Name: לימוד השפעות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים על הזחלים של דגי הזאב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: חקור השפעות נוירוהתנהגותיות של מזהמים סביבתיים בזחלי דגי זאב באמצעות בדיקות high throughput. שיטה זו מאפשרת הערכת נוירוטוקסיות והשלכות לבריאות הציבור ולניהול כימיקלים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים אסירי תודה על התמיכה הפיננסית על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (21876135 ו 21876136), הלאומית המדע והטכנולוגיה פרוייקט של סין (2017ZX07502003-03, 2018ZX07701001-22), הבסיס של מו-שנגחאי מעבדת מפתח של בריאות הסביבה לילדים (CEH201807) ומועצת המחקר השבדית (מס ' 639-2013-6913).

הפרוטוקול הוא בהתאם להנחיות שאושרו על-ידי ועדת האתיקה של בעלי החיים באוניברסיטת טונגג'י.
1. אוסף העובר של דג זברבפיש
<ol><li>הכניסו שני זוגות של מבוגרים בריאים, שהיו בתוך תיבת השאיפה בלילה לפני החשיפה, ושמרו על יחס המין ב-1:1.</li>
	<li>להסיר את הדג המבוגר בחזרה למערכת 30-60 דקות אחרי אור היום למחרת בבוקר.</li>
	<li>הסר את העוברים מתוך תיבת ההשריץ.</li>
	<li>שטפו את העוברים במים מערכת.</li>
	<li>להעביר את העוברים לתוך צלחת פטרי זכוכית (9 ס"מ קוטר) עם מספיק מים במערכת.</li>
	<li>צפו בעוברים שמתחת למיקרוסקופ ובחרו עוברים בריאים לחשיפה מאוחרת יותר. הערה: עוברים בריאים הם בדרך כלל שקופים עם צבע זהוב בהיר מתחת למיקרוסקופ. העוברים בריאים בדרך כלל חיוורים ומצופפים יחד כפי שנצפו מתחת למיקרוסקופ.</li>
</ol>2. הכנה לפני חשיפה
<ol><li>הכינו את הפיתרון של הנקס לפי ההנחיות של ספר31. הערה: הפתרון של הנקס כולל 0.137 M הנאל, 5.4 mM KCl, 0.25 mM Na2hpo4, 0.44 mM KH2פו4, 1.3 Mm Cacl2, 1.0 Mm mgso4, ו 4.2 mm נחקו3.</li>
	<li>לדלל את הפתרון של הנקס לפתרון 10% הנקס באמצעות מים סטריליים.</li>
	<li>Add 1 mL של DMSO לתוך 999 mL של 10% הנקס פתרון לעשות פתרון שליטה של 10% הנקס פתרון כולל 0.1% DMSO. הערה: השלבים הבאים משתמשים ב-BDE-47 כדוגמה לפתרון חשיפה.</li>
	<li>לפזר 5 מ ג מסודר BDE-47 ב 1 מ ל של 100% DMSO כדי ליצור פתרון חשיפה סטנדרטית של 5 מ"ג/mL.</li>
	<li>מערבולת הפתרון 5 מ"ג/mL עבור 1 דקות כדי לפזר לחלוטין את BDE-47 ב DMSO.</li>
	<li>העבר 10 μL של הפתרון 5 מ"ג/mL לבקבוק זכוכית חום 12 mL.</li>
	<li>הוסף מים מעוקר לנפח הסופי של 10 מ ל כדי להפוך את הריכוז של BDE-47 פתרון חשיפה 5 מ"ג/L ו DMSO יחס ב 0.1%, ואז מערבולת עבור 1 דקות.</li>
	<li>העברה 10 μL ו-100 μL של 5 מ"ג/L פתרון לתוך מבחנות נפח 2 100 mL בהתאמה.</li>
	<li>הוסף 10% הנקס פתרון כולל 0.1% DMSO (מוכן בשלב 2.3) כדי 100 mL כדי להפוך את הריכוזים הסופיים של BDE-47 פתרונות חשיפה 5 μg/L ו-50 μg/L, בהתאמה.</li>
	<li>העבר את הפתרונות לבקבוקי זכוכית בראון 100 mL ואחסן אותם ב -4 ° c.</li>
</ol>3. חשיפת עוברים
<ol><li>העברת ~ 50 עוברים לתוך כל אחת משלוש מנות פטרי (6 ס"מ קוטר) 3-5 שעות הפריה פוסט (hpf).</li>
	<li>השתמש בקצה הצינורות 1 מ"ל כדי למחוק את מי המערכת סביב העוברים.</li>
	<li>השתמש בפיפטה כדי להעביר את השליטה ושתי פתרונות חשיפה BDE-47 (שליטה, 5 μg/L, 50 μg/L) לתוך שלוש מנות פטרי מזכוכית, בהתאמה.</li>
	<li>לנער את הזכוכית מנות פטרי בעדינות אחד אחד כדי לגרום לעוברים להתפזר בתחתית הצלחת.</li>
	<li>שימו את הזכוכית מנות פטרי לתוך החממה הקלה מתחת 28.5 ° c.</li>
	<li>לחדש את המחצית של פתרונות החשיפה כל 24 h עד 5 dpf.</li>
	<li>בדוק את העוברים המתים של כל קבוצה ב-1 dpf ו 2 dpf ולחשב את שיעור התמותה.</li>
	<li>בדוק את העוברים המדמדניים של כל קבוצה על 2 dpf ו-3 dpf ולחשב את הצאצאים.</li>
	<li>לבדוק את העיוות של הזחלים כל יום לאחר שהם יוצאים מן chorion ולחשב את שיעור העיוות של כל קבוצה. הערה: מחווני עיוות כוללים ציסטה בחיוג, עקמומיות השדרה, עקמומיות זנב, בין השאר גורמים32.</li>
</ol>4. הכנה למבחן ההתנהגות
<ol><li>הכינו 48 היטב אימונולוגיה עבור בדיקת זווית הנתיב תנועה ושלושה 6 מיקרופלטות היטב עבור בדיקת פעילות חברתית בבוקר של 5 dpf.</li>
	<li>העברת 800 μL של פתרון חשיפה לתוך כל טוב של 48 מיקרוצלחת הטוב. הערה: השתמש 16 בארות עבור כל קבוצה (כלומר, פתרון הבקרה, 5 μg/L, ו-50 μg/L הקבוצה).</li>
	<li>השתמש בעצה אחת מ-mL כדי להעביר 200 μL של פתרון חשיפה עם זחל אחד מן הזכוכית צלחת פטרי לתוך הבאר אחד של 48 מיקרוצלחת היטב.</li>
	<li>העברה 4 מ ל של פתרון חשיפה לתוך כל טוב של 6 מיקרופלייט היטב. הערה: השתמש ב-6 מיקרופלייט היטב עבור כל קבוצה.</li>
	<li>השתמש בעצה אחת מ-mL כדי להעביר 200 μL של פתרון חשיפה עם שני הזחלים לתוך כל טוב של 6 מיקרוצלחת היטב. הערה: לכל קבוצה יש שש קבוצות חוזרות.</li>
	<li>ודא שטמפרטורת חדר הבחינה היא 28 ° צ' 2 h לפני המבחן. הערה: הבדיקות ההתנהגותית מתבצעות בדרך כלל אחר הצהריים.</li>
</ol>5. מבחן התנהגותי
<ol><li>תנועה וזווית מבחן<ol><li>לחץ על סמל משגר בשולחן המחשב כדי לפתוח את התוכנה (ראה טבלת חומרים) השולטת במארז ניטור התפוקה הגבוהה כדי להפעיל את התוכנית.</li>
		<li>בחר את המודול "מעקב, סיבובים, זוויות נתיב" כדי להיכנס לממשק ההפעלה.</li>
		<li>העבר את מיקרוצלחת 48 היטב מוכן בשלב 4.3 לפלטפורמת ההקלטה ומשוך את המכסה.</li>
		<li>לחץ על "קובץ" לחצן "צור פרוטוקול" בתורו של התוכנה כדי להתחיל ליצור פרוטוקול חדש.</li>
		<li>קלט "48" במיקום "ספירת מיקום" ולחץ על "אישור" כפתור.</li>
		<li>לחץעל "פרמטרים" פרמטרים "הפרוטוקול" "זמן" כפתור בתורו את התוכנה. הגדר את משך הניסוי עבור 1 h ו-10 דקות והגדר את תקופת האינטגרציה ל-60 s33.</li>
		<li>צייר את האזורים שזוהו.<ol>
<li>בחר את הצורה האליפטית וצייר את העיגול הראשון מסביב לראש הראשון שמאלה.</li>
			<li>בחר את המעגל, לחץ על "העתק" לחצן "הדבק"מימין"להדביק" "בחר" כפתור בתורו, ולהשתמש בעכבר כדי לגרור את המעגל המועתק למעלה בסדר הנכון.</li>
			<li>בחר את המעגל, לחץ על "העתק" "מארק התחתון" "הדבק" "לבחור" כפתור בתורו, ולהשתמש בעכבר כדי לגרור את המעגל המועתק למטה בסדר הנכון.</li>
