Name: אינדוקציה של פגיעה מלאה בחוט השדרה מסוג טרנס-פעולה בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: למד פרוטוקול כירורגי מדויק ליצירת פגיעת חוט שדרה מלאה בעכברים C57BL/6 באמצעות טכניקת למינקטומיה. השיטה מבטיחה שרידות גבוהה ושחזור אמין לחקר טיפולים עתידיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי סטודנט בינלאומי באוניברסיטת גריפית '(PhD) קצבה RR, פרי קרוס קרן מענק JE ו JSJ, מענק קרן קלם ג'ונס JSJ ו JE, ומענק ועדת ביטוח תאונות דרכים של קווינסלנד JSJ ו JE.

כל ההליכים בוצעו באישור הוועדה לאתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת גריפית' (ESK/04/16 AEC ו-MSC/04/18 AEC) על פי ההנחיות של המועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי של אוסטרליה.
1. הליך התעוות בעלי חיים לניתוח
<ol><li>להנהים ולייצב את החיה.<ol>
<li>השתמש בעכברים בני 8-10 שבועות C57BL/6. השתמש 5% isoflurane ב 1 L/min חמצן עבור אינדוקציה של הרדמה. לצורך תחזוקה של הרדמה, יש להשתמש ב-1.5%-2% isoflurane ב-1 ל'/דקה חמצן. אשר הרדמה מתאימה על ידי ביסוס חוסר רפלקס כאב בזנב ובכפות האחוריים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לנהל buprenorphine (0.03 מ"ג/ ק"ג משקל גוף) עבור משכך כאבים ו enrofloxacin (10 מ"ג/ ק"ג משקל גוף) עבור כיסוי אנטיביוטיקה, תת עורית על פי משקל הגוף. מלוקסיאם (2 מ"ג/ק"ג משקל גוף) ניתן לתת עבור משכך כאבים לטווח ארוך במידת הצורך.</li>
	<li>שמור על טמפרטורת הגוף של החיה יציבה ב 37 °C עם כרית חימום<ol>
<li>לגלח את הפרווה האחורית כדי לחשוף את האזור הכירורגי מעל עמוד השדרה הגב. הסר את הפרווה המגולחת מהאזור הכירורגי לפני עיקור אתר החתך. לחטא את האזור המגולח עם ספוגיות כותנה סטריליות ספוגות בנוזל יוד povidone ורוח כירורגית.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להדביק את כפות העכבר לאזור כירורגי כדי לייצב את החיה(איור 1A). מניח חלון סגלגל וילונות מעל העכבר (איור 1B).</li>
</ol>2. כריתת למינקט
<ol><li>בצע חתך אנכי בקו האמצע ברמת החוליות T10 באמצעות אזמל כירורגי.<ol>
<li>אתר את התהליך הספיני של חוליות T10 כדי לקבוע את האתר של כריתת למינקט. גוף החוליה טמון מעט גולגולתי עד קצה התהליך הספיני8 (ראה איור 2). הקצה מונח בערך בנקודת האמצע של חוליית T118.</li>
		<li>הפוך את החתך ~ 2.5 ס"מ ארוך, כך עמוד השדרה של חוליית T10 הוא בערך באמצע אורך החתך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לשקף את העור ולחזור עם מפשקים.<ol>
<li>השתמש במקצות ישרים כדי להרים את העור מהפשיה הבסיסית. פעולה זו תיצור מקום למיקום המפשקים; אלה ישאירו את השדה הכירורגי פתוח.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לבצע ניתוח בוטה של רקמה תת עורית וfascia לחשוף את התהליכים ספינים.<ol>
<li>השתמש בקצה הקהה של האזמל כדי לבצע חתך קטן בקו האמצע ברקמה התת עורית וfascia הבסיסית כדי לחשוף את הקוצים של חוליות T9-T11. השתמש במקצות הקצה העדינים (לא חדים) כדי לבצע ניתוח בוטה ולשקף את הפשיה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לפצל ולהפריד את השרירים para-spinous לחשוף את ה למינציה.<ol>
<li>השתמש בקצה הקהה של האזמל כדי לפצל את שרירי תא המטען האחורי ושרירים para-spinous לאורך הקוצים של חוליות T9-T11. השתמש במקצות הקצה הבוטה כדי לבצע ניתוח קהה של השרירים בשכבות ולחשוף את ה למינציה של החוליות. זה אמור למזער כל דימום. הערה: אם יש דימום, השתמשו בתמיסת מלח חמה (37°C) השקיה וספוגיות כותנה כדי לשלוט בו ולנקות דם מהשדה הכירורגי.</li>
		<li>השתמש באותם מפסים כדי ליצור כיסים קטנים סביב התהליכים הרוחביים של חוליית T10. השתמש מלקחיים מעוקלים כדי לייצב את הגוף החוליות T10 על ידי חיבור הבליטות שלה מתחת לתהליכים הרוחביים, בכיסים שנוצרו(איור 1C).</li>
		<li>יש לשטוף היטב את הלמינה T10 בתמיסת מלח חמה ולנגב בעדינות עם ספוגיות כותנה כדי לדמיין בבירור את פני השטח הכנים. ודא כי אין קבצים מצורפים שריר / רצועה להישאר לאורך פני השטח דו-צדדי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש במקדחה עם קצה דק (קוטר 0.55 מ"מ, 7 מ"מ אורך) כדי לשבור את הלמינה דו-צדדית.<ol>
