ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לאווה זרדינז'אד על הגהה של כתב היד. עבודה זו נתמכת על ידי המכון הקנדי לחקר הבריאות (CIHR, PJT-156035) וקרן קנדה לחדשנות עבור SL (32930), ועל ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין עבור יוג'יה לין (81901576).

כל עבודת בעלי חיים צריכה להיות מאושרת על ידי ועדת האתיקה המוסדית והבריתית והטיפול בבעלי חיים.  זה ניתוח שלא הישרדות.
1. הכנת חומרים
<ol><li>להכין 100 מ"ל של 70% אתנול על ידי ערבוב 70 מ"ל של 100% אתנול עם 30 מ"ל של מים סטריליים. Autoclave כל הכלים הכירורגיים לפני הניתוח ולשמור את הכלים ב 70% אתנול לפני ובמהלך הניתוח כדי לשמור על עיקור.</li>
	<li>הכן מערכת הזרקה.<ol>
<li>חתוך ~ 30 ס"מ של צינורות פוליאתילן (0.28 מ"מ קוטר). חבר את קצה מחט 30 G x 1/2 (מחט A) לקצה אחד של צינורות פוליאתילן. בזהירות לנתק עוד 30 G x 1/2 מחט (מחט B) ולחבר את הצד השבור לקצה השני של צינורות פוליאתילן.</li>
		<li>חבר מחט א' למזרק שחפת של מ"ל. הערה: עבור צינורות פוליאתילן זה, 1.6 ס"מ של נוזל בצינורות מתאים 1 μL20.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להכין 10:1 קטמין / xylazine תערובת (10 מ"ג / מ"ל קטמין 1 מ"ג / מ"ל xylazine) בתמיסת מלח (bacteriostatic 0.9% [w / v] נתרן כלוריד). הכן את הפתרון באופן טרי לפני השימוש.</li>
</ol>2. הכנת החיה לניתוח
הערה: השתמש בעכברים בגילאי 6-10 שבועות. ניתן להשתמש בעכברים ונקבה וזכרים. במחקר זה, 6-10 שבועות, C57BL /6 עכברים נקבה שימשו. שיטה זו יכולה להיות מותאמת זנים אחרים של עכברים.
<ol><li>להנות את העכבר על ידי הזרקת 250 μL של תערובת קטמין / xylazine תוך-אפרטון. חכה עד שהעכבר ישן לגמרי. ודא שהעכבר לא יגיב לצביטת בהון כדי לזהות ההרמה מלאה.</li>
	<li>לגלח פרווה סביב הרגליים עם קוצץ שיער.</li>
	<li>מורחים את הקרם המשפיל סביב הרגל והמתינו 5 דקות. נגבו את הפרווה השיורית ואת הקרם המשפיל בעזרת רקמה לחה ונקי את הרגל במים סטריליים. לרסס 70% אתנול סביב הרגל כדי לחטא את אזור ההפעלה. האתנול מוגבל לאתר החתך.</li>
</ol>3. תפירה כירורגית של כלי לימפה שונים
הערה: הרגל הימנית תופרת, והרגל השמאלית משמשת כפקד מזויף. פרוטוקול התפר הלימפה (שלבים 3.1-3.8) תיוו 20-30 דקות.
<ol><li>שמור על העכבר בתנוחה נוטה ולתקן אותו עם סרט כירורגי כדי לחשוף את אזור הפעולה על הרגל הימנית.</li>
	<li>Intradermally להזריק 5 μL של 1% אוונס צבע כחול או 9 ס"מ של הנוזל של מערכת ההזרקה צינורות לתוך משטח הרגליים. לעסות בעדינות את משטח הרגליים כדי לעזור אוונס כחול להיכנס כלי הלימפה. הערה: מזרק האינסולין לא קל לשלוט עבור הזרקת נפח קטן. ניתן לשלוט בעוצמה בצורה מדויקת יותר באמצעות אפליקציית ההזרקה. כלי לימפה מדמיינת על ידי צבע כחול מתחת לעור. עם הכשרה מקיפה, ניתן לראות את שני כלי הלימפה האדירים בעין בלתי ככלי שקוף ברקמת השומן, במקביל לעורק הספני. עם הכשרה מקיפה, ניתן לתפור את כלי מבלי להזריק אוונס כחול צבע במקרים שבהם יש חששות של הפרעות פוטנציאליות מהצבע.</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ לנתח, לבחור אתר חתך 5 מ"מ מהקצה התחתון של פוסה popliteal. עשה חתך קטן (~ 5 מ"מ) בעור עם מספריים. באמצעות מפסי פעולה עדינים, למתוח את החתך, ולחשוף את כלי הלימפה איסוף(איור 1A). הערה: במידת הצורך, ניתן להסיר שבר עור קטן כדי לחשוף את כלי הלימפה.</li>
