Name: הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים. (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: למדו שני מודלי ריפוי פצעים בעכברים: ספוג PVA לשחזור לויקוציטים וחתך עור בזנב להדמיית פצאים איטיים. שיטות אלה מאפשרות ניתוח תגובות תאיות וציטוקינים במחלות כמו סוכרת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות קווין קרלסון של מתקן האוניברסיטה בראון Cy, מיון המרכז לייעוץ וסיוע עם הזרימה cy, try ניסויים. תמונות באיור 1B ו-C נוצרו עם ביוריאנדר. מודה לקיילה לי ולגרגורי סראפה על הסיוע הצילומי שלהם. עבודה זו היתה נתמכת על ידי מענקים מן הבאים: הגנה מתקדמים פרויקטים מחקר הסוכנות (DARPA) YFAA15 D15AP00100, התחומים של דיקן פרס המדע החדש המתעוררים (אוניברסיטת בראון), ריאות הלב הלאומי ומכון הדם (NHLBI) 1R01HL126887-01A1, המכון הלאומי למדעי הסביבה (החקות) T32-ES7272 (אימון בפתולוגיה סביבתית), ופרס הגרעין האוניברסיטאי למחקר באוניברסיטת בראון.

כל מחקרים בעלי חיים שתוארו כאן אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים של אוניברסיטת בראון והשתמש וביצע בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המכון הלאומי לבריאות.  הערה: בסרטון הווידאו, המסך הכירורגי הושמט למטרות הדגמה.
1. השתלת תת-עורית של ספוגים PVA
<ol><li>השימוש במספריים לגזור גיליונות של ספוג PVA לתוך 8 מ"מ x 8 מ"מ x 4 מ מ חתיכות. מייבשים את פיסות הספוג של PVA באמצעות מיזוג אותם בתוך הערוץ 1x סטרילי בגביע.</li>
	<li>לחיטוי הספוגים 1 x PBS לחטא, וקריר לחלוטין. מאחסנים ספוגים לאחסון באמצעות ערוץ הPBS של 1x ב -4 ° c.</li>
	<li>לפני ביצוע ההשתלה כירורגית, סדרת מחלקים את המספר הדרוש של ספוגים לתוך תבשיל תרבות סטרילית תחת תנאים סטריליים במכסה זרם למינארי. לאחסן את הספוגים הנוספים ב-1x סטרילי ב 4 ° צ' לשימוש עתידי. ודא כי ספוגים להתנפח 1 ס"מ x 1 ס"מ x 0.5 ס"מ לאחר הסבה. תמונה של ספוגים PVA מיובש מוצג באיור 1A. הערה: כדי לשמור על עקרות האתר כירורגי, הליך השרשה ספוג PVA דורש אדם אחד כדי לטפל בעכבר ולהכין את האתר כירורגי, ואדם שני לבצע את ההשתלה.</li>
	<li>באמצעות הזרקת הצפק של 80 מ"ג/ק"ג במשך שבוע בן 8 – 12 שבועות, זכר C57BL/6J. ניהול 40 מ"ג/ק"ג של xylazine intraperitoneally לחוסר כאבים.  לאשר את עומק ההרדמה על ידי אובדן של רפלקס דוושה. הכינו את האתר כירורגי על ידי הסרת השיער לאורך dorsum עם קוצץ. באמצעות גזה סטרילי, להחיל povidone-פתרון יוד לאזור גילוח 2x, ואחריו 70% אתנול.</li>
	<li>למקם את העכבר על וילונות כירורגי סטרילי. מניחים משטח מחומם מתחת וילונות כירורגיים כדי לשמור על טמפרטורת הליבה של העכבר.</li>
	<li>לחבוש כפפות כירורגי סטרילי לביצוע הניתוח. משוך את העור האחורי הרחק מן הרקמה הבסיסית עם מלקחיים, ובאמצעות מספריים כירורגי סטרילי, לעשות חתך 2 ס מ לאורך קו האמצע בערך 2 ס מ קדמי לבסיס הזנב. בעוד מחזיק את החתך פתוח עם מלקחיים סטרילי, להשתמש מעוקל סטרילי, מספריים בוטה ניתוח משופעת ליצור כיס תת עורית לאורך dorsum באחת המיקומים המצוינים באיור 1B.</li>
	<li>המשך להשתמש מלקחיים כדי להסיר את העור הרחק הרקמה הבסיסית. באמצעות מספריים כירורגי סטרילי, בעדינות לסחוט אחד ספוג PVA בצלחת התרבות כדי להסיר את העודף PBS. להרים את הספוג PVA בפינה אחת באמצעות מספריים כירורגי סטרילי, מובילה עם הפינה המוחזקות על ידי המספריים, מניחים את הספוג לתוך הכיס התת עורית שנוצר בשלב 1.4.</li>
	<li>חזור על תהליך זה 5x, הצבת סך של שישה ספוגים לתוך כיסים תת עורית כפי שמוצג באיור 1B.</li>
	<li>לצבוט את העור ביחד עם מלקחיים סטרילי ולסגור את החתך עם שני קטעי הפצע נירוסטה.</li>
	<li>השתמש בערכה חדשה של כלי ניתוח סטרילי עבור כל עכבר. לחילופין, השתמש בעיקור חרוזים כדי לעקר מכשירים בין עכברים.</li>
</ol>2. בידוד נוזלים מספוגים PVA
<ol><li>על מנת להעריך את הפצע החריף של הפצעים, לבודד ספוגים בין 1 – 14 ימים פוסטימ.</li>
	<li>הכינו צינור לאיסוף נוזלים באמצעות קינון חבית של מזרק של 5 מ"ל לתוך צינור התרבות של 16 מ"ל.</li>
	<li>המתת חסד עכבר עם ספוגים PVA מושתל על ידי שיתוף2 חנק ואחריו פריקה צוואר הרחם.</li>
	<li>להסיר את הסיכות כירורגי ולפתוח את החתך עם מלקחיים שיניים. השתמש במספריים כדי להאריך את החתך לאורך קו האמצע.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים, לחלץ ספוג אחד מכיסו התת עורית ולהעביר אותו לחבית מוכן מזרק, להיות זהיר כדי למזער את הלחץ על הספוג. שטחו את כל רקמת החיבור שנותרה דבקה על פני השטח של הספוג. השתמש במספריים כדי לנתח את הספוג מהרקמה שמסביב במידת הצורך. חזור על תהליך ההסרה ספוג עם הספוגים הנותרים. מניחים את הצינור המכיל את הספוגים על הקרח.</li>
	<li>כדי לבודד את נוזל הפצע, צנטריפוגה את צינור התרבות המכילה את 5 מזרק mL עם ספוגים ב 700 x g עבור 10 דקות.</li>
