הקלטה רב-יחידה חוץ-תאית מעצב הריח של טאוסט

זוהי השיטה החזקה והרגישה ביותר להערכת רגישות חוש הריח בדגים ימיים כפי שהוא מתעד אות חושי גרידא לפני כל עיבוד על ידי מערכת העצבים המרכזית. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם הרגישות שלה, כי זה יכול להיות מועבר בקלות למין אחר מסביבה אחרת עצמאית של מליחות חיצונית. כדי להכין את מי הבקרה, לאסוף ליטר אחד של מי ים מסוננים פחם ולהשתמש בדיקה pH כדי לבדוק את ה- pH.

ה- pH צריך להיות בסביבות 8.2. אם לא, בועה מי הים עם אוויר אטמוספרי עד pH של 8.2 הוא הגיע. לאחר מכן, השתמש titrator אלקליניות כדי למדוד את האלקליניות של המים, ולאחר מכן למדוד את טמפרטורת המים ואת המליחות.

כדי להכין מים דו תחמוצת הפחמן גבוה, לסנן ליטר אחד של מי ים באמצעות מסנני פחם פעיל חלקיקים לפני מבעבע עם פחמן דו חמצני עד pH הרצוי הוא הגיע. השתמש בדיקה pH כדי לבדוק את ה- pH, אשר צריך להיות סביב 7.7, ולאחר מכן להשתמש titrator אלקליניות כדי למדוד את האלקליניות של המים ולמדוד את טמפרטורת המים ואת המליחות. כדי לקבוע את לחץ הפחמן הדו-חמצני הן בשליטה והן במים דו-חמצניים גבוהים, פתח תוכנה שנועדה לחשב פרמטרים של פחמן דו-חמצני במים ולהוסיף את מליחות המים, הטמפרטורה, הלחץ, האלקליות הכוללת וערכי ה- pH לחלון הקלט.

לאחר מכן בחרו את הקבועים, המאזניים והיחידות ולחצו על התהליך כדי לקבוע את לחץ הפחמן הדו-חמצני. לאחר אישור רמה מתאימה של הרדמה על ידי חוסר תגובה לצביטת הזנב, מניחים את הדגים שעברו הרדמה על כרית תמיכה המותאמת אישית לדגם ומנחים צינור סיליקון בגודל מתאים לתוך פי הדג. הצינור מחובר למשאבה תת-קרקעית ומאגר של חומר הרדמה המכיל מי ים ומים נשאבים מעל הזימים בקצב של כ-100 מיליליטר לדקה לקילוגרם.

לאחר מכן, הכנס סיכת אדמה לתוך שריר האגף וחבר את הסיכה לשלב הראש של המגבר. מכסים את הדגים בבד לח כשיחוק הראש חשוף וממקמים את הצינור עם מערכת העברת הגירויים בתוך הנחיריים. כדי לחשוף את עצבי הריח, השתמש במקדחה ובמיקרוסקופ לנתח כדי להסיר את העור והעצם של הגולגולת בין העיניים.

בעת שימוש בדם ים, השתמש במסור עגול כדי להסיר את החלק של הגולגולת מיד מעל העיניים רק האחורי לעיניים ולהשתמש במקדחה כדי להסיר את העצם בין העיניים. לאחר שמספיק עצם נוקתה, השתמש במטסים עדין כדי להסיר את השומן ואת רקמת החיבור overlying את עצבי הריח מבלי לפגוע בעצבים או בכלי הדם. נקה את האלקטרודות לפני השימוש על ידי חיבורן לקוטב השלילי של מקור DC של שלושה וולט והצבת הקצה בתמיסת מלח פיזיולוגית למשך 20 עד 30 שניות.

זרם קבוע של בועות קטנות צריך להיראות מגיע מהטיפ. חבר אלקטרודות טונגסטן מצופות פרילן לשלב הראש של קדם-אמפליפייר זרם AC לסירוגין. לאחר שנחשפו עצבי הריח, השתמש במיקרו-מניפולטורים כדי להכניס את האלקטרודות לעצב הריח המתאים במצב שנותן תגובה מקסימלית לסטנדרט ותגובה מינימלית לריק.

אם הניתוח עבר בצורה חלקה, הצעד הקריטי הוא להפוך את האלקטרודות למיקום הנכון. פעולה זו יכולה להימשך זמן רב וכוללת מידה מסוימת של ניסוי וטעייה. כדי להשיג קריאות אלקטרופיזיולוגיות, השתמשו בשסתום תלת-כיווני המופעל סולנואיד כדי להקים מערכת אספקת גירויים כדי לאפשר מעבר מהיר ממי רקע נקיים לגירוי המכיל מים ולחבר את השקע המשותף לצינור הנושא מים לרוזט הריח.

מניחים קו אחד במי ים ברקע והשני בתסתר הבדיקה. חבר את מנהל ההתקן של השסתום לגורם המפעיל של ממיר דיגיטלי אנלוגי וקבע את תצורת התוכנה כך שתתחיל להקליט באירוע ההדק ולהמשיך לתקופה קבועה מראש. כדי לבדוק את יציבות ההכנה, להקליט שוב ושוב ולמדוד את משרעת התגובה המשולבת שוב ושוב עם התקן המאפשר דקה אחת לפסום בין גירויים רצופים.

לאחר מכן, להקליט את תגובות עצב הריח חומצות אמינו במי ים שליטה, ולאפשר דקה אחת לרווח בין גירויים רצופים, ולאחר מכן להקליט את התגובה פעם אחת 10 סרין טוחן שלישי שלילי בתמצית ריקה מים בקרה. ואז לתעד את התגובות עצב הריח לחומצות אמינו במי ים פחמן דו חמצני גבוה. התגובה לתופת ריקה גבוהה של פחמן דו חמצני ותגובה של פעם 10 לסרין השלישית השלילית בתסתר ריק מים.

כאן מוצגות תגובות אופייניות לגירויי שליטה חיוביים ושליליים המתועדים מעצב הריח של בריאת ים. בתוך כשנייה אחת של יישום גירוי, עלייה מהירה בפעילות ניתן לראות ואחריו תקופה של לינה בעוד הגירוי עדיין נוכח וחזרה לפעילות בסיסית לאחר סיום הגירוי. לעומת זאת, גירוי ריק מעורר תגובה מועטה או ללא תגובה.

בעקומת תגובת ריכוז טיפוסית זו, ניתן לראות כי הגדלת ריכוזים של ריח יכולה לעורר עליות גדולות יותר ויותר בפעילות ולכן משרעת של התגובות המשולבות. התוויית הנתונים המנורמלים וההתמדה הליניארית מאפשרת להעריך את סף הגילוי לתגובות הריכוז של כל בעל חיים או קבוצת בעלי חיים. עקומות תגובת ריכוז סיגמואידאלי ניתן להתוות חצי לוגריתמי, המאפשר חישוב של ריכוז ריח המעורר תגובה מקסימלית 50%.

חשוב לשמור על הדגים בריאים ככל האפשר. לדוגמה, ודא כי הזימים מושקיים כראוי, כי אפיתל הריח נשמר רטוב במהלך ההקלטה. אחת המטרות שלנו היא להתחקות אחר המסלולים העצביים במוח למקום שבו מועבר המידע החושי.