אורכי בהדמיית Vivo וכמת של השתלת אי הלבלב האנושי ותורם תאים מארחים בתא העין הקדמית

ה- ACE הוא אתר הדמיה אופטימלי. הוא תומך לחזור על זה בהדמיה ארוכת טווח של ויוו של תאי איון על מנת ללמוד את תפקודם ואת הכדאיות שלהם במצב השתלה. זה יכול גם להיות מורחב ללמוד היבטים אחרים בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים בזמן אמת.

היתרון של טכניקת ACE טמון בעובדה כי אותם איונים אנושיים בודדים הלבלב ניתן לעקוב באופן לא פולשני עם רזולוציה תת תאית לתקופה ממושכת של זמן. שיעורי ההצלחה של טיפול בתחליפי תאי בטא ממשיכים להשתפר. עם זאת, הערכת היעילות של השתלת איון והישרדות ב vivo, עדיין מאתגר.

שיטה זו יכולה לעזור להעריך ולמטב את התוצאות של השתלות איון. גישה זו אינה מוגבלת לאיים בלבלב בלבד. זה גם מתאים ללמוד רקמות מושפעות.

לדוגמה, בסיבוכים סוכרתיים, כמו גלומרולי כליות או חתיכות כבד, רק שם כמה. כדי להתחיל למקם את העכבר על כרית חימום חמה למקם אותו במחזיק הראש ולשים על מסכת האף. השתמש באגודל ובאצבע המורה כדי להרים מעט את הראש.

הדקו אותו עם החלקים המתכתיים בצדדים. מוודא כי חתיכות האוזן לתקן את הראש ישירות מתחת לאוזניים. תת עורית להזריק פתרון buprenorphine לתוך החלק האחורי של העכבר.

בעדינות לסגת העפעפיים של העין להיות מושתל באמצעות מדפים קהים. פופ את העין החוצה באופן רופף לתקן את זה עם זוג פינצטה מכוסה צינור פוליאתן. לאחר העברת העפעפיים לצלחת פטרי עם PBS, להרים כ 20 עד 30 איונים ב cannular העין.

באמצעות 25 מד המחט רמה כלפי מעלה, בזהירות להכניס את הקצה לתוך הקרנית ולעשות חתך אחד לאורך. בזהירות להרים את הקרנית עם cannula טעון מראש עם איונים, ולאט לאט לשחרר את איונים לתוך העין. לאט לסגת cannula ולהחיל ג'ל עיניים על העין.

לאחר 10 דקות, להסיר את המדפים, מחזיק את העפעף והחזר את העין למצבו הרגיל. להדמיה של איונים אנושיים מושתלים עם שני מיקרוסקופ פוטון, מניחים את פלטפורמת מחזיק הראש מתחת למיקרוסקופ ומנהלים ג'ל לעיניים על העין כנוזל טבילה בין הקרנית לעדשה. מקם את העין מתחת למטרה ודמיין את איי האדם המושתלים כמתואר בכתב היד של הטקסט.

להסרת השפע האוטומטי, עבור אל הכרטיסיה עיבוד תמונה, בחר אריתמטיקה של ערוץ והקלד ערוץ אחד פחות ערוץ 2. פעולה זו יוצרת ערוץ חדש 4. שנה את שמו לסקולטורה.

חזור על תהליך זה והקלד ערוץ 3 מינוס ערוץ 2 כדי ליצור ערוץ חדש חמש ולשנות את שמו עגבניות כל. כדי להגדיר את האיום באופן ידני ליצור משטח חדש ולבחור לערוך באופן ידני באשף. שמרו על המצביע במצב בחירה ובתצוגת תלת-מימד.

ולחץ על עוצמה כדי להמחיש מקטעים. בכרטיסיה ציור בחר מיתאר ולחץ על צייר כדי להתחיל לצייר קווי מתאר סביב גבול איון, החל ממיקום פרוסה אחד. לאחר מכן עברו למיקום פרוסה חדש וחזרו על קווי המתאר של הציור.

סיים עם הפרוסה האחרונה בחלק העליון של איון וסוף על ידי לחיצה על הכרטיסיה ליצור משטח. הקטע הבא, כלי הדם של איון ונוהורסצנטיות עגבניות איון באמצעות מסכת איון. בחרו בעצם מסיכת איון שהוגדר קודם לכן, עברו ללשונית העריכה ולחצו על הכרטיסייה 'מסיכה סך הכל', שפותחת חלון חדש.

בחרו בערוץ כלי הדם בתפריט הנפתח לבחירת ערוצים והפעילו אפשרויות ערוץ כפול לפני החלת המסיכה. קבוע בפנים, בחוץ ולהגדיר voxels מחוץ לפני השטח כדי 0.000 אשר יוצר ערוץ חדש שש. שנה את שם כלי הדם של איון הערוץ הזה.