	<li>לאחר הצנטריפוגה, למחוק את המזרק ואת הספוגים. נוזל הפצע נאסף בתוך 16 שפופרת התרבות של mL. תמונה ייצוגית של נוזל שנאסף מיום 7 פצע מוצג באיור 1D. העבירו את נוזל הפצע לצינור נקי לאחסון לטווח ארוך ב-80 ° c.</li>
</ol>3. בידוד תאים מספוגים PVA
<ol><li>כדי להעריך את הפצע החריף הריפוי התאים הסלולריים, לאסוף ספוגים בין 1 – 14-ימים השרשה לאחר ספוג. ספוגים שהתקבלו מפצע 7 ימים לאחר השרשה מוצגים באיור 1E.</li>
	<li>להכין אוסף בינוני המכיל 1x HBSS (+ סידן/מגנזיום/-פנול אדום) שיושלם עם 1% FBS, 1% HEPES, ו 1% פניצילין-סטרפטומיצין.</li>
	<li>מחלק 5 מ ל של בינוניות של אוסף HBSS לתוך צינור מתחת ל 15 מ ל חרוט.</li>
	<li>לחלץ את ספוגים PVA מעכברים מורדמים כמתואר 2.2 – 2.4. מניחים את הספוגים לתוך צינור החרוט המכיל 5 מ ל של מדיום אוסף HBSS.</li>
	<li>העבר את הספוגים ואת מדיום אוסף HBSS לשקית מבלנדר של 80 mL על ידי שפיכת. תלו את שקית הבלנדר מתוך הצוהר של בלנדר ההנעה, ממוקם כך המשוטים להכות את ספוגים ומדיה. להתאים את ההגדרות של בלנדר ההנעה לרוץ בגבוה עבור 60 s.. לחץ על התחל</li>
	<li>העבר את המדיה משקית הבלנדר בחזרה ל-15 mL עם פיפטה, ומשאיר את הספוגים מאחור בשקית. לסחוט את הספוגים לשחרר ביסודיות את המדיה. להתאים את ההגדרות של בלנדר ההנעה לרוץ 30 s על גבוה. הוסף 5 מ ל של מדיה לשקית הבלנדר וחזור על התהליך המכאוב 2x עבור סך של שלושה שטיפת ספוג.</li>
	<li>צנטריפוגה את צינור החרוט ב 250 x g עבור 5 דקות. כדוריות אדומות של תאים ותאי דם אדומים יהיו גלויים בתחתית צינור החרוט לאחר צנטריפוגה.</li>
	<li>להיפטר supernatant ולבצע הליזה תא דם אדום: להוסיף 900 μL של dH2O כדי הגלולה תא ו פיפטה לערבב. לנטרל עם 100 μL של 10x PBS. הוסף 4 מ ל של 1x PBS לצינור כדי לנטרל במלואו את הליזה, ולאחר מכן צנטריפוגה ב 250 x g עבור 5 דקות. הערה: שלב הפירוק צריך להיות קצר; לעזוב את המים במגע עם התאים במשך יותר מ 3-5 s יכול לגרום לפירוק של כדוריות דם לא אדומות.</li>
	<li>לאחר צנטריפוגה, כדורית תא לבן המכיל תאי הפצע נטול כדוריות דם אדומות יהיה נוכח בתחתית צינור החרוט. השמט את הסופרנטאנט והשהה מחדש את הגלולה במדיום הרצוי לניתוח במורד הזרם.</li>
</ol>4. הזרימה האופציונלית לניתוח של לוקיציטים מולדים מבודדים מפצעי הספוג PVA
<ol><li>השהה מחדש 0.5 – 1 x 106 תאים הפצע ב 25 μl של פתרון 2x של הנוגדן חסימת המכיל 10 Μg/mL ANTI-CD16/CD32 FCRΓII/III נוגדן מדולל ב-1X PBS + 1% bsa. הערה: כל הנוגדנים צריך להיות מתוח כדי לקבוע ריכוזים אופטימליים עבור הניתוח cy, הזרימה.</li>
	<li>דגירה את התאים עם נוגדן חסימת עבור 10 דקות על הקרח.</li>
	<li>לעשות שילוב מאסטר 2x של נוגדנים המכילים 2.5 mg/mL של PerCP-eFluor710-Ly6G, 5 מ"ג/mL של FITC-Ly6C, APC-Fire750-CD 45.2, APC-R700-Siglec-F, ו 10 מ"ג/mL של eFluor660-F4-80 מדולל 1x PBS + 1% BSA. במישרין להוסיף 25 μL של קוקטייל הנוגדן לתאים המדגירה של נוגדן חוסם.</li>
	<li>מגנה את התאים במשך 20 דקות על הקרח, מוגן מפני אור.</li>
	<li>לשטוף את התאים 2x עם 1x PBS.</li>
	<li>לעשות שילוב מאסטר של הכדאיות אמין-תגובתי לתיקון-eFluor506 מדולל 1:1000 ב-1x PBS. השהה מחדש את הגלולה בתא ב-50 μL של הפתרון לצבע הכדאיות. הערה: הסרום חייב להיות מחוץ לשלב הכדאיות הניתן לתיקון, כפי שהוא ימנע כריכת הצבע לחלבונים אנדוגניים. מגנה את התאים במשך 20 דקות על הקרח, מוגן מפני אור.</li>
	<li>לשטוף את התאים 2x עם 1x PBS. השהה מחדש את הגלולה בתא ב 50 μL של 1% פאראמפורמלדהיד.</li>
	<li>דגירה את התאים עם 1% פאראמפורמלדהיד עבור 15 דקות על הקרח, מוגן מפני אור.</li>
	<li>לשטוף את התאים 1x עם הPBS 1x ולהשעות מחדש את הגלולה ב-1x PBS עבור ניתוח cy, לצורך זרימה.</li>
</ol>5. כריתה של עור זנב
<ol><li>באמצעות הזרקת הצפק של 80 מ"ג/ק"ג של שבוע בן 8-12, זכר C57BL/6J. ניהול 40 מ"ג/ק"ג של xylazine intraperitoneally לחוסר כאבים. לאשר את עומק ההרדמה על ידי אובדן של רפלקס דוושה.</li>
	<li>להכין את האתר כירורגי על הזנב של העכבר מורדם באמצעות גזה סטרילית להחיל povidone-הפתרון יוד 2x, ואחריו יישום אחד של 70% אתנול.</li>
	<li>הגדרת קטע 10 מ"מ x 3 מ"מ על המשטח האחורי של הזנב, 10 מ"מ מהבסיס של הזנב (איור 1C) באמצעות סמן קבוע להתחקות אחר תבנית premade.</li>
	<li>מניחים את העכבר המעומנת. על וילונות כירורגיים סטריליים</li>
	<li>לחבוש כפפות סטרילי כירורגי לבצע את ההליכים כירורגי. עם להב אזמל סטרילי, לעשות חתך בעובי מלא לאורך החלק הימני, התחתון, ואת הקצה השמאלי של אזור הפצע.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים סטרילי, לקלף את העור המתלהב הרחק הזנב, ולהשתמש מספריים כירורגי סטרילי לחתוך את הקצה העליון של אזור הפצע.</li>
	<li>תפעילי לחץ עם גזה סטרילית. כדי להפסיק את הדימום</li>
	<li>החלת סרט ריסוס מכשול על מיטת הפצע.</li>
	<li>צלם את הפצעים ממרחק קבוע במרווחי זמן קבועים. לנתח תמונות על ידי ניתוח planimetric כדי לקבוע מדידות אזור הפצע. לחילופין, השתמש בקליפרס כדי להשיג מדידות באורך וברוחב של הפצע.</li>
</ol>

