Name: עכבר כרית הרגליים מודל לחקר ויראלי המושרה תגובות נוירודלקתיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-14T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: חקור תגובות נוירודלקתיות המושרות על ידי וירוסים בעכברים באמצעות מודל הזרקת כרית הרגליים. שיטה זו מאפשרת הערכה מקסימלית של קינטיקת התגובה הדלקתית במערכת העצבים ההיקפית והמרכזית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מכירים במעבדות של שארל ריבר על התמיכה הטכנית המצוינת שלהם ביצוע ניתוחי histopathology. עבודה זו ממומנת על ידי המכון הלאומי של הפרעות נוירולוגיות שבץ (NINDS) (RO1 NS033506 ו RO1 NS060699). לתורמים לא היה כל תפקיד בתכנון לימוד, איסוף נתונים וניתוח, החלטה לפרסם או הכנת כתב היד.

כל ניסויי בעלי חיים בוצעו בהתאם לפרוטוקול (מספר 2083-16 ו 2083-19) שנבדקו ואושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים המוסד (IACUC) של אוניברסיטת פרינסטון. עבודה זו נעשתה על ידי בקפדנות הדרישות ברמת בטיחות 2 (BSL-2), אשר יש לנו מעבדה מאובזר באופן מלא אושרה על ידי ועדת אוניברסיטת פרינסטון בטיחות הוועדה. ההליכים כולל שחיקה באמצעות העכבר, החיסון הנגיפי, ניתוח העכבר, ואוסף רקמות בוצעו בארון בטיחות ביולוגי (תואר ראשון) בחדר מתקן ביולוגי באוניברסיטת פרינסטון. אלה המבצעים את ההליך לבשו שמלות חד פעמיות, כיסוי ראש, הגנת עיניים, כפפות סטרילי, מסכות כירורגיות וכיסויי נעליים.
1. משטח העכבר שחיקה
<ol><li>הרדמה לעכבר C57BL/6 (5 – 7 שבועות) עם מהרדמה גז isofלאנה, נמסר במינון של 3% באמצעות מערכת הרדמה קטנה (קאמרית).<ol>
<li>הניחו את העכבר במישור הכירורגי של ההרדמה על גבו, לפני החיסון, בתוך הרגליים האחוריות. חברו חרוט אף עם דיאפרגמה (סדק בגודל מספיק כדי להתאים את הלוע של בעל החיים) לעכבר ולספק isofלוריאן גז הרדמה במינון קבוע של 1.5% – 2.0%.</li>
		<li>לעקוב בקפדנות את העכבר לתגובה גירוי מכאיב שנוצר על ידי צובט חזק של הבוהן עם מלקחיים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לתפוס בקלות אחד footpad האחוריות עם מלקחיים שטוח.<ol>
<li>בעדינות את העור מגלפת של הרגליים האחוריות כ 20x, בין העקב ורפידות הליכה, עם הלוח נייל (100 – 180 חצץ). אין לגרום לדימום על ידי שהוא שולל לעתים קרובות מדי או להחיל יותר מדי לחץ.</li>
		<li>באמצעות מלקחיים עדינים, לקלף לאט את הרובד הקרנית מנותקת על ידי שחיקה כדי לחשוף את הרובד basale.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. כרית הרגל PRV
<ol><li>הכן את הנגיף מדולל לתוך סיכוייו הרצוי במדיה dmem המכיל 2% סרום העוברי (fbs) ו 1% פניצילין/סטרפטומיצין (טבלת חומרים).<ol>
<li>בקוונטייט מספר יחידות להרכיב פלאק (PFU) במניה וירוס על PK15 תאים כדי לחשב ולתקנן את המינון הנגיפי ולדלל את הנרשת ויראלי בהתאם. הערה: במחקר זה, זן מודבק של PRV (PRV-בקר) שימש במינון של 8 x 106 pfu. מינון זה היה אופטימיזציה בניסוי ראשוני קודם כדי להבטיח כי כל בעלי החיים מחוסן הראו סימפטומים קליניים ב 82 h לאחר החיסון (hpi).</li>
		<li>לשמור על הנגיף הנרשת על קרח ולערבב בעדינות לפני השימוש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הוספה של 20 μL droplet של וירוס הנרשת (8 x 106 pfu) אל הfootpad המנוסות (מינהל אקטואלי). לבצע החיסונים מבוים (בינוני בלבד) במקביל.</li>
	<li>שפשף בעדינות 10x עם מוט של מחט כדי להקל על ספיחה של הווירוס. הימנע מגירוד עם נקודת המחט. חזור על שלב זה כל 10 דקות.</li>
	<li>לשמור על העכבר תחת הרדמה במשך 30 דקות עד כרית הרגליים שנוצר יבש.</li>
	<li>לאחר הפסקת ההרדמה, לפקח על העכבר עד שהוא יכול לשמור על שכיבה משנית ולמקם אותו בכלוב יחיד עבור מעקב קליני ודגימה.</li>
</ol>3. אוסף העכבר לנתיחה ורקמות
<ol><li>בזמנים מתאימים לאחר זיהום, המתת החסד של העכבר על ידי שיטת חנק (CO2). הערה: במחקר זה, נקודת הקצה ההומאנית (כאשר בעלי חיים מתחילים להפגין תסמיני הטרמינל) עבור העכברים הנגועים PRV-בקר הוא 82 hpi. המתת חסד שליטה בעלי חיים במקביל.</li>