	<li>זהה את שני כלי הלימפה האדיבים המובילים ל-pLNs תחת מיקרוסקופ הפירוק(איור 1B). הערה: ישנם שני כלי לימפה שונים מהמשטח עד pLN. שניהם צריכים להיות תפר כדי לחסום את זרימת הלימפה לחלוטין.</li>
	<li>באמצעות מחזיק מחט, בזהירות להכניס את מחט התפר (0.7 מטרי או קטן יותר) בין כלי הלימפה אפרנטי עורק Saphenous ולמשוך את המחט בעדינות סביב כלי הלימפה אפר. משוך בעדינות בחוט התפר והותיר כ-2 ס"מ של מיתר התפר מאחור. השתמש במחזיק המחט כדי לעזור לקשור את המחרוזת בחוזקה כדי לתפור כלי לימפה אחד עם קשר מנתח(איור 1C). הערה: הרקמה מתחת לחתך עלולה להתייבש עם חשיפה ממושכת לאוויר. הפיכת החתך קטן ככל האפשר וביצוע התפר במהירות (כלומר, בתוך 5 דקות) ימנע את הרקמה מתייבש. לשמור על לחות הרקמה על ידי החלת נפח קטן של תמיסת מלח עם ספוגית כותנה.</li>
	<li>לעסות בעדינות את משטח הרגליים כדי להבטיח שום צבע כחול אוונס עובר את אתר התפירה ולאחר מכן לחתוך את המחרוזת העודפת עם מספריים.</li>
	<li>לבצע את אותם שלבי תפר (כלומר, שלבים 3.5 ו- 3.6) על כלי הלימפה האדמטי האחר(איור 1D). סגור את חתך העור עם אותו תפר ששימש לתפירת כלי הדם בשלב 3.5(איור 1E).</li>
	<li>עבור שליטה בלוף, intradermally להזריק 5 μL של 1% אוונס צבע כחול על משטח הרגליים השמאלית לעסות את משטח הרגל כדי לדמיין את כלי הלימפה. לפתוח את העור עם חתך ולאחר מכן לסגור את הפצע מבלי לתפור את כלי(איור 1F).</li>
	<li>לחלופין, לפקח על העכברים המופעלים במשך 2-4 שעות. הצד התפור של הרגל צריך להראות בצקת עם אוונס כחול להתפשט לירך, בעוד רגל הבקרה תראה צבע כחול אוונס מוגבל במשטח הרגל. אם עכברים מתעוררים, תערובת קטמין/קסילאזין נוספת תוזרק כדי לשמור על ההמרמה עד המתת חסד.</li>
</ol>4. מעקב אחר זרימת הלימפה
<ol><li>מיד לאחר הניתוח, intradermally להזריק 10 μL של 2% פלואורסצ'ין isothiocyanate (FITC) במשטח הרגל של השליטה והרגל הלימפה תפר.</li>
	<li>המתת חסד העכברים עם 400 μL של תערובת קטמין / xylazine ולבצע נקע צוואר הרחם כאשר העכברים הם מותמים באופן מלא.</li>
	<li>לאסוף pLNs מן fossa popliteal ולהסיר בזהירות את רקמת שומן perinodal סביב pLNs תחת מיקרוסקופ הניתוק ב 2, 6, ו 12 שעות לאחר הזרקת FITC.</li>
	<li>הטבע את pLNs עם אזור הסינוס medullary פונה לצד cryomold בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT)(איור 1G,H).</li>
	<li>הכן 20 μm חלקים קפואים באמצעות cryotome.</li>
	<li>תמונה cryosections תחת מיקרוסקופ confocal כדי לקבוע התפלגות FITC.</li>
</ol>