<ol><li>Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+use+in+wound+healing+research%3A+a+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%3A+Official+Publication+of+the+Wound+Healing+Society+%5Band%5D+the+European+Tissue+Repair+Society%22%5BJournal%5D)">Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 8 (2), 83-96 (2000).</li>
<li>Elliot, S., Wikramanayake, T. C., Jozic, I., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Modeling+Conundrum%3A+Murine+for+Cutaneous+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A Modeling Conundrum: Murine for Cutaneous Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (4), 736-740 (2018).</li>
<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%3A+Mechanisms%2C+signaling%2C+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration: Mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translational Medicine. 6 (265), (2014).</li>
<li>Huber-Lang, M., Lambris, J. D., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+responses+to+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Innate immune responses to trauma.</a> Nature Immunology. 19 (4), 327-341 (2018).</li>
<li>Novak, M. L., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+Transitions+of+Macrophages+Orchestrate+Tissue+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Phenotypic Transitions of Macrophages Orchestrate Tissue Repair.</a> The American Journal of Pathology. 183 (5), 1352-1363 (2013).</li>
<li>Martins-Green, M., Petreaca, M., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+and+Their+Receptors+Are+Key+Players+in+the+Orchestra+That+Regulates+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Wound+Care%22%5BJournal%5D)">Chemokines and Their Receptors Are Key Players in the Orchestra That Regulates Wound Healing.</a> Advances in Wound Care. 2 (7), 327-347 (2013).</li>
<li>Guerrero-Juarez, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+reveals+fibroblast+heterogeneity+and+myeloid-derived+adipocyte+progenitors+in+murine+skin+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis reveals fibroblast heterogeneity and myeloid-derived adipocyte progenitors in murine skin wounds.</a> Nature Communications. 10 (1), 650(2019).</li>
<li>Shook, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblast+proliferation+and+heterogeneity+are+supported+by+macrophages+during+skin+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Myofibroblast proliferation and heterogeneity are supported by macrophages during skin repair.</a> Science. 362 (6417), 2971(2018).</li>
<li>Davidson, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+wound+repair%2C+cell+proliferation%2C+and+collagen+accumulation+are+produced+by+a+cartilage-derived+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Accelerated wound repair, cell proliferation, and collagen accumulation are produced by a cartilage-derived growth factor.</a> The Journal of Cell Biology. 100 (4), 1219-1227 (1985).</li>
<li>Buckley, A., Davidson, J. M., Kamerath, C. D., Wolt, T. B., Woodward, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sustained+release+of+epidermal+growth+factor+accelerates+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Sustained release of epidermal growth factor accelerates wound repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 82 (21), 7340-7344 (1985).</li>
<li>Peterson, J. M., Barbul, A., Breslin, R. J., Wasserkrug, H. L., Efron, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+T-lymphocytes+in+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Significance of T-lymphocytes in wound healing.</a> Surgery. 102 (2), 300-305 (1987).</li>
<li>Efron, J. E., Frankel, H. L., Lazarou, S. A., Wasserkrug, H. L., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+and+T-lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Wound healing and T-lymphocytes.</a> Journal of Surgical Research. 48 (5), 460-463 (1990).</li>
<li>Schäffer, M. R., Tantry, U., Thornton, F. J., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+synthesis+in+wounds%3A+pharmacology+and+effect+on+accumulation+of+collagen+in+wounds+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Journal+of+Surgery+%3D+Acta+Chirurgica%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide synthesis in wounds: pharmacology and effect on accumulation of collagen in wounds in mice.</a> The European Journal of Surgery = Acta Chirurgica. 165 (3), 262-267 (1999).</li>
<li>Opalenik, S. R., Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+differentiation+of+bone+marrow-derived+cells+during+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%3A+Official+Publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Fibroblast differentiation of bone marrow-derived cells during wound repair.</a> FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 19 (11), 1561-1563 (2005).</li>
<li>Järveläinen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+decorin+in+cutaneous+wound+healing+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%3A+Official+Publication+of+the+Wound+Healing+Society+%5Band%5D+the+European+Tissue+Repair+Society%22%5BJournal%5D)">A role for decorin in cutaneous wound healing and angiogenesis.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 14 (4), 443-452 (2006).</li>
<li>Luckett, L. R., Gallucci, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+%28IL-6%29+modulates+migration+and+matrix+metalloproteinase+function+in+dermal+fibroblasts+from+IL-6KO+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 (IL-6) modulates migration and matrix metalloproteinase function in dermal fibroblasts from IL-6KO mice.</a> The British Journal of Dermatology. 156 (6), 1163-1171 (2007).</li>
<li>Daniel, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+postburn+wound+inflammatory+response+by+gammadelta+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Regulation of the postburn wound inflammatory response by gammadelta T-cells.</a> Shock. 28 (3), 278-283 (2007).</li>
<li>MacLauchlan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+fusion%2C+giant+cell+formation%2C+and+the+foreign+body+response+require+matrix+metalloproteinase+9%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Macrophage fusion, giant cell formation, and the foreign body response require matrix metalloproteinase 9.</a> Journal of Leukocyte Biology. 85 (4), 617-626 (2009).</li>
<li>Schwacha, M. G., Thobe, B. M., Daniel, T., Hubbard, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+thermal+injury+on+wound+infiltration+and+the+dermal+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Impact of thermal injury on wound infiltration and the dermal inflammatory response.</a> Journal of Surgical Research. 158 (1), 112-120 (2010).</li>
<li>Ganesh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+Induces+Oncostatin+M+Expression+in+Human+Chronic+Wound+Macrophages+through+Axl+Receptor+Tyrosine+Kinase+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 Induces Oncostatin M Expression in Human Chronic Wound Macrophages through Axl Receptor Tyrosine Kinase Pathway.</a> The Journal of Immunology. 189 (5), 2563-2573 (2012).</li>