			<li>לחץ על כפתור "לבנות"מארקבתורו. הערה: המערכת תצייר באופן אוטומטי את כל היתר של הצלחת. האזורים החדשים שנוצרו צריכים להתאים באופן מושלם בין הדג הממשי לבין ההשתקפות שלו בצד הבאר.</li>
		</ol></li>
		<li>לחץ על לחצן "צייר קנה מידה", צייר קו כיול על המסך (נתיב אלכסוני או במקביל לצד המיקרו-פלטה), הזן את אורכו והגדר את "היחידה". לאחר מכן לחץ על כפתור "להחיל על הקבוצה".</li>
		<li>הגדר את צבע החי ב "שחור" בתוכנה.</li>
		<li>הגדר את סף הזיהוי ב-16-18 כדי לאפשר זיהוי של בעלי החיים.</li>
		<li>קלט לא פעיל/קטן מהירות קטנה/גדולה ב 0.5 ס"מ/s ו 2.5 ס"מ/s בהתאמה.</li>
		<li>הגדר את מחלקות זווית הנתיב. קלט "-90, 30, 10, 0, 10, 30, ו 90" כדי להפוך את שיעורי זווית הנתיב מ-180 ° + 180 °.</li>
		<li>קבע את תנאי התאורה<ol>
<li>לחץ על "פרמטרים" "נהיגה באור" "משתמש באחת 3 שיטות המפעיל למטה" "גירויים משופרים" בתורו להגדיר את תנאי האור.</li>
			<li>בחר את "Edge" כפתור, ולאחר מכן להגדיר תקופה חשוכה של 10 דקות, ואחריו שלושה מחזורים של לסירוגין 10 דקות אור וכהים תקופות.</li>
		</ol></li>
		<li>שמור את הפרוטוקול והפוך את האור של חדר הבדיקות.</li>
		<li>Acclimate הזחלים במערכת עבור 10 דקות ולחץ על "ניסוי"לבצע"כפתור בתורו, ולאחר מכן בחר את התיקייה שבה קבצי הניסוי נשמרים ולהזין את שם התוצאה.</li>
		<li>לחץ על "רקע" כפתור "התחל" בתורו להתחיל את הבדיקה.</li>
		<li>לחץ על לחצן "הניסוי"לעצורבתורו כדי לעצור את הניסוי כאשר מסתיים הבדיקה. הערה: המערכת מציגה את הנתונים שנבדקו כאשר המערכת נעצרת. הנתונים כוללים את המרחק מסומנים בשלוש מחלקות מהירות ומספרי זווית של הנתיב בשמונה מחלקות זווית של כל דקה. עבור מבחן התנועה בדוגמה המוצגת, המרחק הכולל בכל תקופה קלה (10 דקות) מחושב וההפרש בין קבוצת הביקורת לבין קבוצות הטיפול בהשוואה.</li>
		<li>להעביר את מיקרוצלחת 48 היטב בחזרה לחממה אור עבור ניסויים אחרים.</li>
	</ol></li>
	<li>בדיקת פעילות חברתית<ol>
<li>לחץ על סמל משגר בשולחן המחשב כדי לפתוח את התוכנה השולטת במארז בקרת תפוקה גבוהה כדי להפעיל את התוכנית.</li>
		<li>בחר במודול "אינטראקציות חברתיות" כדי להיכנס לממשק ההפעלה.</li>
		<li>העבר את המוכן 6 מיקרופלייט (קבוצת בקרה) בשלב 4.4 לפלטפורמת ההקלטה ומשוך את המכסה.</li>
		<li>לחץ על "קובץ" לחצן "צור פרוטוקול" בתורו של התוכנה כדי להתחיל ליצור פרוטוקול חדש.</li>
		<li>קלט "6" במיקום "ספירת מיקום" ולחץ על כפתור "אישור".</li>
		<li>לחץעל "פרמטרים" פרמטרים "הפרוטוקול" "זמן" כפתור בתורו את התוכנה. הגדר את משך הניסוי עבור 1 h ו-10 דקות והגדר את תקופת האינטגרציה ל-60 s.</li>
		<li>צייר את האזורים שזוהו.<ol>
<li>בחר את הצורה האליפטית וצייר את העיגול הראשון מסביב לראש הראשון שמאלה.</li>
			<li>בחר את המעגל, לחץ על "העתק" לחצן "הדבק"מימין"להדביק" "לבחור" בתורו, ולהשתמש בעכבר כדי לגרור את המעגל המועתק למעלה הטוב הנכון.</li>
			<li>בחר את המעגל, לחץ על "העתק" "מארק התחתון" "הדבק" "לבחור" כפתור בתורו, ולהשתמש בעכבר כדי לגרור את המעגל המועתק למטה בסדר הנכון.</li>
			<li>לחץ על כפתור "לבנות"מארקבתורו. הערה: האזורים החדשים שנוצרו צריכים להתאים בצורה מושלמת ובין הזחלים הממשיים וההשתקפות שלו בצד הבאר.</li>
		</ol>
</li>
		<li>לחץ על לחצן "צייר קנה מידה", צייר קו כיול במסך (נתיב אלכסוני או במקביל לצד המיקרו-לוח), הזן את אורכו והגדר את "היחידה". לאחר מכן לחץ על כפתור "להחיל על הקבוצה".</li>
		<li>הגדר את סף הזיהוי ב-16-18 כדי לאפשר זיהוי של בעלי החיים.</li>
		<li>לחץ על כפתור "חיה שחורה" בתוכנה.</li>
		<li>בחר את "סף מרחק" לחצן וקלט "5" בתוכנה.</li>
		<li>הגדר את תנאי התאורה.<ol>
<li>לחץ על "פרמטרים" "נהיגה באור" "משתמש באחת 3 שיטות המפעיל למטה" "גירויים משופרים" בתורו להגדיר את תנאי האור.</li>
			<li>בחר את "Edge" כפתור, ולאחר מכן להגדיר תקופה חשוכה של 10 דקות, ואחריו שלושה מחזורים של לסירוגין 10 דקות אור וכהים תקופות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>שמור את הפרוטוקול. והפנה את אור החדר</li>
		<li>Acclimate הזחלים במערכת עבור 10 דקות ולחץ על "ניסוי"לבצע"כפתור בתורו, ולאחר מכן בחר את התיקייה שבה קבצי הניסוי נשמרים ולהזין את שם התוצאה.</li>
		<li>לחץ על "רקע" כפתור "התחל" בתורו להתחיל את הבדיקה.</li>
		<li>לחץ על לחצן "הניסוי"לעצורבתורו כדי לעצור את הניסוי בתוכנה כאשר הבדיקה מסתיימת. הערה: המערכת מציגה את הנתונים שנבדקו כאשר המערכת נעצרת.</li>
		<li>להעביר את 6 הטוב אימונולוגיה (בקרת הקבוצה) בחזרה לחממה אור עבור ניסויים אחרים.</li>
		<li>העבר את 6 מיקרולוחות היטב (5 μg/L ו-50 μg/L) בתורו לפלטפורמת ההקלטה וחזור על הצעדים מ5.2.4 כדי ל5.2.17 על-ידי סודר.</li>
	</ol></li>
</ol>6. ניתוח נתונים
<ol><li>פתח את קובץ הגיליון האלקטרוני בתוצאות התנועה וזווית הנתיב.</li>
	<li>בחר את שלוש עמודות המרחק (inadist, smldist, lardist) ולהוסיף אותם. הערה: הנתונים של inadist, smldist, ו lardist הממוצע שונים שנרשמו על ידי המערכת בכיתות מהירות שונות (לא פעיל/קטן/גדול), בהתאמה.</li>
	<li>עבור כל 10 דקות האור מסכם את המרחק של כל באר, לחשב את המרחק הממוצע של 16 בארות, ולהשוות את הנתונים של שלוש הקבוצות תחת גירויים אור.</li>
	<li>עבור כל 10 דקות האור מסכם את מספר הזווית של כל טוב בכל משך האור מ cl01 כדי cl08 בתורו, ולהשוות את הנתונים של שלוש הקבוצות תחת גירויים אור. הערה: הנתונים של עמודות מ- cl01 to cl08 מתכוונים למספרים שונים של זווית נתיב שנרשמו על-ידי המערכת בזוויות נתיב שונות, בהתאמה.</li>
	<li>פתח את קובץ הגיליון האלקטרוני בתוצאות הפעילות החברתית.</li>
	<li>בחר את העמודות contct ו contct , ועבור כל 10 דקות אור הזמן לסכם את הזמנים החברתיים ואת המשך שלהם לכל הטוב.</li>
	<li>חשב את הזמנים החברתיים הממוצעים ואת משך הקבוצה האחת בכל משך האור והשווה את הנתונים של שלוש הקבוצות תחת גירוי קל.</li>
</ol>