<ol><li>Pflicke, H., Sixt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preformed+portals+facilitate+dendritic+cell+entry+into+afferent+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Preformed portals facilitate dendritic cell entry into afferent lymphatic vessels.</a> The Journal of Experimental Medicine. 206, 2925-2935 (2009).</li>
<li>Schmid-Schonbein, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microlymphatics+and+lymph+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Microlymphatics and lymph flow.</a> Physiological Reviews. 70, 987-1028 (1990).</li>
<li>Skalak, T. C., Schmid-Schonbein, G. W., Zweifach, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+morphological+evidence+for+a+mechanism+of+lymph+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">New morphological evidence for a mechanism of lymph formation in skeletal muscle.</a> Microvascular Research. 28, 95-112 (1984).</li>
<li>Johnston, M. G., Hay, J. B., Movat, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+prostaglandin+production+in+various+inflammatory+lesions%2C+measured+in+draining+lymph%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Kinetics of prostaglandin production in various inflammatory lesions, measured in draining lymph.</a> The American Journal of Pathology. 95, 225-238 (1979).</li>
<li>Eisenhoffer, J., Yuan, Z. Y., Johnston, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+the+L-arginine+pathway+plays+a+role+in+the+regulation+of+pumping+activity+in+bovine+mesenteric+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Evidence that the L-arginine pathway plays a role in the regulation of pumping activity in bovine mesenteric lymphatic vessels.</a> Microvascular Research. 50, 249-259 (1995).</li>
<li>Gasheva, O. Y., Zawieja, D. C., Gashev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contraction-initiated+NO-dependent+lymphatic+relaxation%3A+a+self-regulatory+mechanism+in+rat+thoracic+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Contraction-initiated NO-dependent lymphatic relaxation: a self-regulatory mechanism in rat thoracic duct.</a> Journal of Physiology. 575, 821-832 (2006).</li>
<li>Breslin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor-C+stimulates+the+lymphatic+pump+by+a+VEGF+receptor-3-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor-C stimulates the lymphatic pump by a VEGF receptor-3-dependent mechanism.</a> American Journal of Physiology- Heart and Circulatory Physiology. 293, 709-718 (2007).</li>
<li>Randolph, G. J., Angeli, V., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic-cell+trafficking+to+lymph+nodes+through+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Dendritic-cell trafficking to lymph nodes through lymphatic vessels.</a> Nature Reviews. Immunology. 5, 617-628 (2005).</li>
<li>Mempel, T. R., Henrickson, S. E., Von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427, 154-159 (2004).</li>
<li>Gerner, M. Y., Casey, K. A., Kastenmuller, W., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+and+antigen+dispersal+landscapes+regulate+T+cell+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell and antigen dispersal landscapes regulate T cell immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 214, 3105-3122 (2017).</li>
<li>Kastenmuller, W., Torabi-Parizi, P., Subramanian, N., Lammermann, T., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spatially-organized+multicellular+innate+immune+response+in+lymph+nodes+limits+systemic+pathogen+spread%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A spatially-organized multicellular innate immune response in lymph nodes limits systemic pathogen spread.</a> Cell. 150, 1235-1248 (2012).</li>
<li>Gerner, M. Y., Torabi-Parizi, P., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategically+localized+dendritic+cells+promote+rapid+T+cell+responses+to+lymph-borne+particulate+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Strategically localized dendritic cells promote rapid T cell responses to lymph-borne particulate antigens.</a> Immunity. 42, 172-185 (2015).</li>
<li>Moussion, C., Girard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+control+lymphocyte+entry+to+lymph+nodes+through+high+endothelial+venules%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells control lymphocyte entry to lymph nodes through high endothelial venules.</a> Nature. 479, 542-546 (2011).</li>
<li>Gretz, J. E., Norbury, C. C., Anderson, A. O., Proudfoot, A. E., Shaw, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph-borne+chemokines+and+other+low+molecular+weight+molecules+reach+high+endothelial+venules+via+specialized+conduits+while+a+functional+barrier+limits+access+to+the+lymphocyte+microenvironments+in+lymph+node+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Lymph-borne chemokines and other low molecular weight molecules reach high endothelial venules via specialized conduits while a functional barrier limits access to the lymphocyte microenvironments in lymph node cortex.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192, 1425-1440 (2000).</li>
<li>Mebius, R. E., Breve, J., Duijvestijn, A. M., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+function+of+high+endothelial+venules+in+mouse+lymph+nodes+stimulated+by+oxazolone%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">The function of high endothelial venules in mouse lymph nodes stimulated by oxazolone.</a> Immunology. 71, 423-427 (1990).</li>
<li>Mebius, R. E., Streeter, P. R., Breve, J., Duijvestijn, A. M., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+afferent+lymphatic+vessel+interruption+on+vascular+addressin+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The influence of afferent lymphatic vessel interruption on vascular addressin expression.</a> Journal of Cell Biology. 115, 85-95 (1991).</li>
<li>Mebius, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+GlyCAM-1%2C+an+endothelial+ligand+for+L-selectin%2C+is+affected+by+afferent+lymphatic+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Expression of GlyCAM-1, an endothelial ligand for L-selectin, is affected by afferent lymphatic flow.</a> Journal of Immunology. 151, 6769-6776 (1993).</li>
<li>Drayton, D. L., Liao, S., Mounzer, R. H., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphoid+organ+development%3A+from+ontogeny+to+neogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Lymphoid organ development: from ontogeny to neogenesis.</a> Nature Immunology. 7, 344-353 (2006).</li>
<li>Tomei, A. A., Siegert, S., Britschgi, M. R., Luther, S. A., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+regulates+stromal+cell+organization+and+CCL21+expression+in+a+tissue-engineered+lymph+node+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Fluid flow regulates stromal cell organization and CCL21 expression in a tissue-engineered lymph node microenvironment.</a> Journal of Immunology. 183, 4273-4283 (2009).</li>
<li>Liao, S., Jones, D., Cheng, G., Padera, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+quantitative+measurement+of+collecting+lymphatic+vessel+contraction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Methods%22%5BJournal%5D)">Method for the quantitative measurement of collecting lymphatic vessel contraction in mice.</a> Journal of Biological Methods. 1, 6(2014).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinodal+Adipose+Tissue+Participates+in+Immune+Protection+through+a+Lymphatic+Vessel-Independent+Route%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Perinodal Adipose Tissue Participates in Immune Protection through a Lymphatic Vessel-Independent Route.</a> Journal of Immunology. 201, 296-305 (2018).</li>
<li>Gardenier, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+toxin-mediated+ablation+of+lymphatic+endothelial+cells+results+in+progressive+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation+Insight%22%5BJournal%5D)">Diphtheria toxin-mediated ablation of lymphatic endothelial cells results in progressive lymphedema.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 1, 84095(2016).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