<li>Deskins, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stromal+cells%3A+identifying+assays+to+predict+potency+for+therapeutic+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stromal cells: identifying assays to predict potency for therapeutic selection.</a> Stem Cells Translational Medicine. 2 (2), 151-158 (2013).</li>
<li>Daley, J. M., Brancato, S. K., Thomay, A. A., Reichner, J. S., Albina, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phenotype+of+murine+wound+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">The phenotype of murine wound macrophages.</a> Journal of Leukocyte Biology. 87 (1), 59-67 (2010).</li>
<li>Thomay, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Interleukin-1+Signaling+Improves+the+Quality+of+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Disruption of Interleukin-1 Signaling Improves the Quality of Wound Healing.</a> The American Journal of Pathology. 174 (6), 2129-2136 (2009).</li>
<li>Brancato, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+4+signaling+regulates+the+acute+local+inflammatory+response+to+injury+and+the+fibrosis%2Fneovascularization+of+sterile+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%3A+Official+Publication+of+the+Wound+Healing+Society+%5Band%5D+the+European+Tissue+Repair+Society%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor 4 signaling regulates the acute local inflammatory response to injury and the fibrosis/neovascularization of sterile wounds.</a> Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 21 (4), 624-633 (2013).</li>
<li>Daley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+macrophage+phenotype+by+soluble+product%28s%29+released+from+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Modulation of macrophage phenotype by soluble product(s) released from neutrophils.</a> Journal of Immunology. 174 (4), 2265-2272 (2005).</li>
<li>Crane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+to+macrophage+transition+in+the+murine+sterile+wound%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The monocyte to macrophage transition in the murine sterile wound.</a> PloS One. 9 (1), 86660(2014).</li>
<li>Falanga, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Full-thickness+wounding+of+the+mouse+tail+as+a+model+for+delayed+wound+healing%3A+accelerated+wound+closure+in+Smad3+knock-out+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Full-thickness wounding of the mouse tail as a model for delayed wound healing: accelerated wound closure in Smad3 knock-out mice.</a> Wound Repair and Regeneration. 12 (3), 320-326 (2004).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+underlying+skeletal+growth+arrest+by+cutaneous+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms underlying skeletal growth arrest by cutaneous scarring.</a> Bone. 66, 223-231 (2014).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Model+for+Cutaneous+Wound+Healing+and+Scarring+in+the+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">A Novel Model for Cutaneous Wound Healing and Scarring in the Rat.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 143 (2), 468-477 (2019).</li>
<li>Crane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+influenza+A+virus+infection+leads+to+suppression+of+the+innate+immune+response+to+dermal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Pulmonary influenza A virus infection leads to suppression of the innate immune response to dermal injury.</a> PLOS Pathogens. 14 (8), 1007212(2018).</li>
<li>Grada, A., Mervis, J., Falanga, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+Techniques+Made+Simple%3A+Animal+Models+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Research Techniques Made Simple: Animal Models Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 138 (10), 2095-2105 (2018).</li>
<li>Rittié, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+skin+repair+in+humans+and+other+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of skin repair in humans and other mammals.</a> Journal of Cell Communication and Signaling. 10 (2), 103-120 (2016).</li>
<li>Falanga, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+Bone+Marrow-Derived+Cultured+Mesenchymal+Stem+Cells+Delivered+in+a+Fibrin+Spray+Accelerate+Healing+in+Murine+and+Human+Cutaneous+Wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Autologous Bone Marrow-Derived Cultured Mesenchymal Stem Cells Delivered in a Fibrin Spray Accelerate Healing in Murine and Human Cutaneous Wounds.</a> Tissue Engineering. 13 (6), 1299-1312 (2007).</li>
<li>Lucas, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Roles+of+Macrophages+in+Diverse+Phases+of+Skin+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Differential Roles of Macrophages in Diverse Phases of Skin Repair.</a> The Journal of Immunology. 184 (7), 3964-3977 (2010).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+function+and+fate+of+neutrophils+in+sterile+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Visualizing the function and fate of neutrophils in sterile injury and repair.</a> Science. 358 (6359), 111-116 (2017).</li>
<li>Mirza, R. E., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+cell+subsets+to+cytokine+production+during+normal+and+impaired+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Contributions of cell subsets to cytokine production during normal and impaired wound healing.</a> Cytokine. , 1-4 (2014).</li>
<li>Mirza, R., DiPietro, L. A., Koh, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+Specific+Macrophage+Ablation+Is+Detrimental+to+Wound+Healing+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Selective and Specific Macrophage Ablation Is Detrimental to Wound Healing in Mice.</a> The American Journal of Pathology. 175 (6), 2454-2462 (2010).</li>
<li>DiPietro, L. A., Burdick, M., Low, Q. E., Kunkel, S. L., Strieter, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MIP-1alpha+as+a+critical+macrophage+chemoattractant+in+murine+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">MIP-1alpha as a critical macrophage chemoattractant in murine wound repair.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (8), 1693-1698 (1998).</li>
<li>Wetzler, C., Kämpfer, H., Stallmeyer, B., Pfeilschifter, J., Frank, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+and+Sustained+Induction+of+Chemokines+during+Impaired+Wound+Healing+in+the+Genetically+Diabetic+Mouse%3A+Prolonged+Persistence+of+Neutrophils+and+Macrophages+during+the+Late+Phase+of+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Large and Sustained Induction of Chemokines during Impaired Wound Healing in the Genetically Diabetic Mouse: Prolonged Persistence of Neutrophils and Macrophages during the Late Phase of Repair.</a> Journal of Investigative Dermatology. 115 (2), 245-253 (2000).</li>
<li>Kim, D. J., Mustoe, T., Clark, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+wound+healing+in+aging+small+mammals%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Cutaneous wound healing in aging small mammals: a systematic review.</a> Wound Repair and Regeneration. 23 (3), 318-339 (2015).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

