הערכה של תפקוד הזיכרון בפילסוקרפיין-עכברים מבוססי אפילפסיה

מאמר זה מציג הליכים ניסיוניים להערכת ליקויי זיכרון בעכברים אפילפסיה הנגרמת על ידי pilocarpine. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי ללמוד את המנגנונים הפתופיזיטיביים של התדרדרות קוגניטיבית הקשורה לאפילפסיה, שהיא אחת הנפוצות ביותר במחלת התחלואה באפילפסיה.

פגיעה קוגניטיבית היא אחת התחלואה המשותפת הנפוצה ביותר באפילפסיה של האונה הרקתית. אנו מציגים פרוטוקול המתאר כיצד להעריך ליקוי זיכרון באמצעות מודל עכבר של אפילפסיה כרונית. מיקום אובייקט חדשני, זיהוי אובייקט חדשני ומבחן הפרדת תבניות הם ישבנים פשוטים וקצרים שיכולים להדגיש באופן מינימלי את בעלי החיים.

זה עושה את הבדיקה אופטימלית להערכת תפקוד הזיכרון בעכברים אפילפטיים, ללא גורמים נוספים להתקפים חוזרים ספונטניים. כדי להתחיל, להתאקלם בעלי החיים לאור הנמוך בכלובי הבית שלהם, לפחות 30 דקות. הכן תיבת שדה פתוחה.

ביום הראשון של המגורים, המקום וההלומינומטר במרכז תיבת השדה הפתוח. ולהתאים את ההתרעה ל60 לוקס. כדי להעריך את פעילות הלוקום של כל עכבר, השתמש בתוכנת מעקב וידאו התנהגות בעלי חיים.

לאחר פתיחת תוכנת המעקב אחר וידאו, כייל את גודל תיבת השדה הפתוח. לאחר מכן מניחים בעדינות עכבר ניסיוני בתיבת השדה הפתוח הפונה לקיר. פתח את תוכנית חכמה, לחץ על מותאם אישית וקבל.

לחץ על מקור תמונה. לאחר בחירת המצלמה המותקנת, לחץ על לחצן קבע. כוונן את רזולוציית המצלמה ולחץ, קבל.

לאחר לחיצה על הכיול שלנו, גרור את עכבר המחשב כדי שיתאים לגודל התיבה. ולמלא את גודל הקופסה הפנימית. לחץ על הגדרת אזור כדי לשמור ולהתאים כל גודל תיבה ולאחר מכן לחץ על שמור.

התיבה האדומה היא הטווח המסוכך, כך שהיא מתאימה לגודל התיבה הפנימית, בעוד שהתיבה הוורודה מתאימה לקו המתאר. לחץ על הגדרת זיהוי. לחץ על תמונה והקש Start Test, כדי לבדוק אם מתבצע מעקב אחר אזור מסוים ולאחר מכן קדם את עצירת הבדיקה ולאחר מכן קבל.

לחץ על הגדרות שעה. לאחר בחירת זמן מוגדר מראש, הגדר את זמן ההשהיה, בשלוש שניות זמן רכישה ל- 15 דקות ולחץ על קבל. הקש נושאים כדי להגדיר את שם הקוד.

לחץ על מתזמן, כדי למחוק את הפרטים הקיימים ולגרור את שם הקוד שהשתנה בנושאים להפעלה 1. לחץ על רכישת נתונים. לחץ על לחצן הקלט ולחץ על התחל.

שים את העכבר בתיבה ולעקוב אחריו במשך 15 דקות. לאחר 15 דקות של הקלטה להחזיר את העכבר לכלוב הביתי שלה. שחזר את האור הבהיר.

לחץ על רכישת נתונים. ולאחר מכן לחץ על פעיל ניתוח גרור שם קוד Sham לחלון שלצו. לחץ על לחצן הגדרות דוח.

לחץ על לחצן הגדרות דוח חדשות ולאחר מכן על דוח סיכום ולחץ על קבל. לחץ על שם נושא ומרחק באזור ושלח אותו לצד. לאחר מכן לחץ על לחצן קבל.

לחץ על סימן הביקורת האדום ולחץ על נתח. תבדוק את התוצאות. ביום השני, וביום השלישי, חזור על מפגשי ההרגלה.

ביום הרביעי לבצע את הפגישה היכרות. באור העמום, מקם כל עכבר בשדה הפתוח הריק למשך שלוש דקות. לאחר מגורים קצרים אלה החזירו את החיה לכלוב הבית שלה.

מניחים שני חפצים זהים, בובות גומי, לזירת השדה הפתוח, חמישה סנטימטרים מהקירות הסמוכים. תקן את האובייקטים באמצעות קלטת דו-צדדית. הצג את העכבר הניסיוני, לתוך תיבת השדה הפתוח הפונה לקיר הרחוק ביותר מהאובייקטים.

