Name: Opsono-דבקות Assay כדי להעריך נוגדנים תפקודיים בפיתוח חיסונים נגד אנתרקיס Bacillus ופתוגנים אנקפסולציה אחרים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 47 s
Description: למדו את שיטת האופסונו-דבקות להערכת נוגדנים תפקודיים נגד Bacillus anthracis בפיתוח חיסונים. שיטה בטוחה זו מאפשרת ניתוח יעילות חיסונים ללא הדבקת בעלי חיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ג'יי צ'ואה, ד. צ'בוט וא. פרידלנדר עיצבו את ההליכים המתוארים בכתב היד. ג'יי צ'ואה ות', פוטמון-טיילור, ביצעו את הניסויים. ד. צ'בוט ביצע ניתוח נתונים. ג'יי צ'ו כתב את כתב היד.
המחברים מודים לקייל ג'יי פיטס על סיוע טכני מצוין.
העבודה נתמכה על ידי הסוכנות להפחתת איומים ביטחוניים CBM. VAXBT.03.10.RD.015, תוכנית מספר 921175.
דעות, פרשנויות, מסקנות והמלצות הן של המחברים ואינן בהכרח מאושרות על ידי צבא ארה"ב. תוכנו של פרסום זה אינו משקף בהכרח את השקפותיו או מדיניותו של משרד ההגנה, ואינו מזכיר שמות מסחריים, מוצרים מסחריים או ארגונים המרמזים על תמיכה של ממשלת ארה"ב.

