Name: הקמת מעגל באתרו של איברי הבטן התחתונה וגפיים האחוריות בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 27 s
Description: למד טכניקת הדמיה באתרו של איברי הבטן התחתונה בעכברים לחקר מסירת תרופות ואינטראקציות חיסוניות. שיטה זו מאפשרת הדמיה יעילה של שלפוחית השתן, הערמונית, איברי המין והעור תוך הימנעות מאיברי ניקוי ראשיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחקר היה נתמך על ידי המענק NIH CA194058 כדי DS, Skaggs בית הספר להענקת מרקחת המגמה הזרע תוכנית (DS); הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (גרנט No. 31771093), הפרויקט של שיתוף פעולה בינלאומי של מחוז ג'ילין (No 201180414085GH), קרנות המחקר הבסיסי של האוניברסיטאות המרכזיות, התוכנית JLU מדע וטכנולוגיה מחקר חדשני הצוות (2017TD-27, 2019TD-36).

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הטיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת קולורדו ולהשתמש בוועדה (IACUC).
1. לחמם מראש את מערכת ההיתוך
<ol><li>הכינו את מערכת הפרפיוז לפני הניתוח על-ידי הפעלת מקלחת מים ב37 ° c עבור כל הרכיבים בעלי מכסה המים (מאגר לחות, תא לח וכסוי) כפי שמוצג בתצורה מותאמת אישית באיור 1A. ודא שאבובים נקי ולהחליף במידת הצורך. כדי להגביל את נפח השימוש, השתמש במלכודת בועה בתוך תא לח כמאגר המים (איור 1B-6).</li>
</ol>2. צנתור כלי דם
<ol><li>לגרום הרדמה ב-8-10 בשבוע הישן BALB/c העכבר באמצעות מכונת הרדמה וטרינרית isofלאנה עם 3-5% isof, ושיעור זרימת החמצן ב 0.3 L/min. כחלופה, השתמש קטמין/xylazine או כל סוג אחר של הרדמה בתוך הצפק. להעריך את עומק ההרדמה על ידי 2 שיטות: לצבוט הבוהן רפלקס המצמוץ.</li>
	<li>להרטיב המשי תפר 4-0 עם מחט במים כפולים מזוקקים.</li>
	<li>מניחים את העכבר מורדם במיקום פרקדן על לוח קלקר עם הראש מול המנתח ומשתק את הגפיים האחוריות עם קלטת. לנגב את הבטן עם אלכוהול איזופרופילי ולחתוך את הבטן לאורך קו האמצע בצורת "T" עם מספריים. הפסיקו לדמם מסביב לקצה החתך על ידי האלקטרוקרישת (הקאוזציה).</li>
	<li>לדחוף את הבטן, מעי ונקודתיים בצד ימין של הבטן כדי לחשוף את אבי העורקים הבטני, הבנה קאווה, ואת העורקים הנפוצים כסל ו iliol, וורידים.</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ לנתיחה, למצוא ולאתר את העורק הליאולרומבה/וריד בזכר, השחלות עורק/וריד ועורק iliolרומבה/וריד בנקבה באמצעות 4-0 בתפרים משי (איור 2 קווים צהובים).</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ לנתיחה, לולאה 2 4-0 משי תפרים מתחת העורקים הבטן והוריד הראשי הנחותים (כ 1 ס מ מעל עורק כסל והווריד, 1 מ"מ בנפרד, איור 2), ולעשות קשר רופף בתפר הקרוב ביותר ספינות כסל (איור 2, לבנים מנוקד קו). לחילופין, תפר משי 6-0 יכול לשמש לקשר זה.</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ לנתיחה, ליישר אופקית ולמתוח הן את העורק הנחותים ואת אבי העורקים הבטני עם פורט-אייגיללה. השתמש 24 G כנפיים מסוכך קטטר אינפוזיה לנקב את אב העורקים הבטן, ללחוץ על הכפתור כדי למשוך את ליבת המחט ולהכניס את הצנתר על 5 מ"מ לתוך כלי.<ol>
<li>חזור על אותו ההליך עם הורד המטה הנחות ולקשור קשרים של שני תפרים סביב כלי הצנתור. הערה: המחט יכולה לנקב בקלות דרך כלי הדם; לכן, שמרו על הכלים מתוחים ומחטים מקבילים לכלי. למשוך את ליבת המחט ברגע המחט חודר על 1 מ"מ לתוך כלי. העורקים הבטני הוא מתחת לבנה קאווה נחותים הרבה יותר רזה ואלסטי יותר בשל היותו עטוף רקמת חיבור. לכן, העורקים יכול "להחזיק" על הצנתר, ולכן צריך להיות צנתור לפני האובקאווה כדי להפחית את הסבירות של הקטטר לחמוק.</li>