	<li>מניחים את העכבר בצד הגחוני מול על מחצלת כירורגית באמצעות מחטים/פינים. לאבטח את הגפיים של העכבר עם פינים ללוח קצף כירורגי. להרטיב את הצד הגחוני של העכבר עם 70% אתנול כדי למזער את זיהום הפרווה.</li>
	<li>לצבוט את השכבה החיצונית של פרווה ועור באמצעות מלקחיים ולעשות חתך הראשונית קטן באמצעות מספריים עדינים ליד פתיחת השופכה.<ol>
<li>מתוך פתיחה זו, להמשיך את החתך על הצד השני באמצע עד הסנטר.</li>
		<li>הרחב שני חתכים לרוחב לכיוון הגפיים של הגפיים האחוריות.</li>
		<li>הפרידו את העור משכבת השרירים הבסיסית והצמד מטה אל הצד.</li>
		<li>פתחו את חלל הבטן. והכול עד לבסיס החזה להשלים את הפתיחה של חלל הבטן על ידי ביצוע שני חתכים נוגדים.</li>
		<li>פתח את חלל החזה על ידי חיתוך הסרעפת וצלעות על שני הצדדים הצדדיים. הערה: גזירת צלעות הצלעות מונעת את הסיכון לחתוך את הלב.</li>
		<li>איסוף איברים חשופים, כולל לב, ריאות, טחול, לבלב, כבד, כליות, ושלפוחית השתן ב 1.5 mL מיקרוצינוריות. . השאר את הצינורות על הקרח</li>
		<li>חותכים את הרגל השורק בין העקב לבין רפידות הליכה ומניחים את פיסת הרקמה בצינור כמתואר בשלב 3.3.6.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מניחים את העכבר הצידה והרטיב את הפרווה עם 70% אתנול. חותכים את שכבת העור כדי לחשוף את העמודה החוליות.<ol>
<li>לעשות חתך קטן באזור האגן. להסיר את העור מן הגפיים האחוריות לעבר הראש.</li>
		<li>הסר את הרגליים ואת הידיים על ידי גזירה עם מספריים מקבילים עם וקרוב עמוד השדרה משני הצדדים.</li>
		<li>חותכים את הראש בבסיס הגולגולת (רמה C1-C2).</li>
		<li>תחתוך את הגולגולת עם מספריים. מגנום האמן לעצם הקדמית</li>
		<li>למשוך לפתוח את הגולגולת בכיוונים לרוחב באמצעות מלקחיים.</li>
		<li>בעדינות לגרוף את המוח באמצעות מלקחיים ולהמשיך כמתואר בשלב 3.3.6.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לנקות את עמוד השדרה על ידי גזירה שרירים, שומן ורקמות רכות באמצעות מספריים מעוקל. . תחתוך את הזנב מניחים את עמוד השדרה ללא שינוי בצינור 15 מ ל המכיל תמיסת מלח סטרילית באגירה מפוספרת קרח (PBS). שמרו על הצינורות בקרח עד לניתוח נוסף של חוט השדרה ו-DRG.</li>
</ol>4. חוט השדרה והוצאת DRG
הערה: לחלץ את חוט השדרה ואת DRG מן החוליה החוליות ישירות בעקבות לנתיחה העכבר. הפרוטוקול עבור חוט השדרה וחילוץ DRG כבר הותאם מהפרסום הקודם7.
<ol><li>הסר את העמודה חוליות מצינור הקרח קר PBS ולהסיר את הרקמות הרכות הנותרות, אשר הופך להיות קל יותר לאחר הקירור.</li>
	<li>לעשות שלוש חתכים רוחבי בעמודה דרך החוליות (T1, L1, ו-S2 רמות) באמצעות להב תער. הניחו את שלושת החלקים בצלחת פטרי בעלת 15 מ"מ המכילה PBS קר-קרח סטרילי. שמור על מעקב אחר וסמן מקור של מקטעים לניתוח מאוחר יותר.</li>
	<li>לקחת קטע אחד ולאבטח אותו בין מלקחיים, הצד השני פונה כלפי מעלה. לעשות בודד, חתך האורך דרך קו האמצע באמצעות להב תער, פיצול העמודה בשני חצאים שווים.</li>
	<li>מניחים את שני החצאים בצלחת פטרי חדשה המכילה מחדש סטרילי קר קרח PBS. ודא שהכיוון הנכון של המקטע יוכל להבחין בין צד שמאל לימין.</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ מבתר, בעדינות לקלף את חוט השדרה מתוך הטור חוליות מכל חצי rostral לכיוון caudal באמצעות מלקחיים עדינים.</li>
	<li>לאסוף את שני החצאים חוט השדרה במיקרוצינורות 1.5 mL המכילים 500 μL של הקרח סטרילי קר-PBS. . השאר את הצינורות על הקרח</li>
	<li>להסיר בעדינות את קרום הקרומי מצדו האחד של עמוד השדרה לשני כדי לחשוף את DRG.</li>
	<li>הסר כל DRG בנפרד על ידי אוחז בעצב השדרה חשוף למשוך אותו בעדינות מתוך עמוד השדרה. מניחים את DRG שנאסף ב 15 מ"מ צלחת פטרי המכיל הקרח קר PBS. הקציר כל ipsilateral ו מוחלק מצלעות DRG בנפרד מקטע עמוד השדרה ולהמשיך כמתואר בשלב 4.5. הערה: DRG הוא גלוי כמו מבנה שקוף עגול לאורך העצב השדרה הלבנה.</li>