<ol><li>Walters, M. N., Papadimitriou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22CRC+Critical+Reviews+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: a review.</a> CRC Critical Reviews in Toxicology. 5 (4), 377-421 (1978).</li>
<li>Metschnikoff, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Untersuchurgen+uber+die+intracellulare+Verdauung%2C+bei+wirbellosen+Thieren%5BTitle%5D)+AND+%22Arbeiten+aus+dem+Zoologischen+Instituten+der+Universit%C3%A4t+Wien%22%5BJournal%5D)">Untersuchurgen uber die intracellulare Verdauung, bei wirbellosen Thieren.</a> Arbeiten aus dem Zoologischen Instituten der Universität Wien. 5, 144(1883).</li>
<li>Tauber, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metchnikoff+and+the+phagocytosis+theory%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Metchnikoff and the phagocytosis theory.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 4 (11), 897-901 (2003).</li>
<li>Janeway, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+immune+system+evolved+to+discriminate+infectious+nonself+from+noninfectious+self%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">The immune system evolved to discriminate infectious nonself from noninfectious self.</a> Immunology Today. 13 (1), 11-16 (1992).</li>
<li>Kumagai, Y., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+functions+of+pattern-recognition+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Identification and functions of pattern-recognition receptors.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (5), 985-992 (2010).</li>
<li>Flannagan, R. S., Jaumouille, V., Grinstein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+biology+of+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The cell biology of phagocytosis.</a> Annual Review of Pathology. 7, 61-98 (2012).</li>
<li>Candela, T., Fouet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly-gamma-glutamate+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Poly-gamma-glutamate in bacteria.</a> Molecular Microbiology. 60 (5), 1091-1098 (2006).</li>
<li>Kocianova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+poly-gamma-DL-glutamic+acid+in+immune+evasion+and+virulence+of+Staphylococcus+epidermidis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Key role of poly-gamma-DL-glutamic acid in immune evasion and virulence of Staphylococcus epidermidis.</a> Journal of Clinical Investigation. 115 (3), 688-694 (2005).</li>
<li>Rothbard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+hyaluronidase+and+type-specific+anti-M+serum+on+experimental+group+A+Streptococcus+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Protective effect of hyaluronidase and type-specific anti-M serum on experimental group A Streptococcus infection in mice.</a> Journal of Experimental Medicine. 88 (3), 325-342 (1948).</li>
<li>Oh, S. Y., Budzik, J. M., Garufi, G., Schneewind, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+capsular+polysaccharides+enable+Bacillus+cereus+G9241+to+cause+anthrax-like+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Two capsular polysaccharides enable Bacillus cereus G9241 to cause anthrax-like disease.</a> Molecular Microbiology. 80 (2), 455-470 (2011).</li>
<li>Knuf, M., Kowalzik, F., Kieninger, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+effects+of+carrier+proteins+on+vaccine-induced+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Comparative effects of carrier proteins on vaccine-induced immune response.</a> Vaccine. 29 (31), 4881-4890 (2011).</li>
<li>Wang, T. T., Lucas, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsule+of+Bacillus+anthracis+behaves+as+a+thymus-independent+type+2+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+%26+Immunity%22%5BJournal%5D)">The capsule of Bacillus anthracis behaves as a thymus-independent type 2 antigen.</a> Infection & Immunity. 72 (9), 5460-5463 (2004).</li>
<li>Vogel, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+flow+cytometric+analysis+of+opsonophagocytosis+and+killing+of+nonencapsulated+Haemophilus+influenzae+by+human+polymorphonuclear+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Diagnostic+Laboratory+Immunology%22%5BJournal%5D)">Quantitative flow cytometric analysis of opsonophagocytosis and killing of nonencapsulated Haemophilus influenzae by human polymorphonuclear leukocytes.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 1 (4), 394-400 (1994).</li>
<li>Salehi, S., Hohn, C. M., Penfound, T. A., Dale, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+Opsonophagocytic+Killing+Assay+Using+HL-60+Cells+for+Detection+of+Functional+Antibodies+against+Streptococcus+pyogenes%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Development of an Opsonophagocytic Killing Assay Using HL-60 Cells for Detection of Functional Antibodies against Streptococcus pyogenes.</a> mSphere. 3 (6), 00617-00618 (2018).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Immunoprotective+Proteins+of+Streptococcus+pneumoniae+Identified+by+Opsonophagocytosis+Killing+Screen%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+%26+Immunity%22%5BJournal%5D)">Novel Immunoprotective Proteins of Streptococcus pneumoniae Identified by Opsonophagocytosis Killing Screen.</a> Infection & Immunity. 86 (9), (2018).</li>
<li>Humphries, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seroprevalence+of+Antibody-Mediated%2C+Complement-Dependent+Opsonophagocytic+Activity+against+Neisseria+meningitidis+Serogroup+B+in+England%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Vaccine+Immunology%22%5BJournal%5D)">Seroprevalence of Antibody-Mediated, Complement-Dependent Opsonophagocytic Activity against Neisseria meningitidis Serogroup B in England.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 22 (5), 503-509 (2015).</li>
<li>List of Tier 1 BSAT. , Available from: 
 <a target="_blank" href="www.selectagents.gov/ohp-app1.html">www.selectagents.gov/ohp-app1.html</a> (2017).</li>
<li>Jansen, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+highly+encapsulated+Streptococcus+pneumoniae+strains+in+a+flow-cytometric+assay+for+assessment+of+the+phagocytic+capacity+of+serotype-specific+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Diagnostic+Laboratory+Immunology%22%5BJournal%5D)">Use of highly encapsulated Streptococcus pneumoniae strains in a flow-cytometric assay for assessment of the phagocytic capacity of serotype-specific antibodies.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 5 (5), 703-710 (1998).</li>
<li>Wang, T. T., Fellows, P. F., Leighton, T. J., Lucas, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+opsonic+antibodies+to+the+gamma-D-glutamic+acid+capsule+of+Bacillus+anthracis+by+immunization+with+a+synthetic+peptide-carrier+protein+conjugate%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunology+and+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Induction of opsonic antibodies to the gamma-D-glutamic acid capsule of Bacillus anthracis by immunization with a synthetic peptide-carrier protein conjugate.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 40 (3), 231-237 (2004).</li>