	</ol>
</li>
	<li>החלת דבק מיידי כדי לשתק את הקטטרים של האריקטור spinae, להחליף את איברי הבטן, ולסיים את הניתוח תוך שמירה על ההרדמה. הערה: איברים שאינם יכולים להיות מוחלפים לחלוטין בחלל הבטן יצטרכו להיות לחלח באופן תקופתי במדיום הפרפיוז במהלך תהליך הפרזיה.</li>
</ol>3. הגדר את המערכת הפרפיוז
<ol><li>העבר את העכבר לחדר לחות המים כיסה מראש עד 37 ° c על משטח סיליקון והשתק את כנפי הקטטר אל הלוח עם 19 מחטים G.</li>
	<li>למלא את הקצה של קטטר העורקים (כניסת) עם מאגר פרהפיוז מראש (תמיסת לקטט של צלצול בתוספת 5% bsa), ולאחר מכן לחבר את קצה הקטטר עם אבובים זלוף באמצעות מחבר בורג (איור 1b, חץ אדום). הערה: החזק את המחבר עם מלקחיים הומוסטטי והשתק את האבובים באמצעות הקלטת כדי להימנע מהזזת הקטטרים.</li>
	<li>כוונן את קצב הזרימה הפריסטטי ל-0.6 mL/min ושמור על זרימה יוצאת (איור 1B, חץ כחול) פתוח הסתיים עבור 5-10 דקות כדי לשטוף את הדם דרך צנתר הורידים. יהיו כמה קרישי דם בצנתר השקע; לרוקן את הקרישי דם עם מאגר מבשם לפני סגירת מעגל זלוף.</li>
	<li>לחבר את הקצה של קטטר ורידי עם אבובים שקע באמצעות מחבר בורג על מנת לסגור את המעגל (איור 1B). בשלב זה, לבצע2 גז המתת חסד ולוודא על ידי ניקוב החזה או כל שיטה אחרת.</li>
	<li>כסו את החדר הלח עם המכסה החומם. בדוק את רמת האופן מעת לעת והוסף יותר במידת הצורך. ניתן לבצע את perfusion עד 2 שעות. הערה: 5 מ ל של מבשם יהיה צורך להקים את מערכת הפרפיוז הסגורה. אם אין דליפה או בצקת, נפח הדרך יהיה ירידה בפחות מ-1 מ ל ומאגר נוסף לא יהיה צורך. כדי למנוע בצקת שנגרמה על ידי הטרובוס היקפי מחזורי, מאגר זלוף המכיל 0.002% הפארין ניתן להשתמש ב -10 דקות הראשונות של הפרזיה, אבל יש לשנות כדי לאגור ללא הפארין כדי למנוע את הדליפה בקצה החתכים.</li>
	<li>במקרה הצורך, הוסיפו את האפשרות הכימית לתוך מאגר ההיתוך או ליציאת ההזרקה בכל עת (איור 1ב -5). לדוגמה, 10 μL של 10 מ"ג/mL Hoechst33342 ניתן להוסיף לתוך המיבשם להכתים את גרעיני התא 2 h לפני סוף perfusion, או 50 μL של 1 מ"ג/mL DyLight 649-lectin כדי להכתים את התאים של כלי הדם האנדותל מזערי לפני סוף perfusion. הערה: אם מנסים להכתים את מח העצם עם פתרון הואכסט, עכברים יצטרכו להיות מוזרק מראש 30 דקות לפני הניתוח.</li>
	<li>לאחר זלוף עם ריאגנטים פלורסנט, לשטוף עם מאגר זלוף במשך 10 דקות נוספות כדי למזער את הזריחה הרקע.</li>
</ol>4. ניתוח איברים
<ol><li>איסוף איברים כולל ביקורות, ערמונית, שלפוחית השתן, עצם הירך, שריר, ועור (למשל, רגליים). בלו חתיכת איבר על 1 מ"מ3 ומשטח בין שתי שקופיות זכוכית.<ol>
<li>מחקר מתחת למיקרוסקופ פלורסנט הפוך באמצעות DAPI/Cy5 עירור ומסנני פליטה (עירור לייזרים: DAPI, 405 ננומטר; Cy5, 640 ננומטר). השתמש לפחות במטרה להגדלה של 200x עם מיפתח מספרי 0.45.</li>
		<li>לחילופין, לתקן את האיברים עם 4% פורמלדהיד פתרון עבור 24 שעות ולבצע המטאוקסילין-אאוזין כתמים19.</li>
	</ol>
</li>
	<li>כדי ליצור חלון עצם עבור התבוננות מח עצם שלמים, לשתק את שני הקצוות של עצם הירך או השוקה ולגרד את העצם קליפת המוח עם הקצה לרוחב של המחט G 19 כדי לחשוף את הקרום; לדאוג לשמור על שכבה דקה של עצם שיורית. עצם מניחים על מכסה כיסוי עם החלון מול זכוכית ותמונה עם מיקרוסקופ הפוכה קונפוקלית וקד באמצעות dapi ו Cy5 ערוצי כפי שמתואר לעיל. התאים והרשת כלי הדם בחלל מח העצם ניתן להבחין בקלות.</li>
</ol>

