Name: יציקת כלי דם של ריאות עכבר מבוגר ומוקדם לאחר הלידה עבור הדמיית מיקרו-CT (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: למדו ליצוק את מערכת כלי הדם העורקיים בריאות עכברים מבוגרים ומוקדמים לאחר הלידה. שיטה זו מאפשרת הדמיה מלאה של רשתות כלי הדם באמצעות מיקרו-CT תוך שמירה על שלמות רקמות רכות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך בחלקו על ידי תוכנית המחקר התוך-תוך-ממורלית של NHLBI (DIR HL-006247). ברצוננו להודות למתקן ההדמיה של עכבר NIH על הדרכה ברכישת תמונה וניתוח.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ושימוש (ACUC) של המכון הלאומי לריאות ודם בלב.
1. הכנה
<ol><li>להזריק את העכבר תוך-אפרטינולי עם הפרין (1 יחידה / גרם משקל גוף העכבר) ולאפשר לו ambulate במשך 2 דקות.</li>
	<li>להמתת לחיות בתאדו-קומתי 2.</li>
	<li>מסדרים את העכבר בתמוה מעולה על לוח כירורגי ומאבטחים את כל ארבעת הגפיים ללוח עם סרט הדבקה. השתמש הגדלה עבור פירוק בסדר.</li>
</ol>2. חשיפת ריאות וקנה הנשימה
<ol><li>לרסס את הצד האוורני של העכבר עם 70% אתנול כדי למזער את הפרעות השיער.</li>
	<li>לתפוס את עור הבטן עם מורסות ו לעשות חתך קטן עם מספריים באזור הטבור. החלק את קצות המספריים לתוך השכבה הפשלה בין שרירי הבטן והעור והתחיל להפריד בין שתי השכבות. עבודה באופן תברותי, הסרת העור מהבטן, בית החזה והצוואר.</li>
	<li>פותחים את שרירי הבטן במספריים וחותכים לרוחב משני הצדדים עד שהסרעפת נחשפת.</li>
	<li>אחז בעדינות בתהליך ה-xiphoid והרם מעט את בית החזה וממקסם את הנוף של הריאות הקוודיות דרך הסרעפת הרזה ושקוף למחצה. בזהירות לעשות חתך קטן בסרעפת ממש מתחת לתהליך xiphoid. הריאות יקרסו ויתרחקו מהסרעפת. תחתוך את הסרעפת הרחק מבית החזה, ותדאג לא לחתוך את פארנצ'ימה בריאה.</li>
	<li>לאתר ולנתק את הווירה ונה נחות (IVC) והוושט שבו הם עוברים דרך הסרעפת. השתמשו בגזה כדי לנקות את כל הדם הצורם בחלל בית החזה, ולהימנע ממגע עם הריאות.</li>
	<li>לתפוס את xiphoid שוב ולהרים בעדינות. חותכים את בית החזה דו-צדדי (בערך בקו האמצע) ונמנעים ממגע עם הריאות. הסר את בית החזה הקדמי לחלוטין, מה שהופך את החתך הסופי לאורך זווית החזה ממש לפני manubrium.</li>
	<li>באמצעות מזרק ממולא מראש, בליברליות להרטיב את הריאות עם תמיסת מלח פוספט אגירה (PBS, pH 7.4) כדי למנוע התייבשות. המשך בשגרה זו לאורך כל ההליך.</li>
	<li>בעזרת מפסים, אחז במנובריום והתרומם בעדינות מהגוף. באמצעות מספריים, לחתוך 1-2 מ"מ רוחבי למאניובריום, לנתק את עצם הבריח, ולהסיר. זה יחשוף את התימוס שמתחת.</li>
	<li>לתפוס כל אונה של התימוס, להתפרק, ולהסיר. חזור על הליך זה עם בלוטת התת-נהל. לבסוף, להסיר את רקמת השרירים כיסוי קנה הנשימה. הערה: בעקבות החיתוך, הלב, אב העורקים העולה (AA), גזע עורקי ריאתי (PAT) וקנה הנשימה צריך להיות גלוי. ודא הענפים העורקים הראשיים את תא המטען אינם מחולקים או פצועים.</li>
</ol>3. צנתור הרשות הפלסטינית ופליטת דם
<ol><li>כדי להרכיב יחידה 1, חוט 15 ס"מ של PE-10 צינורות על הרכזת של מחט 30 G ולצרף מזרק 1 מ"ל ממולא מראש עם 10-4 M נתרן nitroprusside (SNP) ב PBS. ראש הצינורות על ידי קידום הבוכנה עד כל האוויר מטוהר מיחידה זו (איור 1). התראה: SNP רעיל אם הוא נבלע. הימנע ממגע עם העור והעיניים. לשטוף את העור ביסודיות לאחר הטיפול. ללבוש ציוד מגן אישי מתאים.<ol>
<li>לחלופין, להרכיב יחידה 2. לעכברים לאחר הלידה יום 7 (P7) ומטה, השתמש בהמוסטט כדי לנתק מחט נוספת 30 G מהרכזת שלה ולהשחיל את המחט על הקצה הפתוח של הצינורות של יחידה 1(איור 1).</li>
	</ol>
</li>
	<li>במקום מחט, השתמש ממחיצה חדה מעוקלת כדי לתפוס קצה אחד של 10 ס"מ אורך של 7-0 משי. חודרים את החלק העליון של הלב הנכנס מצד אחד ומעביר את קצות המקצות דרך השריר ומחוץ לצד השני. אחז במשי עם סט נוסף של מלקות ומשוך כ-2 ס"מ אורך דרך וקשור. קח את הקצה הנותר של 8 ס"מ של התפר, מושך את הלב בcaudally, ולהדביק את הסוף ללוח כירורגי. הערה: זה ייצור מתח, עוד יותר לחשוף את כלי הדם הגדולים ולך את הלב במקום, המאפשר מיקום קל יותר של הצנתר בעורק הריאה.</li>
	<li>וו את הקצוות של מכריחים מעוקלים תחת AA ו PAT. משוך 3 ס"מ אורך של 7-0 משי בחזרה דרך הפתח וליצור תפר רופף זריקה אחת.</li>