חסימת זרימת הלימפה יהיו יישומים רחבים במניפולציה אספקת אנטיגן ל LN בתנאים בריאים ומחלות. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לשלוט בתזמון של אספקת אנטיגן על מנת ללמוד כיצד זרימת הלימפה רציפה מווסתת את התגובה החיסונית בניקוז LNs. שיטה זו של הפרעת זרימת הלימפה יכול לשמש גם כדי ללמוד כיצד לימפה משפיעה על מיבוד התא, הפעלת תאים, העברת תאים, ואינטראקציות תא ב LN.
עכברים המביעים במיוחד קולטן רעלן דיפתריה אנושי (DTR) בתאי אנדותל הלימפה שלהם(Flt4-cre-dtr)פותחו; אלה יכולים לשמש כדי לרוקן במיוחד כלי לימפה ...

הארגון המרחבי של מערכת הלימפה מספק תמיכה מבנית ופונקציונלית כדי להסיר ביעילות נוגדנים נוזלים חוץ תאיים והובלה ותאים אנטיגן הצגת (APCs) ל- LNs ניקוז. כלי הלימפה הראשוניים (הנקראים גם נימי לימפה) חדירים מאוד בשל הצמתים הבין-תאיים הבלתי רציפים שלהם, המקלים על האיסוף היעיל של נוזלים, תאים וחומרים אחרים מהחללים החוץ-תאייםשמסביב 1. כלי הלימפה הראשוניים מתמזגים לאיסוף כלי לימפה, בעלי צמתים בין-תאיים הדוקים, קרום מרתף רציף וכיסוי שריר הלימפה. איסוף כלי לימפה אחראים על הובלת לימפה שנאספו ל-LNs המתנקז ובסופו של דבר חזרה לימפה למחזור2,3. כלי הלימפה הנאספים שהניעו את הלימפה לתוך ה-LN המתנקז הם כלי הלימפההאדירים 4,5,6,7. חסימה של כלי לימפה אפילנטיים יכול לחסום את זרימת הלימפה לתוך LNs, שהיא טכניקה שימושית בעת לימוד הפונקציה של זרימת הלימפה.
מחקרים קודמים הראו כי זרימת הלימפה ממלאת תפקיד משמעותי בהעברת אנטיגן וAPCs, כמו גם שמירה על הומוסטאזיס LN. זה מובן היטב כי APCs נגזר רקמות, מופעל בדרך כלל נדידה תאים דנדריטיים (DCs), לנסוע דרך כלי לימפה אפרנטיים LN כדי להפעיל תאי T8. הרעיון כי אנטיגן בצורה חופשית, כגון חיידקים או אנטיגן מסיס, באופן פסיבי לזרום עם הלימפה ל LN כדי להפעיל APCs תושב LN כבר צובר קבלהבעשור האחרון 9,10,11,12. אנטיגן בצורה חופשית נסיעה עם לימפה לקחת דקות לאחר הזיהום לנסוע LN, ואת הפעלת התא תושב LN עלולה להתרחש בתוך 20 דקות לאחר הגירוי. זה הרבה יותר מהר מאשר ההפעלה של מחשבי מחשבים נודדים, אשר לוקח יותר מ 8 שעות כדי להיכנס LN9 ניקוז. מלבד הובלת אנטיגן ליזום הגנה חיסונית, הלימפה נושאת גם ציטוקינות ו-DCs ל LN כדי לשמור על המיקרו-סביבה שלה, ולתמוך בהומפואוסטזיס של תאימערכת החיסון 13,14. בעבר, חסימת זרימת הלימפה על ידי תפירת כלי הלימפה afferent הוכיח כי הלימפה נדרשת כדי לשמור על פנוטיפ HEV הנדרש לתמיכה בתא T הומאוסטטי ותא B ביות LN15,16,17. CCL21 הוא צ'מוקין קריטי הכוון את מיקום תאי DC ו- T ב- LN8,18. חסימת זרימת הלימפה מפריעה לביטוי CCL21 ב- LN ועלולה להפריע למיקום תאי DC ו-T ו/או אינטראקציה ב- LN19. לכן, חסימת זרימת הלימפה יכולה במישרין או בעקיפין לחסום את הגישה אנטיגן / DC ל LN ניקוז על ידי שיבוש microenvironment LN המסדיר את התגובות החיסוניות ב LN. כדי לחקור טוב יותר את הפונקציה של זרימת הלימפה, פרוטוקול ניסיוני מוצג(איור 1) כדילחסום את זרימת הלימפה בעכברים על ידי תפירת כלי הלימפה אפרנטיים ממשטח הרגל לpLN. שיטה זו יכולה להיות טכניקה חשובה עבור מחקרים עתידיים על תפקוד הלימפה בתנאים בריאים ומחלות.