מאמר זה מתאר שני מודלים הפצע murine מורי המאפשרים הערכה של תגובת הפצע לריפוי חריפה. השיטה הראשונה כרוכה ההשתלה כירורגית של ספוגים PVA בחלל תת עורית. גישה זו מציעה יתרון ברור על פני מודלים ביופסיה מבוססי הפצע ללמוד את התגובה התאית הריפוי הפצע בשל מספר גדול של תאים וכמות של נוזלי הפצע שהתקבלו מתוך ספוגים מבודדים. לביצוע מוצלח של הליך זה, שמירה על שדה כירורגי סטרילי על ידי ניקוי יסודי של העור סביב החתך הוא הכרחי, כמו רוברטסונית של חיידקים לתוך הפצע יהיה לשנות באופן משמעותי את מהלך הריפוי. באמצעות שיטת בידוד התא המתואר כאן, ...

יש הרבה מערכות מודל murine זמין כדי לבחון את תהליכי ריפוי הפצע, כל אחד מהם בעל יתרונות ספציפיים ומגבלות1,2. השיטות הבאות מציגות שני דגמים של פציעות מורתיים, שכל אחד מהם מטפל בהיבט מסוים של תגובת הפצע, וניתן להשתמש בו כדי לזהות את הסיבה והתוצאה של רטבאליות בתגובה לפציעה. תהליך ריפוי הפצעים מתרחש בשלבים נפרדים. השלב הראשון הוא דלקתי, מאופיין הזרימה המהירה של טסיות, נויטרופילים, מונוציטים/מקרופאגים, כמו גם הייצור של ציטוקינים proinflammatory ו נוגדנים. בעקבות הרזולוציה של דלקת, הסביבה מעברים למצב משתנה יותר עם אינדוקציה של ציטוקינים profibrotic וגורמי צמיחה. רקמות גרטולציות מופטות ויוצרות צורה עם הגירה של מיופיברופיצוצים, פיברותקיעות, תאי אפיתל ותאי אנדותל. בשלבים הסופיים, מטריקס החילוץ הזמני הוא שופצה, והיווצרות צלקת הסגר הפצע ההכנסות2,3,4,5,6,7,8.
לא מודל murine אחד מספק מערכת ללמוד את כל השלבים של ריפוי הפצע2. כאן, שני מודלים הפצע כירורגי מתוארים: אחד מובהר התאים הסלולר אקוטי הפצע ריפוי, והשני מאפשר הערכה של סגירת הפצע, כמו גם ניתוח היסטולוגית. שתי השיטות הללו עשויות להיות מועסקים בצורה משלימה כדי להעריך את ההשפעות של הטיפול בהפרעות והתחלואה בהיבטים שונים של תגובת הפצע. השרטת תת עורית של פוליוויניל אלכוהול (pva) ספוגים היא מערכת אשר נעשה שימוש במודלים מכרסמים במשך עשורים כדי להבהיר היבטים רבים של התגובות רקמות תאית וגרטולציות9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20 ,21,22,23,24 גישה זו מאפשרת לשליפה של נוזלי הפצע העשיר cytokine ומחלחל הסלולר. במודל זה, 1 ס מ x 1 ס מ x 0.5 ס מ חתיכות של ספוג PVA ממוקמים לתוך כיסים תת עורית דרך חתך 2 ס מ שנעשו על קו האמצע האחורי. החתך סגור עם כירורגי קליפים, ואת הספוגים ניתן לאחזר בזמן מאוחר יותר נקודות בידוד תאים ונוזלים. התקשורת התאית והציטוקין של ספוגים מבודדים משקפת את השלבים הנורמליים של ריפוי הפצע החריף עד 14 ימים פוסטיר. במועד מאוחר יותר המודל הוא יתרון יותר עבור לימוד היווצרות רקמת הגרטולזה ואת תגובת גוף זר1. עם מערכת זו, ניתן לבודד את > 106 תאים, אשר מציעה יתרון ברור עבור הספק פנוטיic ופונקציונלי ובידוד RNA, על בידוד תאים משיטות אחרות המבוססות על ביופסיה1,22,23,25,26.
שיעור סגירת הפצע נקבע באמצעות מודל כריתה של עור הזנב. במודל זה, כפי שמתואר בתחילה על ידי falanga ואח ' ודיווחו על ידי אחרים27,28,29,30, 1 ס"מ x 0.3 ס"מ בעובי מקטע של עור זנב מוסר ליד בסיס הזנב. אזור הפציעה הוא מדמיין בקלות, ניתן למדוד לאורך זמן. לחילופין, ניתן לבודד את רקמת הזנב לניתוח היסטולוגית. גישה זו יכולה לשמש כחלופה או בשילוב עם שיטת ביופסיה מבוססת על המכה היטב. ההבדלים העיקריים בין שני מודלים אלה הם שיעור סגירת הפצע, נוכחות או העדר פרווה, ומבנה העור2,31,32. פצעי העור של הזנב מציעים פרק זמן ארוך יותר בו יש להעריך את סגירת הפצע, כפי שנדרש כ -21 יום לסיום מלא. זה מנוגד לunsplinted ביופסיות אגרוף, אשר לרפא מהר הרבה יותר (~ 7-10 ימים), בעיקר על ידי התכווצות בשל הפעולה של הפניקולוס carnosus. Splinted ביופסיות אגרוף לרפא לאט יותר ולצמצם את ההשפעות של ריפוי הקונקטילה, אבל להסתמך על נוכחות של גוף זר כדי להגביל את המנגנון המבוסס על מנגנונים1,2,27,30,31,33.
מודלים הפצע המתואר הם אינפורמטיבי להבנת תהליכי ריפוי נורמליים הפצע בהיעדר הפרטורציה. בעוד הריפוי של העור מכרסם שונה בדרכים משמעותיות מאוד מן העור האנושי, כולל מבנה רופף, הסתמכות על ריפוי הקונקטילה, והבדלים אנטומיים אחרים, מערכת murine מציע יתרונות מסוימים למחקרים מכניסטיים והקרנה. בראש ובראשונה מדובר בזמינות של זנים מוטקיים ומוטציות גנטיות, מסאחיזה גנטית ועלות נמוכה יותר. תובנות מכניסטיות שנרכשו ממחקרים מורתיים ניתן לתרגם למודלים בעלי חיים מורכבים המחקים יותר את ריפוי העור האנושי, כגון מערכת חזירי2,31.
בנוסף לבדיקה של תגובות ריפוי פצעים במצב יציב, מודלים אלה יכולים להיות משולבים עם תנאי טיפול מקבל כדי להבין את הבסיס של מומים ריפוי הפצע בסלולר, cy, ורמת רקמה גסה. זה בהגדרה זו מסוים כי שני הדגמים ניתן להשתמש בקונצרט כדי להעריך את ההשפעות של מצב מסוים בשיעור תחלואה, כגון דלקת ריאות לאחר הניתוח, הן התגובה התאית חריפה הפצע ואת שיעור סגירת הפצע30.