	<li>חזור על שלבים 4.3 – 4.7 בשני מקטעי עמוד השדרה האחרים בתוך 30 – 45 דקות.</li>
	<li>צנטריפוגה את כל הצינורות במהירות גבוהה (17,900 x g) עבור 3 דקות ב 4 ° c.</li>
	<li>. וצינורות הקפאה בחנקן נוזלי לאחסן צינורות ב-80 ° צ' לצורך המגון רקמות נוסף.</li>
	<li>לחילופין, לתקן ולחלק את DRG ניקה ורקמות העכבר האחרים עבור ניתוחים histopathological ו/או immunofluorescence כתמים לאחר שלב 4.9.</li>
</ol>5. הומורקמה
<ol><li>להפשיר את הצינורות המכילים. דגימות רקמות קפואות על הקרח</li>
	<li>שוקלים 100 מ"ג של רקמות ומניחים אותו בצינור מיקרוצנטריפוגה 2 mL המכיל חרוז פלדה סטרילית ו 500 μL של מאגר ריפה המכיל 0.5 M EDTA (pH = 8.0), 1 M טריס-HCl (pH = 8.0), 5 M הנאל, 10% SDS, ו לוחות מעכבי קוקטייל פרוטאז.</li>
	<li>לשבש את הרקמות בטמפרטורת החדר (RT) באמצעות הומוגניצר ב 20 מחזורים/s עבור 2 דקות, ואחריו 1 דקות המתנה תקופה, אז 20 מחזורים/s עבור 2 דקות.</li>
	<li>צנטריפוגה את הצינור במהירות גבוהה (17,900 x g) עבור 10 דקות ב RT.</li>
	<li>לאסוף supernatant (500 μL) בצינור חדש ולאחסן אותו ב-20 ° c עד ביצוע אליסה ו qPCR כדי לכמת סמנים דלקתיים עומסים ויראלי, בהתאמה. הערה: עבור qPCR, לאסוף את כל הדגימות עם RNase-חומר חינם (כלומר, חרוזים, צינורות, וכו ') ולשבש רקמות עם מאגר לפירוק RNA המכיל 1% betamercaptoethanol (טבלת חומרים).</li>
</ol>6. הכנת כתמים של מחלקי DRG קפואים
<ol><li>עיבוד רקמה<ol>
<li>לתקן את הגזור וניקה DRG ב 1% פאראמפורמלדהיד (בארה ב) עבור 2 h ב RT.</li>
		<li>העבירו את הרקמה לצינור של 15 מ ל עם 10% סוכרוז ב-PBS. המלון משלב בין לילה ב -4 ° c.</li>
		<li>העבירו את הרקמה לצינור של 15 מ ל עם 20% סוכרוז ב-PBS. המלון משלב בין לילה ב -4 ° c.</li>
		<li>העבירו את הרקמה לתוך שפופרת של 15 מ ל עם 30% סוכרוז ב-PBS. המלון משלב בין לילה ב -4 ° c.</li>
		<li>להטביע רקמות ב-OCT באמצעות cryomold ובלוקים במקום קרח יבש להקפאה מהירה.</li>
		<li>אחסן את הדגימות ב-80 ° צ' עד השימוש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכנה להקפאה<ol>
<li>להסיר את הבלוק הקפוא מ-80 ° צ' ולאפשר לו להאביק בטמפרטורת החדר קריוסטט עבור 30 דקות.</li>
		<li>קריודור the drg בעובי של 15 יקרומטר ו הר את הסעיפים על שקופיות.</li>
		<li>השתמש בעט כדי לצייר מעגל הידרופובי סביב הרקמה רכוב שקופיות.</li>
		<li>שמור את השקופיות ב-4 ° צלזיוס עד לצביעת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>כתמים אימונולואורונסנציה<ol>
<li>לשטוף את הסעיפים DRG 3x ב PBS עבור 10 דקות ב RT.</li>
		<li>דגירה הסעיפים עם 100 μL של הנוגדן העיקרי הרצוי (למשל, נוגדן העכבר נגד PRV גליקופרוטאין B) עבור 1 h ב 37 ° c. לדלל את הנוגדן העיקרי ב-PBS המכיל 10% סרום עז שלילי.</li>
		<li>חזור על שלב ה6.3.1.</li>
		<li>מעכטה את הסעיפים עם 100 μL של הנוגדן המשני הרצוי (עז נגד עכבר אלקסה Fluor 488) עבור 50 דקות ב 37 ° c. . לדלל נוגדן משני ב-PBS בלבד</li>
		<li>הוסף 100 μL של DAPI (4 ′, 6-diamidino-2-פניינילידול) צבע מדולל ב PBS על הסעיף. עוד דגימות הדגירה 10 דקות ב 37 ° c.</li>
		<li>חזור על שלב ה6.3.1.</li>
		<li>הר את הדגימות באמצעות מדיום הרכבה הזריחה על שקופיות זכוכית מאובטח ולכסות עם coverslip.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. הכנה ו-H & E כתמים של משטחי פרפין-רקמה מוטבעת
<ol><li>לתקן את הרקמה ב 10% פורמאלין עבור 24 שעות ב 4 ° c.</li>
	<li>בצע עיבוד לוח זמנים סטנדרטי עבור הטבעה פרפין והסרת רקמות קבועות. העברת רקמות קבועות ל 70% אתנול ותהליך באמצעות אלכוהול משודרג כדי קסילן ואחריו פרפין, כפי שמתואר בעבר8. הערה: שימוש ספוגים פוליאסטר לשמור דגימות רקמה קטנה כגון DRG בתוך קלטות.</li>
	<li>בצע את הפעולות היחידות הרגילות ואחריו H & E כתמים של מקטעי רקמות, כפי שמתואר בעבר9.</li>
</ol>