<table><tbody><tr><td><חזק>0.9% נתרן כלורי מלוח</חזק></td><td>בקסטר</td><td>JB1323</td><td></td></tr><tr><td><חזק>100% אתנול</חזק></td><td>גרינפילד</td><td>שירותי הפצה של האוניברסיטה הגלובלית של קלגרי UN1170.</td><td></td></tr><tr><td><קרם מסיר שיער חזק>חזק</חזק></td><td>Nair</td><td></td><td>Nair פורמולה סגישה להסרת שיער Cr&egrave; אני עם שמן שקדים מתוקים ושמן תינוקות, 200 מ"ל. או מוצר דומה.</td></tr><tr><td>Evans Blue dye</td><td>Sigma Life Science</td><td>E2129-10G</td><td>עבור 1 מ"ל של צבע כחול אוונס, יש להוסיף 0.1 גרם כחול אוונס ל-10 מ"ל PBS. תמיסת Evens Blue תסונן דרך מסננים של 0.22 מ"מ ותישמר סטרילית בכמות של 1 מ"ל.</td></tr><tr><td><חזק>פלואורסצאין איזותיוציאנט I (FITC)</חזק></td><td>סיגמא מדעי החיים</td><td>F7250-1G</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מלקחיים דומונט #3</חזק></td><td>WPI</td><td>500337</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מלקחיים דומונט #5</חזק></td><td>WPI</td><td>500233</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מכשיר הזרקה</חזק></td><td></td><td></td><td>חבר קצה אחד של צינורות פוליאתילן ל-30G ופעמים; &frac12; מחט. חבר מזרק של 1 מ"ל TB למחט. עקור את פיר המחט מעוד 30G ופעמים; &frac12; מחט. הכנס את הקצה הבוטה של ה-30G &times; &frac12; פיר מחט לקצה השני של הצינור. הקוטר הפנימי של צינור זה הוא 0.28 מ"מ. לפיכך, 1.6 ס"מ של נוזל בצינור הוא 1 &mu;l.</td></tr><tr><td><חזק>מזרק אינסולין</חזק></td><td>בקטון דיקינסון ושות' (BD)</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מלקחיים איריס ישר</חזק></td><td>WPI</td><td>15914</td><td></td></tr><tr><td><מספריים חזקים>איריס</חזקים></td><td>WPI</td><td>14218-G</td><td></td></tr><tr><td><חזק>קטמין</חזק></td><td>נרקטן</td><td>DIN 02374994</td><td>הספקים של קטמין וקסילזין נמצאים בדרך כלל תחת רגולציה מוסדית וממשלתית.</td></tr><tr><td><חזק>מחטים (26Gx3/8)</חזק></td><td>בקטון דיקינסון ושות' (BD)</td><td>305110</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מחטים (30Gx1/2)</חזק></td><td>בקטון דיקינסון ושות' (BD)</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מחזיק מחט פאטון</חזק></td><td>ROBOZ</td><td>RS6403</td><td>ישר, ללא נעילה; </td></tr> תמיסת מלח משוננת<tr><td><חזקה>חוצצת פוספט (PBS)</חזקה></td><td>Sigma Life Science</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td><חזק>צינורות פוליאתילן</חזקים></td><td>בקטון דיקינסון ושות' (BD)</td><td>427401</td><td></td></tr> <tr><td>סרט כירורגי חזק><1.25 ס"מ על 9.1 מ')</חזק></td><td>טרנספור</td><td>1527-0</td><td></td></tr><tr><td><חזק>סרט כירורגי (2.5 ס"מ על 9.1 מ')</חזק></td><td>Transpore</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td><חזק>תפירה</חזקה></td><td>דייוויס וגק CYANAMID קנדה</td><td>11/04</td><td>0.7 מונופילמנט מטרי פוליפרופילן</td></tr><tr><td><חזק>מזרק (1 מ"ל)</חזק></td><td>Becton Dickinson and Company (BD)</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td><חזק>VANNAS מספריים</חזק></td><td>מכשירי דיוק עולמיים (WPI)</td><td>14122-G</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Rompun</td><td>DIN02169606</td><td>הספקים של קטמין וקסילזין נמצאים בדרך כלל תחת רגולציה מוסדית וממשלתית.</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><חזק>מיקרוסקופ מנתח</חזק></td><td>אולימפוס</td><td></td><td>אולימפוס S261 (522-STS OH141791) עם מקור אור: Olympus Highlight 3100</td></tr><tr><td><חזק>מיקרוסקופ קונפוקלי</חזק></td><td>Leica</td><td></td><td>SP8</td></tr></tbody></table>