<table><tbody><tr><td>10x פוספט חוצץ</td> מלח <td>Fisher Scientific</td><td>BP3991</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה, Olympus</td><td>Genesee</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS (+סידן, +מגנזיום, &ndash; פנול אדום)</td> <td>ThermoFisher Scientific</td><td>14025076</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>נגד עכבר CD45.2-APC Fire750</td><td>BioLegend</td><td>109852</td><td>Clone 104</td></tr><tr><td>נגד עכבר F4/80-eFluor660</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50-4801-82</td><td>שיבוט BM8</td></tr><tr><td>נגד עכבר Ly6C-FITC</td><td>BD Biosciences</td><td>553104</td><td>שיבוט AL-21</td></tr><tr><td>נגד עכבר Ly6G-PerCP-eFluor710</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>46-9668-82</td><td>שיבוט 1A8-Ly6g</td></tr><tr><td>נגד עכבר Siglec-F-APC-R700</td><td>BD Biosciences</td><td>565183</td><td>שיבוט E50-2440</td></tr><tr><td>Autoclip קליפ פצע נירוסטה Applier</td><td>Braintree Scientific</td><td>NC9021392</td><td></td></tr><tr><td>Autoclip קליפים פצועים מנירוסטה, 9 מ"מ</td><td>Braintree Scientific</td><td>NC9334081</td><td></td></tr><tr><td>שקית בלנדר, 80 מ"ל</td> שפופרת תרבית <td>14258201</td><td></td><td>פישר סיינטיפיק</td></tr><tr><td>, 16 מ"ל, 17x100</td><td>Genesee Scientific</td><td>21-130</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי - Standard</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>צבע כדאיות קבוע eFluor506</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>65-0866-14</td><td></td></tr><tr><td>Hepes Solution, 1M</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-534</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td>NIH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין (5000 U/mL)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>ספוג אלכוהול פוליוויניל - גודל נקבוביות גדול</td><td>Ivalon/PVA Unlimited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>www.sponge-pva.com תמיסת פובידון-יוד, 10%</td> <td>Fisher Scientific</td><td>3955-16</td><td></td></tr><tr><td>סרט מחסום ריסוס, Cavilon</td><td>3M</td><td>3346E</td><td></td></tr><tr><td>בטן 80 ביומאסטר, 110V</td><td>סיוארד</td><td>0080/000/AJ</td><td></td></tr></tbody></table>

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב excisional הפצע מודלים.

Assessment of Acute Wound Healing using the Dorsal Subcutaneous Polyvinyl Alcohol Sponge Implantation and Excisional Tail Skin Wound Models.

ריפוי הפצע הוא תהליך מורכב הדורש התקדמות מסודרת של דלקת, רקמת היווצרות הגרטולציות, פיברוזיס, ורזולוציה. דגמי מורנה מספקים תובנה מכניסטית רבת ערך בתהליכים אלה; עם זאת, אף דגם יחיד לא מטפל באופן מלא בכל ההיבטים של התגובה ריפוי הפצע. במקום זאת, הוא אידיאלי להשתמש בדגמים מרובים כדי לטפל בהיבטים שונים של ריפוי הפצע. כאן, שתי שיטות שונות הכתובות היבטים מגוונים של תגובת ריפוי הפצע מתוארים. במודל הראשון, ספוגים לאלכוהול פוליוויניל מתת-עורי מושתלים לאורך העכבר dorsum. בעקבות איחזור ספוג, תאים יכולים להיות מבודדים על ידי שיבוש מכני, ונוזלים ניתן לחלץ על ידי צנטריפוגה, ובכך לאפשר אפיון מפורט של תגובות הסלולר וציטוקין בסביבה פצע אקוטי. הגבלה של מודל זה היא חוסר יכולת להעריך את קצב סגירת הפצע. לשם כך, נעשה שימוש במודל כריתה של עור הזנב. בדגם זה, 10 מ"מ x 3 מ"מ פיסת מלבנית של עור זנב הוא מגורש לאורך המשטח האחורי, ליד הבסיס של הזנב. מודל זה ניתן לצלם בקלות עבור ניתוח planimetric כדי לקבוע שיעורי הריפוי ניתן לקבל עבור ניתוח היסטולוגית. שתי השיטות המתוארות יכולות להיות מנוצל בזנים של עכברים ששונו גנטית, או בשילוב עם מודלים של תנאי תחלואה, כגון סוכרת, הזדקנות, או זיהום משני, על מנת להבהיר מנגנוני ריפוי הפצע.

תגובה דלקתית מערכתית לאחר השתלת ספוג PVA ניתוח השתלת ספוג PVA שנוצר תגובה דלקתית מערכתית, כפי שמתואר על ידי אינדוקציה של IL-6 פלזמה 1 יום לאחר פצעו (איור 2A). ציטוקינים אחרים proinflammatory כולל tnf-α ו-IL-1β, כמו גם מערך של נוגדנים כולל CCL2 ו CXCL1 המושרה באופן מערכתית ב -7 ימים הראשונים שלאחר pva השתלת ספוג, ותוארו במקומות אחרים26,30.
בידוד תאים ונוזלים מפצעי ספוג של PVA</st...

כאן, שני מודלים מורתיים ריפוי הפצע מתוארים, אחד שנועד להעריך את התגובה התאית הפצע ריפוי והשני כדי לכמת את שיעור סגירת הפצע. שיטות אלה ניתן להשתמש עם דגמי מחלות מורכבות כגון סוכרת כדי לקבוע מנגנונים של היבטים שונים של ריפוי הפצע המסכן.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

Wound healing is a complex process that requires the orderly progression of inflammation, granulation tissue formation, fibrosis, and resolution. Murine ...

