הקמת אוטם פונטינה חריפה בחולדות על ידי גירוי חשמלי

מוצג כאן פרוטוקול לביסוס אוטם פונטינה חריף במודל חולדה באמצעות גירוי חשמלי עם פעימה אחת.

אנו מספקים פרוטוקול כדי לקבוע אוטם בpons של חולדה. דגם חולדת אוטם פונטין זה בוצע בקלות, שוחזר בקלות, ודגם מוצלח מאוד. הגירוי החשמלי יכול לשמש כדי להפוך אוטם בכל אזור מוח אחר כמו התלמוס.

אנשים שרוצים לבצע מודל זה צריכים ללמוד את האוטונומיה פונטין לפני הניסוי. לפני הניתוח, לשקול את החולדות ולהעריך את הביצועים הנוירולוגיים שלהם על פי בדיקות התנהגות כמתואר בטקסט הנלווה. מחממים את משטח החימום ל-37 מעלות מיד לפני ההרדמה ומצמידים את מקדחת הגולגולת למחזיק במסגרת הסטריאוטוקסית.

אשר חוסר תגובה לרפלקס הדוושה בחולדה ההרדמה הראשונה והתלה את החולדה על המסגרת הסטריאוטקסית במצב נוטה על משטח החימום. מקם את מוטות האוזן מעל תעלת האוזן כדי לאבטח את הראש, דואג כי הגולגולת נשמרת אופקית, כדי למנוע כל הטיה של הזריקה. יש למרוח משחה על עיני החיה ולהשתמש במיקרו מכונת גילוח כדי להסיר את השיער מהגולגולת.

השתמש בסמן כדי לצייר קו של שלושה סנטימטרים לאורך קו האמצע של הגולגולת מהקו של canthus צדדי דו צדדי ל 0.5 ס"מ מאחורי fontanelle האחורי ולהשתמש אזמל לעשות חתך קו האמצע לאורך הקו המסומן. השתמש ספוגית כותנה כדי להסיר כל דם ולהמקם חתיכת סרט כירורגי על כל צד של דש העור כדי לחשוף את הגולגולת. השתמש ספוגית חדשה ספוגה 0.9% נתרן כלורי כדי להסיר בעדינות כל רקמת חיבור מהגולגולת ולאתר את bregma.

השתמש בעט סמן קצה עדין כדי לציין את הנקודה המרכזית של bregma כנקודת המוצא, למקם את התרגיל בשישה מילימטרים אחוריים, שני מילימטרים המדיאלי. השתמש במקדחה כדי לבצע בזהירות גולגולת בקוטר מילימטר אחד. לאחר מכן, החליף את התרגיל עם בדיקה 22 מד עם נדן מבודד עם קצה להציב שני מילימטרים מעל הקצה הפרוקסימלי של הנין.

הכנס את הסדינים שבעה מילימטרים לתוך המוח ולקדם את החללית לאורך נדן עד החלק העליון של החללית הוא תשעה מילימטרים מתחת לפני השטח של המוח. חבר את האלקטרודות לגירוי חשמלי וחבר את האנודה לבדיקה. ואז להתחבר לקתודה לאוזן של החולדה.

לאחר מכן, הפעל את ממריצה חשמלית ולהגדיר את רוחב הדופק יחיד ל 4, 050 אלפיות השניה, המתח ל 50 וולט ואת הזרם לארבעה מיליאמפר. השאירו את הגשוש במצב של חמש דקות לאחר הגירוי לפני הסרת המכשיר מהמוח. מכסים את craniotomy עם מלט עצם ולאפשר מלט להתייבש לפני השימוש 4.0 תפירת פוליאמיד תריסים כדי לסגור את הפצע.

לאחר שלושה או ארבעה תפרים, לקשור 2-1-1 קשרים כירורגיים סטנדרטיים. ואז להזריק את החולדה תוך-אפית עם 250 מיקרוליטרים של פניצילין ולפקח על החולדה כל 15 דקות עד ער מלא לפני החזרת החיה לכלוב שלה. בניתוח זה, שישה בעלי חיים היו נתונים לניתוח כפי שהוכח ושישה בעלי חיים טופלו כפקדים.

פרוסות המוח בתמונות אלה נגזרו עכברוש אחד לכל קבוצה. סריקת MRI גילתה כי האוטם היה ממוקם בבסיס הפונס המחקה אוטמים לפני ההימנעות בחולים אנושיים. בגלל נדן מבודד שימש, אוטם לא נצפתה בקליפת המוח, המוח הקטן, או midbrain.

תמונות משוקללות דיפוזיה חשפו גם את אוטם הפונטין החריף. כתמי TTC שימשו לאישור האוטם 24 שעות לאחר הניתוח. כצפוי, נפח האוטם היה גבוה משמעותית בקבוצת הניתוח בהשוואה לקבוצת הביקורת.

ציונים התנהגותיים נמדדו לפני ואחרי הניתוח. בהשוואה לקבוצת הביקורת, חולדות עם אוטם פונטין הקיפו שמאלה. הבדלים משמעותיים נצפו לונגה, ברדרסון, מיקום הגפיים, איזון קרן, ו הסרת דבק ציוני מבחן somatosensory בין rants עם אוטם פונטין וחולדות קבוצת ביקורת.

כל אזור מוח ספציפי יושמד על ידי הגירוי החשמלי.