	<li>באמצעות מספריים לעשות חתך 1-2 מ"מ לכיוון שיא הלב, חודר החדר הימני דק קיר (RV), כדי לאפשר החדר של הצנתר (יחידה 1). לפני הכניסה, ודא שאין אוויר במערכת. הצג את הצינורות המובחרים לחדר הימני והתקדם בעדינות אל תוך ה-PAT השום למחצה עם הקיר הדק.<ol>
<li>ודא ויזואלית כי הצנתר לא התקדם לתוך ענפים ריאתיים שמאל או ימין ואינו כולל את הענף עורק הריאה. באמצעות סרט הדבקה, אבטחו את החלק הדיסטלי של הצינורות ללוח הכירורגי. הערה: כדי לזהות את הקרוואן, השתמש במקלות כדי לצבוט את הצד הימני של הלב. שלא כמו החדר השמאלי, הקיר החופשי הדק יחסית של הקרוואן צריך להיאחז בקלות.</li>
		<li>עבור עכברים מתחת P7, לצרף יחידה 2 micromanipulator ולהציג את קצה המחט של היחידה לתוך PAT כמתואר לעיל באמצעות מניפולטור.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הידקו בעדינות את התפר הרופף סביב שני כלי הדם הגדולים וחתכו את אורך התפר באורך 8 ס"מ שנוצרו בשלב 3.2 כדי להחזיר את הלב לתנוחת מנוחה טבעית. הצנתר מאובטח כעת היטב בתוך ה-PAT.</li>
	<li>חתוך את התאוריה השמאלית של הלב כדי לאפשר לתפרה לצאת מהמערכת.</li>
	<li>מזרק מאובטח המכיל SNP (יחידה 1 או יחידה 2, תלוי גודל) במשאבת המזרק ולערור את הפתרון בקצב של 0.05 מ"ל/דקה כדי לשטוף את הדם ולהדיל באופן מצמצם את כלי הדם. דם / מפרב ים יהיה לצאת דרך auricle קצץ. המשך עירוי עד להסתפר פועל ברור (~ 200 μL בעכבר בוגר, פחות עבור בעלי חיים צעירים). הערה: בעת תחבולה PBS/SNP צמיגות נמוכה, שיעור אינפוזיה גבוה יחסית שימש לטובת חיסכון בזמן. תרכובת הפולימר צמיגית יותר חדור בקצב איטי יותר כדי למנוע מילוי יתר, קרע, ולמקסם את השליטה על נקודות קצה דיסטליות.</li>
</ol>4. אינפלציית טרצ'וסטומיה וריאות
<ol><li>לבנות את יחידת אינפלציית הריאות (איור 2).<ol>
<li>חברו צנתר פלסטיק גמיש 24 G תוך וריד (IV) (מחט הוסרה)/עירוי פרפר לסטופרוק, המחובר למזרק פתוח של 50 מ"ל (ללא בוכנה). תלו את המזרק מעמדת טבעת.</li>
		<li>הוסף 10% פורמלין אגירה למזרק. פתח את הפקק, המאפשר לפורמלין להיכנס לצינורות ולטהר את כל האוויר מהמערכת. סוגרים את הפקק ומרימים את המזרק עד שהניסקוס יהיה 20 ס"מ מעל קנה הנשימה8. התראה: פורמלין הוא דליק, מסרטנים, רעיל באופן חריף בעת בליעה, וגורם לגירוי בעור, נזק רציני לעיניים, רגישות העור, מוטגניות תאי נבט. הימנעו בליע ומגע עם העור והעיניים. הימנע משאיפת האדים או הערפל. התרחקו ממקורות הצתה. ללבוש ציוד מגן אישי מתאים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מניחים שני תפרים רופפים נחותים לסחוס הארואיד 2-4 מ"מ זה מזה.</li>
	<li>באמצעות מספריים, לעשות חתך קטן ברצועה cricoth בלוטת התריס מעולה על התפרים.</li>
	<li>הכנס את הצנתר IV לתוך הפתח וקדם את הקצה מעבר לשני התפרים הרופפים.</li>
	<li>להדק את התפרים סביב קנה הנשימה ולפתוח את הטועק. לאפשר פורמלין להיכנס לריאות על ידי כוח המשיכה ולחכות 5 דקות לריאות לנפח באופן מלא. אם הריאות לדבוק בית החזה במהלך האינפלציה, לתפוס את החלק החיצוני של בית החזה עם מקצות קצה קהה ולנוע לכל הכיוונים כדי לסייע בהצלת האונות. אל תיצור קשר ישיר עם הריאות.</li>
	<li>אחרי 5 דקות, בחזרה את הצנתר IV מעבר התפר הראשון ligate. אני חוזר על התפר השני. הריאות מנופחות כעת במצב סגור ולחץ.</li>
</ol>5. הטלת כלי הדם
<ol><li>בצינור 1.5 מ"ל, להכין 1 מ"ל של פתרון 8:1:11 8 של פולימר:דילול:ריפוי סוכן בעדינות להפוך כמה פעמים כדי להבטיח ערבוב טוב.</li>
	<li>מוציאים את הבוכנה ממזרק של 1 סמ"ק, מכסים את הקצה הנגדי באצבע עם כפפות, ושופכים את תרכובת הפולימר למזרק. מכניסים בזהירות את הבוכנה, הפוך ומקדמים את הבוכנה כדי להסיר את כל האוויר ויוצרים מניסקוס בקצה המזרק.</li>
	<li>הסר את מזרק SNP/PBS ממרכז המחט וטפטף PBS נוסף לתוך הרכזת כדי ליצור מניסקוס. בדוק בקפידה את הרכזת לאיתור אוויר לכוד, תנתק במידת הצורך, ותקן את המניסקוס. הצטרף לרכזת למזרק מלא בתרכובת פולימר. הערה: יצירת מניסקוס בשני הקצוות מפחיתה באופן משמעותי את הסיכוי לאוויר להיכנס למערכת.</li>
	<li>חבר את תרכובת הפולימר המאובזר למשאבת המזרק והטמיע במהירות של 0.02 מ"ל/דקה. הערה: עבור ריאות קטנות יותר, קצב איטי יותר יכול להיות מועיל כדי למנוע מילוי יתר, אך, אינו חיוני.</li>
