הזרקת דם ישירה כפולה לתוך מגנה צ'יסטרנה כודל של דימום Subarachnoid

המטרה הכוללת של וידאו זה הנוכחי היא להסביר את הפרוטוקול של הזרקה ישירה כפולה של דם לתוך מגנה cisterna כמודל של דימום תת-אנכרנואידי. הפיזיולוגיה של הדימום התת-אנכרנואידי נובעת לעתים קרובות מקרע של מפרצת. ואנחנו עושים תחילה את הפזרנות של הדם לתוך התא שבין המוח לרקמה שמכסה את המוח.

התא הזה הוא החלל התת-אנכרנואידי. דימום תת-אנכרנואידי מהווה עד 7% מכלל מקרי השביתה. התמותה נעה בין 30% ל -50% במחקרים מבוססי אוכלוסייה וניצולי דימום תת-עורי חווים בדרך כלל sequelae קוגניטיבי כמו ליקויי זיכרון, אסתניה, או הפרעות במצב הרוח.

הגורם המוביל בשכיחות הגבוהה של תוצאה לקויה הוא מה היא ביסכמיה מוחית. מחקרים עשו קשר בין התרחשות של אצמיה ב vasoconstriction של העורקים המוחיים הגדולים, בשם vasospasm מיקרוסקופי שניתן לזהות ברוב החולים בין הרביעית והחמש עשרה יום לאחר האירוע נפיחות הראשון. בגלל חוסר היעילות של האפשרויות הטיפוליות הנוכחיות, יש צורך רפואי ברור להבנה טובה יותר של אירועים פתולוגיים.

יש לבחון דימום תת-אנכרנואידי נלווה ויעדים טיפוליים חדשים, אך הדבר דורש מודלים מגוונים ומתוקנים של בעלי חיים. הקרע של מפרצת בין-קרן האחראית בעיקר לדימום תת-ארקנואידי בבני אדם עשוי להיות קשה לעשות מודלים פרה-קליניים ואנושיים. בבעלי חיים, הקשיים העיקריים טמון בשכיחות השליטה של דימום והפצה בדם, אבל מחקרים אחרונים מתמקדים בפיתוח מודלים אדמומיים יותר של מודלים של דימום תת-אנכרנואידי.

כאן מייצגים מודל עכבר סטנדרטי של שתי זריקות רצופות של דם עורקי אוטולוגי של יומיים שלנו לתוך מגנה cisterna. היתרונות העיקריים של מודל זה הם לשלוט באופן בלתי פולשני בהליך כירורגי לא פולשני, להתאים את האיכות והכמות של הדם המוזרק, ולחזק את אירוע הדימום מבלי להגביר באופן דרסטי את הלחץ התוך גולגולתי. לפני תחילת הניתוח, אתה צריך לשים עוד מספר רב של נימי זכוכית באמצעות מושך micropipette.

צינור ההזרקה צריך להפגין קוטר פנימי של 0.86 מילימטר וקוטר חיצוני של 0.5 מילימטר. הכינו את נוזל השדרה המוחי המלאכותי למצב מזויף, כפי שצוין בפרוטוקול הכתוב. אתה חייב להבין את זה מחומצן נוזל השדרה המוחי המלאכותי עם מנגנון מסנן מיקרון 0.22.

השלב הראשון של דגם הדימום התת-עכבישי שלנו מורכב מהבידוד של העורק הראשי לאורך קנה הנשימה ואיסוף מקסימום דם מנקב עורק התרדמה. לאחר הרדמה על ידי isoflurane, לבדוק את חוסר רפלקסים על ידי הידוק גפיים אחוריות אחת או שתיים כדי לאפשר את ההגדרה של ההליך הניסיוני. קוד מזרק מילימטר אחד עם אפרין באמצעות מחט מד 26.

זה ימנע קרישת דם במהלך השלבים הבאים. לשקול כל עכבר במדויק באמצעות איזון אלקטרוני. במחקר הנוכחי, לעכברים יהיה משקל גוף בטווח של 20 עד 25 גרם ממש לפני הניתוח.

כפי שהוסבר קודם לכן, הרדמה המושרה של העכבר המופעל ולאחר מכן לגלח את הצוואר ואת הרווח בין כל אוזן באמצעות קליפר חשמלי מתאים. בדוק שהעכבר ישן וראש העכבר חסום היטב. להזריק תת עורית 100 microliters של buprenorphin ב 0.1 מיליגרם לקילו עם מחט 26 מד בגב התחתון, כדי למנוע כאב לאחר התעוררות.

מנע עיניים יבשות באמצעות ג'ל נוזלי מגן ושמור על טמפרטורה תוך-צינורית של 37 מעלות באמצעות שמיכה חשמלית מוסדרת אוטומטית. לפני הטיפול באזור המגולח בתת פתרון חיטוי, כל המכשירים הנוגעים לרקמה עברו עיקור וטופלו באופן הולם. ביום הראשון, לחתוך חתך אחד סנטימטר ארוך בצוואר האחורי, ואחריו הפרדת השרירים לאורך קו האמצע, כדי לגשת מגנה cisterna.