מודלים אלה ניתן ליישם כדי להעריך היבטים שונים של התגובה ריפוי הפצע, כולל קינטיקה הסלולר ציטוקין וסגירה פצע. מודל ספוג PVA מאפשר התאוששות של מיליוני לויוציטים פצע לניתוחים פנוטיפיים ופונקציונליים, בעוד מודל כריתת עור הזנב מאפשר הדמיה קלה של פצעים ריפוי איטי. ניתן להשתמש במודלים של ספוג PVA ופצע זנב כרית בשילוב עם מצבים חולים, כגון סוכרת או דלקת ריאות, כדי להבין את השפעתם על ריפוי פצעים.הדגמת ההליכים עם מרדית קריין תהיה ביל הנרי, עוזר מחקר מהמעבדה שלי. לפני תחילת הניסוי, השתמש במספריים כדי לחתוך יריעות של ספוג PVA לחתיכות של שמונה על שמונה על ארבעה מילימטר. יש להתייבש מחדש את חתיכות הספוג ב-PBS סטרילי במזווה למשך 10 דקות לפני שהם מעקרים את הספוגים ב-PBS.כאשר הספוגים התקררו, אחסן את הספוגים שקועים ב- PBS בארבע מעלות צלזיוס. ביום ההליך, מניחים שישה ספוגים לכל חיה ניסיונית לתוך צלחת תרבות סטרילית במכסה המנוע של זרימה למינארית סטרילית, ומאשרים חוסר תגובה לצביטת בוהן בעכבר הרדמה, בן שמונה עד 12 שבועות, זכר, C57-Black/6. יש עוזר להשתמש קוצץ כדי להסיר את השיער לאורך הגב גזה סטרילית להחיל פתרון povidone-יוד לאזור מגולח פעמיים, ואחריו יישום אחד 70%אתנול.לאחר מכן על העוזר להעביר את העכבר על וילונות כירורגיים סטריליים המונחים מעל כרית מחוממת. לובש כפפות סטריליות, להשתמש במקלפים כדי למשוך את העור הגבי מן הרקמה הבסיסית, ולהשתמש מספריים כירורגיים סטריליים לעשות חתך של שני סנטימטרים לאורך קו האמצע הגבי כשני סנטימטרים לפני הבסיס של הזנב. מחזיק את החתך פתוח עם מדפים סטריליים, להשתמש מספריים כירורגיים סטריליים, מעוקל, קהה קצה כדי ליצור כיס תת עורי לאורך הגב באחת העמדות כפי שצוין בדמות.לאחר המספריים הוכנסו, לפתוח ולסגור את הטיפים פעמיים כדי ליצור כיס גדול מספיק כדי להחזיק ספוג מוכנס. כאשר הכיס נוצר, השתמש במספריים כירורגיים סטריליים כדי לסחוט בעדינות ספוג PVA אחד בצלחת התרבות כדי להסיר PBS עודף. לאחר מכן, הרם את הספוג בפינה אחת, ומוביל עם הפינה המוחזקת על ידי המספריים, מניחים את הספוג בכיס התת עורי.כאשר כל ששת הספוגים הונחו כפי שהוכח, השתמש במטסים סטריליים כדי לצבוט את העור הגבי חתוך יחד, ולסגור את החתך עם שני קליפים פצע נירוסטה. לבידוד נוזלי ספוג PVA, יום עד 14 ימים לאחר ההשתלה, להסיר את סיכות הניתוח, ולפתוח את החתך עם מדפים שיניים. השתמש במספריים כדי להאריך את החתך לאורך קו האמצע הגבי, ולהשתמש במטסים כדי לחלץ ספוג אחד מכיסו התת עורי.מניחים את הספוג לתוך החבית של מזרק חמישה מיליליטר מקונן בצינור תרבות 16 מיליליטר על קרח, ולהשתמש במספריים כדי לנתק כל רקמת חיבור שנותרה חסידה לפני השטח של הספוג, לפי הצורך. כאשר כל הספוגים הוצאו והועברו כפי שהוכח, צנטריפוגה צינור התרבות כדי לאסוף את נוזל הפצע. כדי לבודד את התאים מספוגי PVA, לאחר איסוף הספוגים כפי שהודגם זה בלבד, מקם אותם לתוך צינור חרוט 15 מיליליטר המכיל חמישה מיליליטר של מדיום איסוף HBSS.כאשר כל הספוגים נאספו, decant ההשעיה ספוג לתוך שקית בלנדר 80 מיליליטר, ולתלות את התיק מן הצוהר של בלנדר ההנעה, כך משוטים יכה את הספוגים בינוני. הגדר את בלנדר ההנעה לרוץ על גבוה במשך 60 שניות, ולחץ להתחיל. כאשר הבלנדר נעצר, לסחוט את הספוגים בשקית כדי לשחרר לחלוטין את המדיום, ולהשתמש פיפטה להעביר את המדיום מתיק בלנדר בחזרה לתוך הצינור 15 מיליליטר.כוונן את ההגדרות של בלנדר ההנעה לרוץ במשך 30 שניות על גבוה, ולהוסיף חמישה מיליליטר של בינוני לשקית בלנדר. חזור על תהליך הקיבה פעמיים נוספות לפני צנטריפוגה הצינור של המדיום שנאסף. גלולה אדומה של תאים ותאי דם אדומים צריכה להיות גלויה בתחתית הצינור חרוט.מערבבים 900 מיקרוליטרים של מים מזוקקים עם התאים במשך שלוש עד חמש שניות לפני נטרול התזה עם 100 מיקרוליטרים של 10x PBS וארבעה מיליליטר של 1x PBS. לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה, ולתלות מחדש את גלולת התא הלבן במדיום המתאים לניתוח במורד הזרם. כדי ליצור פצע עור זנב, לאחר אישור חוסר תגובה קמצוץ בוהן בהדמה, שמונה עד 12 שבועות, זכר, C57-שחור / 6 עכבר, להשתמש גזה סטרילית להחיל פתרון povidone-יוד פעמיים לאתר הניתוח, ואחריו יישום אחד של 70%אתנול.באמצעות סמן קבוע ותבנית מראש, עקוב אחר קטע של 10 על 3 מילימטר על פני הגב של הזנב, 10 מילימטרים מבסיס הזנב, והצב את העכבר על וילונות כירורגיים סטריליים. לובש כפפות כירורגיות סטריליות, להשתמש בלהב אזמל סטרילי לעשות חתך בעובי מלא לאורך הקצוות הימניים, התחתונים והשמאליים של אזור הפצע. באמצעות מדפים סטריליים, לקלף את העור excised מן הזנב, ולהשתמש מספריים כירורגיים סטריליים לחתוך את הקצה העליון של אזור הפצע.השתמש גזה סטרילית כדי להפעיל לחץ על הפצע כדי לעצור את הדימום, ולהחיל סרט מחסום ספריי על מיטת הפצע. לאחר מכן, לצלם את הפצעים ממרחק קבוע במרווחי זמן קבועים, ולנתח את הצילומים על ידי ניתוח פלנימטרי כדי לקבוע את מדידות אזור הפצע. ניתוח השתלת ספוג PVA מייצר תגובה דלקתית מערכתית, כפי שהוכח על ידי אינדוקציה של IL-6 בפלזמה יום אחד לאחר הפציעה.מספר התאים שניתן לשחזר מפצעי ספוג PVA עולה עם הזמן, עם נויטרופילים, מונוציטים, מקרופאגים הכוללים את האוכלוסיות העיקריות מסתננות הסלולר בתוך הספוגים. נויטרופילים מזוהים כתאים Ly6G חיוביים, סיגלק-F-שלילי. תאים סיגלקיים-F-חיוביים הם בעיקר אאוזינופילים.גלינג על Ly6G שלילי, Siglec-F-תאים שליליים מאפשר זיהוי של מונוציטים חיוביים F4/80 מקרופאגים. תאים חיוביים F4/80 ניתן להבדיל עוד יותר על ידי ביטוי Ly6C שלהם להבחין מונוציטים דלקתיים גבוהים Ly6C ו Ly6C מונוציטים נמוכים נגזר מקרופאגים. מודל עור הזנב כריתה מספק חלופה לשיטת הביופסיה של פונץ' העור הגבי לחקר סגירת פצעים בעור מוצק חסר פרווה צפופה.סגירת פצעים יכולה להיות מכומתת על ידי מדידת האזור של מיטת הפצע לאורך זמן. פצע עור הזנב ניתן לראות גם חתך על ידי ניתוח היסטולוגי באמצעות כתמי טריכרום של H ו- E ו- Masson. בתמונות אלה, השוליים האחוריים של העור החותך מסומנים על ידי ראשי החץ על פני הגב של הזנב.כדי להבין ריפוי פצע במצב יציב, תרכובות טיפוליות או התערבויות יכול להיבדק גם באמצעות הזריקה שלהם ישירות לתוך ספוג PVA או באמצעות משלוח למיטה פצע הזנב.