<li>Chabot, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+rhesus+macaques+against+inhalational+anthrax+with+a+Bacillus+anthracis+capsule+conjugate+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Protection of rhesus macaques against inhalational anthrax with a Bacillus anthracis capsule conjugate vaccine.</a> Vaccine. 34 (34), 4012-4016 (2016).</li>
<li>Chabot, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+a+capsule+conjugate+vaccine+against+inhalational+anthrax+in+rabbits+and+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Efficacy of a capsule conjugate vaccine against inhalational anthrax in rabbits and monkeys.</a> Vaccine. 30 (5), 846-852 (2012).</li>
<li>Revised FSAP Policy Statement: Inactivated Bacillus anthracis and Bacillus cereus Biovar anthracis. , Available from: 
 <a target="_blank" href="www.selectagents.gov/policystatement_bacillus.html">www.selectagents.gov/policystatement_bacillus.html</a> (2017).</li>
<li>Chua, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde+and+Glutaraldehyde+Inactivation+of+Bacterial+Tier+1+Select+Agents+in+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde and Glutaraldehyde Inactivation of Bacterial Tier 1 Select Agents in Tissues.</a> Emerging Infectious Diseases. 25 (5), 919-926 (2019).</li>
<li>Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (Eighth Edition). , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://grants.nih.gov/grants/olaw/guide-for-the-care-and-use-of-laboratory-animals.pdf">https://grants.nih.gov/grants/olaw/guide-for-the-care-and-use-of-laboratory-animals.pdf</a> (2011).</li>
<li>Durando, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience+with+pneumococcal+polysaccharide+conjugate+vaccine+%28conjugated+to+CRM197+carrier+protein%29+in+children+and+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Experience with pneumococcal polysaccharide conjugate vaccine (conjugated to CRM197 carrier protein) in children and adults.</a> Clinical Microbiology and Infection. 19, Suppl 1 1-9 (2013).</li>
<li>Adams, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decline+of+childhood+Haemophilus+influenzae+type+b+%28Hib%29+disease+in+the+Hib+vaccine+era%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Decline of childhood Haemophilus influenzae type b (Hib) disease in the Hib vaccine era.</a> JAMA. 269 (2), 221-226 (1993).</li>
<li>Balmer, P., Borrow, R., Miller, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+meningococcal+C+conjugate+vaccine+in+the+UK%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Impact of meningococcal C conjugate vaccine in the UK.</a> Journal of Medical Microbiology. 51 (9), 717-722 (2002).</li>
<li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+opsonophagocytic+killing+activity+with+pneumococcal+conjugate+vaccine+in+human+immunodeficiency+virus-infected+Ugandan+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Induction of opsonophagocytic killing activity with pneumococcal conjugate vaccine in human immunodeficiency virus-infected Ugandan adults.</a> Vaccine. 26 (38), 4962-4968 (2008).</li>
<li>Paschall, A. V., Middleton, D. R., Avci, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opsonophagocytic+Killing+Assay+to+Assess+Immunological+Responses+Against+Bacterial+Pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens.</a> Journal of Visualized Experiments. (146), e59400(2019).</li>
<li>Ezzell, J. W., Welkos, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsule+of+Bacillus+anthracis%2C+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The capsule of Bacillus anthracis, a review.</a> Journal of Applied Microbiology. 87 (2), 250(1999).</li>
<li>Hanna, P. C., Acosta, D., Collier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+macrophages+in+anthrax%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academies+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">On the role of macrophages in anthrax.</a> Proceedings of the National Academies of Sciences of the United States of America. 90 (21), 10198-10201 (1993).</li>
<li>Fleck, R. A., Romero-Steiner, S., Nahm, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+HL-60+cell+line+to+measure+opsonic+capacity+of+pneumococcal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Diagnostic+Laboratory+Immunology%22%5BJournal%5D)">Use of HL-60 cell line to measure opsonic capacity of pneumococcal antibodies.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 12 (1), 19-27 (2005).</li>
<li>Chua, J., Deretic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+tuberculosis+reprograms+waves+of+phosphatidylinositol+3-phosphate+on+phagosomal+organelles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium tuberculosis reprograms waves of phosphatidylinositol 3-phosphate on phagosomal organelles.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (35), 36982-36992 (2004).</li>
<li>Chua, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH+Alkalinization+by+Chloroquine+Suppresses+Pathogenic+Burkholderia+Type+6+Secretion+System+1+and+Multinucleated+Giant+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+%26+Immunity%22%5BJournal%5D)">pH Alkalinization by Chloroquine Suppresses Pathogenic Burkholderia Type 6 Secretion System 1 and Multinucleated Giant Cells.</a> Infection & Immunity. 85 (1), (2017).</li>
<li>Ober, R. J., Radu, C. G., Ghetie, V., Ward, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+promiscuity+for+antibody-FcRn+interactions+across+species%3A+implications+for+therapeutic+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunology%22%5BJournal%5D)">Differences in promiscuity for antibody-FcRn interactions across species: implications for therapeutic antibodies.</a> International Immunology. 13 (12), 1551-1559 (2001).</li>
<li>Sorman, A., Zhang, L., Ding, Z., Heyman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+antibodies+use+complement+to+regulate+antibody+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">How antibodies use complement to regulate antibody responses.</a> Molecular Immunology. 61 (2), 79-88 (2014).</li>
<li>Henckaerts, I., Durant, N., De Grave, D., Schuerman, L., Poolman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+a+routine+opsonophagocytosis+assay+to+predict+invasive+pneumococcal+disease+efficacy+of+conjugate+vaccine+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Validation of a routine opsonophagocytosis assay to predict invasive pneumococcal disease efficacy of conjugate vaccine in children.</a> Vaccine. 25 (13), 2518-2527 (2007).</li>
<li>Wolf, J. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWolf%2C+JJ+%22Special+Considerations+for+the+Nonclinical+Safety+Assessment+of+Vaccines%22">Special Considerations for the Nonclinical Safety Assessment of Vaccines</a>. , Elsevier. 243-255 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין עמותה מסחרית או אחרת שעלולה להוות ניגוד עניינים.