	<li>לפקח על המתחם כפי שהוא נע בחופשיות במורד צינורות PE ושים לב נפח המזרק כפי שהוא נכנס PAT. להמשיך למלא עד כל האונות מתמלאים לחלוטין עד לרמת נימי ולעצור את משאבת המזרק. בדוק שוב את עוצמת המזרק. הערה: לאחר מספר ריצות ניתן להשתמש אמצעי אחסון משוער כדי לאמוד נקודת קצה משוערת (~ 35 μL עבור עכבר מבוגר ~ 5 μL עבור גור P1). לאחר הפסקת המשאבה, הלחץ השיאורי במערכת ימשיך לדחוף את תרכובת הפולימר לתוך עורקי הריאות. כל אונות הריאות אמורות להתמלא בקצב דומה.</li>
	<li>מכסים את הריאות במגיב ניקוי סיבים אופטיים, מורחים בליברליות PBS, ומאפשרים לפגר לשבת ללא הפרעה במשך 30-40 דקות בטמפרטורת החדר. במהלך תקופה זו, תרכובת הפולימר תרפא ותתקשה.</li>
	<li>הסר את הצנתר, נתק את הזרועות/החצי התחתון של העכבר, והניחו את הראש/בית החזה ב-50 מ"ל מלא ב-10% פורמלין במשך הלילה.</li>
	<li>לאחר קיבעון, אחז קנה הנשימה והפרד בעדינות את יחידת הלב/ריאה מכלוב הצלעות הנותרים ומבתי החזה. מניחים את בלוק הלב/ריאה במבעון מבריק מלא פורמלין. זרוק את השאר.</li>
</ol>6. מיטות כלי דם חלופיות לליהוק (שולחן 1)
הערה: כל מיטת כלי דם היעד עשוי לדרוש מיקום צנתר שונים, שיעורי אינפוזיה, וזמי מילוי אופטימליים. לכן, בעלי חיים מרובים יהיה צורך להטיל איברים מרובים.
<ol><li>עבור מיטות כלי דם מערכתיות מעולה או נחות הסרעפת בצע את השלבים 1.1-2.5 כאמור לעיל. ראה הערות נוספות במערכת הפורטל ובסרעפת (טבלה 1).</li>
	<li>לתפוס את תהליך xiphoid עם hemostat ולחתוך את בית החזה דו צדדי (בערך בקו האמצע) ממש לפני עורקי בית החזה הפנימיים.</li>
	<li>מקפלים את בית החזה עדיין מחובר על כך שהוא נח על הצוואר / הראש של החיה, חשיפת חלל החזה באופן מלא.</li>
	<li>בצע שלב 3.1 לעיל, לאחר מכן להסיר את הריאות. ברגע אבקים בית החזה (TA) גלוי, וו את הקצוות של מקצות מעוקלים מתחתיו, ~ 10 מ"מ מעולה הסרעפת. לתפוס 3 ס"מ אורך של 7-0 משי, למשוך בחזרה דרך הפתח תחת ת"א, וליצור תפר רופף לזרוק אחת. חזור על הליך זה ~ 8 מ"מ מעל הסרעפת.</li>
	<li>עבור מבנים עדיפים על הסרעפת, השתמש במספריים באביב כדי ליצור חור קטן (כ-30% מההיקף הכולל) בחלק האוורירי של ת"א, כ-2 מ"מ נחותים מהתפרים הרופפים הממוקמים בשלב 6.4.<ol>
<li>עבור מבנים נחותים הסרעפת, במקום זאת, ליצור חור קטן ~ 2 מ"מ מעולה על התפרים רופף.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בהתאם לגודל בעל החיים, להכניס יחידה 1 או 2 לתוך כלי השיט, להתקדם מעבר תפרים רופפים, ולתפור בעדינות את כלי השיט.</li>
	<li>בצע את שלב 3.7, הגדרת משאבת המזרק בקצב של 1.0 מ"ל/דקה וחדירות לפחות 5 מ"ל. תפרפר תצא דרך ה-IVC.</li>
	<li>בצע את השלבים 5.1 - 5.4 התאמת קצב האינפוזיה ל- 0.05 מ"ל/min, ניטור חזותי של רקמת היעד בזמן אמת. הערה: נפח האינפוזיה יהיה ספציפי לגיל איברים ובעלי חיים. הנפח יכול להיות מוגבל עוד יותר על ידי רצועות ענפי עורקים המובילים מיטות כלי דם שאינם היעד (כלומר, מוח, כבד, כליה, מעיים).</li>
	<li>בצע 5.6 ולאחר מכן להסיר רקמת היעד ומקום פורמלין.</li>
</ol>7. הרה, סריקה ושחזור לדוגמה עבור מיקרו-CT
<ol><li>באמצעות סרט פרפין, ליצור משטח שטוח על המיטה הסריקה ומרכז המדגם הרטוב על משטח זה(איור 3A). הערה: אם זוהה חפץ תנועה, הדגימה עשויה לדרוש ייצוב נוסף.</li>
	<li>אוהל קל / לכסות מדגם עם סרט פרפין נוסף כדי למנוע התייבשות. יש לנקוט משנה במיוחד לא לתת מנוחה לסרט הפרפין על הדגימה ולגרום לתווך ברקמה(איור 3ב).</li>
	<li>סרוק את הדגימה באמצעות הגדרות המתוארות בטבלה 2 ותקן פרמטרים אלה בניסוי נתון. הערה: זהו ניסוי/נקודת קצה התלויה. תמלמל את הפרמטרים הנבחרים עבור קלות ההשוואה בין דוגמאות.</li>
	<li>העבר את הסריקות המושחזרות לאיתור עיבוד וניתוח שלאחר העיבוד.</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שיטה זו, המבוצעת כראוי, מניבה תמונות מרשימות של רשתות עורקים ריאתיות, ומאפשרת השוואה וניסויים במודלים של מכרסמים. מספר צעדים קריטיים לאורך הדרך מבטיחים הצלחה. ראשית, על החוקרים לתפור את החיה בשלב ההכנה כדי למנוע מקרישי דם להיווצר בכלי הדם הריאות ותאי הלב. זה מאפשר את המעבר העורקי המלא של תרכובת פולימר. שנית, בעת ניקוב הסרעפת והסרת בית החזה, טפלו בהגנה על הריאות מפני נזק, חתכים או פציעה בשוגג. כל דליפה בדרכי הנשימה תמנע אינפלציה מלאה ותהפוך השוואות בין דגימות לבלתי מדויקות. שלישית, לגרד את הלב במיקום הצנתור של אייפקס. רבי...