אפשר חקירה בחינם במשך 20 דקות ולמדוד באופן ידני את הזמן שהושקע בחקר שני האובייקטים באמצעות שני סטופרים. אין לכמת כזמן גישוש, כל התנהגות, שבה חוטם החיה אינו מצביע לכיוון האובייקט. לאחר שהעכבר מגיע לזמן החיפוש המינימלי של 30 שניות, עבור שני האובייקטים, הפסק את הפעלת F1 והעבר את העכבר לכלוב הביתי שלו.

אם העכבר אינו מצליח לחקור את האובייקטים במשך 30 שניות בתוך 20 הדקות, הסר את העכבר מתיבת השדה הפתוח ואל תכלול אותו בהפעלות נוספות. ביום החמישי, לבצע את הפגישה החדש אובייקט מיקום הבדיקה. מעבירים את העכבר לשטח השדה הפתוח לשיקום למשך שלוש דקות.

ואז להחזיר אותו לכלוב הבית שלה. הזז אובייקט אחד למיקום האלכסוני והצב את העכבר הניסיוני מול הקיר של תיבת השדה הפתוח. אפשר 10 דקות של חקירה חינם והקלטת עם מערכת מעקב וידאו.

מדידה, הזמן שהושקע בחקר כל אובייקט, באמצעות שני סטופרים. לאחר מכן, להעביר את העכבר לכלוב הבית שלה, על ידי תפיסת הזנב. במשך שלושה ימים, תן לעכבר לנוח עם גישה חופשית למזון ומים.

ביום התשיעי לבצע מפגש הרגלה 15 דקות, עבור עכבר אחד. ביום ה-10 מבצעים את מפגש השיקום הקצר, במשך שלוש דקות. ואז להחזיר אותו באופן זמני לכלוב הבית שלו.

מניחים שני חפצים זהים, צינורות פלסטיק 50 מיליליטר מלא 40 מיליליטר של מים, בשדה הפתוח, חמישה סנטימטרים מן הקירות הסמוכים. הצג את העכבר הניסיוני לתוך תיבת השדה הפתוח, מול הקיר הרחוק ביותר מן האובייקטים. כמו העכבר ייחשף לשני אובייקטים שונים במבחן NO, צינור פלסטיק 50 מיליליטר מלא 40 מיליליטר של מים, וצנצנת צנצנות קופלין זכוכית.

לאזן את האובייקט במהלך הפגישה היכרות, על ידי הצגת שני חפצים זהים, צנצנות קופלין זכוכית, עבור מחצית בעלי החיים בקבוצה. לאחר מכן, עם שני אובייקטים שונים, אפשר חקירה חופשית במשך 20 דקות ולמדוד באופן ידני את הזמן שהושקע בחקר שני האובייקטים באמצעות שני סטופרים. לאחר שהעכבר מגיע לזמן התפוגה המינימלי של 30 שניות עבור שני האובייקטים, הפסק את הפעלת ההיכרות.

למחרת, בצע את הפעלת הבדיקה לזיהוי אובייקטים חדשניים. ראשית, להעביר את העכבר לשדה הפתוח לשיקום, במשך שלוש דקות, ולאחר מכן להחזיר אותו לכלוב הבית שלה. חמישה סנטימטרים מן הקירות הסמוכים, להחליף את הצינור עם צנצנת צנצנות קופלין זכוכית, כך העכברים נחשפים צינור אחד צנצנת צנצנות קופלין זכוכית אחת.

עבור מחצית בעלי החיים שנחשפו צנצנות צנצנות קופלין זכוכית במהלך הפגישה הראשונה היכרות, להחליף את צנצנת צנצנות קופלין זכוכית עם צינור פלסטיק 50 מיליליטר מלא 40 מיליליטר של מים. כך שהעכברים נחשפים לצינור אחד וצנצנת צנצנות קופלין מזכוכית אחת. אפשר 10 דקות של חקירה חופשית בעת הקלטתו באמצעות מערכת מעקב וידאו.

ואז לתפוס את הזנב של העכבר הניסיוני, ולהעביר אותו לכלוב הבית שלה. במשך שלושה ימים ולתת לעכבר לנוח עם גישה חופשית למזון ומים. עבור ניתוח NL, פתח את תוכנית ההפעלה המותאמת אישית וקבל.

לחץ על מקור תמונה. לאחר בחירת המצלמה המותקנת, לחץ על לחצן קבע. רק את רזולוציית המצלמה ולחץ על קבל.

לחץ על לחצן פתח תיקיית סרטוני וידאו כדי לפתוח את הווידאו שנשמר. צפה בסרטון הווידאו שנשמר במשך 10 דקות מהרגע שהעכבר נכנס ולמדוד את הזמן שהושקע בחקר כל אובייקט. ביום ה-15 ביצע לראשונה את מפגש ההיכרות הראשון של מבחן PS.

זה לעכבר לשטח השדה הפתוח לשיקום, למשך שלוש דקות. מניחים את לוח הרצפה עם הרשת הרחבה, ושני עצמים זהים. בקבוקי טי מפלסטיק מלאים ב-50 מיליליטר מים, בקופסת השדה הפתוח.

