ההקרנה בוצעה בחדר מבודד קרינה. ומקור הקרינה נדלק רק כאשר כל אנשי הצוות עזבו את החדר.
לשקול את העכבר לפני הניתוח. בחן עומק הרדמה על ידי מבחן כף רגל או צביטת זנב. לגלח את הרגל שנבחרה להליך.
הגדר את זרימת החמצן ל 0.8 ליטר לדקה. לחבר אותו עם חרוט האף. החל משחה עיניים.
להזריק 0.5 מיליליטר של מלוחים תת עורית, רצוי ב scruff של העכבר כדי למנוע hypovolemia במהלך הניתוח. מניחים את העכבר על הבד הכירורגי במצב על-חושי. מניחים את חרוט האף על האף.
לקבע את הקצה של hindlimbs בעדינות עם קלטת, כדי למנוע את העכבר מפני הסטה במהלך הניתוח. מרימים את העור במלקחי חלקים וחותכים פתח קטן כ-5 מילימטרים קרובים לאפוסה הפופליטית. החלק מספריים חדים לתוך הפתח וגזור לכיוון הברך, כך החתך מסתיים ממש מעל הברך.
הקפד לא לנקב את כלי הדם הבסיסיים, על ידי הרמת העור עם מלקחים בעת חיתוך. להזיז את העכבר למיקום נוטה ולהשלים את החתך ההיקף. לנתח את העור לכמה מילימטרים מעל הזווית.
זכור לשמור על הרקמה לחה עם מלוחים סטריליים במהלך כל ההליך. נסיגת העור של הפצע הפרוקסימלי עם מפשק אלסטי. וודאו שהווריד הסיאטי נראה כפי שמוצג.
להזריק 0.01 מיליליטר פטנט כחול V תת עורית בין בוהן השנייה והשלישית. בעדינות ללחוץ על הכף כמה פעמים כדי להפיץ את V.The הפטנט הכחול ההפצה של V כחול פטנט ניתן לראות דרך המיקרוסקופ. המבנים הדרושים כדי להיות חזותיים הם, כלי הלימפה proximal, PLV, צומת הלימפה popliteal, PLN, כלי הלימפה הדיסטלי הראשון, DLV1, ואת כלי הלימפה דיסטלי השני, DLV2.
הגדל כדי לדמיין את ה- PLV וללקט אותו באמצעות תפר ניילון 10-0. לחץ על הכף כדי להבטיח שאף פטנט כחול לא יעבור קרוב לקשירה. Ligate שני כלי הלימפה דיסטלי כפי שמוצג.
לחץ על הכף מספר פעמים שוב כדי לוודא כי שום V כחול פטנט עובר קרוב לקשירה. בדוגמה זו, ניתן לראות כי אחד מכלי הלימפה מתפרץ עקב הקשירה המעכבת את זרימת הלימפה. הסר את צומת הלימפה popliteal, צומת הלימפה יש משטח חלק דמוי פנינה והוא נצבע על ידי V כחול פטנט בניגוד לרקמת השומן שמסביב.
לפני הסרת כרית השומן inguinal, לצרוב את הכלי הזה כפי שמוצג. ואז להסיר את כרית השומן בחתיכה אחת. ודא כי אין דימום פעיל.
זוהי דוגמה של צומת לימפה inguinal ממוקם. צומת הלימפה הממוקם כרית השומן inguinal הוא לעתים רחוקות בצבע על ידי V כחול פטנט יכול להיות קשה להבדיל מן השומן. הסרת כרית השומן בחתיכה אחת היא הדרך הטובה ביותר להבטיח כי צומת הלימפה הוסר.
תפר את קצות העור עד fascia השריר, עם תפר ניילון 6-0 באמצעות מטח ומחזיק מחט, משאיר פער של שניים עד שלושה מילימטרים, כדי להגביל את זרימת הלימפה שטחית. זוהי דוגמה לתפרים המוגמרים, באפוסה הפופליטית, בצד הצדדי של הבד האחורי, מעל הברך, ובצוד המדיאלי של האחורי. לנהל משככי כאבים ולשקול את העכבר לאחר הניתוח, ולאחר מכן למקם אותו ארון מחומם להחלמה.
חזור על ההליך להקרנה לפני הניתוח. גרף זה מראה את נפח hindlimb הממוצע המשולב של שלושה מחקרים נפרדים בשמונת השבועות שלאחר הניתוח. 31 עכברים נכללו בסך הכל.
