Name: Flypub ללמוד אתנול המושרה ביטול עכבה התנהגותית הרגישות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-18T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: למד את שיטת Flypub למדידת התנהגות מופרעת בזבובי פירות Drosophila melanogaster תחת השפעת אתנול. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני התמכרות לאלכוהול בקלות ובדיוק רב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי NIAAA 1R15AA020996, NIMH R21MH109953, המוח & התנהגות קרן מחקר NARSAD, ו NIMH 2G12MD007592 מענקים אשכול NMD. אנחנו גם אסירי תודה על תוכנית העלייה NIH במימון (כלומר 5R25GM069621) עבור תמיכה NMD ו-CMS, התוכנית UTEP קורא-לעלות תמיכה NMD, ממומן במימון התוכנית מארק (2T34GM008048-31) עבור תמיכה AA, ואת ד ר. Keelung הונג בוגר מלגת תמיכה בס. אנו מעריכים מאוד את מחלקת התקשורת UTEP: דרלין בראחס, כריסטיאן ריברה, קארינה מורנו, חוסה לויה פרננדז והחוג למוסיקה: סטפן חדד על עזרתם בהפקה וידאו וקול. לבסוף, אנו מודים מאוד לד ר אנדריאס Thum על שיתוף מוטציה tβh ב קנטון-s הרקע יחד עם השליטה של קנטון-s זבובים; ו ג'סיקה Burciaga על תרומתו היקר שלה למחקרים הראשונית על אוקטואמין וחברי המעבדה האן לדיון ותמיכה.