<ol><li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+neurotoxicity+of+organophosphate+flame+retardants+in+early+life+stages+of+Japanese+medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes).</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).</li>
<li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxicity+induced+by+zinc+oxide+nanoparticles%3A+age-related+differences+and+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Neurotoxicity induced by zinc oxide nanoparticles: age-related differences and interaction.</a> Scientific Reports. 5, 16117(2015).</li>
<li>Rauh, V. A., Margolis, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+review%3A+environmental+exposures%2C+neurodevelopment%2C+and+child+mental+health-new+paradigms+for+the+study+of+brain+and+behavioral+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Child+Psychology+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Research review: environmental exposures, neurodevelopment, and child mental health-new paradigms for the study of brain and behavioral effects.</a> Journal of Child Psychology and Psychiatry. 57 (7), 775-793 (2016).</li>
<li>Ye, B. S., Leung, A. O. W., Wong, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+of+environmental+toxicants+and+autism+spectrum+disorders+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">The association of environmental toxicants and autism spectrum disorders in children.</a> Environmental Pollution. 227, 234-242 (2017).</li>
<li>Schwarzenbach, R. P., Gschwend, P. M., Imboden, D. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchwarzenbach%2C+RP+%22Environmental+Organic+Chemistry%22">Environmental Organic Chemistry</a>. , John Wiley & Sons. (2016).</li>
<li>Akortia, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+sources%2C+levels%2C+and+toxicity+of+polybrominated+diphenyl+ethers+%28PBDEs%29+and+their+transformation+and+transport+in+various+environmental+compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Reviews%22%5BJournal%5D)">A review of sources, levels, and toxicity of polybrominated diphenyl ethers (PBDEs) and their transformation and transport in various environmental compartments.</a> Environmental Reviews. 24 (3), 253-273 (2016).</li>
<li>Shaw, B. J., Liddle, C. C., Windeatt, K. M., Handy, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+evaluation+of+the+fish+early-life+stage+toxicity+test+for+engineered+nanomaterials%3A+experimental+modifications+and+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A critical evaluation of the fish early-life stage toxicity test for engineered nanomaterials: experimental modifications and recommendations.</a> Archives of Toxicology. 90 (9), 2077-2107 (2016).</li>
<li>Landrigan, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+environmental+origins+of+neurodegenerative+disease+in+later+life%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Health+Perspectives%22%5BJournal%5D)">Early environmental origins of neurodegenerative disease in later life.</a> Environmental Health Perspectives. 113 (9), 1230-1233 (2005).</li>
<li>Xu, T., Yin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unlocking+neurobehavioral+effects+of+environmental+endocrine+disrupting+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Endocrine+and+Metabolic+Research%22%5BJournal%5D)">The unlocking neurobehavioral effects of environmental endocrine disrupting chemicals.</a> Current Opinion in Endocrine and Metabolic Research. 7, 9-13 (2019).</li>
<li>Panula, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulatory+neurotransmitter+systems+and+behavior%3A+towards+zebrafish+models+of+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Modulatory neurotransmitter systems and behavior: towards zebrafish models of neurodegenerative diseases.</a> Zebrafish. 3 (2), 235-247 (2006).</li>
<li>Félix, L. M., Antunes, L. M., Coimbra, A. M., Valentim, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+alterations+of+zebrafish+larvae+after+early+embryonic+exposure+to+ketamine%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Behavioral alterations of zebrafish larvae after early embryonic exposure to ketamine.</a> Psychopharmacology. 234 (4), 549-558 (2017).</li>
<li>Bailey, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+behavioral+effects+following+early+life+exposure+to+retinoic+acid+or+valproic+acid+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Persistent behavioral effects following early life exposure to retinoic acid or valproic acid in zebrafish.</a> Neurotoxicology. 52, 23-33 (2016).</li>
<li>Richendrfer, H., Créton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+High-throughput+Behavioral+Analyses+in+Zebrafish+Larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. (77), e50622(2013).</li>
<li>Best, J. D., Alderton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+An+in+vivo+model+for+the+study+of+neurological+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychiatric+Disease+%26+Treatment%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: An in vivo model for the study of neurological diseases.</a> Neuropsychiatric Disease & Treatment. 4 (3), 567-576 (2008).</li>
<li>Yuhei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+systems+toxicology+model+for+developmental+neurotoxicity+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Congenital+Anomalies%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a systems toxicology model for developmental neurotoxicity testing.</a> Congenital Anomalies. 55 (1), 1-16 (2015).</li>
<li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TBBPA+induces+developmental+toxicity%2C+oxidative+stress%2C+and+apoptosis+in+embryos+and+zebrafish+larvae+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology%22%5BJournal%5D)">TBBPA induces developmental toxicity, oxidative stress, and apoptosis in embryos and zebrafish larvae (Danio rerio).</a> Environmental Toxicology. 31 (10), 1241-1249 (2016).</li>
<li>Chakraborty, C., Sharma, A. R., Sharma, G., Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+complete+animal+model+to+enumerate+the+nanoparticle+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A complete animal model to enumerate the nanoparticle toxicity.</a> Journal of Nanobiotechnology. 14 (1), 65(2016).</li>
<li>Wehmas, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+metal+oxide+nanoparticle+toxicity+using+embryonic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Reports%22%5BJournal%5D)">Comparative metal oxide nanoparticle toxicity using embryonic zebrafish.</a> Toxicology Reports. 2, 702-715 (2015).</li>
<li>Cavalieri, V., Spinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+epigenetics+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics+%26+Chromatin%22%5BJournal%5D)">Environmental epigenetics in zebrafish.</a> Epigenetics & Chromatin. 10 (1), 46(2017).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+three+different+embryonic+exposure+modes+of+2%2C+2%3F%2C+4%2C+4%3F-tetrabromodiphenyl+ether+on+the+path+angle+and+social+activity+of+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Effects of three different embryonic exposure modes of 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether on the path angle and social activity of zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 169, 542-549 (2017).</li>