<ol><li>Ghaidan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ten+year+follow-up+of+lung+transplantations+using+initially+rejected+donor+lungs+after+reconditioning+using+ex+vivo+lung+perfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiothoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125(2019).</li>
<li>Kabagambe, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+Ex+vivo+Hypothermic+and+Normothermic+Perfusion+for+Assessment+of+High-risk+Deceased+Donor+Human+Kidneys+for+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Combined Ex vivo Hypothermic and Normothermic Perfusion for Assessment of High-risk Deceased Donor Human Kidneys for Transplantation.</a> Transplantation. 103 (2), 392-400 (2019).</li>
<li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+subnormothermic+ex+vivo+liver+perfusion+for+the+storage%2C+assessment%2C+and+repair+of+marginal+liver+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51419(2014).</li>
<li>Hems, R., Ross, B. D., Berry, M. N., Krebs, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gluconeogenesis+in+the+perfused+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">Gluconeogenesis in the perfused rat liver.</a> Biochemical Journal. 101 (2), 284-292 (1966).</li>
<li>Nielsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasopressin+increases+water+permeability+of+kidney+collecting+duct+by+inducing+translocation+of+aquaporin-CD+water+channels+to+plasma+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (4), 1013-1017 (1995).</li>
<li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li>
<li>Schreiter, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+perfusion+system+emulating+in+vivo+conditions+in+noncirrhotic+and+cirrhotic+human+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">An ex vivo perfusion system emulating in vivo conditions in noncirrhotic and cirrhotic human liver.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (3), 730-741 (2012).</li>
<li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viscous+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors%3A+effect+of+hematocrit+on+intratumor+blood+viscosity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Viscous resistance to blood flow in solid tumors: effect of hematocrit on intratumor blood viscosity.</a> Cancer Research. 49 (13), 3513-3519 (1989).</li>
<li>Duyverman, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+isolated+tumor+perfusion+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">An isolated tumor perfusion model in mice.</a> Nature Protocols. 7 (4), 749-755 (2012).</li>
<li>Sears, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+perfusion+of+a+tumor-containing+colon+with+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Ex vivo perfusion of a tumor-containing colon with monoclonal antibody.</a> J Surg Res. 31 (2), 145-150 (1981).</li>
<li>Duda, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+cells+facilitate+lung+metastasis+by+bringing+their+own+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21677-21682 (2010).</li>
<li>Kristjansen, P. E., Boucher, Y., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dexamethasone+reduces+the+interstitial+fluid+pressure+in+a+human+colon+adenocarcinoma+xenograft%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Dexamethasone reduces the interstitial fluid pressure in a human colon adenocarcinoma xenograft.</a> Cancer Research. 53 (20), 4764-4766 (1993).</li>
<li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Geometric+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors+perfused+ex+vivo%3A+effects+of+tumor+size+and+perfusion+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Geometric resistance to blood flow in solid tumors perfused ex vivo: effects of tumor size and perfusion pressure.</a> Cancer Research. 49 (13), 3506-3512 (1989).</li>
<li>Zhang, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+Maintenance+of+Primary+Human+Multiple+Myeloma+Cells+through+the+Optimization+of+the+Osteoblastic+Niche%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ex vivo Maintenance of Primary Human Multiple Myeloma Cells through the Optimization of the Osteoblastic Niche.</a> PLoS One. 10 (5), (2015).</li>
<li>Di Buduo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+flow+chamber+for+engineering+bone+marrow+architecture+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modular flow chamber for engineering bone marrow architecture and function.</a> Biomaterials. 146, 60-71 (2017).</li>
<li>Lokerse, W. J. M., Eggermont, A. M. M., Grull, H., Koning, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+an+isolated+limb+infusion+model+for+investigation+of+drug+delivery+kinetics+to+solid+tumors+by+thermosensitive+liposomes+and+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of an isolated limb infusion model for investigation of drug delivery kinetics to solid tumors by thermosensitive liposomes and hyperthermia.</a> Journal of Controlled Release. 270, 282-289 (2018).</li>
<li>Tietjen, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+targeting+to+the+endothelium+during+normothermic+machine+perfusion+of+human+kidneys%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle targeting to the endothelium during normothermic machine perfusion of human kidneys.</a> Science Translational Medicine. 9 (418), (2017).</li>
<li>Ternullo, S., de Weerd, L., Flaten, G. E., Holsaeter, A. M., Skalko-Basnet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+perfused+human+skin+flap+model%3A+A+missing+link+in+skin+penetration+studies%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">The isolated perfused human skin flap model: A missing link in skin penetration studies.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 96, 334-341 (2017).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, 4986(2008).</li>
<li>Hekman, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Dual-Modality+Imaging+in+Renal+Cell+Carcinoma%3A+An+Ex+vivo+Kidney+Perfusion+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Targeted Dual-Modality Imaging in Renal Cell Carcinoma: An Ex vivo Kidney Perfusion Study.</a> Clinical Cancer Research. 22 (18), 4634-4642 (2016).</li>
<li>Graham, R. A., Brown, T. R., Meyer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+model+for+the+study+of+tumor+metabolism+by+nuclear+magnetic+resonance%3A+characterization+of+the+phosphorus-31+spectrum+of+the+isolated+perfused+Morris+hepatoma+7777%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">An ex vivo model for the study of tumor metabolism by nuclear magnetic resonance: characterization of the phosphorus-31 spectrum of the isolated perfused Morris hepatoma 7777.</a> Cancer Research. 51 (3), 841-849 (1991).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