חיסונים מבוססי כמוסות הוכחו כיעילים נגד פתוגנים חיידקיים רבים, ורבים מורשים לשימוש בבני אדם25,26,27. חיסונים אלה פועלים על ידי יצירת נוגדנים המכוונים לקפסולה ורבים ממחקרים אלה משתמשים ב- OPKA כדי להראות את הפונקציות האופוסונו-פגוציטיות של הנוגדנים13,14,16,28,29. בשל ח...

הכרה, דבקות, הפנמה והשפלה של פתוגן הם חלק בלתי נפרד phagocytosis1, מסלול בולט בתגובה החיסונית המולדת המארחת שתוארה לראשונה על ידי איליה מצ'ניקוף בשנת 18832,3. לויקוציטים Phagocytic, כמו גם תאים אחרים של המערכת החיסונית, הם מפלים מאוד בבחירת המטרות שלהם; הם מסוגלים להבחין בין "זיהומיות לא עצמי" ו "עצמי לא זיהומיות" באמצעות דפוסים מולקולריים הקשורים פתוגן על ידי הרפרטואר שלהם של קולטני זיהוי דפוס (PRRs)4,5. זיהוי מארח של פתוגן עלול להתרחש גם עם כריכה של opsonins המארח, כגון משלימים ונוגדנים6. תהליך זה, הנקרא opsonization, מצופה את הפתוגן עם מולקולות אלה, שיפור הפנמה על מחייב קולטנים opsonic (למשל, משלימים קולטני Fc) על תאים phagocytic6. עבור פתוגן לדבוק phagocyte, כריכה קולקטיבית של קולטנים מרובים עם ליגנדים קוגנט שלהם יש צורך. רק אז יכול ההדק דבקות ולקיים מדורגים איתות בתוך התא המארח ליזום הפנמה6.
בשל החשיבות של phagocytosis בסיווג של פתוגנים ומניעת זיהום, פתוגנים חוץ תאיים פיתחו דרכים רבות לחתור תחת תהליך זה כדי להאריך את הישרדותם. אסטרטגיה אחת בעלת חשיבות היא ייצור כמוסה פולימרית אניונית (למשל, פוליסכריד או חומצת פוליאמינו) שהיא אנטי-פגוציטית מתוקף המטען שלה, היא אימונוגנית גרועה, ומגינה על מולקולות על מעטפת החיידקים מ PRRs6,7. פתוגנים כגון Cryptococcus neoformans ו דלקת ריאות סטרפטוקוקוס יש כמוסות המורכבות פולימרים סכריד, ואילו אפידרמידים סטפילוקוקוס וכמה מינים Bacillus לייצר חומצה פולי-ɣ גלוטמית (PGGA)7,8. עם זאת, פתוגנים אחרים מייצרים כמוסות הדומות לעצמי הלא מדבק. לדוגמה, pyogenes סטרפטוקוקוס זן פתוגניים של B. cereus יש כמוסה חומצה היאלורונית כי הוא לא רק אנטי phagocytic אבל אשר גם לא יכול להיות מוכר זר על ידי המערכת החיסונית9,10.
הטיה של כמוסה לחלבוני נשא ממירה אותם מאנטיגנים עניים ובלתי תלויים T לאנטיגנים תלויי T אימונוגניים ביותר שיכולים לגרום לתיבת נוגדנים גבוהה נגד כמוסות בסרום11,12. אסטרטגיה זו משמשת לחיסונים מורשים נגד S. דלקת ריאות, שפעת ההמופילוס, ו Neisseria מנינגיטידים11. הפעילויות האופסיוניות של נוגדנים נגד קפסולה הוערכו בדרך כלל על ידי מבחני הרג opsono-phagocytic (OPKA)13,14,15,16. מבחנים אלה בודקים אם נוגדנים תפקודיים יכולים לגרום לפגוציטוזיס ולהרוג14. עם זאת, השימוש OPKA עם פתוגנים זיהומיות, כגון רובד 1 ביולוגי בחר סוכנים ורעלים (BSAT), כולל B. anthracis17, הוא מסוכן ומציג סיכוני אבטחה; מבחנים אלה מחייבים טיפול נרחב בסוכן נבחר. טיפול בסוכן נבחר יכול להיעשות רק במעבדות מוגבלות ברמת 3 (BSL-3); העבודה באזורים אלה דורשת נהלי הפעלה ממושכים בשל אמצעי הבטיחות והאבטחה הרבים שיש לנקוט. מעבדות BSL-3 גם בדרך כלל אינן מצוידות בציוד מיוחד המשמש לעבודת OPKA, כגון מיקרוסקופים וציטומטרים. לכן, פיתחנו מבחנים חלופיים המבוססים על שימוש בחיידקים מומתים18,19. אנו מתייחסים לזה כאל מבחני דבקות באופסונו (OAA) שאינו תלוי בהפנמה והרג כתפוקות מבחנים; במקום זאת, הדבקות של פתוגנים מומתים opsonized משמש כאינדקס של phagocytosis. מבחינה מכנית, OAA הוא תחליף מתאים כי הדבקות מתרחשת פריורי והוא שזורה באופן אינטימי עם הפנמה והרג תאי. מנקודת מבט של biosafety, OAA הוא המועדף כי זה דורש טיפול מינימלי של סוכן זיהומיות, הוא ניסיוני של משך זמן קצר יותר מאשר OPKA, והוא יכול להתבצע במעבדות BSL-2 לאחר מלאי של פתוגן מושבת הופק והועבר.
אנו מדגימים את הניצול של OAA כדי לבחון את הפונקציה האופסיונית של נוגדנים נגד קפסולה שנמצאו בשרה של פרימטים לא אנושיים (NHPs) שחוסנו עם מצומד קפסולה [כלומר PGGA מ- B. anthracis הקשורים לתסביך חלבון הקרום החיצוני (OMPC) של מנינגיטידים Neisseria]20. bacilli opsonized סרום היו דגירה עם קו תא מקרופאג עכבר חסידים, RAW 264.7. לאחר הקיבעון, המונוליילר של התא ובצילי החסיד צולמו על ידי מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. הדבקות החיידקית גדלה כאשר bacilli היו דגירה עם סרום מ NHPs מחוסנים עם הקפסולה להצעיר לעומת סרום שליטה20. דבקות בקורלציה עם הישרדות אתגר האנתרקס20,21. לכן, השימוש ב- OAA אפיין את הפונקציה של נוגדנים נגד קפסולה והקלה מאוד על בדיקות של מועמד החיסון שלנו.

<table><tbody><tr><td>0.20 ומיקרו; מסנן מזרק m (25 מ"מ, תאית מחודשת)</td><td>קורנינג, קורנינג, ניו יורק</td><td>431222</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 10 מ"ל (קצה Luer-Lok)</td><td>BD, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>15&micro; 96 צלחות שחורות באר (צלחת #1 להדמיה)</td><td>In Vitro Scientific, Sunnyvale, CA</td><td>P96-1-N</td><td></td></tr><tr><td>16% paraformaldehyde</td><td>Electron Microscopy Science, Hatfield, PA</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>75 ס"מ מרובע בקבוק מטופל בתרבית רקמות</td><td>קורנינג, קורנינג, ניו יורק</td><td>430641</td><td></td></tr><tr><td>אגר (אבקה)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>A1296</td><td></td></tr><tr><td>Baby Rabbit Complement</td><td>Cedarlane Labs, Burlington, NC</td><td>CL3441</td><td></td></tr><tr><td>תמצית שמרי בקטו</td><td>BD, ניצוצות, MD</td><td>288620</td><td></td></tr><tr><td>BBL עירוי לב מוח (BHI)</td><td>BD, ניצוצות, MD</td><td>211059</td><td></td></tr><tr><td>אגר דם (TSA עם דם כבשים) צלחות</td><td>Remel, Lenexa, KS</td><td>R01198</td><td></td></tr><tr><td>מגרד תאים</td><td>Sarstedt, Newton, NC</td><td>83.183</td><td></td></tr><tr><td>Costar 96 באר צלחות תרבית תאים (צלחות #2 ו-3 לדילול)</td> <td>קורנינג, קורנינג, ניו יורק</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית מדע, האטפילד, PA</td><td>72200-10</td><td></td></tr><tr><td>Difco Nutrient</td><td>Broth BD, Sparks, MD</td><td>234000</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), גלוקוז גבוה</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>11965-092</td><td>מכיל 4500 מ"ג/ליטר גלוקוז, 4 מ"מ L-גלוטמין, פנול אדום</td></tr><tr><td>EVOS FL מערכת הדמיית תאים אוטומטיים (מיקרוסקופ פלואורסצנטי)</td><td>Life Technologies, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>AMAFD1000</td><td></td></tr><tr><td>סרום</td> <td>בקר עובריHyclone, GE Healthcare Life Sciences, South Logan, UT</td><td>SH30071.03</td><td>לא מוקרן גמא, לא מומת בחום</td></tr><tr><td>Fluorescein isothiocyanate</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>F143</td><td></td></tr><tr><td>HCS Cell Mask Invitrogen Orange Cell Stain</td>, <td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>H32713</td><td></td></tr><tr><td>hemocytometer (משופר נויבאואר)</td><td>Hausser Scientific, Horsham, PA</td><td>3900</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת דיו</td><td>בהודו BD, Sparks, MD</td><td>261194</td><td></td></tr><tr><td>L- גלוטמין (200 מ"מ)</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific, Waltham MA</td><td>25030081</td><td>מדיום תוסף עם תוספת של 2 מ"מ L-גלוטמין</td></tr><tr><td>Nikon Eclipse TE2000-U (מיקרוסקופ תרכובת הפוכה)</td><td>Nikon Instruments, Melville, NY</td><td>TE2000</td><td></td></tr><tr><td>PBS ללא סידן או מגנזיום</td><td>לונזה, ווקרסוויל, מרילנד</td>תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין <td>17-516F</td><td></td></tr><tr><td>, 100x</td><td>Hyclone, GE Healthcare Life Sciences, South Logan, UT</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>צלחות פטרי (100 x 15 מ"מ)</td><td>Falcon, Corning, Durham, NC</td><td>351029</td><td>לצלחות אגר</td></tr><tr><td>RAW 264.7 קו תאי מקרופאגים (Tib47)</td><td>ATCC, Manassas, VA</td><td>ATCC TIB-71</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות</td><td>VWR, Radnor, PA</td><td>16004-422</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, MO</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה כחולה טריפן (0.4%)</td><td>סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, MO</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss 700 מיקרוסקופ סריקת לייזר (מיקרוסקופ קונפוקלי)</td><td>קרל זייס מיקרואימציה, ת'ורנווד, ניו יורק</td><td>4109001865956000</td><td></td></tr></tbody></table>