assessment-acute-wound-healing-using-dorsal-subcutaneous-polyvinyl

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

כלי שימושי כדי לנתח את ההשפעות של תרופות, גורמי גדילה, ו / או תאים מניפולציות במודל חיה של תיקון הפצע מתואר. שיטה זו מנצלת את המאפיינים של ספוג אלכוהול (PVA) פוליוויניל לספק ולהכיל את הטיפול הרצוי וגם לתת במה שיש נכרת ונותחו.

פוליוויניל אלכוהול ספוג דגם השרשה

מודל עכברי של ריפוי פצע עורי שניתן להשתמש כדי להעריך את התרכובות טיפוליות בהגדרות פיסיולוגיות וpathophysiological.

מודל עכברי של ריפוי פצע

כלי דם הוא מפתח לגישות בהנדסת רקמות מוצלחת. לכן, טכנולוגיות אמינות נדרשות כדי להעריך את ההתפתחות של רשתות כלי דם ברקמות מבנים. כאן אנו מציגים שיטה פשוטה, יעיל וחסכונית כדי לחזות ולכמת כלי דם בגוף חי.

עור מלא פגמים דגם להערכת כלי דם של Biomaterials<em&gt; בVivo</em

המטרה של פרוטוקול זה היא לבנות עור תלת מימדי בעובי מלא, הדומה לעור טבעי. עם מכשיר פציעה אוטומטי שנבנה במיוחד, ניתן ליצור פצעים מדויקים וניתנים לשחזור תחת שמירה על סטריליות.

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

החולדה, בשל הגודל, הזמינות, וההתנהגות לא הצייתנית שלה, נוצלה כמודל מחקר במשך שנים רבות. המטרה של פרוטוקול זה היא לנצל את החולדה כמודל ריפוי עור פצע איסכמי לספק תובנה חשובה הפתופיזיולוגיה של פצעים כרוניים.

הפגנה של דגם פצע עור העכברוש איסכמי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור התיקון שריטות מבחנה באמצעות הפיברוכדורים העיקריים עבור vivo העור הפצע הריפוי הטיפול בעכברים. שניהם מספר שיטות ברורות כדי להעריך בתוך מבחנה וריפוי פצעים vivo.

שיטת העברת שריטות וחדר מתקפל לחלל מתורבת בניתוח Vivo של ריפוי פצעים

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור פצעים דו-צדדיים בעובי מלא בעכברים וכיצד לעקוב אחר, לקצור ולהכין את הפצעים לניתוח מורפומטרי. כלול תיאור מעמיק של אופן השימוש בסעיפים היסטולוגיים טוריים כדי להגדיר, לכמת ולזהות פגמים מורפומטריים במדויק.

מודל ריפוי פצעים מרין וניתוח פצעים מורפומטריים היסטולוגיים

כאן אנו מדגימים טכניקה ממוטבת להערכת תיקון פצעים באמצעות עור אנושי ex vivo בשילוב עם גישה מוכתמת שלם. מתודולוגיה זו מספקת פלטפורמה פרה-קלינית להערכת טיפולים פוטנציאליים לפצעים.

מודל פצע Ex vivo אנושי וגישה מוכתמת בהר שלם להערכה מדויקת של תיקון העור

מחקר זה מציג שתי טכניקות ניסיוניות חיוניות: בניית מודל פצע עכברים להערכת סגירת פצע והכנת תרחיפים חד-תאיים מעור העכברים כדי לשמר את כדאיות התאים.

מודלים של פצעים בעכברים והכנת תרחיפי תאים בודדים

פצעים מייצגים אתגר בריאותי עולמי. מחקר זה פיתח תא צילום סטנדרטי המשתמש בפלנימטריה דיגיטלית כדי למזער את שונות מדידת הפצעים. ניטור פצעים בעכברים במשך 14 יום חשף עלייה ראשונית באזור הפצע ובהיקפו, ואחריו סגירה הדרגתית. מתודולוגיה זו עשויה לסייע בהערכת קינטיקה של סגירת פצע במודלים פרה-קליניים.

פלנימטריה דיגיטלית להערכת קינטיקה של סגירת פצע במודל עכבר

מתואר מודל פצע מעור עכברוש המאפשר הערכה של תרופות שונות בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגיים בשלבים שונים של תהליך ההחלמה. בנוסף, מפורט פרוטוקול לביצוע פלנימטריה ידנית למעקב אחר קצב התכווצות הפצע במהלך תיקון הרקמות.

מודל פצע עור כירורגי לעכברוש: גישה למחקרי ריפוי פצעים והערכת ביוחומרים

למדו שני מודלי ריפוי פצעים בעכברים: ספוג PVA לשחזור לויקוציטים וחתך עור בזנב להדמיית פצאים איטיים. שיטות אלה מאפשרות ניתוח תגובות תאיות וציטוקינים במחלות כמו סוכרת.

הערכה של ריפוי בפצע חריפה באמצעות השרכה העור מפוליויניל כוהל של הרקמה העורית והזנב Excisional הפצע מודלים.

גלה סרטונים נוספים