המעגל המתואר ניתן להשתמש כדי לחקור שאלות מחקר שונות, למשל את התפקיד של מרכיבי סרום שונים מחסומי רקמות באספקת סמים, או החיסונית והגזע הסחר בתאים. ניתן להוסיף מערכות שונות לאספקת סמים (למשל, ליפוזומים וחלקיקים) כדי להבין את התפקיד של גורמים פיזיולוגיים וביוכימיים במסירה. משך הפרזיה יכול להשתנות, תלוי ברקמה שנחקרה, מטרות מדעיות והלחנה של מבשם. אנו מציגים כאן את התוצאות של מיזוג עד 2 h באמצעות מדיה זלוף בסיסי המורכב של הפתרון של המצלצל עם לקטט ו אלבומין. יש לציין כי מטרת העבודה הנוכחית הייתה להקים את מעגל הפרפיוז במקום לפתח ...

האיבר הבודד זלוף פותחה במקור כדי ללמוד פיזיולוגיה איברים עבור השתלת1,2,3, ו הבנה מאופשר של פונקציות של האיברים ללא הפרעות ממערכות גוף אחרות. לדוגמה, כליה בודדה ופרפיוז הלב היה שימושי מאוד להבנת עקרונות בסיסיים של הומודינמיקה והשפעות של סוכני vasoactive, בעוד זלוף הכבד היה חשוב להבין את תפקוד חילוף החומרים, כולל מטבוליזם הסמים ברקמה בריאה וחולה4,5,6,7. בנוסף, מחקרי פרזיה היו קריטיים בהבנת הכדאיות ותפקוד האיברים המיועדים להשתלה. ב מחקר הסרטן, מבודד זלוף הגידול תוארה על ידי מספר קבוצות באמצעות העכבר, עכברוש, ו מרקמות האדם טרי resected8,9. ב מסוימים perfusion הגידול בודד, הגידול היה מושתל במשטח שומן השחלה כדי לכפות את התפתחותם של הגידול המספק כלי דם מעורק מצע המעי10. הקבוצה הג ביצעה לימודי חלוצי באמצעות זלוף מבודדים של המעי הגס אדנוקרצינומות כדי להבין הומודינמיקה הגידול גרורות8,11,12,13. הגדרות אחרות vivo ex הנדסה לשעבר כוללים 96 התקן זלוף מבוסס על הצלחת לתרבות האדם הראשי מיאלומה נפוצה תאים14 ו תא זרימה מודולרי לאדריכלות מח עצם הנדסה ומחקר פונקציה15.
בנוסף לחקר הפיזיולוגיה והפתולוגיה, שימש העוגב לחקר העקרונות הבסיסיים של אספקת סמים. כך, קבוצה אחת תיאר בודד הגפיים האיבר מבודדים ולמד הצטברות של ליפוזומים בסרקומות16מושתל, בעוד קבוצה אחרת ביצע את זלוף הכליה האנושית כדי ללמוד את המיקוד האנדותל של חלקיקים17. טרנוללו ואח ' השתמשו בכנף עור אנושית מבודדת כvivo מדגם של מודל18.
למרות הפיתוחים הללו בפרזיה של איברים גדולים ורקמות, לא היו דיווחים על מודלים באתרו של היתוך בעכברים כי: a) לעקוף את אברי הסיווג כגון כבד, טחול וכליות; ב) כוללים איברי אגן, עור, שריר, איברי הרבייה (בזכר), שלפוחית השתן, מח העצם והערמונית. בשל הגודל הקטן של האברים הללו והזנת המערכת, הצינורית הvivo לשעבר והקמתה של מעגל פרפיוז לא היתה אפשרית. העכבר הוא מודל החיות החשוב ביותר בחקר הסרטן והאימונולוגיה, ומסירת סמים. היכולת של איברי עכבר קטנים לאפשר שאלות מעניינות לגבי מסירת סמים לאיברים אלה, כולל גידולים מושתלים באגן (שלפוחית השתן, ערמונית, שחלה, מח עצם), להיות נענה, כמו גם מחקרים של פיזיולוגיה בסיסית ואימונולוגיה של מחלות של איברים אלה. כדי לענות על מחסור זה, פיתחנו מעגל באתרו בתוך עכברים שעלולים למנוע פגיעה ברקמות, והוא הרבה יותר מתאים למחקר פונקציונלי מאשר פרזיה איברים מבודדים.