הערה: מקטע הפרוטוקול מפרט את המכינה, הטיפול והניתוח של Flypub הכוללים (1) הרכבה של החדר, (2) התקנה ואיסוף, (3) שיטת הגדרת תחנת בדיקות, (4) חשיפה לאתנול, (5) חיזור הבקיע וניתוח נתונים, ו (6) ניתוח סטטיסטי. השלבים המרכזיים לניהול האנליזה והניתוח של Flypub מתוארים בתהליך עבודה (איור 1).
1. הרכבת הקאמרית (איור 2)
<ol><li>חותכים את החלק התחתון של בקבוק הסיבוב העגול בבקבוק 25 מ ל בעזרת להב גילוח.</li>
	<li>לעשות חור, 5 מ"מ בקוטר, בסימן 50 mL של הבקבוק באמצעות ברזל הלחמה חם. הערה: זוהי נקודת הגישה שבה יועברו הזבובים אל החדר.</li>
	<li>חותכים גיליון רשת שינוי למעגל, 54 מ"מ קוטר, כדי להתאים את בקבוק Drosophila ילה בסימן 75 mL.</li>
	<li>אבטח את הרשת בסימן 75 mL של הבקבוק באמצעות דבק חם.</li>
	<li>חותכים את הסדין פלסטיק פוליקרבונט למעגל, 70 מ"מ קוטר.</li>
	<li>חבר את גיליון פלסטיק פוליקרבונט לבקבוק בסימן 25 מ"ל (השטח הפתוח התחתון עשה בשלב 1.1) באמצעות דבק חם.</li>
	<li>לחץ למטה באמצעות משקולות כדי להבטיח את סיבוב הפוליקרבונט מחובר היטב לתחתית.</li>
	<li>רוחצים את הפאבים באתנול כדי להסיר ריחות ולשטוף אותם פעמים רבות תחת הפעלת מים מזוקקים. לנער את הפאבים במרץ כדי להסיר את המים העודפים.</li>
	<li>לייבש את הפאבים על ידי הנחת אותם באופן אופקי על מגבות נייר בטמפרטורת החדר.</li>
</ol>2. לטוס לטיפול ולאיסוף
<ol><li>שמרו על הזבובים על מזון רגיל/מאכלים מהמטבח של אגר/סוכר/שמרים (https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/harvardfood.html).</li>
	<li>לאסוף אחד עד שני זבובים הזכר הישן לתוך קבוצה של 33, אשר מייצגים נקודת נתונים אחת, תחת פחמן דו חמצני (CO2) הרדמה. הקפד לבחור את הזבובים עם מורפולוגיה שלם ולשים אותם בבקבוקון מזון כדי להתאושש. הערה: החברה נסבלת פעמיים או שלוש פחות. התנהגויות יכול להיות רגיש להגדרות ניסיוני ולכן מספר לעוף לכל פאב עשוי להיות צריך להיות מותאם עם שליטה לטוס קו. הערה: ודא כי בקבוקון המזון מונח בצד כך שהזבובים ההרדמה אינם נתקעים במזון.</li>
	<li>שמור את הזבובים בחממה 25 ° c עם לפחות 50% לחות יחסית ו 12 h אור/12 h מחזור כהה עבור יומיים לפני חשיפה אתנול. הערה: קו משותף2 הוא קריטי כדי לחסל כל CO2המושרה השפעות פיסיולוגיים או התנהגותיים שעשויים לשנות תגובות אתנול המושרה.</li>
	<li>השימוש בקודים להגנוטיפוסים עיוורים או תנאי טיפול לניסויים בביצוע חשיפה לאתנול והתנהגויות חיזור הבקיע. הערה: בדיקות עיוורות מסייעות לחסל את ההטיה הניסיונית.</li>
</ol>3. תחנת שיטתהגדרת (איור 3a)
<ol><li>הגדר דוכן עותקים עם זרוע מרכזית צמודה על ראש ספסל בחדר מאוורר היטב. הערה: מעמד ההעתקה אינו חובה. כל התקן אחסון זמני המספק פלטפורמת רמה מספיקה.</li>
	<li>הצמד את שתי הזרועות הצדדיים למעמד, כאשר כל זרוע היא כ -18 ס מ ממרכז המעמד.</li>
	<li>הניחו אור פלורסנט על כל זרוע של הדוכן ואחד באמצע.</li>
	<li>חברו את מקליט הווידיאו לזרוע המרכזית, כ-38 ס מ מעל למרכז הבסיס. זה יהיה להקליט את הפאבים מהנוף העליון.</li>
	<li>כסו את בסיס המעמד בנייר לבן, המסייע לדמיין זבובים בצבע כהה כדי ליצור ניגודיות.</li>
	<li>במהלך יום החשיפה, הפעל את נוריות הפלורסנט ואת המחשב המחובר למצלמת הווידאו המצורפת לעמוד ההעתקה (איור 3A). הערה: עוצמת האור 2100-2200 lux מספק איכות טובה של התנהגויות מוקלטות עבור הבקיע. עם זאת, תנאי תאורה סביבתי במעבדה מספיקים כדי להתבונן בפעילות חיזור המושרה האתנול.</li>
	<li>הכינו את הפריטים שישמשו לחשיפה לאתנול שתוארה באיור 3B.</li>
	<li>אסוף שישה בפאבים נקיים ומורכבים לערכת ניסויים ותייג אותם בקוד 1 עד 6. הערה: הקפד למקם את הקודים אקראי על גנוטיפים לטוס או תנאי טיפול.</li>
</ol>4. חשיפה לאתנול (איור 3)
<ol><li>בעדינות להעביר קבוצה של 33 זכרים לתוך חדר Flypub דרך החור בסימן 50 mL באמצעות משפך קטן. הערה: כדי למזער את הלחץ המכני על הזבובים, למקם משטח העכבר או כל חומר ריפוד מתחת לפאב במהלך ההעברה.</li>
	<li>. כסו את החור בקלטת הערה: הקלטת משמשת לסגירת החור ולמניעת הימלטות מתוך הפאב.</li>
	<li>יישר את הפאבים על הבמה מ-1 עד 6.</li>
	<li>Acclimate את הזבובים לחדר עבור 10 דקות (איור 3D).</li>
	<li>כוונן את הגדרות המצלמה, כולל המיקוד, הזום והבהירות, והקלט את 5 הדקות האחרונות של ההתאמה כדי למדוד את רמת החיזור בבסיס. הערה: כדי למנוע בוהק שנוצר על ידי השתקפות אור מפאב, מגבונים למקום (בדרך כלל 4 שכבות או פחות מ 1 מ"מ עובי) בתחתית הפאב כדי לכוונן את הזווית.</li>
	<li>להכין רפידות כותנה למסירה אתנול ידי חיתוך כרית לארבעה רבעים שווים עם מספריים נקיים ולאחר מכן לקצץ את הפינות כדי להפוך אותו לתוך צלחת פטרי במהלך הסתגלות (איור 3C). הערה: אין להשתמש בידיים חשופות כדי לטפל בתחבושות הכותנה. השתמש מלקחיים לטפל רפידות כותנה כדי למנוע כל העברה פוטנציאלית של ריחות.</li>
	<li>הוסיפו כרית כותנה לכל צלחת פטרי.</li>
	<li>הוסף 1 מ ל של 95% אתנול לכל משטח כותנה, לוודא פתרון אתנול להיות מופץ באופן שווה על האזור כולו של הלוח.</li>
	<li>כיסוי עם מגבונים כפולים שכבתית כדי למנוע אידוי האתנול מהר.</li>
	<li>מניחים את צלחת הפטרי הקטנה המכילה את כרית הכותנה הספוגה באתנול ואת מגבונים לחים באמצעות הפתיחה התחתונה של הפאב לאחר הסתגלות.</li>
	<li>יישר את הפאבים על הבמה, התחל בהקלטה ובמקביל הפעל טיימר.</li>
	<li>הקלט את הפאבים המכילים זבובים במהלך החשיפה לאתנול עד הזבובים להפסיק לחיזור או לנוע עקב הרגעה.</li>
	<li>הסר את צלחת פטרי המכילה אתנול מכל פאב עם מרית כאשר מעל 90% הזבובים הם הרגעה.</li>
	<li>בעדינות להעביר זבובים חזרה לבקבוקונים שהוקצו שלהם דרך החור בסימן 50 mL בפאב. הערה: הניחו משפך על גבי מבחנות מזון כדי לסייע בהעברה. הקפידו להניח זבובים על הצד של מבחנות המזון כדי למנוע מהם להיתקע באוכל.</li>
	<li>נקו את הפאבים באתנול כדי להסיר ריחות ולשטוף אותם פעמים רבות תחת הפעלת מים מזוקקים. לנער את הפאבים במרץ כדי להסיר את המים העודפים.</li>
	<li>לייבש את הפאבים על ידי הנחת אותם באופן אופקי על מגבות נייר בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>שמרו על הזבובים בחממה של 25 ° c עם לפחות 50% לחות יחסית ו-12 שעות אור מחזור כהה.</li>
	<li>חזור על השלבים 4.1-4.17 כל 24 שעות במשך שישה ימים רצופים ולוודא לבצע את חשיפת האתנול באותו הזמן של היום כדי למנוע כל השפעות מעגליות. הערה: מחליפים מזון מדי 2 – 3 ימים כדי לשמור על זבובים בריאים.</li>
</ol>5. הבקיע וניתוח נתונים (איור 4-6)
<ol><li>פתח את קטעי וידאו מוקלט באמצעות נגן מדיה (למשל, VLC) ולהגדיל את הווידאו כדי לצפות בבירור זבובים להבקיע (איור 4A).</li>
	<li>הצמד את קוד הזמן לווידאו (איור 4B).</li>
	<li>לספור את מספר הזכרים העוסקים בפעילות חיזור כולל להלן, הארכה כנף חד צדדית, שרשרת חיזור, מעגל חיזור, כיפוף הבטן והרכבה עבור כל 10 s לחסום זמן31 (איור 5).</li>
	<li>הזן את מספר הזכרים המציגים חיזור עבור כל 10 הזמן בבלוק לתוך גליון עבודה (איור 6A).</li>
	<li>השתמש במספר המקסימלי של הזכרים המחזרים בשלושת גושי הזמן הרצופים של 10 השעות כנקודת נתונים ייצוגית (איור 6B).</li>
	<li>חישוב ממוצע של 10 נקודות נתונים רצופות בעלי הערך הגבוה ביותר (איור 6C) ומייצג את אחוז החיזור הבין-גברי לכל פאב (איור 6c).</li>
</ol>6. אנליזה סטטיסטית (איור משלים 1)
<ol><li>פתח תוכנה לניתוח סטטיסטי (לדוגמה, Minitab 17) והוסף נתוני חיזור בגליון העבודה. הערה: ניתן להשתמש בכל תוכנת ניתוח סטטיסטי.</li>
	<li>כדי לקבוע את התפלגות הנתונים (התפלגות רגילה או שאינה נורמלית), עבור אל הכרטיסיה סטטיסטיקה , בחר באפשרות סטטיסטיקה בסיסיתולחץ על אפשרויות בדיקה נורמליות (איור משלים 1ai).</li>
	<li>במשתנה, בחר עמודות בודדות (כל עמודה המייצגת ערכת נתונים של גנוטיפ או טיפול תחת המחקר), בחר במבחן אנדרסון-דרלינג ולחץ על אישור (איור משלים 1aii). הערה: מחלקת ההסתברות הנורמליות תציג את ערך ה-P המחושב: אם ערך ה-P גדול מ-0.05, הנתונים מופצים בדרך כלל. אם ערך ה-P קטן מ-0.05, הנתונים לא מופצים בדרך כלל (איור משלים 1Aiii).</li>
	<li>להשוואה בין קבוצות מרובות, יש לערום את העמודות להשוואה על-ידי לחיצה על כרטיסיית נתונים , לבחור מחסניתולאחר מכן עמודות (איור משלים 1bi).</li>
	<li>בחלון מחסנית עמודות , בחר את עמודות הנתונים שיהיו מוערמות, בחר את הערימה שנעשתה בגליון עבודה או בעמודה חדשה של גליון העבודה הנוכחי עם העמודה הבאה המיועדת לציון כתב תחתי (לדוגמה, זהות קבוצתית של נתונים; משלים איור 1Bii-1Bii).</li>
	<li>לחץ על הכרטיסיה סטטיסטיקה , בחר את בדיקת ANOVA , בחר את המודל הליניארי הכללי ולאחר מכן לחץ על התאמה למודל הליניארי הכללי (איור משלים 1Ci).</li>
	<li>בחלון מודל ליניארי כללי , בחר את העמודות שיש להשוותו בתיבה תגובות , בחר את העמודה עם כתב תחתי בתיבה גורמים ולחץ על אישור, המוביל לתוצאות הניתוח הסטטיסטי (איור משלים 1cii-1ciii).</li>
	<li>להשוואת שתי קבוצות עם נתונים שהופצו בדרך כלל, לחץ על לשונית Stat , בחר את הסטטיסטיקה הבסיסיתובחרבמבחן t 2 לדוגמה (איור משלים 1Di).</li>
	<li>ב 2-לדוגמה t עבור חלון ממוצע , בחר כל מדגם הוא בעמודה משלו, מתוך תיבה נפתחת, בחר את שתי הקבוצות כדי להשוות את לדוגמה 1 ולדוגמה 2 תיבות ולאחר מכן לחץ על אישור, אשר מוביל את תוצאות הניתוח הסטטיסטי (משלים איור 1dii-1diii).</li>
	<li>להשוואת שתי קבוצות עם נתונים שאינם מופצים בדרך כלל, עבור לכרטיסייה Stat , בחר Nonparametrics ולחץ על מאן-ויטני (איור משלים 1ei)</li>
	<li>בחלון מאן-ויטני , בחר בשתי הקבוצות להשוואה בדוגמה הראשונה ובתיבות הדוגמה השניה ולאחר מכן לחץ על אישור, שיוביל לתוצאות הניתוח הסטטיסטי (איור משלים 1eii-1eiii).</li>
	<li>להשוואת שלוש קבוצות או יותר של נתונים שאינם מופצים בדרך כלל, עבור לכרטיסיה Stat , בחר Nonparametricsולאחר מכן לחץ על מבחן קרוקל-ווליס (איור משלים 1fi).</li>
	<li>בחלון קרוקל-ווליס , בחר את העמודות שיש להשוותו בתיבה תגובה , בחר את העמודה עם כתב תחתי בתיבה פקטור ולחץ על אישור, אשר מוביל לתוצאות הניתוח הסטטיסטי (איור משלים 1fii-11).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