<li>השתמש בקצה המקדחה כדי לעקוב אחר נתיב אנכי ממרחב בין-חוליות T9-T10 לחלל הבין-חוליות T10-T11 לאורך הלמינה T10, מבלי להדליק את המקדחה. זאת כדי להבטיח כי קצת המקדחה לא לתפוס כל רקמות(איור 1D).</li>
		<li>עכשיו מדליקים את המקדחה, לאט ובזהירות חופרים תעלה אנכית על ה למינה הימנית של חוליית T10. חלק זה של כריתת ה למינקטום אמור ליצור פגם כירורגי מדויק לאורך עובי העצם בקו אנכי ישר. שמור על האחיזה עם המגביות המעוקלות כדי לשמור על יציבות החוליה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ודא כי קצה המקדחה אינו חודר דרך העצם ולפגוע בחוט השדרה. חזור על אותו תהליך בצד שמאל של ה למינה, שמירה על החוליה יציבה עם מפסים מעוקלים. להשיקה עם תמיסת מלח חמה כדי לשטוף את כל שברי העצם הנותרים.</li>
	<li>הרם והסר את החלק האחורי של הקשת העצבית(איור 1F).<ol>
<li>השתמש במקצות הקצה העדינים הזוויתיים כדי לאחוז בתהליך הספיני ולהסיר את כל קטע הגב של הלמינה המופרד על-ידי הקידוח הדו-צדדי. להשכך ולהוות שוב אם יש דימום, כדי לדמיין בבירור את חוט השדרה החשוף מתחת לחלון כריתת ה למינציה(איור 1E).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. טרנס-פעולה
<ol><li>לגרום לפגיעה בחוט השדרה על ידי תפליטה של חבל החשוף עם פרוסה אחת של הלהב.<ol>
<li>השתמש בלהב הצר והעגול כדי לחתוך את הכבל במרכז חלון כריתת ה למינקט. ודא לטאטא את המעמקים לרוחב של עמוד השדרה כדי לגרום לפגיעה בהתמרה מלאה(איור 1G).</li>
	</ol>
</li>
	<li>אשר את השלמות של פציעת ההתמרמרות באמצעות מקצות הקצה העדינים הבוטים והסר את כל החיבורים הנותרים באתר הטרנס-שיח'.</li>
	<li>שלוט בדימום אם יש, לפני סגירת השכבות הכירורגיות.</li>
	<li>השתמש בתמיסת מלח חמה כדי להשיך ולנקה כל דימום המתרחש מגדמי חבל החוט הים החסומים. השתמש בספוגית כותנה כדי להפעיל לחץ עדין כדי להשיג המוסטאזיס במידת הצורך. תדחדל לא לדחוס את חוט השדרה.</li>
</ol>4. סגר וטיפול מיידי לאחר הניתוח
<ol><li>מאחדים את השרירים ותפרים בשכבה.<ol>
<li>לאחר ההמוסטאזיס מושגת באתר transection, לשחרר את האחיזה מפס מעוקל על חוליות T10. להביא את הקצוות של השרירים הנקטעים יחד לאורך קו האמצע כדי להשיג apposition טוב.</li>
		<li>תפר את השרירים בשכבה באמצעות 5-0 polyglactin 910 תפרים נספג. ודא כי העקמומיות הטבעית של עמוד השדרה אינה גורמת למתח בקו התפר או לפתוח את התפרים, חשיפת אתר כריתת למינקט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>סגור רקמה תת עורית ועור.<ol>
<li>השתמש בתפרי משי 5-0 שאינם קליטים כדי לסגור את חתך העור. ודא כי אין דימום, קרישי דם או פסולת שנותרו מתחת לעור לפני הסגירה. השקיה סופית עם תמיסת מלח חמה עשויה להיות נחוצה בשלב זה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>תפסיק את ההרדמה. יש לשמור על החיה במשך 10-30 דקות עד להחלמה. בעל החיים צריך להישאר על משטח החימום למשך זמן זה. לספק ג'ל מים ומזון לח בכלוב.</li>
	<li>לטיפול לאחר הניתוח, לכלול buprenorphine (פעמיים ביום), enrofloxacin (פעם ביום) עבור היומיים הראשונים מניעה. בנוסף, לרוקן ידנית את שלפוחית השתן לפחות פעמיים ביום, בהתאם להנחיות ועדת האתיקה של בעלי החיים. הערה: בעלי החיים בניסוי זה הוערכו פעמיים ביום עבור בריאותם הכללית ורווחתם, שכללה בדיקה לכאב מתמשך (כדי לתת מינונים נוספים של buprenorphine) או זיהום (enrofloxacin נוסף), מצב התזונה והלחות שלהם (לתת נוזלים להזרקה אם מיובש) וכל סימנים של כריתה אוטומטית (לספק טיפול בפצע אם כריתת אונה קלה). מומלץ מאוד כי היבטים אלה של טיפול לאחר הניתוח, לרבות החלטות המתת החסד, יקבעו בהנחיית הוועדה המוסדית לאתיקה של בעלי חיים.</li>
</ol>5. הערכת מודל הפציעה
<ol><li>ביסוס אובדן התפקוד המוטורי.<ol>
<li>להעריך את ההתנהגות המוטורית בעכברים הפצועים 2, 7, 14, 21 ו 28 ימים לאחר הפציעה בשדה פתוח באמצעות סולם עכבר באסו (BMS) כדי לקבוע את אובדןהפונקציה 9 (איור 3C-E).</li>
	</ol>
</li>
	<li>אישור היסטולוגי של פציעה<ol>
<li>לקצור את חוט השדרה הפצוע עם עמודי החוליות לאחר המתת חסד (נעשה עם פחמן דו חמצני בניסוי זה, כפי שאושר על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים).</li>