<table><tbody><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.5x-90x מיקרוסקופ זום סטריאו על מעמד בום עם תאורת LED</td><td>אמסקופ</td><td>מק"ט: SM-3BZ-80S</td><td></td></tr><tr><td>פחמן דו חמצני, USP</td><td>Airgas healthcare</td><td>19087-5283</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>NIKON</td><td>ECLIPSE Ti2</td><td></td></tr><tr><td>עט קוטר סטרילי חד פעמי עם FIAB</td><td></td> <td>בטמפרטורה גבוההF7244</td><td></td></tr><tr><td>מלכודת בועות בתא לח (חלק 6 באיור 1)</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>733692</td><td>מותאם אישית כמיכל הפרפיסט; אפשר גם זלוף בלחץ קבוע</td></tr><tr><td>כיסוי תא לח עם חלון קוורץ (חלק 3 באיור 1)</td> <td>מכשירי הרווארד</td><td>733524</td><td>לשמור על טמפרטורת החדר</td></tr><tr><td>תא לח עם מחליף חום צינור מתכת</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>732901</td><td>תא לח מצופה מים עם מכסה לשמירה על טמפרטורת הפרפוזה והעכבר</td></tr><tr><td>מחזיקי מחטים Olsen-Hegar עם חותכי תפרים</td><td>כלי מדע עדינים (FST)</td><td>125014</td><td></td></tr> משאבת רולר <tr><td>C2649150AE06</td><td></td>בריאות<td>USP</td><td>Airgas</td></tr><tr><td>(חלק 4 באיור 1)</td><td>מכשירי הרווארד</td><td>730113</td><td>לספק פרפוזה לצינורית בתא</td></tr> <tr><td>הלחבקרת סרוו של SCP plugsys F/Perfusion (חלק 1 באיור 1)</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>732806</td><td>לשלוט במהירות הטיהור</td></tr><tr><td>כרית סיליקון</td> מכשיר <td></td><td></td><td>הרווארד</td></tr><tr><td>סט צינורות סיליקון (חצים באיור 1)</td> <td>מכשיר הרווארד (TYGON)</td><td>733456</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים דפוס סטנדרטי לסטודנטים</td><td>כלי מדע עדינים (FST)</td><td>91100-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td> <td>כירורגייםכלי מדע עדינים (FST)</td> <td>14001-14</td><td></td></tr><tr><td>שולחן לתא לח</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>734198</td><td></td></tr><tr><td>Thermocirculator (חלק 2 באיור 1)</td> <td>מכשיר הרווארד</td><td>724927</td><td>אמבט מים במחזור לכל הרכיבים המעטפים במים</td></tr><tr><td>תא עצירה תלת כיווני (חלק 5 באיור 1)</td> <td>Cole-Palmer</td><td>30600-02</td><td></td></tr><tr><td>מכונת הרדמה וטרינרית</td><td>היילנד</td><td>HME109</td><td></td></tr><tr><td><חזק>חומרים</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>19-G BD מחט PrecisionGlide</td><td>BD</td><td></td><td>305186 לשיתוק המחט המכונפת של Insyte Autoguard ולגירוד עצם קליפת המוח</td></tr><tr><td>4-0 תפרי משי</td><td>Keebomed-Hopemedical</td><td>427411</td><td></td></tr><tr><td>6-0 תפרי משי</td><td>מסנן 427401</td><td></td><td></td>Keebomed-Hopemedical</tr><tr><td>( 0.2 ומיקרו; m)</td> מסנן <td>ThermoFisher</td><td>42225-CA</td><td>עבור 5% BSA-RINGER' </td></tr><tr><td>סמן קבוע</td> S מזרק <td>Staedtler</td><td>342-9</td><td></td></tr><tr><td>(10 מ"ל)</td>מזרק <td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-823-2E</td><td></td></tr><tr><td>(60 מ"ל)</td><td>מסנן BD</td><td>309653</td><td>ל-5% BSA-RINGER' S</td></tr><tr><td>ריאגנטים</חזקים></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1% כחול אוונס (w/v) בתמיסת מלח עם חוצץ פוספט (PBS, pH 7.5)</td><td>Sigma</td><td>314-13-6</td><td></td></tr><tr><td>10% פורמלין</td><td>velleyvet</td><td>36692</td><td></td></tr><tr><td>עכברי BALB/c (בני 8-10 שבועות)</td> <td>צ'ארלס ריבר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>בקסטר Viaflex לקטט הפתרון של רינגר</td><td>EMRN Medical Supplies Inc.</td><td>JB2324</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין סרום בקר</td><td>Thermo Fisher</td><td>11021-037</td><td></td></tr><tr><td>דבק ציאנואקרילט</td><td>דבק Krazy</td> DyLight-649-לקטין <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Vector Laboratories, Inc.</td><td>ZB1214</td><td></td></tr><tr><td>אתנול (70% (נפח/נפח))</td><td>Pharmco</td><td>111000190</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst33342</td><td>Life Technologies</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Enterprises Limited</td><td>66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ</td><td>מלח Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr></tbody></table>