המוקד של טכניקה זו הוא הדמיה של ארכיטקטורת עורקים ריאתי באמצעות תרכובת פולימר מבוסס בעכברים. בעוד עבודה נרחבת בוצעה על מיטות כלי דם מערכתיות כגון מוח, לב, וכליה1,,2,,3,,4,,5 , פחות מידעזמיןלגבי הכנה ומילוי של רשת עורקים ריאתית. מטרת מחקר זה, אם כן, היא להרחיב עלעבודה קודמת 6,7,8ולספק התייחסות כתובהוחזותית מפורטת כי החוקרים יכולים בקלות לעקוב כדי לייצר תמונות ברזולוציה גבוהה של עץ עורקי הריאה.
בעוד שיטות רבות קיימות עבור תיוג והדמיה כלי דם ריאות, כגון הדמיית תהודה מגנטית, אקוקרדיוגרפיה, או ANgiography CT9,10, רבים של שיטות אלה להיכשל למלא כראוי ו / או ללכוד את כלי קטן, הגבלת היקף מה ניתן ללמוד. שיטות כגון מקטעים טוריים ושחזור מספקים רזולוציה גבוהה אך הם זמן / עבודהאינטנסיבית 11,12,13. שלמות הרקמה הרכה שמסביב נפגעת בליהוק קורוזיהמסורתי 10,,13,,14,,15,,16. אפילו גיל וגודל בעלי חיים הופכים לגורמים כאשר מנסים להציג צנתר או, הרזולוציה היא חסרה. טכניקת הזרקת פולימר, מצד שני, ממלאת עורקים לרמת ניים ובשילוב עם μCT, מאפשרת רזולוציה שאין שני לה5. דגימות מריאות העכבר צעיר כמו יום לאחר הלידה 14 כבר יצוק בהצלחה8 ומעובד בעניין של שעות. אלה ניתן לסרוק מחדש ללא הגבלת זמן, או אפילו נשלח למיקרוסקופי הכנה היסטולוגית / אלקטרונים (EM) מבלי להתפשר על הרקמה הרכה הקיימת17. המגבלות העיקריות לשיטה זו הן העלות מראש של ציוד/תוכנה CT, אתגרים עם ניטור מדויק של לחץ תוך-וסקולרי, ועם חוסר היכולת לרכוש נתונים באופן אורכי באותה חיה.
נייר זה מתבסס על עבודה קיימת כדי לייעל עוד יותר את טכניקת הזרקת עורק הריאה ולדחוף את הגבולות הקשורים לגיל/גודל עד ליום שלאחר הלידה 1 (P1) כדי להניב תוצאות מרשימות. זה שימושי ביותר עבור צוותים שרוצים ללמוד רשתות כלי דם עורקיים. בהתאם לכך, אנו מספקים הדרכה חדשה למיקום/ייצוב של צנתר, שליטה מוגברת על קצב מילוי/נפח, ומדגישים חסרונות בולטים להצלחה מוגברת בליהוק. לאחר מכן ניתן להשתמש בשחקנים כתוצאה מכך לאפיון עתידי וניתוח מורפורולוגי. אולי חשוב מכך, זוהי ההדגמה החזותית הראשונה, למיטב ידיעתנו, שהולכת את המשתמש בהליך המורכב הזה.