<ol><li>Field, H. J., Hill, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathogenesis+of+pseudorabies+in+mice+following+peripheral+inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">The pathogenesis of pseudorabies in mice following peripheral inoculation.</a> Journal of General Virology. 23 (2), 145-157 (1974).</li>
<li>Engel, J. P., Madigan, T. C., Peterson, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transneuronal+spread+phenotype+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+of+the+mouse+hind+footpad%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">The transneuronal spread phenotype of herpes simplex virus type 1 infection of the mouse hind footpad.</a> Journal of Virology. 71 (3), 2425-2435 (1997).</li>
<li>Guedon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+changes+induced+by+Varicella+Zoster+Virus+in+a+rat+model+of+postherpetic+neuralgia%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Neuronal changes induced by Varicella Zoster Virus in a rat model of postherpetic neuralgia.</a> Virology. 482, 167-180 (2015).</li>
<li>Pomeranz, L. E., Reynolds, A. E., Hengartner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+pseudorabies+virus%3A+impact+on+neurovirology+and+veterinary+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology+and+Molecular+Biology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of pseudorabies virus: impact on neurovirology and veterinary medicine.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 69 (3), 462-500 (2005).</li>
<li>Wittmann, G., Rziha, H. J. Aujeszky's disease (pseudorabies) in pigs. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWittmann%2C+G+%22Herpesvirus+diseases+of+cattle%2C+horses+and+pigs%22">Herpesvirus diseases of cattle, horses and pigs</a>. Knipe, D. M., Howley, P. M. 9, Kluwer Academic Publishers. Boston, Mass. 230-325 (1989).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Diseases+of+swine%2C+6th+ed%22">Diseases of swine, 6th ed</a>. Leman, A. D., Glock, R. D., Mengeling, W. L., Penny, R. H. C., Scholl, E., Straw, B. , Iowa State University Press. Ames, Iowa. 209-223 (1986).</li>
<li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Research+Notes%22%5BJournal%5D)">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9, 82(2016).</li>
<li>Sands, S. A., Leung-Toung, R., Wang, Y., Connelly, J., LeVine, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Histochemical+Detection+of+Iron+in+Paraffin+Sections+of+Mouse+Central+Nervous+System+Tissue%3A+Application+in+the+APP%2FPS1+Mouse+Model+of+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22ASN+Neuro%22%5BJournal%5D)">Enhanced Histochemical Detection of Iron in Paraffin Sections of Mouse Central Nervous System Tissue: Application in the APP/PS1 Mouse Model of Alzheimer's Disease.</a> ASN Neuro. 8 (5), (2016).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li>
<li>Koyuncu, O. O., MacGibeny, M. A., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmented+neuronal+cultures+reveal+two+distinct+mechanisms+for+alpha+herpesvirus+escape+from+genome+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">Compartmented neuronal cultures reveal two distinct mechanisms for alpha herpesvirus escape from genome silencing.</a> PLoS pathogens. 13 (10), 1006608(2017).</li>
<li>Laval, K., Vernejoul, J. B., Van Cleemput, J., Koyuncu, O. O., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virulent+Pseudorabies+Virus+Infection+Induces+a+Specific+and+Lethal+Systemic+Inflammatory+Response+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Virulent Pseudorabies Virus Infection Induces a Specific and Lethal Systemic Inflammatory Response in Mice.</a> Journal of Virology. 92 (24), 01614-01618 (2018).</li>
<li>Laval, K., Van Cleemput, J., Vernejoul, J. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alphaherpesvirus+infection+of+mice+primes+PNS+neurons+to+an+inflammatory+state+regulated+by+TLR2+and+type+I+IFN+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Alphaherpesvirus infection of mice primes PNS neurons to an inflammatory state regulated by TLR2 and type I IFN signaling.</a> PLoS Pathogens. 15 (11), 1008087(2019).</li>
<li>Brittle, E. E., Reynolds, A. E., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+modes+of+pseudorabies+virus+neuroinvasion+and+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Two modes of pseudorabies virus neuroinvasion and lethality in mice.</a> Journal of Virology. 78 (23), 12951-12963 (2004).</li>
<li>Mancini, M., Vidal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+pathogenesis+of+herpes+simplex+encephalitis+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Mammalian+Genome%3A+Official+Journal+of+the+International+Mammalian+Genome+Society%22%5BJournal%5D)">Insights into the pathogenesis of herpes simplex encephalitis from mouse models.</a> Mammalian Genome: Official Journal of the International Mammalian Genome Society. 29 (7-8), 425-445 (2018).</li>
<li>Kopp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+neurons+and+encephalitis+after+intracranial+inoculation+of+herpes+simplex+virus+requires+the+entry+receptor+nectin-1%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Infection of neurons and encephalitis after intracranial inoculation of herpes simplex virus requires the entry receptor nectin-1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (42), 17916-17920 (2009).</li>
<li>Wang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+specific+innate+immune+responses+in+herpes+simplex+virus+infection+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Role of specific innate immune responses in herpes simplex virus infection of the central nervous system.</a> Journal of Virology. 86 (4), 2273-2281 (2012).</li>
<li>Haberthur, K., Messaoudi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+varicella+zoster+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Animal models of varicella zoster virus infection.</a> Pathogens. 2 (2), Basel, Switzerland. 364-382 (2013).</li>
<li>Sarova-Pinhas, I., Achiron, A., Gilad, R., Lampl, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+neuropathy+in+multiple+sclerosis%3A+a+clinical+and+electrophysiologic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurologica+Scandinavia%22%5BJournal%5D)">Peripheral neuropathy in multiple sclerosis: a clinical and electrophysiologic study.</a> Acta Neurologica Scandinavia. 91 (4), 234-238 (1995).</li>
<li>MacGibeny, M. A., Koyuncu, O. O., Wirblich, C., Schnell, M. J., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+axonal+transport+of+rabies+virus+is+unaffected+by+interferon+treatment+but+blocked+by+emetine+locally+in+axons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Retrograde axonal transport of rabies virus is unaffected by interferon treatment but blocked by emetine locally in axons.</a> PLoS Pathogens. 14 (7), 1007188(2018).</li>
<li>Hunsperger, E. A., Roehrig, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+analyses+of+the+neuropathogenesis+of+a+West+Nile+virus+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">Temporal analyses of the neuropathogenesis of a West Nile virus infection in mice.</a> Journal of Neurovirology. 12 (2), 129-139 (2006).</li>
<li>Swartwout, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zika+Virus+Persistently+and+Productively+Infects+Primary+Adult+Sensory+Neurons+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Zika Virus Persistently and Productively Infects Primary Adult Sensory Neurons In Vitro.</a> Pathogens. 6 (4), Basel, Switzerland. 49(2017).</li>
<li>Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One+hundred+years+of+poliovirus+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">One hundred years of poliovirus pathogenesis.</a> Virology. 344 (1), 9-16 (2006).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