הקמת מעגל באתרו של איברי הבטן התחתונה וגפיים האחוריות בעכברים

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

לשעבר vivo זלוף הוא כלי פיזיולוגי חשוב כדי ללמוד את הפונקציה של איברים מבודדים (למשל, הכבד, הכליות). באותו זמן, בשל הגודל הקטן של איברי העכבר, לשעבר vivo זלוף של העצם, שלפוחית השתן, העור, הערמונית, ואיברי הרבייה הוא מאתגר או לא ריאלי. כאן, אנו מדווחים בפעם הראשונה בתוך מעגל באתרו התחתון הגוף בתוך עכברים הכולל את הרקמות הנ ל, אבל עוקף את איברי הסיווג הראשי (כליות, כבד, טחול). המעגל מבוסס על ידי canנולגאת אבי העורקים הבטני ואת הווריד הנחותים והוריד מעל עורק כסל וריד ומצרוב כלי דם היקפיים. פרזיה מבוצעת באמצעות משאבה פריסטטית עם זרימה מעשית הנשמרת עד 2 שעות. בשנת באתרו עם הפלורסנט לקטין ופתרון הואכסט אישר כי המיקרו-בלטורה בוצעה בהצלחה. מודל זה של העכבר יכול להיות כלי שימושי מאוד לחקר תהליכים פתולוגיים, כמו גם מנגנונים של משלוח התרופה, הגירה/גרורות של במחזור תאים סרטניים לתוך/מתוך הגידול, ואינטראקציות של מערכת החיסון עם איברים ורקמות מבשם.

הגדרת מערכת היתוך מעגל סגור באמצעות צינורית של אבי העורקים הבטן ואת האובקאווה הנחותים של 8-10 שבוע עכברים הישן תוך שמירה על נפח של מאגר זלוף פחות מ 10 mL. איור 3A מראה תמונות מיקוד לאחר מבשם רקמות עם הפתרון של הכפיל המכיל Hoechst 33342 ו dylight 649-לקטין. שריר, מח עצם, ביקורות, שלפוחית השתן, הערמונית, ואת העור ברגל להראות יעיל כתמים גרעיניים וסקולרית. איור 3B מראה המטאוקסילין-אאוזין כתמים של איברים לאחר 3 שעות של מיקרופון nor.
<p class="jove_content" fo:kee...

פרוטוקול מתואר על הפרזיה באתרו של גוף העכבר התחתון, כולל שלפוחית השתן, הערמונית, איברי מין, עצם, שרירים ועור כף הרגל.