ציר ה-x מייצג שבועות לאחר הניתוח. ציר ה- y מייצג נפח אחורי במילימטרים מעוקבים. סרגלי החצים מייצגים את סטיית התקן.
יש לצפות כי הנפיחות מהניתוח ואת בצקת הלימפה המושרה יקטן במהלך ארבעת השבועות הראשונים. לאחר ארבעת השבועות הראשונים אנו רואים מצב יציב יחסית של בצקת לימפתית. נפח השליטה hindlimb עולה במהלך שמונת השבועות, ובכך בקפדנות אומר את ההבדל בנפח בין hindlimb בצקת הלימפה ואת hindlimb שליטה, זה היה בלתי צפוי.
הגורם הוא העריך להיות כי העכברים השתמשו hindlimb לא מופעל שלהם יותר מאשר hindlimb המופעל בשבועות שלאחר הניתוח. זה יכול להוביל היפרטרופיה של hindlimb שליטה ואולי להסביר את הגידול בנפח. לנתונים פרטניים על שלושת המחקרים שנכללו אנא קראו את הפרוטוקול.
טבלה זו מציגה את מבחן ההשוואה המרובים של Sidak למדידות הנפח המשולבות של שלושת המחקרים הכלולים. ערך P מחושב מראה כי יש הבדל מובהק סטטיסטית בין hindlimbs עם בצקת לימפתית המושרה ואת השליטה hindlimbs, במהלך כל שמונת השבועות של מעקב. לניתוח סטטיסטי פרטני על שלושת הפרויקטים הכלולים אנא קרא את הפרוטוקול.
שיטה זו גורמת בצקת לימפתית מובהקת סטטיסטית, נמשך לפחות שמונה שבועות. ההליך יכול לשמש כדי ללמוד את פטריות של בצקת הלימפה כדי לחקור אפשרויות טיפול חדשני. לאחר צפייה בסרטון זה, היית צריך להשיג הבנה של איך לגרום בצקת לימפתית משנית בדיעבד של עכברים, באמצעות שילוב של מיקרוכירורגיה הקרנה לפני ואחרי הניתוח.
לאחר השליטה, ניתן לבצע את ההליך הכירורגי תוך 45 דקות.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מודל חיה זה מאפשר לחוקרים להשרות בצורה מובהקת סטטיסטית בצקת לימפתית משנית בגפה האחורית של עכברים, הנמשכת לפחות 8 שבועות. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של בצקת לימפתית ולבדוק אפשרויות טיפול חדשניות.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום מדעי
- מדעי המוח
- ביולוגיה
- פתופיזיולוגיה
רקע
- בצקת לימפית משנית היא מצב שעלול להשפיע באופן משמעותי על איכות החיים.
- הבנת המנגנונים שלה היא קריטית לפיתוח טיפולים יעילים.
- מודל זה נועד לספק שיטה מהימנה להשראת בצקת לימפית בעכברים.
- מומלץ לעבור הכשרה בטכניקות מיקרו-כירורגיות לצורך יישום מוצלח.
מטרת המחקר
- להשראת בצקת לימפטית משנית עקבית בגפיים האחוריות של עכברים.
- לחקירת הפתופיזיולוגיה הבסיסית של בצקת לימפטית.
- לבחינת אפשרויות טיפול חדשניות פוטנציאליות לבצקת לימפטית.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- השראה של בצקת לימפתית משנית בגפה האחורית של עכברים.
- שימוש בהקרה כפי שמתואר בפרוטוקול.
- הרדמה של העכבר לפני הפרוצדורה.
- טכניקות מיקרו-כירורגיות להשראה מוצלחת של בצקת לימפתית.
תוצאות עיקריות
- הושがג לסינפדמה בעלת מובהקות סטטיסטית שנמשכה לפחות 8 שבועות.
- המודל לא גרם לתחלואה חמורה בעכברים.
- התקבלו תוצאות עקביות לאורך מספר ניסויים.
- ההדרכה שיפרה את יעילות הפרוצדורה.
מסקנות
- מודל זה יעיל לחקר בצקת לימפטית בעכברים.
- הוא מספק פלטפורמה לבדיקת גישות טיפוליות חדשות.