		<li>לתקן את הרקמה על ידי צוללת לילה ב 4% paraformaldehyde ולהטעות את העצמות על ידי טיפול עם 20% אתילן דיאמין חומצה טטראצטית (EDTA) על פני 3 שבועות, החלפת EDTA טרי כל 48 שעות.</li>
		<li>הכן את הקוצים המותאם לחיתוך קריו וחתוך אותם לחלקים בעובי 30 μm.</li>
		<li>הר את החלקים על מגלשות זכוכית מצופה ג'לטין עבור התכתמות חיסונית עם נוגדנים נגד GFAP ו Hoechst 33342.</li>
		<li>תדמינו את השקופיות במיקרוסקופפלורסנט (איור 3א) ובצעו מדידותשל גודל הפציעה באמצעות תוכנת ניתוח תמונה (לדוגמה, תוכנת ניתוח ניקון - NIS Elements [איור 3B]).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Sharif-Alhoseini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+spinal+cord+injury%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Animal models of spinal cord injury: a systematic review.</a> Spinal Cord. 55 (8), 714-721 (2017).</li>
<li>Lee, D. H., Lee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+axon+regeneration+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Animal models of axon regeneration after spinal cord injury.</a> Neuroscience Bulletin. 29 (4), 436-444 (2013).</li>
<li>Sharif-Alhoseini, M., Rahimi-Movaghar, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSharif-Alhoseini%2C+M+%22Topics+in+Paraplegia%22">Topics in Paraplegia</a>. Dionyssiotis, Y. , IntechOpen. (2014).</li>
<li>Talac, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+spinal+cord+injury+for+evaluation+of+tissue+engineering+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Animal models of spinal cord injury for evaluation of tissue engineering treatment strategies.</a> Biomaterials. 25 (9), 1505-1510 (2004).</li>
<li>Nakae, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+animal+model+of+spinal+cord+injury+as+an+experimental+pain+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+%26+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">The animal model of spinal cord injury as an experimental pain model.</a> Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2011, 939023(2011).</li>
<li>Kwon, B., Oxland, T., Tetzlaff, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+used+in+spinal+cord+regeneration+research%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Animal models used in spinal cord regeneration research.</a> Spine. 27, 1504-1510 (2002).</li>
<li>Kundi, S., Bicknell, R., Ahmed, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury%3A+current+mammalian+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury: current mammalian models.</a> American Journal of Neuroscience. (4), 1-12 (2013).</li>
<li>Harrison, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebral+landmarks+for+the+identification+of+spinal+cord+segments+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Vertebral landmarks for the identification of spinal cord segments in the mouse.</a> Neuroimage. 68, 22-29 (2013).</li>
<li>Basso, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basso+Mouse+Scale+for+locomotion+detects+differences+in+recovery+after+spinal+cord+injury+in+five+common+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains.</a> Journal of Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).</li>
<li>Seitz, A., Aglow, E., Heber-Katz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+from+spinal+cord+injury%3A+a+new+transection+model+in+the+C57Bl%2F6+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Recovery from spinal cord injury: a new transection model in the C57Bl/6 mouse.</a> Journal of Neuroscience Research. 67 (3), 337-345 (2002).</li>
</ol>