מודל החיסונים שמתואר כאן הוא שימושי כדי לחקור את ייזום ופיתוח של תגובות נוירודלקתיות במהלך זיהום וירוס אלפא. יתר על כן, זה במודל vivo משמש כדי ליצור את קינטיקה של שכפול והתפשטות של אלפא וירוס מהיקפית ל-CN. זהו חלופה לדגמים אחרים, כגון העור אגף החיסון, אשר מסתמך על גירוד בעורי עמוק13, או את התוואי התוך-גולגולתי, אשר מציג ישירות את הווירוס לתוך ה-cn14,15,16. כתוצאה מכך, עם דגם footpad, ניתן להשיג הערכה מפור...

מחקר זה מתאר מודל כרית החיסון כדי לחקור את השכפול והתפשטות של וירוסים מ היקפית ל-CN ותגובות נוירודלקתיות הקשורים. מודל footpad החיסון השתמשו באופן אינטנסיבי כדי לחקור את הזיהום וירוס אלפא בנוירונים1,2,3. המטרה העיקרית של מודל זה היא לאפשר וירוסים נוירוטרופי לנסוע במרחק מקסימלי דרך היקפית לפני שהגיע ל-CN. כאן, מודל זה משמש כדי להשיג תובנות חדשות בפיתוח נוירופתיה מסוימת (גירוד נוירופתי) בעכברים נגועים בווירוס פסבדו אקראי (PRV).
PRV היא וירוס אלפא הקשורים מספר פתוגנים ידועים (קרי, הרפס סוג 1 ו 2 [HSV1 and HSV2] ו אבעבועות רוח-zoster וירוס [VZV]), אשר גורמות פצעים קרים, נגעים באברי המין, ואבעבועות עוף, בהתאמה4. וירוסים אלה הם כל pantropic ומסוגל להדביק סוגים רבים של תאים שונים מבלי להציג אהדה עבור סוג הרקמה הספציפית. עם זאת, הם כולם מוצגים נוירוטרוזם אופייני על ידי הפולשים היקפית (ולפעמים, ה-CN) של המינים המארחים. הפונדקאי הטבעי הוא חזיר, אבל PRV יכול להדביק את רוב היונקים. במחשבים מארחים לא טבעיים אלה, prv מדביק את היקפית ומשרה מתחריטוס חמור שנקרא "גירוד מטורף", ואחריו מוות בחריפות5,6. התפקיד של התגובה נוירוחיסונית בתוצאה הקלינית בפתוגנזה של זיהום PRV כבר הבינו היטב.
מודל החיסון מאפשר PRV ליזום זיהום בתאים באפידרמיס של footpad. לאחר מכן, הזיהום מתפשט לתוך סיבים עצביים חושים וסימפטיים הinnervate את האפידרמיס, בלוטות זיעה, ו dermis. הזיהום מתפשט על ידי חלקיקי וירוס נע דרך העצב הגיד כדי DRG בתוך כ 60 h. הזיהום מתפשט דרך חוט השדרה, בסופו של דבר להגיע המוח המבוקר כאשר בעלי חיים הופכים מורבנד (82 h לאחר ההדבקה). במהלך הזמן הזה חלון, דגימות רקמות ניתן לאסוף, מעובד, וניתח עבור שכפול וירוסים סמנים של התגובה החיסונית. למשל, בדיקה היסטולוגית וכימות העמסה ויראלי ניתן לבצע ברקמות שונות כדי ליצור מערכת יחסים בין ייזום ופיתוח של קליני, virological, ו דלקתיות תהליכים בפתוגנזה PRV.
באמצעות מודל החיסונים, המנגנונים הסלולאריים והמולקולריים של הפרוריטוס המושרה בעכברים ניתן לחקור. יתר על כן, מודל זה יכול לספק תובנה חדשה לתוך ייזום ופיתוח של דלקת נוירודלקתיות המושרה במהלך דלקות הרפס. הבנה טובה יותר של התהליכים הבסיסיים המושרה על ידי הנגיף האנטי-וירוס עלולה להוביל לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. למשל, מודל זה שימושי כדי לחקור את המנגנונים של גירוד נוירופתי בחולים עם נגעים פוסט herpetic (למשל, הרפס zoster, רעפים) ולבדוק מטרות טיפוליות הרומן בעכברים עבור מחלות האדם המקביל.

<table><tbody><tr><td>נוגדנים נגד PRV gB</td><td>תוצרת המעבדה</td><td></td><td>1/500 דילול</td></tr><tr><td>Aqua-hold2 פאפ אדום</td><td>פישר מדעי</td><td>2886909</td><td></td></tr><tr><td>לוחות אמרי קומפקטיים-24 ספירה (100/180 קבצי ציפורניים חצץ)</td><td>Revlon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קוקטייל מעכב פרוטאז שלם ללא EDTA</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>11836170001</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 עכברים (5-7 שבועות)</td><td>הג'קסון </td> תמיסת DAPI של מעבדות <td></td><td></td></tr><tr><td>(1 מ"ג/מ"ל)</td> <td>Fisher scientific</td><td>62248</td><td>1/1000 דילול</td></tr><tr><td>צלחת פטרי פוליסטירן סטרילית חד פעמית 100 x 15 מ"מ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5731500</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td> <td>Hyclone, GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30022</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח פופט בופר (PBS) של Dulbecco</td><td>Hyclone, GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30028</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Hyclone, GE Healthcare מדעי החיים</td><td>SH30088</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מעוקלים עדינים נירוסטה</td><td>FST</td><td>14095-11</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G מדיה הרכבה</td><td>Fisher scientific</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פורמלין, ניטרלי חוצץ 10%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>איזותזיה איזופלורן</td><td>הנרי שיין</td><td>NDC 11695-6776-2</td><td></td></tr><tr><td>צינור מיקרוצנטריפוגה 2 מ"ל</td><td>דנוויל סיינטיפיק</td><td>1000945</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטיוב 1.5 מ"ל</td><td>SARSTEDT</td><td>72692005</td><td></td></tr><tr><td>סרום עיזים שלילי</td><td>וקטור</td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>154022</td><td></td></tr><tr><td>מחט גלישה מדויקת 18G</td><td>BD</td><td>305196</td><td></td></tr><tr><td>סכיני גילוח פלדה גב</td><td>Personna</td><td>9412071</td><td></td></tr><tr><td>RNA lysis buffer (RLT)</td> <td>Qiagen</td><td>79216</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי נירוסטה, 5 מ"מ</td><td>Qiagen</td><td>69989</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost / בתוספת שקופיות מיקרוסקופיות</td><td>פישר מדעי</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>לייזר רקמות LT</td><td>Qiagen</td><td>69980</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>488 (עיזים נגד עכברים)</td> <td>Life Technologies</td><td>A11029</td><td>1/2000 דילול</td></tr></tbody></table>