בדוח זה, תיארנו את ההתקנה ואת הפרוטוקול המפורט של הגדרת הארגון של Flypub; שיטה הרומן למדוד כיצד חשיפה אתנול חוזר מעורר disinhibited חיזור ורגישות התנהגותית. למרות השיטת Flypub היא פשוטה יחסית, מספר צעדים דורשים טיפול ותשומת לב כדי להבטיח תוצאות אמינות. ראשית, זבובים לבדיקה חייב להיות פיגמנט מלא (כלומר, מפותח לגמרי זבובים), בריא ושלמים. עיוותים או נזק במיוחד בכנפיים או ברגליים יכולים להשפיע על יכולתו של הזכר לבית המשפט. שנית, גיל לטוס הוא חשוב ויש להתאים בין קבוצות שליטה וניסיוני (גיל אופטימלי: 3-5 ימים בחשיפה לאתנול 1). שבועיים ומעלה פראי סוג זבובים הזכרים נוטים להציג את רמות גבוהות של חיזור disinhibited31. כך, הגיל המתאים התאמה של זבובים במחקר חיוני כדי למנוע תוצאות משתנה. שלישית, מספר הטיסה לכל פאב חיוני (אופטימלי: 33 לכל פאב). מספרי הטיסה הנמוכים או הגבוהים ביותר לכל פאב יכולים להטות באופן משמעותי את ציוני החיזור (נתונים לא מוצגים). רביעית, מלון Flypub צ'יימברס צריך להיות בעלי כרכים זהים כפי שמודגם באיור 2B. הדבר מבטיח כי זבובים יקבלו אדי אתנול באופן סינכרוני והתנהגויות המועלות עקביות. חמישית, הקלטת וידאו ברורה וניקוד מדויק של חיזור הם חיוניים. פרוטוקול זה תלוי במידה רבה על תצפיות התנהגותיות, כל כך מוקפד הקפדה על פרוטוקול הניקוד הסטנדרטי מהווה בסיסי כדי למזער תוצאות לא עקביות. לבסוף, מומלץ מאוד לבצע את החשיפה של האתנול ואת צעדי החיזור באופן עיוור, כאשר ניסוי ניסיוני אינו מודע לזבובים או לטיפולים ניסיוניים, ובכך מונע הטיה ניסיונית.
לשיטת Flypub יש יתרונות רבים. ראשית, ניתן לבדוק קבוצות מרובות של זבובים ולהשוותו בו. שנית, זה זול, פשוט להתקנה וקל ללמוד, מה שהופך אותו נוח מאוד לניסויים בכל הרמות כולל יסודי באמצעות התיכון, סטודנטים לתואר ראשון ולתארים מוסמכים, פוסט-דוקטורנטים והוראה, כמו גם מעבדות ההוראה עם מרחב מוגבל תקציבים. שלישית, זה יכול להיות מנוצל כדי למדוד התנהגויות נוספות כגון disinhibited חיזור של זבובים נקבה ואת השפעת הרגעה של אתנול או הרגעה אחרים כדי להעריך רגישות ראשונית ופיתוח עמידות ותחזוקה31,32. ביחד, Flypub הוא שיטה רב-תכליתית ללמוד תכונות מגוונות של AUD.
המגבלה העיקרית של שיטת Flypub הוא משטר הניקוד קפדני ומפרך. התנהגות החיזור תחת השפעת האתנול הוא דינמי מאוד באופן שמשך החיזור נע בין פחות משנייה אחת לכמה דקות והזבובים העוסקים בחיזור משתנים לעתים קרובות למדי. המשטר הבקיע הציג כאן פותחה כדי לשלב את הטבע הדינמי הזה כדי לספק ציונים עקביים על חשיפות אתנול בודדים עבור גנוטיפ נתון31,32. כפי שצוין בפרוטוקול, פעילות החיזור הוא הבקיע באופן ידני, וזה זמן רב. מספר תוכניות הניקוד האוטומטי פותחו כדי להקל על ההקרנה משוחדת התנהגותי גבוהה תפוקה וכולם אשר להסתמך על בודדים זבובים ' תנועות ומיקומים39,40,41,42,43,44,45. ניסינו גם לפתח תוכנת מחשב כדי לספור באופן אוטומטי את פעילות החיזור אך לא היתה אפשרות להשיג תוצאות עקביות ואמינות. זה יכול להיות בגלל העובדה שניקוד התנהגותי כולל שלבי חיזור מרובים (כלומר, בעקבות, הארכה כנף חד צדדית, כיפוף בטן והרכבה)35,36,46 של זבובים מרובים בבת אחת. גם עם מגבלה זו, הניסויים עם הכשרה נאותה צריך להיות מסוגל לכמת את התנהגויות חיזור המושרה האתנול עם עקביות ודיוק. עם זאת, זה יהיה לעזר רב וחשיבות לאמץ למידה ממוחשבת או אלגוריתמים מתקדמים אחרים כטיפול.
בדומה מודלים מכרסם, המחקרים על אתנול במודל לטוס יש התמקדו במידה רבה על הlocomotor של אתנול השפעות הרגעה. שיטת flypub עם זאת, מדדים disinhibited חיזור, סוג של היפוביטול קוגניטיבית שהוא הרומן31,32. לכן, Flypub יכול לסייע להבהיר את השחקנים המולקולריים, מסלולים סלולריים ומעגלים עצביים, כמו גם גורמי הסיכון (למשל, גיל, לישון, דיאטה או סביבה חברתית) קריטי עבור ביטול התנהגות התנהגותי ורגישות. יש לנו בעבר הפגינו כי דופמין איתות נדרש עבור eibs, אשר בקנה אחד עם הממצאים של דגמי מכרסמים ונושאים אנושיים6,9,31. גם כהוכחה של המושג, בדקנו את מוטציה tβh חסר OA (המקבילה חסרי חוליות של norepinephrine) ומצא oa הוא גם חשוב לרגישות התנהגותית להשפעה של האתנול למרות התרומה שלה הוא קטן יחסית לעומת זה של דופמין31. ממצא זה הוא בניגוד להתבוננות על ידי שסץ47 כי tβh מוטציה זבובים התערוכה אין ליקויים ברורים ברגישות locomotor ההפעלה של אתנול אפקט47. זה מציע ברורים מולקולרית, מסלולים סלולריים ועצביים למדיזציה התנהגותית לעומת הlocomotor הפעלה. מחקרים מעקב צריכים לשתף פעולה ברעיון מפתה זה.
לסיכום, Flypub הוא שיטה בעלות נמוכה, רבת פנים ויעילה כדי לחקור את התגובות התנהגותיות לאתנול, במיוחד ביטול ורגישות התנהגותית, זה עשוי לעזור לקדם את ההבנה שלנו של AUD ולספק תובנה התערבויות יעיל עבור הפרעה כרונית זו.