לסופרים אין מה לחשוף.

שיטה זו גורמת לפציעה מלאה של סוג ההתזזה ברמת החוליות T10 בעכברים, מה שגורם לשיתוק מוחלט של בעל החיים, מתחת לרמת הפציעה. בסך הכל, שיטה זו גורמת לדימום מינימלי, נזק משני זניח ופציעה יציבה, לשחזור. בהשוואה לשיטות שפורסמו בעבר של transection ללא כריתת למינקטוע10, שיטה זו מציעה את היתרונות במונחים של הדמיה ישירה מבלי לתמרן את העקמומיות של עמוד השדרה, שליטה טובה יותר על שלמות הפציעה, ויכולת משופרת לשלוט דימום ולהשיג hemostasis. היתרון של שיטה זו הוא כי הפרוטוקול ניתן לשנות לשימוש בכל רמות חוליות אחרות מ...

פגיעה בחוט השדרה (SCI) היא בעיה רפואית מורכבת התוצאה היא שינויים דרסטיים בבריאות ואורח החיים. אין תרופה ל-SCI, והפתופיזיולוגיה של SCI אינה מובנת היטב. מודלים של בעלי חיים SCI, במיוחד דגמי מכרסמים, מציעים כלי יקר ערך לניסויים בטיפולים חדשים, והשתמשו בהם כדי לחקור SCI במשך עשרות שנים. עד כה, מעל 72% של מחקרים פרה-קליני SCI העסיקו מודלים חולדה, לעומת רק 16% שהשתמשו בעכברים1. למרות חולדות, בשל גודלם גדול יותר ונטייה ליצור חללים דומה SCIs אנושי, היו באופן מסורתי חיות המודל המועדף לחקר גישות טיפוליות חדשניות, עכברים (כולל מודלים רבים של עכבר טרנסגניים) נמצאים כעת בשימוש בתדירות גבוהה יותר כדי ללמוד מנגנונים תאיים ומולקולריים של SCI2. דגם העכבר מציע יתרונות נוספים במונחים של טיפול קל יותר, שיעורי רבייה מהירים יותר ועלויות נמוכות יותר מאשר חולדות; עכברים גם להפגין רמה גבוהה של דמיון גנומי עםבני אדם 1,2,3. החיסרון העיקרי של מודל העכבר זוהה כגודל קטן יותר באופן משמעותי היוצר אתגרים עבור התערבויות כירורגיות ליצירה ולטפל בפציעות בחוט השדרה4,5.
יש פער בספרות הקיימת המדגיש את הצורך בפרוטוקול כירורגי חזק ותו לא כדי לגרום ל-SCI יציב במודל העכבר. לכן, אנו מספקים גישה כירורגית חדשנית ומדויקת בפרוטוקול זה כדי להתגבר על מגבלות אלה. פרוטוקול זה מספק הנחיות מעמיקות כדי לגרום לפציעה מסוג transection בעכברים, כמו סוג פציעה זה הוכר להיות המתאים ביותר ללמוד שינויים רגנרטיביים ניווניות בעקבות פציעה 6 ,כמו גםneuroplasticity, מעגלים עצביים והנדסת רקמות גישות7. בחרנו לגרום לפציעה באזור בית החזה התחתון, מאז SCI רמת בית החזה משמש הנפוץ ביותר בספרות1.