<table><tbody><tr><td>מזרק 1 סמ"ק</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני נצנוץ זכוכית 20 מ"ל</td><td>פישר</td><td>03-340-25P</td><td></td></tr><tr><td>30 גרם מחט</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>צינורות חרוטיים 50 מ"ל</td><td>קורנין</td><td>352098</td><td>לדוגמא אחסון וסריקה</td></tr><tr><td>מזרק 60 סמ"ק</td><td>בקטון דיקינסון</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>7-0 משי תפר</td><td>טלפלקס</td><td>103-S</td><td></td></tr><tr><td>אנליזה 12.0 תוכנה</td><td>AnalyzeDirect בע"מ</td><td>תוכנה ראשית</td> <td>N / A</td></tr><tr><td>Amira 6.7 תוכנה</td><td>Thermo Scientific</td><td>N/A</td><td>אלטרנטיבה</td></tr> תוכנה <tr><td>CeramaCut מספריים 9 ס"מ</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14958-09</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מעוקלים מצופים קרמיקה</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11272-50</td><td></td></tr><tr><td>מיכל CO2</td><td>רוברט חמצן ושות'</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>משאבת מזרק כפולה</td><td>קול פארמר</td><td>EW-74900-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Mini-Forceps</td><td>Fine Science</td><td>כלים 11200-14</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Sigma - מדעי החיים</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Covidien</td><td>441215</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Fine Science כלים</td><td>13013-14</td><td></td></tr><tr><td>הפרין (1000USP יחידות/מ"ל)</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409-2720-01</td><td></td></tr><tr><td>Horos Software</td><td>Horos Project</td><td>N/A</td> תא אינדוקציה <td>חלופי Sofware</td></tr><tr><td></td><td>n/</td><td>a n/a</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher</td><td>06-666</td><td>סיבים אופטיים לניקוי</td></tr><tr><td>מגבונים סרט תיוג</td><td>פישר</td><td>15966</td><td></td></tr><tr><td>בסיס מגנטי</td><td>Kanetec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>מערכת מיקרו-CT</td><td>PerkinElmer</td><td>Quantum GX</td><td></td></tr><tr><td>Microfil (תרכובת פולימרית)</td><td>Flowech Inc.</td><td>ערכה B - MV-122</td><td>8 אונקיות של תרכובת MV; 8 אונקיות של מדלל; MV-Curing Agent</td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Stoelting</td><td>56131</td><td></td></tr><tr><td>מונו-ג'קט 1/2 מ"ל מזרק אינסולין</td><td>Covidien</td><td>1188528012</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מתומן שיניים ישרות</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11042-08</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis company, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>#PM999 צינורות PE-10</td><td>Instech</td><td>BTPE-10</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ</td><td>מלח BioRad</td><td>#161-0780</td><td></td></tr><tr><td>מעמד טבעת</td><td>פישר</td><td>S13747</td><td>גובה 24 אינץ'.</td></tr><tr><td>נתרן ניטרופרוסיד</td><td>סיגמא</td><td>71778-25G</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פלדה</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>16 x 16 אינץ 'שטח, 1/16 בעובי</td></tr><tr><td>מספריים קפיץ ישר</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>SURFLO 24G טפלון IV קטטר</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה</td><td>360103</td><td></td></tr><tr><td>לוח כירורגי</td><td>פישר</td><td>12-587-20</td><td>זהו מחזיק שקופיות שהומר</td></tr><tr><td>מהדק אוניברסלי בעל 3 שיניים</td><td>Fisher</td><td>S24280</td><td></td></tr><tr><td>Winged Inf. סט 25X3/4, 12 אינץ' צינורות</td><td>Nipro</td><td>PR25G19</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Stemi-508 Dissector Scope</td><td>Zeiss</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