אלכוהול הוא אחד התרופות הזמינות והנפוצות ביותר בעולם. יש לו פוטנציאל גבוה לשימוש לרעה והתמכרות; עם זאת, המנגנון שבבסיס תהליך זה נשאר ברור לחלוטין. אתנול מעורר ביטול עכבה, אופוריה, ליקוי קוגניטיבי, היפראקטיביות, אובדן שליטה מוטורית והרגעה בתולעים1, פירות זבובים1,2,3, עכברים4, חולדות5 ובני אדם6, המציין רכיבים נוירוביולוגי נפוצות תיווך ההשפעות של אתנול מיצורים חסרי חוליות ליונקים כולל בני אדם. צריכת אתנול כרונית גורמת לעיבודים עצביים ושינויים התנהגותיים שאינם משקרים AUD. אחד העיבודים הוא רגישות התנהגותית המוגדרים כתגובה מורחבת עם חוויות חוזרות של אתנול7,8,9 או חומרים ממכרים אחרים10,11,12.
במהלך העשורים, המחקרים על השפעות ההתנהגות המושרה אתנול (eibs) התמקדו השפעה locomotor מגרה, אשר משמש כפרוקסי לתגובה אופוריה7,8,9,13. לדוגמה, חולדות או עכברים על חוזר (כל 24, 48 או 72 h) מינהל אתנול להציג את פעילות locomotor מורחבת כפי שנמדד על ידי מהירות הליכה8,14,15,16,17,18,19,20,21. באופן דומה, זבובים הפרי חשופים החשיפה השנייה אדי אתנול 4 h לאחר החשיפה הראשונה את התגובה locomotor משופרת כפי שנמדד על ידי מהירות הליכה כמו גם22. בעוד מידע לא זמין על המנגנון הבסיסי eibs לאפקט מגרה locomotor בזבובי פירות, המחקרים בחולדות ועכברים חשפו את הרכיבים המולקולריים והאותות (לדוגמה, הדופמין, גלוטמט ומערכות הנגבה), כמו גם מצעים עצביים ומעגל (לדוגמה, האזור tegmental הגחוני, הגרעין accumbens, אמיגדלה וקליפת המוח) המשחק תפקידים עיקריים עבור eibs6,9,23.
ביטול העכבה הוא השפעה גדולה של אתנול ומובילה לביטוי של התנהגויות שבדרך כלל מוגבלות. האפקט הבלתי מעורער מופעל על פונקציות מוטוריות, רגשיות, חברתיות, מיניות וקוגניטיביות, שעלולות לגרום להתנהגות מינית בלתי הולמת, תוקפנות מילולית או פיזית ומעשים אימפולסיבית בבני אדם ובדגמי בעלי חיים24,25,26,27,28,29. ביטול ביטול האתנול המושרה נחקר בדגמי בעלי חיים למחקרים מכניסטיים והם כוללים אימפולסיביות מוטוריים ותוקפנות אצל מכרסמים וקופים וכן ביטול ביטול מזון בתולעים6,9,24,28,29,30. הדגמנו כי זבובי פירות להראות disinhibited התנהגות מינית תחת השפעת אתנול31. במיוחד, זכרים מסוג פראי זבובים מבית המשפט לעתים רחוקות גברים אחרים ללא אתנול31 וכאשר הם עושים, האדיבות לדחות גברים החיזור. תחת השפעת האתנול, עם זאת, זבובים זכרים להראות חיזור יותר לקראת זכרים אחרים התערוכה דחייה פחות, וכתוצאה מכך חיזור הכוללת משופרת הבין גברים. בעיקר, זבובים לפתח רגישות התנהגותית לאפקט ביטול על השפעת אתנול חוזר, אשר משמש מערכת ייחודית ללמוד eibs31,32.
בדוח זה, אנו מתארים כיצד להגדיר, לבצע, לפתור ולנתח את שיטת Flypub ונתונים כדי ללמוד אתנול המושרה והרגישות של הפרי זבוב Drosophila ילה melanogaster. כדי לספק את השירות ואת האפקטיביות שלה, בדקנו את מסוג פראי -S קנטון (CS; בקרת לעוף להתאמץ) יחד עם זבובים לקויה tyramine β הידרוקסילז (tβh) כי בגדלים שונים אוקטואמין (OA). OA הוא כינוי עצבי מרכזי בחסרי חוליות33,34 ומשחק תפקיד מרכזי בהתפתחות של סובלנות אתנול בזבובים22. אנו מדווחים כאן בפעם הראשונה כי OA חשוב EIBS.