חותכים את קצה פיפטה זכוכית ריקה עם מספריים דקים. לאחר מכן הסתגל למזרק המחובר למחבר סיליקון גמיש. לאחר מכן להעביר 60 microliters של דם או נוזל השדרה המוחי מלאכותי בצינור 0.5 מיליליטר באמצעות micropipette דיוק למצוץ לתוך פיפטה זכוכית, 60 microliters של דם עבור מצב דימום תת-עורי או 60 microliters של נוזל השדרה המוחי מלאכותי למצב דמה.

להזרקה, הכנס את הפיפטי על המסגרת הסטראוטקטית באמצעות, למשל, הטבעת שלנו או וגישה איטית קצה פיפטה לממברנה בממשק עם מגנה cisterna. הכנס לאט את קצה פיפטה דרך קרום אטנטו-העורף לתוך מגנה cisterna באמצעות מיקרומניפולטור של מסגרת סטריאומטטית. חבר את פיפטה למזרק מלא בעבר, מוכן אינדוקציה לחץ.

להזריק על ידי לחץ בקצב נמוך סביב 10 microliters לדקה, כדי למנוע יתר לחץ דם תוך גולגולתי חריף. במהלך ההזרקה, יש לנטר מקרוב את קצב הנשימה ואת הטמפרטורה רקטלית. בסוף ההזרקה, בזהירות להסיר את פיפטה באמצעות micromanipulator חזותית לטפל אין דליפה במהלך הנסיגה.

להשיג הונוסטזיס ולבצע שני תפרים עם חוט תפר קלוע שאינו נספג. מיד לאחר הניתוח, לבודד ולמקם את העכבר דטוביטוס ירידה לכסות עם שמיכת הישרדות בתיבה פתוחה למשך ההחלמה. לאחר 24 שעות, לגרום הרדמה שוב, להתקין את העכבר על מסגרת stereotactic כמו יום קודם לכן ולהסיר בזהירות את התפרים עם מיקרו מספריים.

הכן כמו לפני aseptic של קרום אטלנטי-העורף, על ידי החלת על האזור מגולח פתרון aseptic עם מוט כותנה. להזריק, כמו יום קודם לכן, 30 microliters של דם או נוזל השדרה המוחי מלאכותי בקצב נמוך. כאמור, לפקח על קצב הנשימה וטמפרטורה רקטלי.

בסוף ההזרקה, בזהירות להוריד את פיפטה ולשלוט על היעדר דליפת דם במהלך הנסיגה. להשיג הונוסטזיס ולבצע שני תפרים עם חוט תפר נספג קלוע. מהיום הראשון לאחר הניתוח ליום ההקרבה, יש להעריך את משקל הגוף מדי יום כאינדיקטור רגיש לטיבה כללית.

זה הראה עלייה משמעותית במשקל הגוף בדימום תת-אנכרנואידי, בהשוואה לבעלי חיים מזויפים, מה שמרמז על תהליך התאוששות פעילות לאורך זמן ואירועים פתולוגיים ממושכים, דימום תת-ארוקנואידי. למה התמותה לא במצב מזויף? התמותה קרובה ל-30% ביום השביעי במצב של דימום תת-אנכרנואידי, ורוב בעלי החיים מתים ביום אחד או ביום הרביעי לאחר הניתוח.

בין נקודות קצה אנושיות, ירידה משמעותית במשקל מעולה של 15% מהמשקל הראשוני מצוין. יציבה עם גב רכון, תנועות איטיות, פצעים, קולות חריגים או תוקפנות משמעותית הם גם סימנים לכך שהחיה סובלת. אם מופיע אחד מהסימנים הללו או שילוב של סימנים, המעקב אחר החיה מחוזק תוך שעות לאחר הופעתה.

אם מצבו של בעל החיים מחמיר בשעה הבאה או לא משתפר בתוך 48 שעות, זה ייחשב כי רמה של סבל בלתי נסבל הוא הגיע ואת ההרג מתבצע. בדוגמה זו ביום הראשון של הניתוח, זה יכול להיות שנצפה ממוח מדגם, קרישי דם לאורך העורקים הגדולים של מצולע ויליס בנושא דימום תת-אנכרנואידי. ביום החמישי לאחר הניתוח ולפני ההקרבה, הזרקת דיו הודית בין וסקולרית מאפשרת זיהוי של vasospasm מקרוסקופי המתאים vasoconstriction של עורקים מוחיים גדולים, צביעה של פרוסות המוח עם hematoxylin ואוזין מאפשר מדידה של וספוספסם מוחי.

כאן, כפי שמודגם על מיקרוגרפיה זו צילום, אתה יכול להתבונן כמו vasospasm של עורק הבזיליקר. במודל זה של הסטת הזרקה ישירה של דם לתוך מגנה cisterna, הדגמנו לאחרונה vasospasm מוחי של עורקים מוחיים גדולים, תצהיר פיבריל כלי דם מוחיים, אפופטוזיס התא, מלווה פונקציות חושיות, מוטוריות וקוגניטיביות שונות בעכברים. לכן, זה עושה מודל זה מאומת ומאופיין לאירועים לטווח קצר וארוך טווח, דימום תת-ארוכת טווח.

זה צריך להיות מתאים באופן אידיאלי לזיהוי פוטנציאלי של מטרות חדשות, עבור מחקרים על אסטרטגיות טיפוליות יעילות נגד דימום תת-ארקנואידים הקשורים סיבוכים.