opsono-דבקות assay כדי להעריך נוגדנים תפקודיים בפיתוח חיסונים נגד אנתרקיס bacillus ופתוגנים אנקפסולציה אחרים

Opsono-Adherence Assay to Evaluate Functional Antibodies in Vaccine Development Against Bacillus anthracis and Other Encapsulated Pathogens

מבחני דבקות האופסונו הוא בדיקה פונקציונלית המונים את ההחזקה של פתוגנים חיידקיים לפגוציטים מקצועיים. מכיוון שדבקות היא דרישה לפגוציטוזיס והרג, ההאשמה היא שיטה חלופית למבצעי הרג אופסונו-פגוציטיים. היתרון של בדיקת דבקות באופסונו הוא האפשרות להשתמש בפתוגנים מומתים ובקווי תאים של יונקים, המאפשרים סטנדרטיזציה על פני ניסויים מרובים. השימוש בפתוגן מושבת ב assay גם מקל על העבודה עם סוכנים זיהומיות ברמה biosafety 3 ופתוגנים ארסיים אחרים. בעבודתנו, נעשה שימוש ב-opsono-adherence assay כדי להעריך את היכולת התפקודית של נוגדנים, החל מ-sera של בעלי חיים מחוסנים עם חיסון מבוסס קפסולה אנתרקס, כדי לגרום לדבקות באצילוס אנתרקיס קבוע לקו תא מקרופאג עכבר, RAW 264.7. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית אוטומטית שימשה ללכידת תמונות של bacilli דבק מקרופאגים. דבקות מוגברת הייתה בקורלציה עם נוכחות של נוגדנים נגד כמוסות בסרום. יונקים לא אנושיים שהפגינו ריכוזי נוגדנים גבוהים נגד קפסולה בסרום היו מוגנים מפני אתגר אנתרקס. לפיכך, ניתן להשתמש בפקודת האופסונו-דבקות כדי להבהיר את הפונקציות הביולוגיות של נוגדנים ספציפיים לאנטיגן בסרה, להעריך את יעילותם של מועמדים לחיסון וטיפולים אחרים, ולשמש כמתאם אפשרי של חסינות.

סעיף זה מציג מיקרוגרפים מייצגים שנאספו במהלך ניסוי OAA יחד עם תוצאות המראות כי OAA יכול לשמש כדי לבחון את הפונקציה הביולוגית של נוגדנים. כאן, הבדיקה שימשה בהצלחה כדי להעריך את היעילות של מועמד חיסון אנתרקס. זה קריטי כדי לאמת את מצב של אנקפסולציה על bacilli כמו מעט עד ללא אנקפסולציה גורם להם לדבוק בתאים מארחים, לייצר רקע גבוה. איור 1 הוא תמונה של B. anthracis Ames מוכתם בדיו הודו כדי לבחון אנקפסולציה. OAA דורש תאורה של שדות תצוגה סמוכים מרובים ואם נעשה שימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית, ב...

הבדיקה האופסונו-דבקות היא שיטה חלופית למבצע ההרג האופוסונו-פאגוציטי כדי להעריך את הפונקציות האופסיוניות של נוגדנים בפיתוח חיסונים.

Opsono-דבקות Assay כדי להעריך נוגדנים תפקודיים בפיתוח חיסונים נגד אנתרקיס Bacillus ופתוגנים אנקפסולציה אחרים

The opsono-adherence assay is a functional assay that enumerates the attachment of bacterial pathogens to professional phagocytes. Because adherence is ...

