מאומת LC-MS/MS הפאנל לכמת 11 תרופות עמידות לפני שחפת בדגימות שיער קטן

דבקות המטופל היא מאתגרת מאוד חילוף החומרים של התרופה יכול להשתנות מאדם לאדם כך מדידה אובייקטיבית של רמות התרופה עשוי להוכיח להיות חשוב במניעת הופעתה של התנגדות במהלך טיפול ב- TB. אם דבקות יכולה להיות מדויקת יותר וקלה יותר לכמת, אז ספקי שירותי בריאות יכולים לפתח תוכנית טיפול שתגביל את הפיתוח של עמידות לתרופות. פיתחנו את פאנל ספקטרומטריית המסה הראשונה של אנלייט לטיפול בתרופות לשחפת מרובות בדגימות שיער קטנות במבחן אחד.

הפאנל הרב-תרופתי שלנו דורש רק דגימה אחת של שני מיליגרם למטופל ולא משתמש בחילוץ פאזה מוצק או בשלב סינון כדי למנוע אובדן של נפח הדגימה. אמצעים אובייקטיביים של חשיפה לתרופות שנמדדו בשלב מוקדם של קורס הטיפול עלולים להתריע בפני רופאים על בעיות עם תרופות בודדות במשטר הטיפול. דגימות שיער חייב להיות מרוסק ביום הניתוח למדידת רמת ריכוז סמים מדויקת.

כדי לרכוש דגימות שיער, לאחר קבלת הסכמה מדעת בכתב, הכינו חומרים הכוללים תווית דקה, שתי תוויות משתתפות, זוג מספריים, חתיכת רדיד אלומיניום, מגבון אלכוהול ושקית ניילון. לנגב את הלהבים של המספריים נקי עם לנגב אלכוהול. עבור לחלק האחורי של הראש ולהרים את החלק העליון של השיער באמצעות קליפ שיער אם תרצה.

לאסוף 30 קווצות שיער מהגב של הראש ולבודד את סכך עם היד שלך. קח את המספריים אל הקרקפת וגזור את סככה של שיער. בזהירות למקם את סכך השיער על רדיד אלומיניום.

שים את התווית הדקה על הקצה הדיסטלי של סכך השיער, והדבק אותו בצורה מאובטחת לרדיד האלומיניום. הקצה הדיסטלי הוא הצד הרחוק ביותר מהקרקפת. מקפלים מעל חתיכת רדיד אלומיניום על גבי סכך השיער ולשים תווית משתתף על גבי רדיד אלומיניום.

מניחים את החלק המקופל מעל רדיד אלומיניום לתוך שקית הניילון ומכניסים תווית משתתפת נוספת על גבי שקית הניילון. עבור מיצוי סמים מדגימות השיער, לשקול שני מיליגרם של כל דגימת שיער לתוך צינורות חרוזים שכותרתו בנפרד ושני מיליגרם של דגימת השיער הריק לתוך כל אחד 16 צינורות חרוזים נוספים. לאחר שקילה, מניחים את כל צינורות חרוזים לתוך homogenizer טחנת חרוזים הומוגניזציה הדגימות במהירות של 6.95 מטרים לשנייה במשך שני מחזורים 30 שניות עם תקופת מנוחה של 15 שניות בין כל מחזור.

לאחר ההומוגניזציה השנייה, הוסיפו 500 מיקרוליטרים של התערובת הסטנדרטית הפנימית המתאימה לכל דגימה והוסיפו 500 מיקרוליטרים של מתנול לצינור הריק של המטריצה. ספייק צינורות עקומת הכיול עם נפח המתאים של תערובת סטנדרטית התייחסות על פי השולחן ולמקום את כל הצינורות באמבט מים 37 מעלות עם רעידות עדינות במשך שעתיים. בסוף הדגירה, מעבירים את העל-טבעי מכל צינור חרוזים לצינורות מיקרוצנטריפוגה חדשים המסומנים ומוסיפים 500 מיקרוליטרים של מתנול לצינורות חרוזים.

מערבולת צינורות חרוזים ולהעביר את לשטוף מתנול לצינורות microcentrifuge המתאימים. צנטריפוגה הדגימות בזהירות להעביר את supernatants לתוך צינורות חדשים מבלי להפריע כדורי השיער. להתאדות את הנוזל בצינורות כדי יובש ב 32 מעלות צלזיוס ולכונן מחדש את הדגימות עם 200 microliters של מים בדרגת כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה עם 1% חומצה פורמית.