<table><tbody><tr><td>Baytril הזרקה 50 מ"ג/מ"ל, 50 מ"ל</td><td>Provet</td><td>BAYT I</td><td>תרופה לטיפול לאחר הניתוח</td></tr><tr><td>Betadine 500 מ"ל</td><td>Provet</td><td>BETA AS</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט מתכלה Castroviejo, נעילת</td> להב זירקוניה קרמי <td>לשימוש חוזר</td><td>ProSciTech</td><td>T149C</td></tr><tr><td>, עגול עם דפנות חדות, קצה יחיד, זוויתי</td><td>ProSciTech</td><td>TXD101A-X</td><td></td></tr><tr><td>צמר גפן לשימוש חוזר ( 5 יחידות)</td> <td>Multigate</td><td>21-893</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>Dremel Micro</td><td>DREMEL</td><td>8050-N/18</td><td>כלי סיבובי אלחוטי</td></tr><tr><td>מלקחיים חבישה עדינים</td><td>Multigate</td><td>06-306</td> מקדחים <td>חד פעמיים לשימוש חד פעמי</td></tr><tr><td></td><td>Kemmer Pr&auml; zision</td><td>SM 32 M 0550 070</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לשימוש חוזר Dumont #7b</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה Dumont</td> לשימוש חוזר, סגנון 5 <td>ProSciTech</td><td>T05-822</td><td></td></tr><tr><td>גוזם פרווה</td> לשימוש חוזר <td>WAHL</td><td>WA9884-312</td><td>גוזם שיער אפס חפיפה</td></tr><tr><td>מספריים איריס, Ti, קצות חדים, ישר, 90 מ"מ</td><td>ProSciTech</td><td>TY-3032</td><td>לשימוש חוזר</td></tr><tr><td>איזופלורן איזותזיה NXT 250</td><td>Provet</td><td>ISOF 00 HS</td><td>חומר הרדמה</td></tr><tr><td>Colibri Retractor - 4 ס"מ</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>ידית אזמל</td> לשימוש חוזר <td>ProSciTech</td><td>T133</td><td></td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות לטקס לשימוש חוזר בגודל 7.5</td><td>Medline</td><td>MSG5475</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי מתכלה 0.9%</td> <td>STS</td><td>PHA19042005</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>חבילת חבישה סטרילית</td><td>Multigate</td><td>08-709</td><td></td></tr><tr><td>וילון חד פעמי נוזל סטרילי אטום לשימוש חד פעמי 60x60 ס"מ</td><td>Multigate</td><td>29-220</td><td>חד פעמי</td></tr><tr><td>רוח כירורגית חד פעמית 100 מ"ל</td><td>Provet</td><td># SURG SP</td> חומר תפר <td>מתכלה</td></tr><tr><td>- SILK BLK 45 ס"מ 5/0 FS-2</td><td>Johnson & ג'ונסון מדיקל</td><td>682G</td> חומר <td>תפר משי</td></tr><tr><td>- Vicryl 70 ס"מ 5-0 S/A FS-2</td><td>Johnson & Johnson Medical</td><td>VCP421H</td><td>Vicryl Suture</td></tr><tr><td>Temgesic 0.3 מ"ג ב-1 מ"ל, x 5 אמפולות (תרופה מסוג S8)</td><td>Provet</td><td>TEMG I</td><td>תרופה לטיפול לאחר הניתוח</td></tr></tbody></table>