<li>Zhao, J., Xu, T., Yin, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+activity+changes+on+zebrafish+larvae+with+different+2%2C+2%3F%2C+4%2C+4%3F-tetrabromodiphenyl+ether+%28PBDE-47%29+embryonic+exposure+modes%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Locomotor activity changes on zebrafish larvae with different 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether (PBDE-47) embryonic exposure modes.</a> Chemosphere. 94, 53-61 (2014).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobehavioral+effects+of+two+metabolites+of+BDE-47+%286-OH-BDE-47+and+6-MeO-BDE-47%29+on+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Neurobehavioral effects of two metabolites of BDE-47 (6-OH-BDE-47 and 6-MeO-BDE-47) on zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 200, 30-35 (2018).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chlorine+contents+and+chain+lengths+influence+the+neurobehavioral+effects+of+commercial+chlorinated+paraffins+on+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hazardous+Materials%22%5BJournal%5D)">The chlorine contents and chain lengths influence the neurobehavioral effects of commercial chlorinated paraffins on zebrafish larvae.</a> Journal of Hazardous Materials. 377, 172-178 (2019).</li>
<li>Schmitt, C., McManus, M., Kumar, N., Awoyemi, O., Crago, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analyses+of+the+neurobehavioral%2C+molecular%2C+and+enzymatic+effects+of+organophosphates+on+embryo-larval+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology+and+Teratology%22%5BJournal%5D)">Comparative analyses of the neurobehavioral, molecular, and enzymatic effects of organophosphates on embryo-larval zebrafish (Danio rerio).</a> Neurotoxicology and Teratology. 73, 67-75 (2019).</li>
<li>Li, X., Kong, H., Ji, X., Gao, Y., Jin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavioral+phenomics+applied+for+phenotyping+aquatic+neurotoxicity+induced+by+lead+contaminants+of+environmentally+relevant+level%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavioral phenomics applied for phenotyping aquatic neurotoxicity induced by lead contaminants of environmentally relevant level.</a> Chemosphere. 224, 445-454 (2019).</li>
<li>Leuthold, D., Klüver, N., Altenburger, R., Busch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+environmentally+relevant+neuroactive+chemicals+specifically+be+detected+with+the+locomotor+response+test+in+zebrafish+embryos%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Can environmentally relevant neuroactive chemicals specifically be detected with the locomotor response test in zebrafish embryos?</a> Environmental Science & Technology. 53 (1), 482-493 (2018).</li>
<li>Kinch, C. D., Ibhazehiebo, K., Jeong, J. H., Habibi, H. R., Kurrasch, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+exposure+to+bisphenol+A+and+replacement+bisphenol+S+induces+precocious+hypothalamic+neurogenesis+in+embryonic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Low-dose exposure to bisphenol A and replacement bisphenol S induces precocious hypothalamic neurogenesis in embryonic zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (5), 1475-1480 (2015).</li>
<li>Javed, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+amyloid+beta+toxicity+in+zebrafish+with+a+chaperone-gold+nanoparticle+dual+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Inhibition of amyloid beta toxicity in zebrafish with a chaperone-gold nanoparticle dual strategy.</a> Nature Communications. 10 (1), 1-14 (2019).</li>
<li>Green, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+high-throughput+neurophenotyping+of+zebrafish+social+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated high-throughput neurophenotyping of zebrafish social behavior.</a> Journal of Neuroscience Methods. 210 (2), 266-271 (2012).</li>
<li>Tytell, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hydrodynamics+of+eel+swimming+II.+Effect+of+swimming+speed%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The hydrodynamics of eel swimming II. Effect of swimming speed.</a> Journal of Experimental Biology. 207 (19), 3265-3279 (2004).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Zebrafish+Book%22%5BJournal%5D)">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> The Zebrafish Book. 4, (2000).</li>
<li>Ying, L., Jiang, L., Bo, P., Yong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teratogenic+effects+of+embryonic+exposure+to+pretilachlor+on+the+larvae+of+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agro-Environment+Science%22%5BJournal%5D)">Teratogenic effects of embryonic exposure to pretilachlor on the larvae of zebrafish.</a> Journal of Agro-Environment Science. 36 (3), 481-486 (2017).</li>
<li>Macphail, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotion+in+larval+zebrafish%3A+Influence+of+time+of+day%2C+lighting+and+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Locomotion in larval zebrafish: Influence of time of day, lighting and ethanol.</a> Neurotoxicology. 30 (1), 52-58 (2009).</li>
<li>Kais, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMSO+modifies+the+permeability+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29+chorion-implications+for+the+fish+embryo+test+%28FET%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">DMSO modifies the permeability of the zebrafish (Danio rerio) chorion-implications for the fish embryo test (FET).</a> Aquatic Toxicology. 140, 229-238 (2013).</li>
<li>Truong, L., Harper, S. L., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTruong%2C+L+%22Drug+Safety+Evaluation%22">Drug Safety Evaluation</a>. , Springer. 271-279 (2011).</li>
<li>Peeters, B. W., Moeskops, M., Veenvliet, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Color+preference+in+Danio+rerio%3A+effects+of+age+and+anxiolytic+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Color preference in Danio rerio: effects of age and anxiolytic treatments.</a> Zebrafish. 13 (4), 330-334 (2016).</li>
<li>Barba-Escobedo, P. A., Gould, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+social+preferences+of+lone+zebrafish+in+a+novel+environment%3A+strain+and+anxiolytic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Visual social preferences of lone zebrafish in a novel environment: strain and anxiolytic effects.</a> Genes, Brain and Behavior. 11 (3), 366-373 (2012).</li>
<li>Blaser, R., Penalosa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimuli+affecting+zebrafish+%28Danio+rerio%29+behavior+in+the+light%2Fdark+preference+test%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Stimuli affecting zebrafish (Danio rerio) behavior in the light/dark preference test.</a> Physiology & Behavior. 104 (5), 831-837 (2011).</li>
<li>Blaser, R. E., Rosemberg, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measures+of+anxiety+in+zebrafish+%28Danio+rerio%29%3A+dissociation+of+black%2Fwhite+preference+and+novel+tank+test%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio): dissociation of black/white preference and novel tank test.</a> PloS One. 7 (5), e36931(2012).</li>
<li>Weichert, F. G., Floeter, C., Artmann, A. S. M., Kammann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+ecotoxicity+of+potentially+neurotoxic+substances-Evaluation+of+a+behavioural+parameter+in+the+embryogenesis+of+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Assessing the ecotoxicity of potentially neurotoxic substances-Evaluation of a behavioural parameter in the embryogenesis of Danio rerio.</a> Chemosphere. 186, 43-50 (2017).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