- מחקרים עתידיים יכולים להתבסס על מודל זה כדי להעמיק את ההבנה של בצקת לימפטית.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
שיטה זו מספקת מודל עכברי הניתן לשחזור עבור בצקת לימפטית משנית, המאפשרת מחקרים מכניסטיים של תפקוד לימפתי לקוי והערכה של התערבויות טיפוליות. המודל תומך בתיקוף מטרות על ידי ביסוס מערכת רלוונטית למחלה עם פלט פנוטיפי בר-כימות לאורך תקופה של 8 שבועות. הוא מסייע בהפחתת סיכונים בשלב הפרה-קליני על ידי מתן אפשרות להערכת השפעות של תרכובות על זרימה לימפטית ועיצוב מחדש של רקמות ללא תחלואה חמורה.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביופארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- ערך מדעי: מאפשר בדיקה של רכיבי נתיב הלימפה ותיקוף תפקודי של מטרות המעורבות בהומאוסטזיס של נוזלים.
- ערך תפעולי: מספק פנוטיפ עקבי וכמותי להערכת מעורבות המטרה וביסוף הנתיב.
סריקה ופיתוח בדיקות
- ערך מדעי: מייצר מדידות של נפח הגפה האחורית כמדד כמותי למסעות סינון של תרכובות.
- ערך תפעולי: תומך בסטנדרטיזציה של הבדיקה באמצעות מבחן ההשוואות המרובות של Sidak לצורך תיקוף סטטיסטי בין קבוצות מחקר.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- ערך מדעי: מדמה את הפתופיזיולוגיה של בצקת לימפטית (lymphedema) משנית בבני אדם, ומאפשר חקר של סמנים ביולוגיים תרגומיים הקשורים לדליפה לימפטית ופיברוזיס.
- ערך תפעולי: מאפשר רציפות פרה-קלינית משלב הגילוי ועד לבדיקות יעילות, עם פנוטיפ יציב הנשמר למשך 8 שבועות לפחות.
שילוב תהליכי עבודה וצינור עיבוד
השיטה משתלבת ברצף שבין שלב הגילוי לשלב הפרה-קלִיני, ותומכת בתיקוף מטרות מונחה-השערה ובהערכה של תרכובות מובילות בתוכניות מחקר של מחלות של מערכת הלימפה.
- ביולוגיה של גילוי: תומכת בהפחתת סיכונים מכניסטיים על ידי הבהרת תפקידם של מטרות לימפו-וסקולריות בהיווצרות בצקת.
- סריקה: מאפשרת מערכת ביולוגית מוכנה לשימוש לחשיפה לתרכובות, עם מדידת נפח הגפיים האחוריות כנקודת סיום כמותית ראשית.
- אנליטיקה: מספקת מסגרת סטטיסטית (Sidak's test) להשוואה בין קבוצות טיפול לקבוצות ביקורת לאורך נקודות זמן אורך.
- מחקר תרגומי: תואמת פנוטיפים קליניים של לימפדמה, ותומכת בהחלטות go/no-go המקושרות לסמנים ביולוגיים.
- שימוש חוזר ארגוני: מבססת פלטפורמה רב-פעמית של הקרנה-מיקרו-כירורגית למידול פתולוגיה לימפטית במספר פרויקטים.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: ביטחון חיזוי במודולציה של המטרה באמצעות תגובה פנוטיפית בת-קיימא ובעלת מובהקות סטטיסטית.
- ערך תפעולי: פרוטוקול סטנדרטי של הקרנה (10 Gy לפני/אחרי) וליגציה מיקרו-כירורגית מבטיח הדירות בין מפעילים שונים.
- ערך אסטרטגי: מפחית את הסיכון לכישלון בשלבים מאוחרים על ידי מתן אפשרות להערכה מוקדמת של פרופילי בטיחות ויעילות לימפטיים.
- השפעה על הפורטפוליו: מסייע בתיעדוף מותאם-סיכונים של מועמדים המכוונים למערכת הלימפטית, בהתבסס על נאמנות מודל המחלה.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות בטכניקות של מיקרו-כירורגיה ובפרוטוקולים לבטיחות מקרינה.
- תלוי בציוד ייעודי הכולל סטריאו-מיקרוסקופ, מקור קרינה עם מיגון עופרת וכלי תפירה מדויקים.
- מחייב סטנדרטיזציה בין-צוותית בין יחידות הניתוח, ההקרנה והפנוטיפינג להשגת תוצאות עקביות.
- התאמה למערכות מודל אחרות תדרוש תיקוף של האנטומיה הלימפטית והסבילות לקרינה.
- מגבלה מעשית: משך הפרו prosedur (כ-45 דקות לאחר הכשרה) והתלות במיומנויות מיקרו-כירורגיות עשויים להשפיע על קצב העבודה (throughput).