חזור על השלבים הקודמים ובחר את העגבניות הכל בתפריט הנפתח של בחירת הערוץ, כדי ליצור את הערוץ החדש, לשנות את שמו, עגבניית איון. לאחר מכן צרו משטח חדש בתפריט הסצנה ובחרו יצירה אוטומטית באשף. הגדר את ערוץ המקור כלי הדם של איון שנוצר בעבר ובחר חיסור רקע.

באופן אופציונלי, השתמש במסננים. לדוגמה, בחר עוצמה וכוונן את המסנן בחלון, שיכול להסיר אובייקטי שירות נבחרים. סיים את האשף ותן שם לעצם פני השטח החדש, כלי הדם של איון.

באובייקט שירות כלי הדם של איון עבור אל כרטיסיית העריכה ולחץ על הכרטיסיה מסיכת הכל, הפותחת חלון חדש. בחרו בערוץ עגבניות איון בתפריט הנפתח לבחירת ערוצים והגדירו את הווקסלים מחוץ למשטח ל-10.000 שיוצר ערוץ חדש. שנה את שמו של כלי הדם עגבניות איון ערוץ זה.

כדי למקטע אות פלואורסצנטי של כמוסת עגבניות, בחרו אריתמטיקה של ערוץ בכרטיסיית עיבוד התמונה והקלדו ערוץ 7 מינוס ערוץ 8 היוצר את הערוץ החדש. שנה את שמה לכמוסת עגבניות. צור משטח חדש כפי שתואר בעבר ובחר ערוצי מקור, כלי דם עגבניות איון או כמוסה עגבניות באשף.

לאחר מכן בצע חיסור רקע. פתח את קובץ ה- backscatter של האיון וצור משטח חדש. באשף, בחר יצירה אוטומטית והגדר אזור עניין.

במידת הצורך, התאימו את הסף בעוצמה מוחלטת. ניתן ללחוץ או לכבות את עצם פני השטח, כדי להצליב בעוצמת הערוץ המתאימה. לאחר שתסיים, סגור את האשף.

לבסוף, בצע כימות, בחר אובייקט משטח שנוצר בתפריט הסצנה ועבור אל הכרטיסיה סטטיסטיקה. כדי לאחזר נתוני אמצעי אחסון מפורטים, בחר את הכרטיסיה המפורטת ובחר ערכים ואמצעי אחסון ספציפיים מהתפריט הנפתח. כדי לאחזר ערך אמצעי אחסון כולל עבור אל הכרטיסיה המפורטת ובחר ערכים ממוצעים.

פרוטוקול זה שימש להשתלת איונים אנושיים שאינם מסומנים בתא הפנימי של העין של עכברים נמען פלואורסצנטי אדום בן שמונה שבועות. תוכנת הדמיה אינטראקטיבית שימשה אז כדי לחלץ נתונים כמותיים מהתמונות. בהדמיית ויבו פלואורסנס, שתלי איון האדם נפגעו על ידי הפרעה משמעותית משפעת אוטומטית של רקמות שלא נצפתה בעכברים שתלי איון.

כדי לשפר את יחס האות לרעש, ערוץ השפע האוטומטי הוחסך. לאחר מכן הוגדר ידנית גבול איון הנקרא מסיכת איון והערוצים המתאימים. לבסוף, פילוח אות העגבניות לתוך כלי הדם העפעפיים ואת קפסולת העפעפיים ואת עיבוד פני השטח הסופי שימש כדי לחלץ נתונים כמותיים.

כאן כמפגש הדמיה אורך מייצג של אותו שתל איון אנושי בשבועיים, חודשיים, חמישה חודשים ושמונה חודשים לאחר ההשתלה. תמונות MIP של נתונים גולמיים שהוקלטו במקור, תמונות מעובדות לאחר הסרת שפעת אוטומטית של איון ואובייקטי איון מקופלים מוצגים. בעת ביצוע הזרקת העפעפיים, הקפד לטעון מראש את איונים בנפח קטן ולהשתמש בזרועות אור תאומות גמישות במיקרוסקופ הסטריאו שלך, כדי להדגיש את שטח תא העין על מנת להזריק בהצלחה את איונים לתוך ACE.

בעקבות ההדמיה in vivo ניתן לתקן את העיניים ולתחקר עוד יותר על כתמי נוגדנים והיסטולוגיה קונבנציונלית. טכניקה זו שימושית מאוד למחקרים תפקודיים של איונים אנושיים בודדים בזמן אמת ובתנאים פיזיולוגיים, במיוחד בהקשר של כלי דם, כדאיות ומחקרים מטבוליים.