עבודה זו מספקת פרוטוקול ניסיוני מפורט להערכת הרעילות של מזהמים סביבתיים באמצעות הזחלים דג זברה. במהלך תקופת החשיפה, מגיע התהליך מעוברים אל הזחלים, כלומר הטיפול הטוב של העוברים והזחלים חיוני. כל דבר המשפיע על התפתחות העוברים והזחלים יכול להשפיע על התוצאה הסופית. כאן הסביבה התרבותית, תהליך החשיפה והתנאים הניסיוניים נדונים על מנת להבטיח את הצלחת כל שיטת העבודה.
עבור סביבת התרבות, עוברי הדגים והזחלים חיים בטמפרטורה יציבה של ~ 28 ° c. בעבודה זו, חממה קלה שיכולה לקבוע את תנאי האור באופן אוטומטי ולשמ...

בשנים האחרונות יותר ויותר מזהמים סביבתיים הוכחונוירוטוקסי1,2,3,4. עם זאת, הערכה של רעילות נוירוvivo לאחר החשיפה למזהמים סביבתיים אינו קל כמו זה של הפרעה אנדוקרינית או רעילות התפתחותית. בנוסף, חשיפה מוקדמת למזהמים, בעיקר במינונים הרלוונטיים לסביבה, משכה תשומת לב גוברת ללימודי רעילות5,6,7,8.
Zebrafish הוא הוקם כמודל בעלי חיים עבור מחקרים נוירורעילות במהלך ההתפתחות המוקדמת לאחר חשיפה למזהמים סביבתיים. דג הזבראפיש הינו החוליות המתפתחות מהר יותר ממינים אחרים לאחר ההפריה. הזחלים לא צריכים להיות מוזנים כי החומרים המזינים ב chorion הם מספיק לקיים אותם 7 ימים הפריה (dpf)9. הזחלים יוצאים מן chorion ב ~ 2 dpf ולפתח התנהגויות כגון שחייה והפעלה כי ניתן לצפות, מעקב, כימות, וניתח באופן אוטומטי באמצעות כלי התנהגות10,11,12,13 החל ב 3-4 dpf14,15,16,17,18. בנוסף, ניתן להבין בדיקות תפוקה גבוהה גם באמצעות כלי התנהגות. לפיכך, הזחלים דג זברה הם מודל מצטיין לחקר נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים19. כאן, פרוטוקול מוצע באמצעות ניטור תפוקה גבוהה כדי לחקור את הרעילות נוירולוגית של מזהמים סביבתיים על הזחלים של דגים תחת גירויים אור.
המעבדה שלנו למדה רעילות נוירוהתנהגותית של 2, 2 ', 4, 4 '-tetrabromodiphenyl אתר (bde-47)20,21, 6 '-הידרוxy/מתקסי-2, 2 ', 4, 4 '-טטרארומאודיפנאל אתר (6-הו/מיאו-bde-47)22, deca-ברומיד diפניאיל אתר (bde-209), עופרת, ומסחרי כלוריד קבוקים23 באמצעות הפרוטוקול המוצג. מעבדות רבות משתמשות גם בפרוטוקול כדי ללמוד את ההשפעות הנוירותנהגותיות של מזהמים אחרים על הזחלים או דגים מבוגרים24,25,26,27. זה פרוטוקול נוירו התנהגותי שימש כדי לסייע לספק תמיכה מכניסטית מראה כי חשיפה במינון נמוך כדי בינתנול A והחלפת בינול המושרה מוקדם היפותלמי נוירוגנזה ב דג זברה העובריים27. בנוסף, חלק מהחוקרים ממוטבים את הפרוטוקול לביצוע מחקרים תואמים. מחקר שנערך לאחרונה ביטלה את הרעילות של ביתא עמילואיד (Aβ) במודל קל, תפוקה גבוהה מודל דג זברה באמצעות מצופה קזאין חלקיקי זהב (βCas אונפס). זה הראה כי βCas אונפס במחזור מערכתי ממוקם על פני מחסום הדם-מוח של הזחלים דג זברה ו מגרם aβ 42, מעורר רעילות באופן לא ספציפי, כמו המלווה, אשר נתמך על ידי פתולוגיה התנהגותית28.
תנועה, זווית הנתיב, והפעילות החברתית הם שלושה אינדיקטורים נוירוהתנהגותית המשמשים לחקר ההשפעות הנוירורעילות של הזחלים דג זברה לאחר חשיפה מזהמים בפרוטוקול המוצג. תנועה נמדד על-ידי המרחק השוחה של הזחלים ועלול להינזק לאחר חשיפה למזהמים מזהמים. זווית הנתיב והפעילות החברתית קשורים קשר הדוק יותר לתפקוד המוח ומערכת העצבים המרכזית29. זווית השביל מתייחסת לזווית הדרך של התנועה בעלי חיים ביחס לכיוון השחייה30. שמונה מחלקות זווית מ ~-180 °-~ + 180 ° מוגדרות במערכת. כדי לפשט את ההשוואה, שישה שיעורים בתוצאה הסופית מוגדרים כתורים שגרתיים ( -10 ° ~ 0 °, 0 ° ~ + 10 °), ממוצע פונה ( -10 ° ~-90 °, + 10 ° ~ + 90 °), והפניות מגיבות (-180 ° ~-90 °, + 90 ° ~ + 180 °) על פי המחקרים הקודמים שלנו21 הפעילות החברתית של שני הדגים היא בסיסית של התנהגות משוצבת הקבוצה; כאן מרחק של < 0.5 ס מ בין שני הזחלים התקפים מוגדר כאיש קשר חברתי.
הפרוטוקול המוצג כאן ממחיש תהליך ברור לחקר השפעות נוירוהתנהגותיות על הזחלים דג זברה ומספק דרך לחשוף את ההשפעות הנוירורעילות של חומרים שונים או מזהמים. הפרוטוקול יועיל לחוקרים המעוניינים ללמוד את הרעילות העצבית של מזהמים סביבתיים.