<table><tbody><tr><td>95% אתנול</td><td>VWR Chemicals</td><td>BDH1158-4LP</td><td></td></tr><<tr><td>i>Canton-S</td><td>-</td><td>-</td><td>-זן מסוג פרא המשמש כמעמד בקרה</td></tr><tr><td>העתק עם זרועות</td><td>קייזר</td><td></td><td>205411 דגם RS 2-XA, עם זרוע מרכזית אחת ושתי זרועות רוחביות; להקמת תחנת flypub</td></tr><tr><td>כותנה מעגלית</td><td>Swisspers</td><td>COT-027</td><td>כדי לספק אתנול</td></tr><tr><td>אקסל</td><td></td><td></td><td>כדי לנתח נתונים; ניתן להשתמש בכל תוכנת גיליון עבודה או גיליון אלקטרוני; נורת</td></tr><tr><td>פלואורסצנט</td><td>Lights of America</td><td>7108N</td><td>לכל היותר (120 וולט-70 ואט לכל היותר); כדי להאיר את תחנת flypub</td></tr>; <tr><td>תוכנת Microsoft LifeCam</td> <td>של</td> <td>מיקרוסופט</td> <td>בגרסה 3.60; כדי להקליט וידאו, flypub</td></tr>, <tr><td>Microsoft LifeCam Studio</td>, <td>חיישן</td> Microsoft <td>Q2F-00013</td><td>1080P HD; כדי להקליט וידאו flypubs</td></tr><tr><td>Minitab 17</td><td></td> <td>Minitab-גרסה</td> <td>17; לביצוע ניתוח סטטיסטי; ניתן להשתמש בכל תוכנת ניתוח סטטיסטי</td></tr><tr><td>יריעת רשת ניילון</td><td>Sefar Nitex-model</td><td></td> <td>B0043D1TVY, לבן אטום, רשת 200 מיקרון; להכנת</td></tr><tr><td>צלחות פטרי</td> זבוב <td>Falcon</td><td>08-757-100A</td><td>35 x 10 מ"מ; לניקוי אתנול</td></tr><tr><td>משפך פלסטיק - בגודל בינוני</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-348A</td><td>קוטר 65 מ"מ וגובה 67 מ"מ; להעביר זבובים מרדימים מפאב זבוב לבקבוקון מזון</td></tr><tr><td>משפך פלסטיק - קטן</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>07-202-121</td><td>קוטר 4 מ"מ וגובה 46 מ"מ; להעברת זבובים מבקבוקון</td></tr><tr><td>ליריעת פוליקרבונט</td> flypub <td>Lexan-0.762 מ"מ עובי, שקוף, 610 x 1220 מ"מ נומינלי; להכנת זבוב</td><td></td><td></td></tr> בקבוק <tr><td>תחתון עגול</td><td>פישר מדעי</td><td>AS115</td><td>פוליפרופילן, גובה 103 מ"מ, קוטר 60 מ"מ וקיבולת 177 מ"ל; כדי ליצור זבוב</td></tr><tr><td>מלחם</td><td>ברזל Weller</td><td>WES51</td><td>כדי ליצור חור ב-flypub</td></tr><tr><td>קוד זמן</td> <td>-</td><td></td> <td>קובץ .smi, קוד זמן מתקתק כתוביות שנוצר במעבדת האן; כדי לנטר את הזמן במהלך ניקוד החיזור; בכל עת שניתן להשתמש בכתוביות</td></tr><tr><td>Tyramine &#946; הידרוקסילאז (t&#946; h)</td><td>-</td><td>--</td><td>זן זבוב מוטנטי (nM18 אלל אפס)חסר ב-t&#946; h ברקע Canton-S ; מושג מד"ר אנדראס תום (אוניברסיטת לייפציג, לייפציג, גרמניה)</td></tr><tr><td>נגן המדיה VLC</td><td>VideoLAN-גרסה</td><td></td> <td>3.0.8; ניתן להשתמש בכל נגן מדיה כדי להבקיע חיזור</td></tr></tbody></table>

flypub ללמוד אתנול המושרה ביטול עכבה התנהגותית הרגישות

Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization

הפרעת אלכוהול בשימוש (AUD) נותרה בעיה רצינית בחברה שלנו. כדי לפתח התערבויות אפקטיביות להתמכרות, חשוב להבין את המנגנונים הנוירויולוגיים הבסיסיים, שעבורם יש צורך בגישות נסיוניות ומערכות מודל מגוונות. המרכיב העיקרי של משקאות אלכוהוליים הוא אתנול, אשר גורם שינויים גמישים במערכת העצבים המרכזית והתנהגות על צריכת כרונית. רגישות התנהגותית (כלומר, הסלמה תגובות) במיוחד מייצגת שינוי מפתח אדפטיבית התמכרות. רוב האתנול המושרה לימודי התנהגותיות במודלים בעלי חיים נערכו על ההשפעה locomotor הפעלה של אתנול. השפעה בולטת של אתנול היא ביטול עכבה התנהגותית. לעומת זאת, רגישות התנהגותית להשפעה של אתנול, עם זאת, אינה מיוצגת. כדי לטפל בבעיה זו, פיתחנו את הטיפול של Flypub המאפשר למדוד את העלייה הסלמה בפעילויות חיזור disinhibited על חשיפת אתנול חוזר ב Drosophila ילה melanogaster. כאן, אנו מדווחים על שיטת הפעולה צעד אחר צעד Flypub כולל הרכבה של תאי חשיפה האתנול, ההתקנה של תחנת הטיפול, קריטריונים עבור לטוס לטפל ואיסוף, אתנול משלוח, קוונפיקציה של פעילויות חיזור disinhibited, עיבוד נתונים וניתוח סטטיסטי. כמו כן מסופק כיצד לפתור שלבים קריטיים, להתגבר על מגבלות ולהרחיב את כלי השירות שלה כדי להעריך התנהגויות נוספות המושרה אתנול. שיטת Flypub בשילוב עם כלים גנטיים רבי-עוצמה ב- Drosophila ילה melanogaster יקל על המשימה של גילוי המנגנון הבסיסי המושרה אתנול התנהגותי רגישות.