חסימת זרימת הלימפה על ידי תפירת כלי לימפה אפילנט בעכברים

Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice

כלי הלימפה הם קריטיים בשמירה על איזון נוזל רקמות אופטימיזציה של ההגנה החיסונית על ידי הובלת אנטיגן, ציטוקינים, ותאים לתעלות הלימפה ניקוז (LNs). הפרעה של זרימת הלימפה היא שיטה חשובה בעת לימוד הפונקציה של כלי לימפה. כלי הלימפה האדמטיים האדיבים ממשטח הרגליים של המריין ועד לבלוטות הלימפה הפופוליליות (pLNs) מוגדרות היטב בשם המסלולים היחידים לניקוז הלימפה לתוך ה-pLNs. תפירת כלי לימפה שונים אלה יכולה למנוע באופן סלקטיבי את זרימת הלימפה ל-pLNs. שיטה זו מאפשרת הפרעה בזרימת הלימפה עם נזק מינימלי לתאי הלימפה הלימפה בpLN המתנקז, כלי הלימפה אפרנטיים, כמו גם כלי לימפה אחרים באזור. שיטה זו שימשה כדי ללמוד כיצד משפיע הלימפה venules אנדותל גבוה (HEV) וביטוי chemokine ב LN, ואיך הלימפה זורמת דרך רקמת שומן המקיפה את LN בהיעדר כלי לימפה פונקציונליים. עם ההכרה הגוברת בחשיבות של תפקוד הלימפה, שיטה זו תהיה יישומים רחבים יותר כדי לפענח עוד יותר את הפונקציה של כלי לימפה בוויסות microenvironment LN ותגובות חיסוניות.

תפר כלי הלימפה שימשבמחקרים קודמים 15,16,17,19,שם הוא שימש ככלי חשוב כדי ללמוד את הפונקציה של זרימת הלימפה לפני הביולוגיה המולקולרית של כלי הלימפה היה מובן טוב יותר. חסימת זרימת הלימפה מפריעה ל-LN הומאאוסטזיס, מה שמוביל לכך ש-HEVs מאבדת את ביטוי הגנים הקריטי הדרוש ללימפוציטיםאופטימליים ל-LN 15,16,17. מא...

פרוטוקול לחסום את זרימת הלימפה על ידי תפירה כירורגית של כלי לימפה שונים מוצג.

Lymphatic vessels are critical in maintaining tissue fluid balance and optimizing immune protection by transporting antigens, cytokines, and cells to ...