יציקת כלי דם של ריאות עכבר מבוגר ומוקדם לאחר הלידה עבור הדמיית מיקרו-ct

Vascular Casting of Adult and Early Postnatal Mouse Lungs for Micro-CT Imaging

כלי דם יוצרים רשתות מורכבות בחלל תלת מימדי. כתוצאה מכך, קשה להעריך חזותית כיצד רשתות כלי דם אינטראקציה ולהתנהג על ידי התבוננות על פני השטח של רקמה. שיטה זו מספקת אמצעי לדמיין את ארכיטקטורת כלי הדם התלת מימדית המורכבת של הריאה.
כדי להשיג זאת, צנתר מוכנס לתוך עורק הריאה ואת כלי הדם הוא שטף בו זמנית של דם ומורחב כימית כדי להגביל את ההתנגדות. הריאות מתנפחות לאחר מכן דרך קנה הנשימה בלחץ סטנדרטי, תרכובת הפולימר חדורת לתוך מיטת כלי הדם בקצב זרימה סטנדרטי. לאחר כל רשת העורקים מתמלאת ומותר לרפא, כלי הדם של הריאות עשוי להיות חזותי ישירות או בתמונה על סורק מיקרו CT (μCT).
כאשר מבוצע בהצלחה, אפשר להעריך את רשת עורקים ריאתי בעכברים החל בגילים שלאחר הלידה מוקדם למבוגרים. בנוסף, בעוד הפגינו במיטת עורקים ריאתי, שיטה זו יכולה להיות מיושמת על כל מיטה כלי דם עם מיקום צנתר אופטימיזציה ונקודות קצה.

צוות שחקנים מוצלח יציג מילוי אחיד של כל רשת עורקי הריאות. אנו מדגימים זאת בעכברים C57Bl/6J הנעים בגיל: P90 יום לאחר הלידה (איור 4A), P30 (איור 4B), P7 (איור 4C), ו P1 (איור 4D). על ידי שליטה בקצב הזרימה וניטור חזותי של המילוי בזמן אמת, נקודות קצה אמינות של כלי הדם הדיסטליים ביותר הושגו(איור 5א).
<p class="jove_content" fo:keep-together.w...

המטרה של טכניקה זו היא הדמיה ex vivo של רשתות עורקים ריאתיים של עכברים פוסט לידתיים ומבוגרים מוקדם באמצעות אינפלציה ריאות והזרקה של תרכובת פולימר אטומה רדיו באמצעות עורק הריאה. יישומים פוטנציאליים עבור רקמות יצוקות נדונים גם.

יציקת כלי דם של ריאות עכבר מבוגר ומוקדם לאחר הלידה עבור הדמיית מיקרו-CT

Blood vessels form intricate networks in 3-dimensional space. Consequently, it is difficult to visually appreciate how vascular networks interact and ...