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...

פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לענות על שאלות על אספקת תרופות ואינטראקציות חיסוניות בתוך האיברים הכלולים במעגל שלנו. טכניקה זו מאפשרת חליטה של איברים שאינם ניתנים לתיעוב על ידי שיטות מסורתיות לשעבר vivo, תוך הימנעות איברי האישור העיקריים. לפני תחילת הניתוח, להגדיר אמבט מים במחזור וכל הרכיבים ז'קט מים, ל 37 מעלות צלזיוס.ודא כי הצינורות מנוקים, ולהשתמש במלכודת בועה בתוך תא לח כמו המאגר perfusate להגביל את נפח perfusate. כדי לבצע את הליך הצנתור, לאשר חוסר תגובה רפלקס הדוושה, בנורה הרדמה זכר בן שמונה עד 10 שבועות לראות עכבר. ולמקם את העכבר בתקרת supine על לוח קלקר, עם הראש בשעה שש.לשתק את גפי החיות עם סרט הדבקה, ולנגב את הבטן עם אלכוהול איזורופיל. בצע חתך בצורת T בבטן, באמצעות קרישת אלקטרו כדי לעצור כל דימום סביב קצה החתך. לדחוף את הבטן, jejunum ואת המעי הגס לצד ימין של הבטן, כדי לחשוף את האב העורקים הבטן, vena קאווה ואת העורקים איליוואלומבר נפוץ וורידים.תחת מיקרוסקופ ניתוח, לאתר ולצרף את העורקים השחלות iliolumbar וורידים עם תפרים משי 4-O. לולאה שני תפרים משי 4-O מתחת לאאורטה הבטן וקנה קאווה נחות על סנטימטר אחד מעל העורק איליאק ווריד, אחד מילימטר זה מזה. ואז לעשות בהנהון רופף בתפר הקרוב ביותר לכלי איליאק.השתמש במחזיק מחט כדי ליישר אופקית למתוח הן את vena cava נחות ואת ביתן הבטן. בנוסף, שמירה על כלי הדם מתוחים, להשתמש קטטר IV מגן מכונף 24 מד כדי לנקב את אב העורקים הבטן. ברגע שהמחט חודרת כמילימטר אחד לתוך הכלי, לדכא את הכפתור כדי לחזור בו קרן המחט, ולהכניס את הקטטר כחמישה מילימטרים לתוך הכלי.הכנס קטטר חמישה מילימטרים לתוך ונה קאווה נחות, באותו אופן. ולקשור את שני התפרים סביב כלי הקטטר. לאחר מכן להחיל דבק מיידי כדי לשתק את קטטרים על זקפה ספין א, ולהחליף את איברי הבטן.כדי להקים את מערכת החיסון, מניחים את העכבר על כרית סיליקון בתא לח ז'קט מים, ולשתק את כנפי הקטטר אל הפנקס עם מחטים 19-מד. ממלאים את מפרצון הקטטר העורקי, עם חיץ זלוק מחומם מראש. השתמש בממטרים המוסטטיים, ומחבר בורג-on כדי לחבר את מפרץ הקטטר לצנרת, ולשתק את צינורות חלחלת הפנימית עם סרט הדבקה.התאימו את קצב הזרימה הפריסטואלי ל-0.6 מיליליטר לדקה, והמשיכו את זרימת הזליפה פתוחה במשך חמש עד עשר דקות, כדי לשטוף את הדם החוצה דרך הקטטר הווריד. כמה קרישי דם יהיו נוכחים קטטר שקע, לשטוף את הקרישים עם חיץ perfusate, ולהשתמש בורג על המחבר כדי לצרף לקצה של קטטר ורידים צינורות השקע כדי לסגור את המעגל. לאחר מכן מכסים את התא לח עם מכסה מחומם מראש עד שעתיים של תדלוק, מעת לעת לבדוק את רמת perfusate.כאן, תמונות קונפוקל לאחר קיפוב עם פתרון צלצול המכיל Hoechst 33342 ו DyLight-649 lectin, מוצגים. השריר, מח העצם, האשכים, שלפוחית השתן, הערמונית ועור כף הרגל מדגימים בדרך כלל כתם גרעיני וסקולרי יעיל. המטוקסילין וכתם אאוסין של רקמות אלה לאחר שלוש שעות של תדלוק תרמי תקין, מגלה שטיפה מוצלחת של האיברים, ללא פגיעה לכאורה ברקמה.מודל זה יכול לשמש להבנת מסלולי ספיגת סמים, בסביבה הפיזיולוגית הלא רלוונטית. לדוגמה, כדי להבין את התפקיד של רכיבי סרום בהצטברות סמים. אנחנו משתמשים במערכת, כדי להבין את המנגנון של הצטברות ליפוזום בעור.