בדיקת Opsono-Adherence מנתחת את נוכחותם של נוגדנים אופוסוניים פונקציונליים המיוצרים בבעלי חיים לאחר החיסון, אשר הוכחו כמתאמים עם יעילותם של מספר חיסונים אנושיים מורשים. בדיקה זו מועדפת לשימוש עם חומרים ביולוגיים נבחרים ופתוגנים זיהומיים אחרים וניתן לבצע אותה במעבדת BSL-1 או BSL-2 לאחר העברת חומר BSL-3 המומת. נוגדנים נגד כמוסות חיידקים, כולל קפסולת Bacillus anthracis, הוכחו כיעילים במודלים של זיהום בבעלי חיים.מבחני אופסונו-דבקות מעריכים באופן תפקודי נוגדנים מבלי להדביק בעלי חיים. פעל לפי כל נהלי הבטיחות והאבטחה המוסדיים בעת עבודה עם זנים אלימים עטופים של Bacillus anthracis. בסרטון זה, אנו משתמשים בזן מומת בתנאי בטיחות ביולוגית שנייה.התחל הליך זה בהכנת תאי RAW 264.7, כמתואר בפרוטוקול הטקסט. כדי לצלחת את התאים לבדיקת היצמדות האופסונו, החלף את הבקבוק במדיום טרי והשתמש במגרד תאים כדי לגרד בעדינות תאים מהבקבוק. פיפטה למעלה ולמטה כדי לפרק את גושי התאים לספירת תאים קלה יותר.צלחת 14,000 תאים לבאר בצלחת תחתונה שטוחה מזכוכית בעובי 96 באר בעובי 0.15 מיקרון. אפשר לתאים לגדול במשך שלושה ימים, ולהחליף את המדיום שהושקע יום אחד לפני ביצוע ה-OAA. לאחר שלושה ימי דגירה, מספר התאים צריך להיות כ-50,000 תאים לבאר.כדי להתחיל בבדיקה, הכינו צלחת מאסטר של Bacillus anthracis ממלאי נבגים על ידי פיזורה לבידוד על צלחת אגר NBY. למטרות הדגמה, נעשה שימוש בלוחית אגר דם כבשים. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך יום אחד לפני גידול במרק.לאחר מכן, חסנו 30 מיליליטר מרק תרבית בבקבוק מאוורר של 250 מיליליטר עם כמה מושבות של הבצילים. מנערים את תרבית המרק ב-125 סל"ד, 37 מעלות צלזיוס, עם 20% CO2 ולחות למשך 18 עד 24 שעות. השתמש בכתמים שליליים בדיו הודי כדי להבטיח עטיפה מספקת, וכי הבצילים נמצאים בשרשראות קצרות לפני הקיבוע.לשם כך, ערבבו חמישה מיקרוליטרים של תרחיף חיידקים עם שני מיקרוליטרים של דיו הודי על שקופית מיקרוסקופ. לאחר מכן, הניחו זכוכית כיסוי בעובי של מיקרון אחד או 1.5 מיקרון על גבי המתלה מבלי ליצור בועות. התבונן בתרחיף החיידקים באמצעות עדשת אובייקט שמן פי 40 עד פי 100 במיקרוסקופ אור.קפסולה עבה אינה כוללת דיו הודי. ודא שהבצילים עטופים על ידי התבוננות באזור פינוי המקיף כל חיידק. כמו כן, ודא ששרשראות הבצילי קצרות.כדי לקבוע יחידות יוצרות מושבה, או CFUs, יש לדלל באופן סדרתי 100 מיקרוליטר של תרבית אחת עד 10 בתמיסת PBS, ודילול תרבית צלחות על צלחות אגר דם כבשים. דגירה במשך 12 עד 18 שעות בחום של 37 מעלות צלזיוס. ספרו CFUs וקבעו את מספר החיידקים למיליליטר תרבית.לאחר שווידאתם שהבצילים עטופים, מדוללים ומצופים מספיק, יש לתקן את תרבית החיידקים שנותרה על ידי הוספת 10 מיליליטר של 16% פרפורמלדהיד ל-30 מיליליטר של תרבית בריכוז סופי של 4% פרפורמלדהיד. העבירו את הנפח לצינור חרוטי של 50 מיליליטר. לאחר מכן, ערבבו לאט על שייקר בטמפרטורת הסביבה במשך שבעה ימים.כדי לבדוק סטריליות, העבירו ארבעה מיליליטר, או 10% נפח, של תרחיף חיידקים קבוע לצינור חרוטי של 50 מיליליטר. שטפו את המתלה על ידי הוספת PBS, וגלולה במינימום של 3000 גרם למשך 45 דקות. לאחר מכן הסר את הסופרנטנט, וודא שהכדור הרך לא יפריע.לאחר חזרה על כביסה זו לפחות פעמיים, השעו מחדש את הדגימה הקבועה בארבעה מיליליטר PBS. יש צורך להסיר את כל הקיבוע במהלך הכביסה כדי שהקיבוע לא יפריע לבדיקת הכדאיות. במידת הצורך, הגדל את מספר הכביסות.לבדיקת כדאיות, יש לחסן 40 מיליליטר של מדיום גידול חיידקים בארבעה מיליליטר של תרחיף שטוף ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שבעה ימים. בדוק את הצפיפות האופטית ב-600 ננומטר בספקטרופוטומטר לפני ואחרי שבעה ימים כדי למדוד עכירות. לאחר שבעה ימים של דגירה בתרבית מרק, צלחת לפחות 100 מיקרוליטר מרק על צלחת אגר ודגירה למשך שבעה ימים נוספים.אם לא רואים עלייה בעכירות ולא רואים גידול בצלחות, התרבות המקורית נחשבת סטרילית, ואולי מועברת למעבדת BSL-2. פעל לפי ההנחיות המוסדיות לאישור העברה. שטפו את מלאי החיידקים המומת שלוש פעמים ב-PBS כדי להסיר קיבוע.הוסף תמיסת FITC בריכוז סופי של 75 מיקרוגרם למיליליטר. ערבבו את התערובת באיטיות במשך 18 עד 24 שעות בחום של ארבע מעלות צלזיוס. שטפו את החיידקים כמו קודם כדי להסיר עודפי FITC.