פרוטוקול זה נותן הדרכה מדויקת, צעד אחר צעד, ליציקת כלי הדם העורקיים הריאה בעכברים בוגרים ותחילת לידה. טכניקה זו מאפשרת למשתמשים ללהק באופן מלא את כל רשת כלי הדם להדמיה במגוון שיטות, כולל מיקרו-CT, תוך שמירה על שלמות הרקמות הרכות. טכניקה זו שימושית במיוחד להתבוננות במורפולוגיה ואדריכלות של כלי דם ריאתי, אך ניתן להתאים אותה בקלות לפילוח של מיטות כלי דם אחרות.כמו ניתוחים וניתוחים רבים, אין תחליף למעשה לדמיין הליך, והצופים עשויים להפיק תועלת מלראות כמה מהתמרונים המאתגרים יותר מבוצעים. לאחר תהליך xiphoid נחשף, בעדינות לתפוס ולרומם את כלוב הצלעות. בזהירות לעשות חתך בסרעפת חשופה עכשיו, שקוף למחצה.הריאות יתמוטטו בעליל, ויתרחקו מהסרעפת. לאחר חשיפת הריאה וקנה הנשימה, חוט 15 ס"מ של צינורות PE10 על הרכזת של מחט 30-מד. ולצרף יחידה זו למזרק מיליליטר אחד, המכיל 10 עד 4 טוחן של נתרן nitroprusside, ב PBS.קדם את הבוכנה כדי להפוך את הצינורות עד שכל האוויר כבר מטוהר. כחלופה יעילה לטקסט, לחדור את פסוק הלב בצד אחד, ולהעביר את קצות מדפים מעוגלים דרך השריר, ואת הצד השני של הרקמה. לתפוס קצה אחד של אורך 10 ס"מ של משי 7-0, ולמשוך כשני סנטימטרים דרך הרקמה.לאחר קשירת התפר, השתמש בשמונה ס"מ הנותרים של תפר כדי למשוך את הלב באופן סיבתי. ותדביק את קצה התפר ללוח הניתוחים. וו את קצות מדפים מעוגלים תחת הן את העורקים העולים ואת תא המטען של עורק הריאה.ולמשוך אורך של 3 ס"מ של משי 7-0 בחזרה דרך הפתח כדי ליצור תפר רופף חד פעמי. השתמש במספריים כדי לבצע חתך של 1-2 מ"מ לכיוון עלות הלב, חדירה החדר הימני דק הקירות. והכניסו את הצינורות ההפוכים לחדר הימני, והתקדמו בעדינות את הקטטר לתוך תא המטען הדק למחצה של עורק התריאה.ודא חזותית כי הקטטר לא התקדם לענפי הריאה השמאליים או הימניים, ואינו עולה על נקודת ענף עורק הריאה. מדביקים את החלק הדיסטלי של הצינור ללוח הניתוחי, ומהדקים בעדינות את התפר הרופף סביב שני הכלים הגדולים. חותכים את חתיכת התפר באורך שמונה ס"מ כדי להחזיר את הלב למצב מנוחה טבעי.ולגזור את הנביאה השמאלית של הלב כדי לאפשר לתוספות לצאת מהסקגולטורה. לאחר מכן, השתמש במשאבת מזרק, כדי להחדיר את הנתרן nitroprusside בקצב זרימה של 0.5 מיליליטר / דקה הן לשטוף את הדם, כדי להחדיר את כלי הדם באופן מקסימלי, עד perfusate פועל ברור. כדי לבנות את יחידת אינפלציית הריאות, לחתוך את קטטר פלסטיק גמיש 24-מד תוך וריד מהאמבטיה ולהתחבר המחט של ערכת עירוי פרפר.צרף יחידה זו ל stopcock, ולצרף את stopcock למזרק פתוח 50 מיליליטר. לאחר טעינת המזרק עם פורמלין ו priming קטטר, עם stopcock סגור, למקם את המזרק בעמדת טבעת, עד לנקודה שבה המניסקוס הוא 20 ס"מ מעל קנה הנשימה. מניחים שני תפרים רופפים, שניים עד ארבעה מילימטרים זה מזה, נחותים מהסחוס העריסה, ולהשתמש במספריים כדי לבצע חתך קטן ברצועה cricothyroid, מעולה על התפרים.מכניסים את הקטטר לתוך הפתח, ומקדמות את הקצה מעבר לשני התפרים הרופפים. הדק את התפרים סביב קנה הנשימה, ולפתוח את stopcock כדי לאפשר את הפורמלין להיכנס לריאות על ידי כוח הכבידה. חכה חמש דקות עד שהריאות יתנפחו לגמרי.אם הריאות נצמדות לכלוב הצלעות במהלך האינפלציה, השתמש במטסים קהים כדי לתפוס את החלק החיצוני של כלוב הצלעות, והזז את הצלעות לכל הכיוונים כדי לסייע בהפצת האונות מבלי ליצור מגע ישיר עם הריאות. לאחר חמש דקות, לסגת קטטר מאחורי התפר הראשון ligate. ואז לסגת קטטר מאחורי התפר השני ligate.הריאות צריכות כעת להיות מנופחות במצב סגור, בלחץ. כדי להטיל את כלי הדם, לטעון מיליליטר אחד של פתרון 8-1-1 של חומר ריפוי פולימרי diluent לתוך מזרק מיליליטר אחד. ולהכניס בזהירות את הבוכנה.עם המזרק הפוך, לדכא את הבוכנה כדי להסיר את האוויר, ולאפשר היווצרות של מניסקוס בקצה המזרק. הסר את מזרק nitroprusside נתרן מהרכזת של המחט, ולטפטף תוספת PBS לתוך הרכזת, כדי ליצור מניסקוס. הצטרפו למזרק הפולימר-תרכובת לרכזת, והתחל את העירוי ב-0.02 מילימטרים לדקה.לפקח על התרכובת כפי שהוא נע בחופשיות דרך צינורות, ונוי על נפח המזרק כפי שהוא נכנס תא המטען של עורק הריאה. המשיכו בשפע עד שכל האונות יתמלאו לחלוטין, עד לכלי הקטן ביותר. עצור את המשאבה, ושוב, שים לב לנפח המזרק.מכסים את הריאות עם ניגוב ניקוי סיבים אופטיים, ולהחיל בנדיבות PBS. אפשר לדגימה לשבת באין מפריע במשך 30 עד 40 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר תרכובת הפולימר נרפא והוקשח, לנתק את הגפיים ואת החצי התחתון של העכבר.ומקום את הראש ואת בית החזה לתוך חרוט 50 מיליליטר מלא 10% פורמלין במאגר, לילה. למחרת בבוקר, לתפוס את קנה הנשימה להפריד בעדינות את הלב ואת יחידת הריאות מכלוב הצלעות הנותרים ואת בית החזה. מניחים את בלוק הרקמות שנקטפו בבקבוקון נבל מלא פורמלין.גבס מוצלח יגרום למילוי אחיד של כל רשת עורקי הריאה. אם יש נזק לדרכי הנשימה של הריאה או הריאות, דליפות קטנות ימנעו מהריאות להחזיק בלחץ. מילוי מטושטש או לא שלם יכול לנבוע מנעל אוויר כתוצאה מהכנסת האוויר למערכת כלי הדם באמצעות הקטטר, חסימת זרימת במורד הזרם של המתחם.Underfilling מתרחשת כאשר תרכובת קטנה מדי הוא הציג לתוך כלי הדם. לחלופין, מילוי יתר, או החדרת יותר מדי תרכובת פולימר מהר מדי, יכול לגרום לקרע עורקי, או, בדרך כלל, מעבר ורדם. קידום הקטטר רחוק מדי במורד תא המטען הריאה יכול לגרום לקצה להיתקע לענף עורק ריאתי אחד, ליצור חוסר איזון בזרימה, ולגרום לצד אחד להתמלא מהר יותר מהשני.ביצועים זהירים של הטכניקה כפי שהוכח, באמצעות ניטור ישיר המתאים של נקודות קצה כלי דם דיסטליים, שיעורי עירוי סטנדרטי יכול לגרום למילוי אופטימלי של כלי דם ריאתי. יתר על כן, התאמת טכניקה זו כלי הדם המערכתיים יכול להניב תוצאות חיוביות באותה מידה במיטות כלי דם אחרים. לאחר הליהוק, ניתן לעבד דגימות לסריקת טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת.לעיבוד שלאחר עיבוד, חבילת תוכנה מסחרית יכולה לשמש ליצירת עיבוד נפח תלת-ממדי של עץ כלי הדם הריאה. כאשר מנסים טכניקה זו בפעם הראשונה, להיות זהיר במיוחד סביב הריאות שביר, ואת עורק הריאה. והכי חשוב, הימנע החדרת אוויר לתוך מעגל כלי הדם.לאחר גבס מוצלח, ניתן לסרוק דגימה באמצעות מיקרו-CT, ו ניתן לחקור שאלות הקשורות למורפומטריה ואדריכלות של כלי הדם.