סעיף זה ממחיש את התוצאות של ניסוי Flypub נציג. Drosophila 35לרוב הזכרים האחרים 35,36. במהלך החשיפה הראשונה אתנול, סוג פראי קנטון-S (CS) גברים הציגו גידול קטן אך חסר משמעות בחיזור disinhibited intermale31 (איור 7a). עם זאת, זכרים בפקולטה הראו עליות הסלמה בפעילות disinhibited חיזור בעקבות חשיפות אתנול עוקבות (ANOVA Glm, CS: R2= 0.83, F(5, 66) = 65.21, p &lt; 0.0001; n = 12; איור 7A), המעיד על רגישות התנהגותית לתופעת האנוטיזציה של אתנול. בעבר הצגנו כי סוג זה של eibs דורש דופמין ואת קולטן דופמין דופקאר בנוירונים פטריות31,32.
כדי לזהות אם הנוירומודולטורים נוספים מעורבים eibs, חקרנו את התפקיד של OA על ידי בדיקת הזבובים (tβh; nM18 null אלל)37,38 tyramine β הידרוקסילז, האנזים הגבלת קצב ב biosynthesis oa, ובכך לקויה ב oa. הזכרים tβh ברקע גנטי במדעי הבית (מתנה מסוג ד ר אנדריאס Thum, אוניברסיטת לייפציג, גרמניה) הציג את התגובה הdisinhibited חיזור הרגישות על ידי היום חשיפות האתנול (ANOVA glm, tβh: R2= 0.67, F(5, 66) = 27.60, p &lt; 0.0001; n = 12; איור 7B) אבל ברמה מופחתת לעומת CS (ANOVA glm, אינטראקציה אפקט: F = 2.50, p &lt; 0.034). לאחר ניתוח post-הוק, הזכרים tβh הציגו רמות נמוכות יותר של חיזור בין-גברי בכל חשיפה כי הוא בולט ביותר במהלך הרביעי עד שישי חשיפות האתנול כאשר לעומת CS (שני לדגום t-TEST: p &lt; 0.002 ב EXP4, p &lt; 0.004 ב EXP5, p &lt; 0.021 בEXP6; n = 12; איור 7C). יחד, תוצאות אלה מציינות כי OA עשוי לשחק תפקיד EIBS לאפקט ביטול העכבה של אתנול. חשוב יותר, אלה מערכות נתונים להפגין בבירור את השירות ואת האפקטיביות של שיטת Flypub בלמידה אתנול המושרה והרגישות.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig1.jpg"> איור 1: זרימת העבודה של שיטת Flypub. דיאגרמת זרימת עבודה המדגיש את שלבי המפתח לניהול השיטת Flypub. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig2.jpg"> איור 2: החומרים הקאמריים של הפלייפאב וההרכבה. (א) חומרים הנדרשים כדי לבנות קאמרית flypub כוללים (i) חם דבק אקדח דבק, (ii) אקדח דבק חם,(iii) סכין גילוח,(iv) הלחמה ברזל, (v) סרגל, (vi) רשת, (vii) גיליון פלסטיק פוליקרבונט, ו (viii) בקבוק מתחת לקצה התחתון. (ב) ייצוג סכימטי של הרכבת הקאמרית של flypub. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig3.jpg"> איור 3: חשיפה לאתנול. (א) תחנת flypub המלאה במלואה. (ב) חומרים הנדרשים לחשיפה לאתנול כוללים (i) P1000 מיקרופיפטה, (ii) סרט, (iii) כותנה, (iv) צלחת פטרי, (v) מגבונים, (vi) קטן משפך, (vii) טיימר, (viii) בגודל בינוני, (ix) עכבר pad, (x) מספריים, (xi) 95% אתנול, (xii) מלקחיים ו (xiii) מרית. (ג) צעדים על איך לחתוך רפידות כותנה. (ד) התצוגה העליונה של הפאבים המיושרים על הבמה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig4.jpg"> איור 4: הגדרת וידאו עבור ניקוד התנהגותי. מוצג הוא מדריך צעד-אחר-צעד ב (א) כיצד להגדיל את התצוגה בווידאו ו (ב) כיצד להוסיף את קובץ קוד הזמן לנגן המדיה VLC לקבלת ניקוד התנהגותי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig5.jpg"> איור 5: התנהגויות חיזור של גברים. תמונות מייצגות ממחישים את התנהגויות החיזור הגברי של דרוזוהילה , כולל הארכת כנף חד-צדדית (A), שרשרת החיזור (ב)מעגל החיזור (D) הבטן כיפוף ו (E) הרכבה המשמשים לניקוד התנהגותי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig6.jpg"> איור 6: קלט וניתוח נתונים. (א) מספר הזכרים העוסקים בחיזור בגוש הזמן של כל 10 הימים מועתק לגליון עבודה. המספר הגבוה ביותר של החיזור זכרים של שלושה בלוקים ברציפות של 10 הזמן (החץ הירוק) משמש כנקודת נתונים ייצוגית. הממוצע של 10 נקודות נתונים רצופות (סוגר כחול או כתום) בעל הערך המקסימלי מייצג את אחוז החיזור הבין-גברי לכל פאב [סוגר כתום; MAX (ממוצע), חץ שחור]. (ב, ג) נוסחאות גליון העבודה המשמשות לחישוב נקודת הנתונים של הנציג המקסימלי והממוצע המקסימלי של 10 נקודות מידע מייצגות עוקבות לכל פאב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig7.jpg"> איור 7: אתנול המושרה ביטול עכבה התנהגותית ורגישות בפקולטה למדעי ההתנהגות tβh. (א, ב) הזכרים CS ו tβh הציגו ביטול החיזור באמצעות חשיפות באמצעות כיווני האתנול חוזר (ANOVA glm, CS: R2= 0.83, F(5, 66)= 65.21, p &lt; 0.0001; tβh: R2= 0.67, F(5, 66)= 27.60, p &lt; 0.0001; n = 12). (ג) הזכרים tβh הראו חיזור פחות disinhibited לעומת CS (n = 12). ערכי p של הניתוח הפוסט-הוק מוצגים מעל לקו. פעילות חיזור בין גברים נותחו מתוך קטעי וידאו שנוצרו עבור כל חשיפה אתנול. כל הנתונים מדווחים כאמצעי ± שגיאה סטנדרטית של הממוצע. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
משלים איור 1: אנליזה סטטיסטית. השלבים בתוכנה Minitab 17 על איך לבצע את (א) מבחן נורמליות, (ב) הערמה את הנתונים, (ג) המודל הליניארי הכללי מבחן ANOVA, (D) שני לדגום t-test, (E) המבחן מאן-ויטני ו (F) מבחן קרוקל-ווליס. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123supfig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