<table><tbody><tr><td>48-well-microplate</td><td>Corning</td><td>3548</td><td>Embyros בית</td></tr><tr><td>6-well-microplate</td><td>Corning</td><td>3471</td><td>Embyros</td></tr><tr><td>בית BDE-47</td><td>AccuStandard</td><td>5436-43-1</td><td>מזהם</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>67-68-5</td><td>מיקרוסקופ קו-סולבנט</td></tr><tr><td></td><td>אולימפוס</td><td>SZX 16</td><td>מכשיר תצפית</td></tr><tr><td>פיפטה</td><td>Eppendorf</td><td>3120000267</td><td>פתרון העברת</td></tr><tr><td>Zebrabox</td><td>נקודת מבט</td><td>ZebraBox</td><td>מכשיר התנהגות</td></tr><tr><td>Zebrafish</td><td>שנחאי FishBio Co., Ltd.</td><td>ספק דג הזברה</td> <td>של Tubingen</td></tr><tr><td>ZebraLab</td><td>Viewpoint</td><td>תוכנת התנהגות</td> <td>ZebraLab</td></tr></tbody></table>

לימוד השפעות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים על הזחלים של דגי הזאב

Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae

השנים האחרונות יותר ויותר מזהמים סביבתיים הוכחו נוירוטוקסינים, במיוחד בשלבי הפיתוח המוקדמים של אורגניזמים. הזחלים מדגים הם מודל בראש המחקר הנוירותנהגותי של מזהמים סביבתיים. כאן, פרוטוקול ניסיוני מפורט מסופק להערכת רעילות נוירומזהמים סביבתיים באמצעות הזחלים דג זברה, כולל אוסף של העוברים, תהליך החשיפה, אינדיקטורים נוירוהתנהגותית, תהליך הבדיקה, ו . ניתוח נתונים כמו כן, הסביבה התרבותית, תהליך החשיפה והתנאים הניסיוניים נדונים על מנת להבטיח את הצלחת התהליך. הפרוטוקול נעשה שימוש בפיתוח של תרופות פסיכוסטיות, מחקר על מזהמים עצביים סביבתיים, והוא יכול להיות ממוטב כדי לבצע מחקרים מתאימים או להועיל למחקרים מכניסטיים. הפרוטוקול ממחיש תהליך פעולה ברור לחקר השפעות נוירוהתנהגותיות על הזחלים דג זברה יכול לחשוף את ההשפעות של חומרים נוירורעילים שונים או מזהמים.