לאחר המערבולת, מעבירים את דגימות הנוזלים לבקבוקוני ענבר עם 250 מוסיף מיקרוליטר. עבור ספקטרומטריית מסת טנדם כרומטוגרפיה נוזלית, התקן תחילה עמודה של 2 עד 100 מילימטר עם גודל חלקיקים מיקרומטר 2.5 וגודל נקבוביות אנגסטרום 100 עם קדרי פנול עם קצה קוטבי עשויים לחלוטין מסיליקה נקבובית לתוך תא העמוד. ודא שבעמודה מותקנת גם מחסנית מגן מומלצת על-ידי היצרן.

העתק והדבק את המידע המורכב הכלול במעברי פעולת השירות MDR-TB LCMS. csv לתוך התיבה בחלון מפרט המסה. בגיליון אלקטרוני, צור רצף אצווה של עקומת הכיול, בקרת איכות, דגימות מטופלים, עקומת כיול, בקרת איכות, דגימות מטופלים, עקומת כיול ובקרות איכות.

הוסף זריקות ריקות ממס בתחילת וסוף הריצה, כמו גם לפני ואחרי עקומת הכיול, בקרת איכות ודגימות המטופל. לאחר מכן מניחים לפחות שמונה זריקות ריקות ממס בזריקות בעקומת הכיול ואת בקבוקון בקרת האיכות הגבוהה כדי להפחית את נשיאת האנליט. לאחר השלמת האצוות, פתח את תוכנת הכימות.

גלול בין המעברים כדי לוודא שזמן השמירה שנבחר באופן אוטומטי מדויק ובדוק שההחלקה הגאוסיאנית מוגדרת ל- 1.5. לאחר מכן, לחץ על מציג את עקומת הכיול ואת הרגרסיה והגדר את סוג ההמתנה לאחד על x. לחץ על אישור ואמת את עקומת הכיול ואת דגימות בקרת האיכות כדי להבטיח שהאצווה הופעלה בהצלחה.

עבור כל אזכור הפניה לכמת, לפחות שני שלישים מנקודות הכיול חייבים להיות בעלי דיוק בטווח של 80-120%ודא שערך R המוצג מעל עקומת הכיול גדול מ- 0.975. אם כל התנאים לעיל עומדים, האצווה עברה ואת הדגימות ניתן לכמת. לחץ על ערוך בסרגל הכלים ולחץ על העתק את הטבלה כולה.

לאחר מכן הדבק את הטבלה בגיליון אלקטרוני ולהשתמש בממוצע הריכוז המחושב של שתי זריקות מדגם כדי לקבוע את הריכוז המדווח של כל מדגם. כאן מוצג איור של כרומטוגרמה עם רמות מאושרות של כל 11 תרופות שחפת עמידות לתרופות. בנתונים אלה, כרומטוגרמות יון שחולצו עבור תרופה מסוימת אחת באחד כיול ניתן לראות.

המעברים מכמת ומזהה משמשים כדי לאשר באופן איכותי את נוכחותו של התרופה כמו היחס בין האזור של הכימות ואת האזור של מזהה נשאר קבוע על פני דגימות. התקן הפנימי מנוטר גם כדי להבטיח שכל הזרקת מדגם מנורמלת. בניתוח זה, מדגם נוח של 15 דגימות שיער בקרב אוכלוסיית מחקר כוללת של 96 חולים הנוטלים תרופות נגד סמים TB תחת תנאים טיפוליים שנצפו ישירות ממערב קייפ, דרום אפריקה הוערכה כדי לקבוע רמות מייצגות של תרופות נגד סמים TB על פני הרמות הנמוכות ביותר והגבוהות ביותר עבור כל analyte.

בהיעדר מיצוי שלב מוצק או שלב סינון צעד, לטפל בעת העברת על טבעי לתוך צינורות האידוי. כל דבר שיועבר לצינורות יכול בסופו של דבר מוזרק לתוך העמוד. כמו הרוטור של ראפטור חרוז יכול לעוף אם לא דפק בחוזקה או נעול, הקפד לבדוק שוב את הרוטור לפני הניתוח.

בניגוד antiretrovirals בתחום HIV, הקשר בין פרמקוקינטיקה תרופות TB, דבקות ותוצאות קליניות נשאר במידה רבה unstudied. שיערנו כי תרופות מסוימות נגד שחיפת אינן מצטברות היטב בשיער. מיקוד המטבוליטים של תרופות אלה עשוי לספק הבנה טובה יותר של דבקות המטופל.