עכבר כרית הרגליים מודל לחקר ויראלי המושרה תגובות נוירודלקתיות

Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

פרוטוקול זה מתאר מודל החיסון לשימוש לימוד ייזום ופיתוח של תגובות נוירודלקתיות במהלך זיהום וירוס אלפא בעכברים. כמו אלפא וירוסים הם הפולשים העיקריים של מערכת העצבים ההיקפית (היקפית), מודל זה מתאים לאפיין את קינטיקה של שכפול נגיפי, התפשטות שלו מ היקפית ל-CN, ותגובות נוירודלקתיות הקשורים. מודל כרית הרגליים מאפשר חלקיקי וירוס להתפשט מאתר זיהום ראשוני באפידרמיס הfootpad לסיבי עצב חושי ואוהד הinnervate את האפידרמיס, בלוטות זיעה, ו dermis. הזיהום מתפשט דרך העצב המגיד לגנגוליה השורש (DRG) ובסופו של דבר דרך חוט השדרה אל המוח. כאן, footpad העכבר הוא מחוסן עם וירוס פסבדו אקראי (PRV), וירוס אלפהרתקרוב הקשורות וירוס הרפס (HSV) אבעבועות רוח-זוסטר וירוס (VZV). מודל זה ממחיש כי זיהום PRV מעורר דלקת חמורה, מאופיין הסתננות נויטרופילים ב footpad ו DRG. ריכוזים גבוהים של ציטוקינים דלקתיים מזוהים לאחר מכן ברקמות הומוגניים על ידי אליסה. בנוסף, מתאם חזק הוא הבחין בין הגן PRV וביטוי חלבון (דרך qPCR ו IF כתמים) ב DRG וייצור ציטוקינים פרו דלקתיים. לכן, מודל החיסון העצמי מספק הבנה טובה יותר של התהליכים הבסיסיים המושרה על ידי הנגיף אלפא, ועלול להוביל לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. בנוסף, המודל יכול להנחות מחקר על neuropathies היקפית, כגון טרשת נפוצה ונזק המושרה ויראלי הקשורים היקפית. בסופו של דבר, זה יכול לשמש ככלי חסכוני vivo לפיתוח התרופה.

העכבר הfootpad המודל מאפשר אפיון של הimmunopathogenesis של דלקת וירוס אלפא בvivo, כולל שכפול והתפשטות של הזיהום מתוך footpad מחוסן למערכת העצבים אינדוקציה של תגובות נוירודלקתיות ספציפיות.
במחקר זה, אנחנו הראשון שבשנו את העכבר האחוריות footpad ו או ללעוג מחוסן או מחוסן האזור השורק עם זן השני של PRV (PRV-בקר). האתר של שחיקה היה גלוי הfootpad השליטה. קרום נוצר באתר השחיקה כחלק מתהליך הריפוי (איור 1, חץ שחור). לעומת זאת, עכברים שחוסנו עם PRV הראו דלקת חמורה בנקודת הקצ...

מודל החיסונים הוא כלי רב ערך לאפיון תגובות נוירודלקתיות המושרה בvivo. בפרט, היא מספקת הערכה ברורה של קינטיקה ויראלית ותהליכים immunopathological משויכים המופעלים במערכת העצבים ההיקפית.