אינדוקציה של פגיעה מלאה בחוט השדרה מסוג טרנס-פעולה בעכברים

Induction of Complete Transection-Type Spinal Cord Injury in Mice

פגיעה בחוט השדרה (SCI) מובילה במידה רבה לאובדן תפקוד בלתי הפיך וקבוע, הנפוץ ביותר כתוצאה מטראומה. מספר אפשרויות טיפול, כגון שיטות השתלת תאים, נחקרים כדי להתגבר על המוגבלויות מתישה הנובעות SCI. רוב הניסויים בבעלי חיים פרה-קליניים נערכים במודלים של מכרסמים של SCI. בעוד מודלים חולדה של SCI כבר בשימוש נרחב, מודלים עכבר קיבלו פחות תשומת לב, למרות מודלים עכבר יכול להיות יתרונות משמעותיים על מודלים חולדה. הגודל הקטן של עכברים משווה לעלויות תחזוקה נמוכות יותר של בעלי חיים מאשר לחולדות, והזמינות של דגמי עכבר טרנסגניים רבים היא יתרון עבור סוגים רבים של מחקרים. פגיעה חוזרת ומדויקת בבעלי החיים היא האתגר העיקרי למחקר SCI, אשר מכרסמים קטנים דורש ניתוח דיוק גבוה. מודל הפציעה מסוג transection היה מודל פציעה נפוץ בעשור האחרון למחקר טיפולי מבוסס השתלה, עם זאת שיטה מתוקמנת לזימת פציעה מלאה מסוג transection בעכברים אינה קיימת. פיתחנו פרוטוקול כירורגי לגרימת פציעה מלאה של סוג התרדמות בעכברים C57BL/6 ברמת בית החזה 10 (T10). ההליך משתמש במקדחת קצה קטנה במקום rongeurs כדי להסיר במדויק את ה למינה, לאחר מכן להב דק עם קצה חיתוך מעוגל משמש כדי לגרום לתנופה של חוט השדרה. שיטה זו מובילה לפציעה מסוג transection לשחזור מכרסמים קטנים עם נזק מינימלי לשרירים ולעצם, ולכן ממזערת גורמים מבלבלים, במיוחד כאשר ניתחו תוצאות תפקודיות התנהגותיות.

השיטה המתובררת כפי שמתוארת באיור 1, כרוכה בייצוב הולם של העכבר(איור 1A) והדמיהטובה של עמוד השדרה ורקמותמצנחי דם (איור 1B). תהליך קוצני ולמינה ניתן לדמיין בבירור עם ניתוח שרירים מינימלי ואובדןדם (איור 1C,אזור מודגש). קידוח הקצה ים ים מבוצע כפי שמתואר איור 1D, כדי ליצור חלון כריתת למינקטה כפי שמתואר על ידי המלבן. חלון כריתת ה למינקטוברית שנוצרת ברור ומאפשר הדמיה ישירה וגישה ל...