establishing-situ-closed-circuit-perfusion-lower-abdominal-organs

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ההליך הכירורגי לזירוז של איסכמיה hindlimb החד צדדית באה לידי ביטוי, עם אישור של איסכמיה על ידי הדמיה זלוף דופלר לייזר.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

השימוש חזירים מקומיים זעירים במדע גדל באופן משמעותי בשנים האחרונות. באמצעות הוכחת כיצד לבצע אינטובציה, צנתור שלפוחית ​​השתן transurethral, ​​עורק הירך ואת צנתור וריד, כמו גם זלוף transcardial, אנו שואפים להגביר עוד יותר את הערך של גטינגן minipigs במחקר ביו.

טכניקות ניתוחיות בסיסי Minipig גטינגן: אינטובציה, צנתור שלפוחית ​​השתן, צנתור כלי עצם הירך, ו זלוף Transcardial

אינדוקציה כירורגית של איסכמיה של הגפיים האחוריות בעכבר שימושית לבחינת אנגיוגנזה, אולם זה נפגע בזני עכברים מסוימים המולדים המציגים נמק רקמות המושרה על ידי איסכמיה. מתוארות שיטות לגרימת איסכמיה תת-חריפה בגפיים באמצעות מכווצים אמרואידים כדי לעקוף בעיה זו באמצעות אינדוקציה של חסימת עורקים הדרגתית.

שיטות חריפה subacute Murine Hindlimb איסכמיה

כלית perfused העכבר המבודדת (MIPK) היא טכניקה לשמירת כלית עכבר בתנאי vivo לשעבר perfused ופונקציונלי עבור שעה 1. החוצצים טכניקה כירורגית מתוארים בפירוט.

טכניקת כלית עכבר המבודדת perfused

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המדגים את הטכניקה ואת הפקדים הדרושים עבור הדמיית זלוף דופלר לייזר כדי למדוד את זרימת הדם בעכבר hindlimb.

הדמיית זלוף דופלר לייזר בעכבר הינדלימב

הפרוטוקול מתאר שיטה פשוטה לכריתת כבד עכבר שלם למחקרים מטבוליים באמצעות זלוף ורידים פורטלי.

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

המאמר הנוכחי מתאר טכניקה שונה להשתלת לב הטרוטופית וסקולרית עם טכניקה אספטית מעודכנת, שיכוך כאבים והרדמה.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול הערכה של לב מושתל הטרוטופית לאחר שימור נורמותרמי ex situ במודל חולדה.

מודל עכברוש של השתלת לב הטרוטופית נורמומית לשעבר

מערכת זילוח כבד נורמותרמית ex vivo (NEVLP) נוצרה עבור כבדי עכברים. מערכת זו דורשת ניסיון במיקרו-כירורגיה אך מאפשרת תוצאות זילוח הניתנות לשחזור. היכולת להשתמש בכבדים של עכברים מאפשרת לחקור מסלולים מולקולריים לזיהוי תוספי פרבוסט חדשים ומאפשרת ביצוע ניסויים המתמקדים בתיקון איברים.

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

כאן, אנו מציגים שיטה חזקה עבור זילוח באתרו של כבד העכבר כדי ללמוד את הרגולציה החריפה והישירה של חילוף החומרים בכבד מבלי להפריע לארכיטקטורה הכבדית אלא בהיעדר גורמים מחוץ לכבד.

ייצור גלוקוז בכבד, אורגנזה וליפוליזה מכומתים באמצעות מודל הכבד של עכבר מחורר

פינוי אינסולין בכבד הוא קריטי לוויסות הומאוסטזיס של גלוקוז. מאמר זה מתאר הליך זלוף כבד ידידותי למשתמש להערכה ישירה של קצב פינוי האינסולין בכבד באתרו בעכברים.

הערכת פינוי אינסולין בעכברים באמצעות זלוף כבד באתרו

למד טכניקת הדמיה באתרו של איברי הבטן התחתונה בעכברים לחקר מסירת תרופות ואינטראקציות חיסוניות. שיטה זו מאפשרת הדמיה יעילה של שלפוחית השתן, הערמונית, איברי המין והעור תוך הימנעות מאיברי ניקוי ראשיים.

הקמת מעגל באתרו של איברי הבטן התחתונה וגפיים האחוריות בעכברים

גלה סרטונים נוספים