לאחר הכביסה האחרונה, השעו מחדש את הבצילי ב-PBS באותו נפח התחלה. ואחסן את הבצילי במינוס 20 מעלות צלזיוס עד לשימוש. השבתת חום של נפח קטן של נסיוב בדיקה מפרימטים לא אנושיים בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות בבלוק חום או במכונת PCR.נפל ושטוף חיידקים עם תווית FITC עם PBS פעמיים על ידי גלולה ב -15,000 פעמים G למשך שלוש עד חמש דקות. השעיה ב-PBS באותו נפח התחלה. בצלחת תחתונה עגולה של 96 בארות, יש לדלל באופן סדרתי את נסיוב הבדיקה במדיום התא.בצלחת תחתונה עגולה נוספת של 96 בארות, הוסף 10 מיקרוליטר של נסיוב בדיקה מדולל לכל באר. לאחר מכן, הוסיפו 10 מיקרוליטר של מחמאה לארנב תינוק טרי. לצלחת מספר שלוש, הוסף את הנפח המתאים של בצילי המסומן ב-FITC עבור ריבוי זיהומים של 20.לדוגמה, בנפח המכיל 50, 000 כפול 20 בצילים לכל 50,000 תאים. מלאו כל באר בלוח מספר שלוש בנפח המתאים של מדיום התא עד לסך של 105 מיקרוליטר. דגרו על צלחת מספר שלוש בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות בנוכחות 5% CO2 עם לחות כדי לעודד את Bacilli.הנח צלחת מספר אחת, המכילה תאי הדבקה, על גוש חום של 37 מעלות צלזיוס. השתמש בצנרת רב-ערוצית כדי להסיר מדיום משומש מבארות, והחלף במהירות ב-100 מיקרוליטר של חיידקי אופסוניזציה מלוח מספר שלוש, כדי להבטיח שלא ייווצרו בועות בבארות במהלך הצנרת. כדי לא להפריע לשכבת התא החד-שכבתית, הוסף נפח לדפנות הבארות.דגירה על צלחת מספר אחת ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2 ולחות למשך 30 דקות להדבקה. שוטפים כל באר חמש פעמים עם 150 מיקרוליטר PBS, על גבי גוש החום של 37 מעלות צלזיוס, כדי להסיר בצילים לא מחוברים. פיפטה לצד הבארות כדי להבטיח שהתאים לא יתפזרו בטעות במהלך הכביסה.הוסף 150 מיקרוליטר של 4% פרפורמלדהיד לכל באר, ותקן את התאים למשך שעה. לאחר שטיפת התאים פעמיים עם PBS, מערבבים שני מיקרוליטרים של תאי הקרנה כתומים בעלי תכולה גבוהה ב-10 מיליליטר PBS. לאחר מכן, הוסיפו 150 מיקרוליטר מתמיסת הצביעה הזו כדי לתקן תאים, ודגרו במשך 30 דקות בטמפרטורת הסביבה.הניחו את לוחית מספר אחת על הבמה והתמקדו בתאים באמצעות שדה בהיר או ניגודיות פאזה. בכרטיסייה רכישה, בחר פורמט 96 בארות כהגדרת הצלחת. לאחר מכן, בחר הגדרות ערוץ.לאחר מכן, בחר הגדרה למצב אריח. ציין את מספר התמונות שיש לרכוש. שנה את מצב הרכישה לשחור-לבן או מונוכרום, והגדר את ה-Binning לשניים על שניים לפחות.הפעל את המיקוד האוטומטי או מודול המיקוד. ציין באיזו תדירות יש לבצע את פונקציית המיקוד האוטומטי. לאחר מכן, הפעל את פונקציית Z-Stack, אם זמינה.ציין את מספר ה-Z-Stacks שיתפסו את עובי התא החד-שכבתי והחיידק הדבק. הקצה תיקיית קבצים לשמירת התמונות. כעת, הפעל את תוכנית ההדמיה האוטומטית.בצע איסוף וניתוח נתונים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. זן איימס של בצילוס אנתרסיס נצבע לרעה בדיו הודי כדי לבחון אנקפסולציה. יש לאמת את מצב האנקפסולציה, מכיוון שמעט או ללא אנקפסולציה גורמת להם להיצמד לתאים מארחים ללא נוגדנים, מה שיוצר רקע גבוה.עוצמת הקרינה ומאפייני הלבנת הפוטו של הבצילי נבדקו באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית. חשוב לוודא שהפלואורסצנטיות של הבצילים אינה דוהה באופן משמעותי עם הזמן, מכיוון שהבצילים יעברו חשיפות ארוכות לאור במהלך ההדמיה. תמונות ההקרנה המקסימליות של Bacillus anthracis מחוברות לחד-שכבות התא מוצגות כאן.אלו הם שדות ראייה מייצגים שנספרו וקיבלו ניקוד עבור בדיקת הדבקות האופסונו. העלייה בהתקשרות של בצילי מודגר עם אנטי-סרום מצומד קפסולה נובעת מנוכחותם של נוגדנים נגד קפסולה שהפכו את ה-Bacilli. טיטר הסרום של פרימטים לא אנושיים שחוסנו ב-10 ו-50 מיקרוגרם של קפסולה מצומד גבוה משמעותית מהטיטרים של מצומד וקפסולה בלבד.אנו מפתחים בדיקה דומה המשתמשת בזרימה ציטומטרית ובנויטרופילים אנושיים, שהם תאים שאינם נצמדים, כדי למדוד פעילות אופסונית וגם לכמת קפסולה על פני השטח של חיידקים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב את מבחן הדבקות האופסונו. אל תשכח שעבודה עם פתוגנים BSL-3 מסוכנת ביותר.יש להקפיד על הנחיות מוסדיות ואמצעי בטיחות.