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור כריתת למינקטוע מדויקת עבור אינדוקציה של פגיעה יציבה בחוט השדרה מסוג transection במודל העכבר, עם נזק משני מינימלי למחקר פגיעה בחוט השדרה.

Spinal cord injury (SCI) largely leads to irreversible and permanent loss of function, most commonly as a result of trauma. Several treatment options, ...

פרוטוקול זה מספק פגיעה מדויקת, מבוקרת בניתוח, כדי לגרום לתרגום מלא של חוט השדרה בעכברים עם יכולת שכפול גבוהה ו שיעורי הישרדות גבוהים מאוד. השימוש בתרגיל עדין לפגיעה בעצמות ממזער את הנזק לרקמה הסובבת, ומאפשר לדגמן את תגובות הפציעה והטיפול בדיוק רב יותר. כדי לבצע כריתת למין, לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס הדוושה ב 8 עד 10 שבועות נקבה C57 שחור 6 עכבר, לגלח את הפרווה האחורית כדי לחשוף את האזור הכירורגי על עמוד השדרה הגבי לעקר את האזור מגולח עם ספוג כותנה סטרילי ספוג נוזל חיטוי יוד povidone ורוח כירורגית.באמצעות אזמל, לעשות חתך אנכי קו האמצע ברמת החוליות T10 ולהשתמש מטלפים ישרים כדי להרים את העור מן fascia הבסיסית כדי להקל על מיקום מפשק. כדי לחשוף את הקוצים של חוליות T9 עד T11, השתמש בקצה הקהה של האזמל כדי לבצע חתך קו אמצע קטן ברקמה התת עורית ואת fascia הבסיסית ולהשתמש מדפים לא חדים קצה דק כדי לנתח בוטה לשקף את fascia. כדי לחשוף את הלמינה, השתמש בקצה הקהה של האזמל כדי לפצל את תא המטען הגבי והשרירים הפרספיניים לאורך הקוצים של חוליות T9 עד T11 ולהשתמש במלקחי הקצה העדינים והקהים כדי לנתח את השרירים בשכבות כדי לחשוף את הלמינה של החוליות.השתמש באותם מלקחיים כדי להפוך כיסים קטנים סביב התהליכים הרוחביים של חוליית T10 ולחבר את שיניים של מלקחיים מעוגלים תחת התהליכים רוחביים בתוך הכיסים שנוצרו כדי ל

induction-of-complete-transection-type-spinal-cord-injury-in-mice

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בדיקת האורך של איבוד מסת העצם של עצמות הירך לבין tibiae של עכברים בוגרים בוצעה בעקבות פגיעה בחוט השדרה באמצעות רציפים במינון נמוך רנטגן סורק. אובדן העצם Tibia זוהה לאורך כל תקופת המחקר, תוך איבוד מסת העצם בעצם הירך לא זוהה עד 40 ימים שלאחר הפציעה.

הערכת אורך של עכבר הינד איבוד מסת העצם לימב לאחר פגיעה בחוט השדרה באמצעות רומן, In vivo מתודולוגיה

מקור: Elzat, E. Y. Y., et al., הקמת מודל פגיעה בחוט השדרה של חבלת עכבר המבוסס על טכניקה זעיר פולשנית. J. Vis. Exp. (2022). סרטון זה מדגים את השיטה לגרימת פגיעת חבלה בחוט השדרה ברמת T9 במודל עכבר, באמצעות פלטפורמה קואקסיאלית של פגיעה בחוט השדרה. משקל נופל על חוט השדרה ברמת T9 שיוצר חבלה הגורמת מיד לשינוי צבע הרקמה ונפיחות.