השיטת Flypub מודדת את ההתנהגויות שבהן מציג הפרי את מלאנוזופילה מלוגסטר תחת השפעת האתנול. ניתן לשלוט בקלות על ידי הניסויים בכל הרמות וליישם גירויים שונים, הקלה על שימוש בסמים ולימודי התמכרות.

Flypub ללמוד אתנול המושרה ביטול עכבה התנהגותית הרגישות

Alcohol use disorder (AUD) remains a serious problem in our society. To develop effective interventions for addiction, it is important to understand the ...

המחת של Flypub מודדת התנהגויות לא מנופחות תחת השפעת אלכוהול. ובכך להקל על המחקר המקניסטי של הפרעת שימוש באלכוהול. אלכוהול הוא אחד הסמים הזמינים ביותר בשימוש נרחב בעולם.המנגנון הנוירוביולוגי שבבסיס הפרעת השימוש באלכוהול, לעומת זאת, מובן באופן לא שלם. זבוב הפירות, Drosophila melanogaster, שימש בהרחבה לחקר ההשפעות של אתנול על אופוריה, תנועה, disinhibition, ו sedation. הוא משמש גם כדי ללמוד את השינויים הארוכים והתמשך שלה בהתנהגות רלוונטי התמכרות כגון סובלנות, רגישות, ואתנול מחפש.מחקרים רבים ב Drosophila ומודלים אחרים של בעלי חיים להתמקד לוקומוטור הפעלת ההשפעות של אתנול. ההשפעה המובהק של אתנול היא ביטול חיים התנהגותי. עם זאת, המחקר שלו הוא די מיוצג.כדי לטפל בבעיה מרכזית זו, פיתחנו את המחתר Flypub כדי למדוד התנהגות חסרת מעצורים תחת השפעת אתנול. כדי להרכיב את תא Flypub, לקחת בקבוק עגול לחתוך את החלק התחתון של סימן 25 מיליליטר עם סכין גילוח. צור חור בסימן 50 מיליליטר באמצעות ברזל הלחמה חם.זוהי נקודת הגישה שבה יוצגו זבובים. מניחים רשת עגולה בקוטר 54 מילימטרים בסימן 75 מיליליטר, ומאבטחים אותה באמצעות דבק חם. מקם יריעת פלסטיק שקופה בקוטר 70 מילימטרים בקצה התחתון הפתוח, ואבטח אותה באמצעות דבק חם.כדי להבטיח כי סיבוב הפלסטיק מחובר היטב לתחתית, לחץ למטה באמצעות משקולות. לאסוף זבובים זכר לתוך קבוצה של 33. מניחים אותם בצד של בקבוקון מזון.מניחים אותם באינקובטור של 25 מעלות צלזיוס עם לפחות 50% לחות יחסית ואור של 12 שעות, מחזור כהה של 12 שעות במשך יומיים לפני החשיפה לאתנול. הכן את תחנת המרשם Flypub על-ידי הדלקת אורות, מחשב ומצלמה להקלטת וידאו. הכינו שישה פאבים לסט ניסויים.תייג אותם במספרים 1 עד 6. בעדינות להכניס את הזבובים לתוך הפאב באמצעות משפך קטן. סגור את הפאב באמצעות קלטת.להתאקלם את הזבובים במשך 10 דקות. במהלך ההתאקלמות, התאימו את מוקד המצלמה והקליטו את חמש הדקות האחרונות של ההתאקלמות. במהלך ההתאקלמות להכין רפידות כותנה למשלוח אתנול.חותכים כרית כותנה לארבעה רבעים שווים ולאחר מכן לקצץ את הפינות כדי להפוך אותו להתאים לתוך צלחת פטרי. מוסיפים כרית כותנה לצלחת פטרי. מוסיפים מיליליטר אחד של 95% אתנול ל כרית הכותנה.הקפד פתרון אתנול להיות מופץ באופן שווה על כל האזור של כרית. מכסים במהירות צלחת פטרי עם מגבוני מעבדה. מניחים בזהירות אתנול המכיל צלחת פטרי מתחת לכל פאב.יישר את הפאבים על הבמה. התחל בהקלטה ולהתחיל בו-זמנית שעון זמן. הקלט עד שטסים יפסיקו לחזר או לזוז.הסר את האתנול המכיל צלחת פטרי כאשר מעל 90% מהזבובים הם מרומם. מעבירים בעדינות את הזבובים הרותמים בחזרה לבקבוקוני מזון. שים אותם בחזרה לתוך החממה.חזור על השלבים הקודמים כל 24 שעות במשך שישה ימים רצופים. פתח את הווידאו באמצעות נגן מדיה. ואז ציון מספר הזכרים העוסקים בפעילויות חיזור כל 10 שניות.פעילויות החיזור שיש להבקיע כוללות: הארכת כנף חד צדדית, שרשרת חיזור, מעגל חיזור, כיפוף בטן והתהוות. מוצגות הקלטות מייצגות של אופן הפעולה של fly. במהלך ההתאקלמות שבה הזכרים אינם מראים פעילות רבה.במהלך החשיפה הראשונה שבה גברים מפגינים חיזור ספורדי. ובמהלך החשיפה השישית שבה גברים מציגים חיזור פעילות. הזן את מספר הזכרים המציגים חיזור בבלוק זמן עשר שני.השתמש במספר המרבי של זכרי חיזור לשלוש חסימות רצופות של 10 שניות כנקודת נתונים מייצגת. הממוצע של 10 נקודות נתונים רצופות בעלות הערך הגבוה ביותר מייצג את אחוז החיזור הבין-עורי לכל פאב. סוג הבר קנטון-S התערוכה גדל בהדרגה פעילויות של חיזור disinhibited על חשיפה אתנול חוזר ונשנה.זה מייצג רגישות התנהגותית לאפקט disinhibition של אתנול. בדקנו את תפקיד התמנון ברגישות על ידי בדיקת הזבובים שחסרים בהם טיראמין בטא-הידרוקסילאז, T beta H, ובכך חסרים תמנון. כמו קנטון-S, המוטנטים T beta H הראו תגובות הסלים לחשיפה אתנול חוזר, אבל ברמה מופחתת.כאשר השווינו את T beta H וקנטון-S, ראינו כי זכרי המוטנטים T beta H התבונו חיזור פחות מנוכר מאשר זכרי קנטון-S בכל חשיפה המציינת כי תמנון עשוי להיות חשוב לרגישות. עכשיו אתה יכול להגדיר, לנהל, ולנתח התנהגויות הנגרמות על ידי אתנול באמצעות בדיקה Flypub. נקודות המפתח שיש לזכור כוללות, אחד, הרכבה נכונה של הפאב.שתיים, מסירת אתנול עקבית, ושלוש, ציון התנהגותי מדויק ובלתי משוחד. ל-Flypub יש יתרונות רבים. זה פשוט, זול להגדיר, וקל ללמוד.כמו כן, קבוצות מרובות של זבובים ניתן לתחקר בו זמנית, להקל על מחקר זה כדי לזהות את ההשפעות של מניפולציות גנטיות או ניסיוניות. ההערכה Flypub הוא מאוד מושך לניסויים בכל הרמות כולל יסודי דרך התיכון, סטודנטים לתואר ראשון ושני, פוסט דוק ופקולטה. לסיכום, מישן Flypub יאפשר לך לזהות שחקנים מולקולריים, מסלולים תאיים, מעגלי מוח, וגורמי סיכון התורמים להפרעת שימוש באלכוהול.