vascular-casting-adult-early-postnatal-mouse-lungs-for-micro-ct

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

ניגודיות משופרת כלי שיט קטן בעל חיים הדמיה על ידי microCT היא מהירה, חסכונית תפוקה גבוהה טכניקה...

כלי משופר ניגודיות הדמיה באמצעות MicroCT

Non-הרסני להדמיה נפח יכולה להיות מושגת רק על ידי טכניקות טומוגרפית, מתוכם היעילה ביותר היא טומוגרפיה רנטגן מיקרו ממוחשבת (CT).

ברזולוציה גבוהה 3D הדמיה של Ex-Vivo דגימות ביולוגיות באמצעות מיקרו-CT

במאמר זה, אנו מציגים טכניקה פשוטה, מעשית ליציקת כלי דם במוח כי הוא קל לביצוע, יכול להיות מנוצל על התמונה עץ כלי דם של המוח עכבר מבוגר.

יציקה של כלי דם במוח העכבר למבוגרים הדמיה 3D ו ניתוח מורפולוגי

אנו מציגים פרוטוקול להערכת קצב פינוי הנוזל המכתשית או בצקת ריאות בריאות של עכברים יילודים באמצעות טכנולוגיית הדמיית רנטגן.

הדמית רנטגן בזמן אמת של כרכי נוזל ריאות עובריות עכבר ריאות

אנו מתארים שיטה לזיהוי התפתחות קשריות גידול בריאות של מודל עכבר אדנוקרצינומה באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת והשימוש בה לניטור שינויים בגודל הגוש לאורך זמן ובתגובה לטיפול. דיוק ההערכה אושר באמצעות כימות היסטולוגי של נקודת הקצה.

באמצעות טומוגרפיה מיקרו שחושבת הערכת התפתחות גידול ומעקב של תגובה לטיפול במודל עכברי של סרטן הריאות

אנו מתארים הדמיה גישה המבוססת על מיקרו-CT וקרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית להערכת האורך של המודל פיברוזיס הריאות העכבר המושרה על ידי החדרה intratracheal כפול של bleomycin יחידנית או פולשני משולבת.

יחידנית או משולבת הדמיה גישה המבוססת על מיקרו-CT וקרינה פלואורסצנטית טומוגרפיה מולקולרית להערכת האורך של ריאות הנגרמת Bleomycin פיברוזיס בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של מסוף העכבר למבוגרים פלקים כריתת כריתה לחקור היווצרות בלסטאמה blastema ו intramembranous להתקשות, מנותח על ידי הפלורסנט אימונוהיסטוכימיה ו רציפים ב-vivo מיקרו טומוגרפיית.

כריתה של ספרות עכבר למבוגרים והתחדשות: מודל פשוט כדי לחקור ממגי בלסטאמה היווצרות הIntramembranous פיקציה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת חלון אופטי השוכנות לצמיתות עבור בית החזה מורין, המאפשר הדמיה תוך-ויאלית ברזולוציה גבוהה של הריאה. קביעות החלון הופכת אותו מתאים היטב לחקר תהליכים תאיים דינמיים בריאה, במיוחד אלה המתפתחים לאט, כגון התקדמות גרורתית של תאים סרטניים מופצים.

חלון קבוע לחקירת גרורות סרטן לריאה

טומגוגרפיה מיקרו-ממוחשבת עם שרף כפול מאפשרת הדמיה, דיגיטציה וסגמנטציה של שתי מערכות צינוריות בו זמנית כדי להקל על ניתוח תלת-ממדי של ארכיטקטורת איברים. DUCT משלב הזרקת ex vivo של שני שרפים radiopaque ואחריו סריקת טומוגרפיה מיקרו ממוחשבת פילוח של הנתונים טומוגרפיים.

צינור: יציקת שרף כפול ואחריו טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת לניתוח כבד תלת-ממדי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לשימוש בטומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (מיקרו-CT) כדי לכמת אזורים מאווררים במודל פיברוזיס ריאתי חד צדדי המושרה על ידי בלאומיצין באמצעות החדרה תוך קנה הנשימה בצד הנגע.

ניתוח נפח ריאות חד צדדי באמצעות מיקרו-CT להערכה משופרת של פיברוזיס ריאתי במודלים פרה-קליניים

למדו ליצוק את מערכת כלי הדם העורקיים בריאות עכברים מבוגרים ומוקדמים לאחר הלידה. שיטה זו מאפשרת הדמיה מלאה של רשתות כלי הדם באמצעות מיקרו-CT תוך שמירה על שלמות רקמות רכות.

יציקת כלי דם של ריאות עכבר מבוגר ומוקדם לאחר הלידה עבור הדמיית מיקרו-CT

גלה סרטונים נוספים