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לחקר ההשפעות הנוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים באמצעות הזחלים של הדגים תחת גירויים באור. התנועה, זווית הנתיב ובדיקות הפעילות החברתית מוגדרות במבוא. הכיוונון של המיקרופלטות בבדיקות התנועה וזווית הנתיב והתמונות של התוכנה מוצגות להלן. בנוסף, תוצאות המחקר שלנו מוצגות כדוגמאות. שני מחקרים להציג את תנועה ואת התוצאות זווית הנתיב לאחר החשיפה BDE-47 ו 6-או/מיאו-BDE-47. המחקר השלישי מציג את ההשפעות של 4 קבוקים מסחריים כלור על התנהגות חברתית.
<p class="jove_content" fo:...

פרוטוקול ניסיוני מפורט מוצג במאמר זה להערכת רעילות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים באמצעות מודל הזחלים דג זברה, כולל תהליך החשיפה ובדיקות אינדיקטורים נוירוהתנהגותית.

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae ...

הפרוטוקול שלנו מספק תהליך ברור לחקר ההשפעות הנוירו-התנהגותיות של החומרים והמזהמים המעניינים את זחלי הזברה ולחשיפת הנוירוטוקסיות הפוטנציאלית של סוכנים אלה. הטכניקה יכולה להתבצע באמצעות בדיקות תפוקה גבוהה של נוירו-התנהגותים במודל הזברה-דג. שיטה זו יכולה להיות מיושמת כדי להעריך את ההשפעות הנוירו-התנהגותיות של מזהמים כדי להדגים נוירוטוקסיות פוטנציאלית עלינו בני האדם, שכן לגנום זברה-דג יש חומולוגיה גבוהה עם בני אדם, כך שהוא יכול לספק אינדיקציות לניהול כימי ולבעיות בריאות הציבור הנגרמות על ידי מזהמים.כמו זברהfish יש את היתרון של הקרנת תפוקה גבוהה, שיטה זו מספקת תובנה הן פיתוח של תרופות פסיכוטרופיות ומחקר טוקסיקולוגיה סביבתית. אל תהיה מאוים על לימוד הניסוי הראשון. אם תעקוב אחר הפרוטוקול, תהיה לך תוצאה מוצלחת.לפחות שעתיים לפני ביצוע ניסוי, להגדיר את טמפרטורת החדר ל 28 מעלות צלזיוס ולהוסיף 800 microliters של פתרון חשיפה לכל באר של מיקרופלסטיק 48 היטב. לאחר מכן, השתמש פיפט מיליליטר אחד עם קצה שונה להעביר זחל אחד ב 200 microliters של פתרון חשיפה לכל באר של microplate כהכנה לניסוי זווית קטר נתיב. כדי להכין מיקרופלסטיק של שש בארות לניסויי התנהגות חברתית, הוסיפו ארבעה מיליליטר של פתרון חשיפה לכל באר של ששת המיקרו-מפלסים היטב והעברת שני זחלים ב-200 מיקרוליטר של פתרון חשיפה לכל באר.לפני תחילת הבדיקה, פתח את תוכנת ניטור תפוקה גבוהה ובחר את מודול זוויות הנתיב סיבובי מעקב. העבר את המיקרופלסטיק 48 באר לפלטפורמת ההקלטה ולמשוך את העטיפה. לחץ על קובץ והפיק פרוטוקול כדי להתחיל ליצור פרוטוקול חדש והזן 48 למיקום ספירת המיקומים.לחץ על פרמטרים, פרמטרי פרוטוקול ושעה, הגדר את משך הניסוי לשעה ו- 10 דקות ואת תקופת השילוב ל- 60 שניות. באמצעות כלי הצורה האליפטית, צייר עיגול סביב החלק השמאלי העליון היטב. בחר את העיגול ולחץ על העתק, סימון ימני עליון, הדבקה ובחירה.השתמש בעכבר כדי לגרור את העיגול המועתק היטב הימני העליון ולחץ על העתק, סימון ימני עליון, הדבקה ובחירה שוב. לאחר מכן, גרור היטב את העיגול המועתק לתחתית הימנית ולחץ על בנה ונקה סימונים. המערכת תצייר באופן אוטומטי עיגול מעל כל באר אחרת של הצלחת.לאחר מכן, לחץ על צייר קנה מידה וצייר קו כיול על המסך. הזינו את אורך השורה, קבעו את היחידה ולחצו על 'החל על קבוצה'. הגדר את צבע החיה לשחור והגדר את סף הגילוי ל- 16 עד 18 כדי לאפשר זיהוי של בעלי החיים, הגדר את המהירות הלא פעילה למהירות קטנה ל- 0.5 ס"מ לשנייה ואת המהירות הקטנה עד הגדולה ל- 2.5 ס"מ לשנייה.הגדר את מחלקות זווית הנתיב ממינוס 180 פלוס 180 כמצוין. כדי להגדיר את תנאי האור, לחץ על פרמטרים, נהיגה קלה, שימוש באחת מ- 3 שיטות מפעילות להלן וגירויים משופרים כדי להגדיר את תנאי האור. לחץ על Edge והגדר תקופה כהה של 10 דקות, ואחריה שלושה מחזורים של תקופות אור וכהה לסירוגין של 10 דקות.לאחר מכן, שמור את הפרוטוקול. כאשר כל הפרמטרים נקבעו, כבה את התאורה בחדר הבדיקה, ואפשר לזחלים להתאקלם במערכת במשך 10 דקות. בתום תקופת ההתאקלמות, לחץ על ניסוי וביצוע וצור את התיקיה שבה יש לשמור את הקבצים הניסיוניים.לאחר מכן, הזן את שם התוצאה ולחץ על רקע ו התחל. בסוף הניסוי, לחץ על ניסוי ועצור. לאחר מכן החזירו את המיקרופלסטיק בן 48 הבאר בחזרה לאנקובטור האור לניסויים הבאים.מכיוון שכל קבוצה יכולה לכלול 16 בעלי חיים, המערכת יכולה לשמש לביצוע בדיקות תפוקה גבוהות של הקטר וזווית הנתיב בתנאי טיפול שונים במיקרופלסטיק יחיד של 48 באר. הפעילות החברתית של הזחלים יכולה להיבדק באמצעות צלחות שש בארות. בניסוי מייצג זה, קבוצת הריכוז הגבוהה ביותר של BDE-47 הפגינה היפואקטיביות בולטת במהלך התקופה האפלה, בעוד שלא נצפו שינויים עקב חשיפה ל- BDE-47 במהלך תקופות האור.יתר על כן, קבוצת הריכוז הגבוהה של 6-הידרוקסי-BDE-47 ביצעה פחות פניות שגרתיות וממוצעות בחמישה ימים לאחר ההפריה. עם זאת, פניות מגיבות יותר נגרמו בקבוצות החשיפה 6-methoxy-BDE47. הפעילות החברתית של דג הזברה עוררה על ידי פרפין-70 כלור ופרפין-52b עם שרשרת קצרה, בעוד הפרפין-52a הכלור בשרשרת הארוכה קיצר את משך המגע של הזחלים.חשוב לוודא שלזחלים שהועברו לבדיקה צריכה להיות יכולת שחייה נורמלית וללא מומים. משתנים אחרים, כגון העדפת צבע, העדפה בהירה כהה, כל החושך, תנועות הזנב של זברה, ניתן לכלול כדי לענות על שאלות נוספות על רעילות neurobehavioral של מזהמים סביבתיים. פתרונות החשיפה BDE-47 הם נוירוטוקסיים ויש להם פוטנציאל הפרעה אנדוקריני, כדי להיות בטוח כדי למנוע מגע ישיר עם העור.