לאחר מכן הציג את העכבר הניסיוני לתוך תיבת השדה הפתוח הפונה לקיר הרחוק ביותר מהאובייקטים. אפשר חקירה חינם למשך 20 דקות. ולמדוד באופן ידני את הזמן לבלות לחקור את שני האובייקטים באמצעות שני סטופרים.

לאחר שהעכבר מגיע לזמן חקירה מינימלי של 30 שניות עבור שני האובייקטים, הפסק את מפגש ההיכרות הראשון והעבר את החיה לכלוב הביתי שלה. כדי לאזן את מבחן הפרדת האובייקטים והתבניות עבור מחצית מבעלי החיים מניחים את לוח הרצפה עם הרשת הרחבה ושני עצמים זהים, בקבוקי זכוכית לניסוי איזון הדלפק בתיבת השדה הפתוח. לאחר מכן הציגו את העכבר הניסיוני לתיבת השדה הפתוח ואפשרו חקירה חופשית למשך 20 דקות.

לאחר שהעכבר מגיע לזמן חקירה מינימלי של 30 שניות עבור שני האובייקטים, הפסק את מפגש ההיכרות הראשון והעבר את החיה לכלוב הביתי שלה. למחרת, להעביר את העכבר לאזור השדה לשיקום במשך שלוש דקות. ואז להחזיר אותו לכלוב הבית שלו.

לאחר מכן בצע את מפגש ההיכרות השני עם שני בקבוקי זכוכית על רצפת הרשת הצרה. לניסויי האיזון הנגדי, בצעו את מפגש ההיכרות השני עם שני בקבוקי טי מלאים במים על רצפת רשת צרה. למחרת לבצע את הפגישה בדיקת הפרדת דפוס.

העבר את העכבר לשטח השדה הפתוח ללא חפץ לשיקום למשך שלוש דקות. ואז להחזיר אותו לכלוב הבית שלו. לאחר מכן, מניחים את הבקבוק T מלא במים ובקבוק זכוכית על רצפת הרשת הצרה.

הפוך את T-flasks מלא במים, באובייקט הרומן. לניסויים נגדיים, מניחים כל חפץ על רצפת הרשת הצרה כדי להפוך את בקבוק הזכוכית לאובייקט חדשני במקרה זה. לאחר מכן עבור העכבר הניסיוני לשטח השדה הפתוח במשך 10 דקות כדי לחקור.

אפשר 10 דקות של חקירה חינם והקלטת באמצעות מערכת מעקב וידאו. תפוס את הזנב של העכבר הניסיוני ולהעביר אותו לכלוב הבית שלה. למדוד את הזמן שהושקע בחקר כל אובייקט באמצעות שני שעוני עצר.

ולחשב את יחס האפליה השווה את הפרש הזמן שהושקע בין האובייקט החדשני לבין האובייקט המוכר המחולק לפי הזמן הכולל לחקור את שני האובייקטים. שישה שבועות לאחר כניסתה של pilocarpine המושרה התקפים חריפים. עכברים יהיו נתונים למבחן מיקום האובייקט החדש.

בדיקת זיהוי אובייקטים חדשנית ומבחן הפרדת תבניות. בסדר זה מופרדים על ידי שלוש תקופות מנוחה יום בין בדיקות. אושר כי אין העדפה משמעותית בין שני האובייקטים שהוצגו יחד.

העכברים האפילפטיים הראו ירידה משמעותית ביחס האפליה בשלושת הבדיקות בהשוואה לפקדי שאם. הפגנת ליקוי זיכרון מרחבי. המדידה של פעילות לוקומוטור, הראתה עלייה משמעותית בבעלי חיים אפילפטיים.

בעוד שהמוטיבציה לחקור את האובייקטים הייתה דומה בין שאם לבעלי חיים אפילפטיים. לבסוף מוות של תא היפוקמפוס הוערך לאחר אפילפטיקוס מצב המושרה pilocarpine באמצעות כתם סגול קריסטל כדי לאשר את ההתקף המושרה נזק עצבי. בעלי החיים שטופלו pilocarpine הפגינו תאים פיקנוטיים בשדה המשנה CA3 של ההיפוקמפוס, שלא כמו פקדי שאם.

ספירה במבחן NO ו- PS היא קריטית כדי להפחית את ההטיה הטבועה אפשרית באובייקטים ספציפיים למכשיר זה. בנוסף עכברים אפילפטיים כרוניים פתוחים מראים חרדה מוגברת, הדורשת צעדי מגורים מרובים עבור אומה מספיק לשבחים להגדרות הניסוי. שינויים בזמן כגון המספר או המיקום של האובייקטים בפרוטוקול שלנו יכולים לספק את בדיקות הזיכרון.

אשר יכול להיות שימושי כדי לפרט מנגנונים מורכבים של אפילפסיה הקשורים ירידה קוגניטיבית. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך להעריך היבטים שונים של ליקוי זיכרון באפילפסיה.