שיטה זו מפריעה לזרימת הלימפה עם נזק מינימלי לתאי אנדותל הלימפה, ועם שליטה מדויקת בתזמון המצור, ניתן להשתמש בה כדי לחקור כיצד זרימת הלימפה משפיעה על הונוסטזיס ותגובות חיסוניות בצומת הלימפה. עוזר להדגים את ההליך יהיה ג'ינגנה שו, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי. כדי להכין מנגנון הזרקה, לחתוך כ 30 ס"מ של צינורות פוליאתילן.חבר את קצה המחט A לקצה אחד של הצינור. בזהירות לנתק מחט אחרת, ולחבר את הצד השבור לקצה השני של צינורות פוליאתילן. ואז לצרף מחט A למזרק שחפת מיליליטר אחד.מיד לפני השימוש, להכין 10:1 קטמין-xylazine תערובת מלוחים. לאחר הרדמה של העכבר על ידי הזרקת 250 מיקרוליטרים של תערובת קטמין/קסילאזין תוך-אפית, להבטיח הרדמה מלאה עם קמצוץ בוהן. לגלח את הפרווה סביב הרגליים עם קוצץ שיער, ולאחר מכן להחיל קרם depilatory סביב הרגל.לאחר חמש דקות, לנגב את הפרווה שיורית ואת קרם depilatory באמצעות רקמה לחה, ולאחר מכן לנקות את הרגל עם מים סטריליים. יש לרסס 70% אתנול סביב הרגל כדי לעקר את אזור ההפעלה. מניחים את העכבר בתקרת נוטה, ולהשתמש בקלטת כירורגית כדי לחשוף את אזור הניתוח ברגל ימין.מוזרקים תוך-תאית חמישה מיקרוליטרים של צבע כחול 1%Evans, או תשעה סנטימטרים של הנוזל מצנרת ההזרקה צינורות לתוך כרית הרגל הימנית של העכבר. לעסות בעדינות את כף הרגל כדי לעזור לנוזל להיכנס כלי הלימפה. תחת מיקרוסקופ לנתח, לאתר אתר חתך חמישה מילימטרים מהקצה התחתון של אופוסה popliteal.באמצעות זוג מספריים, לעשות חתך קטן כחמישה מילימטרים אורך. לאחר מכן השתמש מלקעות פעולה בסדר כדי למתוח את החתך ולחשוף את כלי הלימפה איסוף. זהה את שני כלי הלימפה afferent המוביל בלוטות הלימפה popliteal.באמצעות מחזיק מחט, בזהירות להכניס את מחט התפר בין כלי הלימפה afferent ואת העורק saphenous. משוך בעדינות את המחט סביב כלי הלימפה. בזהירות למשוך את חוט התפר, משאיר כשני סנטימטרים של חוט התפר מאחור.השתמש במחזיק המחט כדי לעזור לקשור קשר של מנתח. לעסות בעדינות את כרית כף הרגל כדי להבטיח שום צבע כחול אוונס עובר את אתר התפר, ולאחר מכן לחתוך את החוט עודף עם מספריים. תפר את כלי הלימפה אדישים אחרים, ולאחר מכן לסגור את החתך בעור עם אותו תפר ששימש עבור כלי הלימפה.לשליטה מזויפת, להזריק תוך אדרה חמישה microliters של 1% צבע כחול אוונס כרית רגל שמאל, לעסות את כרית הרגל. פתח את העור עם חתך, ולאחר מכן לסגור את הפצע מבלי לתתבוע את הכלי. בעת ניטור העכבר לאחר הניתוח, הרגל הימנית צריכה להראות בצקת, עם צבע כחול אוונס מתפשט לירך, בעוד רגל הבקרה תראה צבע כחול אוונס מוגבל כרית הרגל.מיד לאחר הניתוח, להזריק תוך אדרה 10 microliters של 2%FITC הן כרית רגל ימין והן בצד שמאל. שעתיים, שש ו-12 שעות לאחר הזרקת FITC, אוספים את בלוטות הלימפה הפופליטיות מהפוסה של עכברים שעברו המתת לחץ. בזהירות להסיר את רקמת שומן perinodal סביב pLNs.להטמיע את pLNs בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית עם אזור סינוס medullary פונה לצד של עובש קריו. השתמש קריוטום להכין חלקים קפואים 20 מיקרון. כדי לקבוע את התפלגות FITC ב- pLNs, צלמו את קטעי ההקפאה תחת מיקרוסקופ קונפוקלי.תמונות קונפוקל שנתפסו שעתיים, שש, ו 12 שעות לאחר הזרקת FITC להראות מופחת באופן משמעותי הצטברות FITC בבלוטות הלימפה popliteal לאחר תופר את כלי הלימפה afferent. FITC שיורית ב- pLNs הצטברה באופן מועדף בסינוסים הלימפה. תמונות confocal של רקמת שומן perinodal להראות כאשר כלי הלימפה נחסמים על ידי תפור, FITC נכנס לרקמה כאשר בלוטות הלימפה סינוסים, אבל זה לא מופץ ביעילות לאורך בלוטות הלימפה.כאשר מנסים שיטה זו, חשוב לזכור כי החדרת מחט התפר בין כלי הדם לבין כלי הלימפה היא קריטית. כישלון של צעד זה עלול לשבור את כלי הדם. לאחר ביצוע שיטה זו, ניתן לחסן עכברים עם זיהום או גירוי חיסוני אחר כדי ללמוד כיצד זרימת הלימפה מווסתת את ההגנה החיסונית.הפונקציה של זרימת הלימפה אינה מובנת היטב. שיטה זו יכולה לשמש לחקר נדידת תאים בצומת הלימפה בהעדר זרימת הלימפה.

blocking-lymph-flow-by-suturing-afferent-lymphatic-vessels-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

כדי לעקוב אחר ההתקדמות של תגובה חיסונית לאורך זמן בתוך העכבר זאת, בלוטות הלימפה ניתן להסיר ברצף על ידי ניתוח. כאן, אנו מתארים כיצד טכניקה זו ניתן לבצע.

צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

סרטון זה מתאר טכניקת in vivo ליצירת לימפאדמה בזנב מורין, הצטברות נוזלים חריגה בחלל הרקמה הבין-תאית המובילה לנפיחות בזנב. המודל מוחל על מנגנוני לימוד וטיפול בלימפדמה.

מודל לימפדמה של זנב מורין: טכניקת In Vivo ליצירת לימפאדמה מתמשכת בזנב מורין

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד הכירורגי של בלוטת הלימפה המתנקזת מפשעתית מדגם עכבר. חתך באזור הבטן מספק גישה לבלוטת הלימפה המפשעה, אשר נקטף בניתוח. בלוטת הלימפה השקופה שנקטפה יכולה לשמש למחקרים אימונולוגיים.

קצירת בלוטת לימפה מנקזת מפשעתית ממודל מורין

סרטון זה מדגים טכניקה לצינור צינור הלימפה המזנטרי בחולדות. שיטה זו מאפשרת גישה ישירה לכל נפח הרכיבים הקיימים בנוזל הלימפה.

קנולציה של צינור לימפה מזנטרי במודל חולדה לקצירת נוזל לימפה

. הנה, נדגים את שיטות ויוו כימות של ליקוציט יציאה מן תמימה, מודלק, והעור מאתר ממאיר. אנו לבצע השוואת עפות בשני דגמים: transdermal FITC יישום, בחיי עיר photoconversion. יתר על כן, נדגים את התועלת של photoconversion עבור מעקב אחר ליקוציט היציאה של גידולים עורית.

לכימות ליקוציט היציאה דרך כלי הלימפה מ מאתר עור וגידולים

מודל זה חיה מאפשר לחוקרים לגרום מימפתית משני משמעותי מבחינה סטטיסטית בתוך האיבר הארוך של עכברים, שנמשך לפחות 8 שבועות. המודל יכול לשמש כדי ללמוד את הפתופסולוגיה של ימפתית ולחקור אפשרויות טיפול הרומן.

שיטה מתוקנת לגרימת ימפתית משנית בתוך הגפיים של עכברים

לימפאדמה היא נפיחות בגפיים הנגרמת על ידי תפקוד לקוי של הלימפה. אנו מתארים מודל זנב מורין כרוני של ביצנית לימפה ושימוש חדשני בטכנולוגיית ננו-טראנספקטו רקמות (TNT) להעברת מטען גנטי לזנב.

מודל לימפאדמה זנב מורין

פרוטוקול זה מתאר הליך הישרדות עבור לימפאדנקטומיה מזנטרית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב, בכל אחת מארבע תחנות לאורך שרשרת בלוטות הלימפה המזנטריות. הליך זה ניתן להתאמה כדי לאפשר הפרעה סלקטיבית בתקשורת הלימפה עם המעי הגס הדיסטלי, המעי הגס הפרוקסימלי ו/או המעי הדק.

כריתת לימפאדנקטומיה מזנטרית של עכברים לשיבוש סלקטיבי בתקשורת לימפה עם מערכת העיכול הספציפית לאזור

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להגדרה ברורה של השלבים לאנסטומוזה של בלוטת הלימפה הצווארית העמוקה או כלי הלימפה הנכנס שלה עם וריד הפנים האחורי בחולדה, כדי למזער את השפעתם של משתנים אחרים ולתקנן את ביצוע המחקר מבוסס הניתוח.

פרוטוקולים כירורגיים לאנסטומוזה לימפה ורידית עמוקה בצוואר הרחם במודל חולדה: אנסטומוזה של בלוטות לימפה וכלי לימפה

כתב היד מדגים שיטה חדשנית למחקר in vivo של ההתכווצות של כלי הלימפה הצוואריים וזרימת הלימפה בעכברים, לבדיקת פונקציות פיזיולוגיות שונות של כלי הלימפה הצוואריים (cLVs) ואסטרטגיות טיפוליות לוויסות מנגנוני הוויסות הלימפתיים של ניקוז וניקוי מוח.

הגדרה ניתנת לשחזור עבור הדמיה דו-פוטונית ב-In vivo של כיווץ כלי הלימפה הצווארי וזרימת הלימפה בעכברים

למד שיטה כירורגית לחסימת זרימת הלימפה בעכברים באמצעות תפירת כלי לימפה אפילנט. השיטה מאפשרת שליטה מדויקת בתזמון החסימה ונזק מינימלי לתאי האנדותל הלימפטיים, ומסייעת בחקר השפעת זרימת הלימפה על הומאוסטזיס ותגובות חיסוניות.

חסימת זרימת הלימפה על ידי תפירת כלי לימפה אפילנט בעכברים

גלה סרטונים נוספים