opsono-adherence-assay-to-evaluate-functional-antibodies-vaccine

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הסרטון מראה בדיקת הרג אופסונופאגוציטית במבחנה באמצעות תרבית משותפת של נויטרופילים אנושיים עם דלקת ריאות סטרפטוקוקוס. נוגדנים וחלבונים משלימים מאפשרים אופסוניזציה של החיידקים, ומאפשרים לנויטרופילים לזהות ולהרוג חיידקים, ומראים פעילות אופסונופאגוציטית מוצלחת של נויטרופילים.

הערכת פעילות הרג אופסונופאגוציטית נגד פתוגנים חיידקיים

סרטון זה מדגים בדיקת היצמדות אופסונו-לבחינת האינטראקציה בין חיידקים שעברו אופסונציה לבין תאי מערכת החיסון. חיידקים המסומנים בפלואורסצנטית, מטופלים בסרום בדיקה המכיל נוגדנים נגד קפסולות, מודגרים עם מקרופאגים. לאחר צביעת המקרופאגים בפלואורסצנטיות, החיידקים המחוברים על פני המקרופאגים נצפים תחת מיקרוסקופ לצורך הדמיה.

בדיקת היצמדות אופסונו-להערכת האופסוניזציה של חיידקים עטופים על ידי נוגדנים נגד קפסולות

טכניקה הרומן לתצוגה מהירה אנטיגן על משטח חיידקי מוצג, שיכלול משטח biotinylation ואחריו חשיפה חלבונים עניין בפיוז'ן עם אבידין monomeric. טעינת BCG עם אנטיגנים שנבחר בהצלחה משפר את immunogenicity שלה, רומז כי הקליגרפיות יכול להחליף את הגישות המסורתיות גנטי.

ביטוי של אנטיגנים אקסוגני חיסון ה-BCG Mycobacterium חיידקי סטרפטקוקוס בוביס דרך קישוט משטח שאינו גנטי עם מערכת אבידין-ביוטין

כאן אנו מציגים פרוטוקול אלגנטי ויוו הערכה של חיסון היעילות ומנחה תגובות מערכת החיסון. פרוטוקול זה ניתן להתאים מודלים חיסון ללמוד ויראלי, חיידקי, או טפילים פתוגנים.

הערכה של פתוגן-פונדקאי תגובות והיעילות החיסון בעכברים

שיטת ההרג הזה opsonophagocytic משמש כדי להשוות את היכולת של תאים חיסוניים phagocytic להגיב ולהרוג חיידקים בהתבסס על טיפולים שונים ו/או תנאים. באופן קלאסי, assay הזה משמש תקן זהב להערכת אפקטור פונקציות של נוגדנים שהועלו נגד חיידק בשם opsonin.

Opsonophagocytic הריגה הנועד להעריך תגובות אימונולוגי נגד פתוגנים חיידקיים

כאן, פרוטוקול פשוט מוצג לייצור חלקיקי mRNA המבוססים על פולי (בטא אמינואסטר) פולימרים, קל להתאמה על ידי שינוי mRNA אנקפסולציה. זרימת העבודה לסינתזה של הפולימרים, הננו-חלקיקים והאפיון החיוני שלהם מתוארים גם הם. כמו כן מתווספת הוכחת תפיסה בנוגע לחיסון.

סינתזה ואפיון של חלקיקי פולי (בטא אמינואסטרים) טעונים mRNA למטרות חיסון

הפרוטוקול מציג שיטות מפורטות להערכה אם ננו-אמולסיה אופיופוגונין D אדג'ובנט מקדם תגובות חיסוניות תאיות יעילות.

במבחנה הערכת פעילות תאית של חיסון ננו-אמולסיה אדג'ובנט אופיופוגונין D

בזיהום Mycoplasma pneumoniae, בדיקות סרולוגיות יכולות להניב תוצאות טובות, אך עם ספציפיות נמוכה בגלל תגובה צולבת אימונולוגית. ה- ELISA ללכידת אנטיגן פנימית, המתוארת במאמר זה, מבטיחה ספציפיות גבוהה של מינים והוכחה כבדיקת סינון אמינה לאבחון מדויק של M. pneumoniae.

בדיקת חיסון הקשורה לאנזים לכידת אנטיגן לזיהוי ספציפי של דלקת ריאות מיקופלסמה

הפרוטוקול הנוכחי מכין ומעריך את התכונות הפיזיקליות, התגובה החיסונית וההשפעה המגנה in vivo של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב חדשני.

הערכת התגובה החיסונית של חיסון אדג'ובנטי ננו-תחליב נגד זיהום סטפילוקוקוס אאורוס עמיד למתיצילין (MRSA)

כאן, אנו מציגים פרוטוקול חלופי לגרימת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית בעכברי C57BL/6, תוך שימוש בגליקופרוטאין מיאלין אוליגודנדרוציטים (MOG)35-55 אפיטופ אימונוגני המושהה באדג'ובנט של פרוינד המכיל את תת-המין Mycobacterium avium  paratuberculosis שהומת בחום.

פעילות אדג'ובנטית של Mycobacterium paratuberculosis בשיפור האימונוגניות של אוטואנטיגנים במהלך אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף תחליב ננו-תחליב (RA) שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. על ידי הוספת RA שאושר על ידי ה- FDA לננו-תחליב, sIgA ספציפי לאנטיגן קודם בנרתיק ובמעי הדק לאחר הזרקה תוך שרירית של ננו-תחליב.

חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות ל-OVA

למדו את שיטת האופסונו-דבקות להערכת נוגדנים תפקודיים נגד Bacillus anthracis בפיתוח חיסונים. שיטה בטוחה זו מאפשרת ניתוח יעילות חיסונים ללא הדבקת בעלי חיים.

Opsono-דבקות Assay כדי להעריך נוגדנים תפקודיים בפיתוח חיסונים נגד אנתרקיס Bacillus ופתוגנים אנקפסולציה אחרים

גלה סרטונים נוספים