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

פרוטוקול זה מאפשר את המחקר של ייזום ופיתוח של תגובות נוירו-אינפלציה במערכת העצבים ההיקפית של העכבר במהלך זיהום ויראלי. עם מודל זה, זיהומים לנסוע מרחק גדול יותר מהפריפריה למערכת העצבים ההיקפית והמרכזית, המאפשר הערכה מקסימלית של הקינטיקה של התגובה neuroinflammatory. לאחר הצבת עכבר C57BL/6 הרדמה בן חמישה עד שבעה שבועות בתדר השופע על כרית כירורגית, לאשר חוסר תגובה רפלקס הדוושה.ולהשתמש 100 כדי 180 לוח אמרי חצץ, כדי לשחוק בעדינות את העור glabrous של רגל אחורית אחת בין העקב ואת רפידות הליכה עם כ 20 מעברים של הלוח. לאחר מכן השתמש במקלפים עדין כדי לקלף לאט את הקרנית שכבה מנותק על ידי שחיקה לחשוף את השכבות בזלה. לאחר ערבוב עדין, למרוח topically 20 microliters של טיטר המתאים של אינוקולום וירוס על footpad abraded.לבצע חיסונים מדומה עם בינוני רק ב footpads abraded של חיות בקרה במקביל. לאחר כל יישום, בעדינות לשפשף את footpad 10 פעמים עם פיר של מחט כדי להקל על הספחת הנגיף כל 10 דקות במשך 30 דקות. כאשר משטח הרגליים abraded מיובש, לאפשר לעכברים להתאושש עם ניטור עד recumbency עצם החזה לפני הצבת בעלי החיים לתוך כלובים בודדים למעקב קליני ודגימה.בנקודות הזמן הניסיוניות המתאימות, אספו את האיברים החשופים לנגיף, כולל הלב, הריאות, הטחול, הלבלב, הכבד, הכליות ושלפוחית השתן למיקרו-צינורות בודדים של 1.5 מיליליטר על קרח. לאחר מכן לקצור את כפות הרגליים abraded בין העקב ואת רפידות הליכה ולמקום את הדגימות לתוך צינורות בודדים 1.5 מיליליטר על קרח. לאחר מכן, מניחים את העכבר במצב נוטה להרטיב את הפרווה עם 70% אתנול.כדי לחשוף את עמוד החוליות, בצע חתך קטן באזור האגן והפשט את העור מהגפיים האחוריות לכיוון הראש. כדי להסיר את החלק הראשון ואת הגפיים האחוריות, השתמש במספריים כדי לחתוך במקביל וקרוב לעמוד השדרה משני הצדדים. ולהסיר את הראש בבסיס הגולגולת.השתמש במספריים כדי לפתוח את הגולגולת מאגנום foramen לעצם הקדמית. ולהשתמש במקלות כדי למשוך לפתוח את הגולגולת בכיוון הרוחווי. לאחר מכן השתמש בממטרים כדי לגרוף בעדינות את המוח ול למקם את המוח לתוך microtube 1.5 מיליליטר על קרח.השתמש מספריים מעוגלים כדי לנקות את עמוד השדרה של שריר, שומן, ורקמות רכות, ולהסיר את הזנב. ואז למקם את עמוד השדרה שלם לתוך צינור 15 מיליליטר של PBS קר כקרח סטרילי על קרח במשך לא יותר משלוש שעות. לאחר הניתוח, להעביר את חוט השדרה לתוך צלחת תרבית רקמות כדי לאפשר הסרה של כל רקמה רכה שנותרה.השתמש בסכין גילוח כדי לבצע שלושה חתכים רוחביים דרך עמוד השדרה בחוליות S2, L1 ו- T1. מעבירים את החלקים למנות בודדות של 15 מ"מ המכילות PBS סטרילי קר כקרח. מעקב וסימון מקורות המקטעים לצורך ניתוח מאוחר יותר.לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי לאבטח צד דורסל מקטע אחד למעלה ולהשתמש בסכין גילוח כדי לבצע חתך אחד, אורך למטה דרך קו האמצע כדי לפצל את העמודה בשני חצאים שווים. מניחים את שני החצאים בצלחת פטרי חדשה המכילה PBS טרי, סטרילי קר כקרח בכיוון המקורי כדי להיות מסוגל להבחין בין הצדדים השמאליים והימין של עמוד השדרה. תחת מיקרוסקופ מנתח, השתמש במקלפים עדין כדי לקלף בעדינות את חוט השדרה מתוך כל מחצית של עמוד החוליות בכיוון rostral כדי caudal.לאחר מכן מניחים את שני חצאי חוט השדרה במיקרו-צינורות בודדים של 1.5 מיליליטר המכילים 500 מיקרוליטרים של PBS סטרילי קר כקרח על קרח. כדי לחשוף את גנגליון השורש הגבי, הסר בעדינות את קרום המוח מצד אחד של עמוד השדרה לצד השני. ולמשוך את עצב עמוד השדרה הלבן החשוף מעמוד השדרה.קוצרים את גנגליון השורש הגבי העגול והשקוף ממקטע עמוד השדרה לצלחת פטרי 15 מ"מ של PBS קר כקרח. ולאסוף את גנגליון שורש הגב של Ipsilateral ו contralateral כפי שהוכח רק. לאחר קצירת עצב עמוד השדרה וגנגליון שורש הגב משני מקטעי עמוד השדרה האחרים כפי שהוכח זה בלבד, צנטריפוגה כל צינורות הרקמה במהירות גבוהה.לאחר מכן שאפו את העל-טבעיים והקפיאו את הדגימות בחנקן נוזלי, ואחסנו במינוס 80 מעלות צלזיוס עד להומוגניזציה. עבור הומוגניזציה של רקמות, להפשיר את הצינורות של רקמה קפואה על קרח לפני שקילה החוצה 100 מיליגרם של כל מדגם. מעבירים לצינור מיקרוצנטריפוגה של שני מיליליטר המכיל חרוזים סטריליים ו-500 מיקרוליטרים של חיץ בדיקה של רדיואימון-פריציפציפציה.לאחר מכן, לשבש את הרקמות בטמפרטורת החדר על homogenizer ב 20 מחזורים לשנייה במשך שתי דקות, ואחריו תקופת המתנה של דקה אחת, ו 20 מחזורים לשנייה במשך שתי דקות נוספות. לאחר הסיבוב השני של הומוגניזציה, צנטריפוגה הרקמות במהירות גבוהה לפני העברת 500 microliters של כל על טבעי לתוך צינור חדש שכותרתו כראוי. יש לאחסן במינוס 20 מעלות צלזיוס עד לניתוח במורד הזרם.אתר השחיטות גלוי במשטח הבקרה. וזה אופייני עבור קרום להיווצר באתר שחיקה כחלק מתהליך הריפוי. לעומת זאת, עכברים מחוסנים עם פסאודורביות, מדגימים דלקת חמורה של כף הרגל בנקודת הקצה ההומנית המאופיינת בנפיחות ואדמומיות.בדיקה היסטופתולוגית של משטח הליכה מחוסן וגנגליון שורש הגב חושף נמק אפידרמיס ודלקת עורית חמורה בתוך קטעי כף הרגל הנגועים פסאודורביים. חדירה של נויטרופילים נצפתה גם בסעיפי DRG נגועים פסאודורביים. עלייה משמעותית בביטוי חלבון G-CSF נמדדת במשטח הרגליים ובגנגליון השורש הגבי של עכברים נגועים פסאודורביים בהשוואה לפקדים הן בשבעה והן ב-82 שעות לאחר ההדבקה.רמות G-CSF משמעותיות נצפו גם ב 82 שעות לאחר זיהום בחוט השדרה, המוח, הלב, ורקמות הכבד של עכברים נגועים pseudorabies לעומת פקדים. יתר על כן, רמות משמעותיות של IL-6 מזוהים בכל הרקמות שנבדקו של עכברים נגועים pseudorabies החל 24 שעות לאחר ההדבקה. במצב מורבידי, התגלו פסאודורביים במשטח הרגליים, גנגליון שורש הגבי, חוט השדרה והמוח.עם הביטוי הציטופלסמי הגבוה של פסאודורביס גליקופרוטאין gB בנוירונים של גנגליון השורש הגבי בעכברים נגועים פסאודורביים. כדי להבטיח זיהום מוצלח, חשוב כי טיפה של וירוס בעמודה לא נופל מן footpad abraded. מודל זה של בעלי חיים עשוי לשמש פלטפורמה לבדיקת היעילות של תרופות אנטי דלקתיות ואנטי ויראליות על מנת למנוע נוירופתיות היקפיות הנגרמות על ידי ויראלי.

mouse-footpad-inoculation-model-to-study-viral-induced

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הסרטון מדגים השראת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי על ידי הזרקת שילוב של גליקופרוטאינים אוליגודנדרוציטים מיאלין ושחפת מיקובקטריום בלתי פעילה. המודל מאפשר לחוקרים לחקור מנגנוני מחלה ולבחון התערבויות טיפוליות.

אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכבר

סרטון זה מדגים את הדור של מודל עכבר עם זיהום CNS. גור יונק מוזרק עם הנגיף הן תוך גולגולתית והן intraperitoneally. הנגיף מתפשט, מדביק את מערכת העצבים המרכזית וגורם למוות תאי עצב ודלקת. הגור מוערך עבור סימפטומים של זיהום עם התקדמות המחלה.

יצירת מודל מורין עם זיהום במערכת העצבים המרכזית

סרטון זה מדגים את יצירת דלקת עצבית במודל עכבר. עכבר מורדם עם מיקרו פצעים נלקח, וחיסון של וירוס pseudorabies (PRV) מוחל על הפצעים. הנגיף מדביק את העצבים ההיקפיים, מתפשט לגרעיני השורש הגבי (DRG), ומדביק עוד יותר את חוט השדרה והמוח. זיהום של נוירונים במערכת העצבים מוביל לתגובה חיסונית הגורמת לנזק עצבי, המוביל לדלקת עצבית.

יצירת דלקת עצבית הנגרמת על ידי וירוס במודל עכבר

בסרטון זה, מודל עכבר של טרשת נפוצה נקבע באמצעות אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE). העכבר מוזרק עם תחליב המכיל פפטיד עצבי ואדג'ובנט, המפעיל תגובה חיסונית המפעילה תאי T אוטוריאקטיביים. לאחר מכן מתבצעת הזרקה של רעלן שעלת (PTX) כדי להגביר את חדירות מחסום הדם-מוח, מה שמאפשר לתאי T האוטו-תגובתיים לחדור למוח. חדירה זו יוזמת מפל איתות שבסופו של דבר גורם לנזק למיאלין, המחקה את המצב הדה-מיאלינציה של טרשת נפוצה.

סרטון זה מדגים את התהליך של הערכת תפקוד מוטורי לקוי במודל עכברי באמצעות מתן רעלן שעלת וחיסון המכיל פפטידים ואדג'ובנטים המחקים מיאלין, ולאחר מכן בדיקות הליכון להערכת תפקוד מוטורי והערכת הנזק העצבי הנובע כתוצאה מהפעלה חיסונית ודה-מיאלינציה.

הערכת תפקוד מוטורי במודל ניסיוני של עכבר נוירוטיס אוטואימוני

פרוטוקול בדיקה אופטימלי מוצג במאמר זה עבור מבחן הביצועים של Rotarod, המשמש למדידת נכות נוירולוגית מתקדמת בעכברים נגועים ב-TMEV.

מדידת נכות נוירולוגית מתקדמת עכבר דגם של טרשת נפוצה

דו ח זה מתווה גישה פשוטה לזירוז בהצלחה ניסוי חיסון לדלקת בעצה (EAN) באמצעות חלבון המיאלין אפס פפטיד180-199 (P0) בשילוב עם אדג'וונט מלאה של פרוינד, הרעלן שעלת. אנו מציגים פרדיגמה מתוחכם המסוגל להעריך במדויק את היקף הגירעונות פונקציונלי, neuropathology המתרחשים EAN הזה.

גישה פשוטה כדי לגרום לדלקת בעצה חיסון ניסיוני בעכברים C57BL/6 עבור הערכות Neuropathological פונקציונלי

בדו ח זה, היתרונות של תרבויות organotypic ותרבויות הפומבית העיקרי של העכבר, נגזר שורש העזוב הגרעינים מודגשים לחקור מגוון רחב של מנגנונים הקשורים אינטראקציה נוירון-גליה, והנוירולוגיה הפלסטית, neuroinflammation, בתגובה זיהום ויראלי.

Explant של עכבר למבוגרים DRG הפומבית תא מודלים לחקור והנוירולוגיה הפלסטית ואת התגובות עלבונות סביבתי כולל זיהום ויראלי

גישה זו מתוארת זיהוי בזמן אמת של התגובה החיסונית מולדת ופצעו עורית, Staphylococcus aureus זיהום של עכברים. מאת LysM בהשוואת-EGFP עכברים (אשר מחזיקים נויטרופילים פלורסנט) עם LysM-EGFP crossbred immunodeficient עכבר זן, נוכל לקדם את ההבנה שלנו של זיהום ופיתוח של גישות כדי להילחם זיהום.

דגם העכבר כדי להעריך מולדת התגובה החיסונית לזיהום Staphylococcus aureus

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת ICR מוסמך (המכון לחקר הסרטן) מודל murine של זיהום מערכת העצבים המרכזית כדי להציג את ההתפתחות של נוירופתיה. ניטור ויראלי חריפה הפרעות נצאליטיות על ידי עשרות מחלה זהה יכול להתבצע על מראה דנגי וירוס המושרה נוירופתיה ב vivo.

מודל Murine של וירוס דנגה-הנגרמת חריפה דלקת קרום המוח-כמו מחלה

אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית היא אחד המודלים הנפוצים ביותר של טרשת נפוצה. בפרוטוקול הנוכחי, עכברי C57BL/6J משני המינים מחוסנים בפפטיד גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים מיאלין, וכתוצאה מכך בעיקר פרזיס עולה של הזנב והגפיים. כאן אנו דנים בפרוטוקול של אינדוקציה והערכה של EAE.

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

חקור תגובות נוירודלקתיות המושרות על ידי וירוסים בעכברים באמצעות מודל הזרקת כרית הרגליים. שיטה זו מאפשרת הערכה מקסימלית של קינטיקת התגובה הדלקתית במערכת העצבים ההיקפית והמרכזית.

עכבר כרית הרגליים מודל לחקר ויראלי המושרה תגובות נוירודלקתיות

גלה סרטונים נוספים