flypub-to-study-ethanol-induced-behavioral-disinhibition

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

Assay פשוט למדוד את ההשפעות מרגיעים של אתנול...

דרך פשוטה למדוד את רגישות אתנול זבובים

דרוזופילה התפתחה כמערכת מודל משמעותית עבור לנתח את הבסיס התאי ומולקולרית של תגובות התנהגותיות לאלכוהול. כאן אנו מציגים פרוטוקול לאיסוף נתונים רגישות אלכוהול בהקשר היממה שיכולה להיות מיושם בקלות לניסויים אחרים, והוא מתאים היטב למחקר לתואר ראשון.

FlyBar: מתן אלכוהול לזבובים

בדיקות פשוטות למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בדרוזופילה מקלות על השימוש באורגניזם מודל זה לחקירת התנהגויות חשובות אלה הקשורות לאתנול. כאן מתוארת בדיקה פשוטה יחסית וניתנת להרחבה למדידת רגישות לאתנול וסבילות מהירה בזבובים.

Assay זול, Scalable התנהגות למדידת אתנול הרגעת רגישות וסובלנות מהירה ב<em&gt; דרוזופילה</em

אנו מתארים פרוטוקול גרימת מתגמל nonrewarding חוויות בזבובי פירות (תסיסנית) באמצעות צריכת אתנול מרצון כאמצעי לשינויים במדינות גמול.

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

שיטות נוכחיות למדידת רגישות האלכוהול בדרוזופילה נועדו לבחון קבוצות של זבובים. אנו מציגים בקלות, בעלות נמוכה, התפוקה גבוהה הערכה להערכת רגישות הרגעה אלכוהול במספר גדול של זבובים בודדים. השיטה אינה דורשת כלים מיוחדים וניתן לבצעו בכל מעבדה המשתמשת בחומרים משותפים.

שיטת תפוקה גבוהה עבור מדידת אלכוהול הרגעה זמן של הפרט דרוזופילה מלאנוגסטר

מוצג כאן פרוטוקול למודל 2BC/CIE של תלות באלכוהול בעכברים לחקר הפרעת שימוש באלכוהול.

חשיפה כרונית לאדי אתנול לסירוגין בשילוב עם בחירה בשני בקבוקים למודל הפרעת שימוש באלכוהול

הליך ללמוד את היכולת של הקשר סביבתי אלכוהול קשור להפעלת החידוש של אלכוהול התנהגות מסוימת לקבלה בחולדות מתוארת.

נוהל ללב התחדשות מושרה הקשר של התנהגות אלכוהול מחפשי מיזוג הפבלובית בחולדות

כאן, שיטות לפיתוח מודל עכבר של מתח תבוסה החברתית subchronic והקל מתוארות ושימוש כדי לחקור את התכונות פתוגניים של דיכאון כולל hyperphagia- וסימפטומים כמו polydipsia-הבאים עלייה במשקל גוף.

במודל עכבר של מתח הבס חברתי Subchronic והקל להבנת גירעונות התנהגותיים ופיסיולוגיים הנגרם על-מתח

למידת הימנעות הסעות-תיבה-מבוססת היטב במדעי המוח התנהגותיים. פרוטוקול זה מתאר כיצד ניתן לשלב הסעות תיבה לומדת במכרסמים עם microstimulation אתר ספציפי החשמלי intracortical (ICMS) ובו זמנית בchronical הקלטות vivo ככלי ללמוד היבטים רבים של למידה ותפיסה.

שילוב הסעות-Box הדרכה עם אלקטרו Cortex הקלטה וגירוי ככלי לחקר תפיסה ולמידה

מכרסמים הם מודל מתאים לחקירת המצעים המולקולריים של התנהגות והפרעות פסיכיאטריות מורכבות. ניתן להשתמש במיקרו-הזרקת מוח במכרסמים ערים כדי להבהיר מצעי מחלה. מוצגת שיטת מיקרו-הזרקה יעילה וניתנת להתאמה אישית למוח כמו גם ביצוע פרדיגמה אופרנטית המכמתת מוטיבציה.

מכרסמים מוח Microinjection לחקר מולקולריים מצעים של התנהגות מוטיבציה

למד את שיטת Flypub למדידת התנהגות מופרעת בזבובי פירות Drosophila melanogaster תחת השפעת אתנול. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני התמכרות לאלכוהול בקלות ובדיוק רב.

Flypub ללמוד אתנול המושרה ביטול עכבה התנהגותית הרגישות

גלה סרטונים נוספים