גרימת חבלה בחוט השדרה במודל עכבר באמצעות פלטפורמה קואקסיאלית לפגיעה בחוט השדרה

מקור: Kumar, S., et. al. מודל עכבר של פצעי לחץ לאחר פגיעה בחוט השדרה. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים אינדוקציה מפורטת של פגיעה בחוט השדרה בעכברים. העכבר המורדם מנותח כדי לחשוף את חוליות T9-T10, והתהליכים הקוצניים שלהם מוסרים. לאחר מכן חוט השדרה החשוף עובר טרנסקטציה כדי לגרום לפציעה. לאחר מכן סוגרים את אזור הניתוח, והעכבר מורשה להתאושש.

יצירת מודל עכבר עם פגיעה בחוט השדרה

טכניקה חדשנית ליצירת...

פגיעה קריעת צוואר הרחם מבוקרת בעכברים

פגיעה בחוט השדרה היא מצב טראומטי שגורם לתחלואה קשה ותמותה גבוהה. בעבודה זו אנו מתארים בפירוט מודל חבלה של פגיעה בחוט השדרה בעכברים ואחרי השתלה של תאי גזע עצביים.

השתלת תאי גזע עצבית בדגם ניסיוני של Contusive פגיעה בחוט השדרה

Photothrombosis הוא הליך זעיר פולשני וניתן לשחזור מאוד כדי לגרום לאיסכמיה מוקדית בחוט השדרה ומשמש כמודל לפגיעה בחוט השדרה בעכברים.

Photothrombosis-induced איסכמיה מיקוד כדגם של חוט השדרה פגיעה בעכברים

מאמר זה מתאר שיטה ליצירת פגיעת דחיסת חוט שדרה (SCI) הניתנת לשחזור בעכבר היילוד. המודל מספק פלטפורמה מועילה לחקר מנגנונים של פלסטיות אדפטיבית העומדים בבסיס התאוששות תפקודית ספונטנית.

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

אנו מציגים מודל תזוזה מבוסס חוט השדרה על חוט השדרה, שיכול לייצר פגיעה עקבית בחוט השדרה בעכברים מבוגרים.

תולעת רקמות מבוססי חוט השדרה פגיעה בעמוד השדרה דגם עכברים

טכניקות זעיר פולשניות ומכשיר מעבדה פשוט משפרים את יכולת השכפול של מודל הפגיעה בחוט השדרה על ידי הפחתת הנזק האופרטיבי לחיות הניסוי ומתן אפשרות לתחזוקה של המורפולוגיה האנטומית. השיטה כדאית משום שהתוצאות האמינות וההליך הניתן לשחזור מקלים על חקירת מנגנוני תיקון המחלה.

הקמת מודל פגיעה בעמוד השדרה של חבלה בעכבר המבוסס על טכניקה זעיר פולשנית

הפרוטוקול הנוכחי המדמה תסמונת חבל הטבור המרכזי (CCS) בעכברים שיפר את יכולת החזרתיות וממזער את הנזק הניתוחי לחיות הניסוי, תוך הימנעות משיבוש יתר של המבנה האנטומי. האסטרטגיה במחקר זה מועילה מכיוון שהיא מאפשרת מחקר של מנגנוני פציעה על ידי הפקת תוצאות עקביות.

הקמת מודל תסמונת חבל הטבור המרכזי בעכבר C57BL/6J

מוצג כאן מכשיר חדשני אוטומטי לפגיעה בחוט השדרה עבור עכברים, שיכול לייצר במדויק מודלים של פגיעה בחוט השדרה בדרגות שונות.

משפיען אוטומטי למודל פגיעה מתמשכת בחוט השדרה בעכברים

למד פרוטוקול כירורגי מדויק ליצירת פגיעת חוט שדרה מלאה בעכברים C57BL/6 באמצעות טכניקת למינקטומיה. השיטה מבטיחה שרידות גבוהה ושחזור אמין לחקר טיפולים עתידיים.

אינדוקציה של פגיעה מלאה בחוט השדרה מסוג טרנס-פעולה בעכברים

גלה סרטונים נוספים