קביעת יעילות מעכבי כימית נגד הצמיחה טוקסופלזמה Gondii באמצעות שיטת לוציפראז מבוססי צמיחה

אסטרטגיות רגישות אלה ניתן להשתמש כדי להעריך את יעילות עיכוב של מעכבים כימיים בשילוב עם מחיקת גנים CRISPR-Cas9 כדי לחקור את מטרות התרופה. במקום להשתמש בהקדשה נקודת קצה, צמיחת טפילים יכולה להיות מנוטרת לאורך זמן כדי לאפשר חישוב של זמן הכפלת טפיל באמצעות חלבון כתב רגיש. בדיקה זו יכולה להיות קנה מידה עד 384 או 1, 536 microplates היטב לבדיקה של תרכובות מרובות או להקרנה של ספריות באופן תפוקה גבוהה.

אסטרטגיה זו ניתן לשנות כדי לכמת את הצמיחה של פתוגנים מיקרוביאליים תאיים אחרים ואת התגובות שלהם לתרופה של עניין. כדי לבצע בדיקה לצמיחה Toxoplasma מבוסס לוציפראז, להתחיל על ידי שאיפה בזהירות המדיום מן תרבויות microplate מראש 96 היטב של fibroblasts העורלה האנושית לחסן 150 microliters של השעיית טפיל B לתוך הבארים בפורמט שלוש עמודה וחמש שורה. לאחר אינקובציה של ארבע שעות באינקובטור תרבות התא, בזהירות שאפו את המדיום מכל באר כדי להסיר את הטפילים שאינם פלשו ולמלא את הבארים בכל אחד מלבד השורה הראשונה עם טמפרטורת החדר פנול אדום חינם מדיום.