studying-neurobehavioral-effects-environmental-pollutants-on

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

מאמר זה מתאר את התגובה ההתנהגותית של דגי זברה לתרכובות רעילות על ידי ניטור תנועת הזחל. הפרוטוקול בוחן גם דוגמה לתגובת זחלי הזברה למזהמים סביבתיים.

בדיקת תנועת זחלים: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לחקר רעילות נוירו-התנהגותית של תרכובת בזחלי דגי זברה

המעבדה שלנו פיתחה מערכת שהיא שימושית לצורך זיהוי של כמה התנהגויות שונות בזחלי דג הזברה 7 ימים בת הדמיה אוטומטית תפוקה גבוהה רומן. המערכת יכולה לשמש לאיתור שינויים עדינים בהתנהגות לאחר הזחלים שנחשפו לרעלים או תרופות סביבתיים.

ניתוח התנהגות תפוקה גבוהה אוטומטי בזחלי דג הזברה

מאמר זה מתאר כיצד יכול להיות משותק דג הזברה מבוגר, מחוברת לצינורות, ומשמש לניסויי in vivo אלקטרו לאפשר הקלטות ומניפולציה של פעילות עצבית בבעלי חיים בשלמותה.

הקלטת אלקטרו במוח של דג הזברה למבוגר שלמה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבחון פעילויות זחל דג זברה, פאטהד מינו גינקולוגיות ותגובות photomotor (PMR) באמצעות תוכנת מעקב אוטומטי אנטי. כאשר שולבו במשותף הרעלים bioassays, ניתוחים של התנהגויות אלו מספקים כלי אבחון לבחון אתריים כימי. פרוטוקול זה מתואר באמצעות קפאין, neurostimulant מודל.

נסיוני לבחינת תגובה התנהגותית פרופילים בדגים זחל: ליישום הקפאין נוירו-ממריץ

כתב יד זה מתאר שיטה פשוטה למדוד מתח במהלך הפעולה במהלך בגרות דג מבוגר. הגישה מנצלת את הנטייה הטבועה שדגים מעדיפים את החצי התחתון של הטנק כאשר במצב מלחיץ. כמו כן, אנו מתארים שיטות לזיווג עם פרמקולוגיה.

גישות התנהגותיות לחקר הלחץ הטבוע בדג זברה

מטרת הפרוטוקול הנוכחי היא להתוות את הצעדים הדרושים כדי לבסס ולהשתמש במבחן העדפה חברתית עבור דג זברה בוגר ולהוכיח שניתן להשתמש בו כדי לאפיין פגמים חברתיים הנגרמים על ידי אתנול.

מידול הפרעות בספקטרום האלכוהול העוברי בדגי הזברה כדי לאפיין את ההשפעה של סביבה עוברית שלילית על התנהגות חברתית של מבוגרים

כאן, אנו מציגים סוללת בדיקות התנהגותית מקיפה, כולל מיכל חדשני, Shoaling ומבחני העדפה חברתית, כדי לקבוע ביעילות את ההשפעות הנוירוטוקסיות האפשריות של כימיקלים (למשל, מתאמפטמין וגלייפוסט) על דגי זברה בוגרים באמצעות מכל יחיד. שיטה זו רלוונטית לנוירוטוקסיות ולמחקר סביבתי.

הערכת רעילות עצבית אצל מבוגרים Danio rerio באמצעות סוללה של מבחנים התנהגותיים במיכל יחיד

אנו מתארים את זרימת העבודה וניתוח הנתונים של מערכת סינון להערכת רעילות של תרכובות כימיות בהתבסס על תגובת הבהלה של רטט עובר דג הזברה. המערכת מתעדת את תנועותיהם של עוברי דגי זברה בחשיפה לגירוי רטט ומאפשרת הערכה משולבת של רעילות/קטלניות כללית ורעילות עצבית-שרירית.

הערכת רעילות של כימיקלים באמצעות מערכת סינון תגובת בהלה לרטט של דגי זברה

פרוטוקול זה מתאר הליך סינון תרופות בזחלי זברה 3-7 ימים לאחר ההפריה ואחריו הערכה מורפולוגית.

בדיקת מולקולות קטנות ובדיקת רעילות בזחלי דגי זברה בשלב מוקדם

פרוטוקול לתכנון והבנייה של טנק אדמת ממשק למנהרת רוח אקלים מבוקר קטנה כדי לחקור את ההשפעות של forcings אטמוספרה באידוי מוצג. שני מיכל האדמה ומנהרת רוחם instrumented עם טכנולוגיות חיישן למדידה רציפה באתרו של תנאים סביבתיים.

היכרות האפקטים של האטמוספרה Forcings באידוי: שילוב ניסיוני של שכבת האטמוספרה הגבול ומתחת לפני קרקע רדודה

חקור השפעות נוירוהתנהגותיות של מזהמים סביבתיים בזחלי דגי זאב באמצעות בדיקות high throughput. שיטה זו מאפשרת הערכת נוירוטוקסיות והשלכות לבריאות הציבור ולניהול כימיקלים.

לימוד השפעות נוירוהתנהגותית של מזהמים סביבתיים על הזחלים של דגי הזאב

גלה סרטונים נוספים