אלקטרואנצפלוגרמה וידאו רציפה במהלך היפוקסיה-איסכמיה בעכברים יילודים

אנצפלופתיה איסכמית היפוקסית היא הגורם השכיח ביותר להתקפי יילודים. מודל עכבר זה של התקפים איסכמיים היפוקסיים ואלקטרואנצפלוגרפיה רציפה של וידאו או EEG יכול לעזור לקדם את ההבנה והאפיון שלנו של התקפי יילודים. טכניקה זו מקלה על רכישת הקלטות אלקטרואנצפלוגרפיה באיכות גבוהה במודל פגיעה בילודים ויכולה לסייע במחקרים עתידיים של מנגנוני התקפי יילודים, תוצאות ובדיקות טיפוליות.

מי שידגים את ההליך יהיה פראווין וואגלי. מומחה מעבדה מהמעבדה שלי. לניתוח השתלת אלקטרודות.

לאחר אישור חוסר תגובה לרפלקס כאב בעכבר מורדם ביום התשיעי לאחר הלידה, הנח את העכבר בשלב סטריאוטקסי עם חרוט אף והשתמש בצד האחורי של מוט האוזן כדי להחזיק את הראש יציב. עקר את אזור החתך בגולגולת עם שלושה קרצוף בטאין ואתנול 70% לסירוגין והשתמש בווילון מעוטר כדי לכסות את העכבר תוך שמירה על אזור החתך גלוי. פתחו את הקרקפת האחורית הקדמית מעט מעל העיניים, והסיגו כחצי סנטימטר מהעור.

מקם מחדש את הראש על הבמה הסטריאוטקסית כך שהעור ימשוך החוצה כדי לחשוף את הגולגולת, והשתמש בצמר גפן כדי למרוח מי חמצן. השתמש בלהב אזמל כדי לגרד בזהירות את הגולגולת. ומרחו טיפת דבק של כ -50 מיקרוליטר על העצם.

השתמש באפליקטור כדי לפזר את הדבק על הגולגולת ולהניח את הדבק מתחת לאור אולטרה סגול למשך 40 שניות. כאשר הדבק התייצב, מדוד את הקואורדינטות באמצעות הברגמה החשופה כהפניה. והשתמש במחט בגודל 32 כדי ליצור חורי אלקטרודות דו-צדדיים באזור CA1 של ההיפוקמפוס, דו-צדדית בקליפת המוח הקודקודית ובמוח הקטן.

נקה את הדם מפני השטח של הגולגולת והשתמש בזרוע הסטריאוטקסית כדי להוריד את האלקטרודות המחוברות למחבר השקע הנשי לתוך המוח. השתל כל אלקטרודה במוח וקבע את האלקטרודות במקומן עם אקריליק דנטלי. הדביקו את האוזניות לגולגולת בעזרת אקריליק דנטלי נוסף.

הזריק תת עורי חמישה מיליגרם לק"ג קטופרופן לכל גור. כאשר כל האלקטרודות מאובטחות לפחות במחצית מההמלטה, החזירו את הגורים לאם. 24 שעות לאחר השתלת האלקטרודות, הנח כל בעל חיים בתא פרספקס בהתאמה אישית של 37 מעלות צלזיוס להקלטת EEG והשתמש בכבל מגבר תפעולי גמיש בהתאמה אישית כדי לחבר את הגורים למערכת ניטור EEG וידאו.

השתמש במגבר דיפרנציאלי רב-ערוצי כדי לבצע דיגיטציה של נתוני ה-EEG ב-1000 הרץ עם הגבר של קילו אחד ולסקור את אות ה-EEG בתוכנת ניתוח מתאימה. לאחר מכן רשום EEG בסיסי לפני הפציעה למשך 30 דקות, לפני ניתוק החיות להליך ליטיגציה של עורק הצוואר. לאחר רישום נתוני ה-EEG הבסיסיים, יש לעקר את העור בין הלסת התחתונה לעצם הבריח בצד שמאל של הצוואר עם בטאין ואתנול כפי שהודגם.

ולעשות חתך של כסנטימטר בצד שמאל של הצוואר. הניחו את הגור מתחת למיקרוסקופ חיתוך ומשכו בזהירות את הרקמה והעור התת עורי כדי לחשוף את עורק הצוואר. הניחו חתיכה של חמישה סנטימטרים של תפר משי סטרילי מתחת לעורק.

זהה את עצב הנרתיק והפריד בעדינות והחזיר את העצב מהעורק. תמרן את התפר כך שיהיה רק מתחת לעורק. לאחר זיהוי עצב הנרתיק, יש להפריד בעדינות ולהחזיר את העצב מהעורק ולהשתמש במלקחיים זעירים כדי להשחיל חתיכת תפר משי סטרילי באורך חמישה סנטימטרים מתחת לעורק.

קושרים תפר מסוקס כפול סביב העורק כדי לחסום את הזרימה ולחתוך את התפר העודף. החלף את הרקמה התת עורית והעור מעל העורק החשוף והשתמש ב-Vetbond כדי לאטום את החתך. לאחר מכן החזר את החיה לניטור EEG רציף בתא בטמפרטורת החדר המונח על מזרן מחמם ובצע בדיקות טמפרטורת אינפרא אדום נקודתיות של טמפרטורת הליבה של הגור כדי להימנע מפתיחת החדר.

לאחר שאפשרתם לגורים להתאושש במשך שעה אחת עם חלק רציף של ניטור חמצן מעורר השראה, שטפו את התא עם 60 ליטר לדקה של 100% חנקן ו-0.415 ליטר לדקה של 100% חמצן. ברגע שריווי החמצן בתא מגיע ל-12%, הפחת את זרימת החנקן ל-10 ליטר לדקה תוך שמירה על זרימת החמצן ללא שינוי. בצע התאמות קטנות לפי הצורך, שמור על חלק החמצן בהשראה על 8% למשך 45 דקות.

לאחר 45 דקות של חשיפה להיפוקסיה, החזירו את חלק החמצן הנשאב ל-21% ואפשרו לגורים להתאושש בתא עם ניטור EEG למשך שעתיים. בתום תקופת ההקלטה, נתקו את העכברים ממערכת ה-EEG והחזירו את הגורים לאם. הקלטות EEG של וידאו מאפשרות לתאם ממצאים אלקטרוגרפיים להתנהגות בווידאו.

רוב האירועים שנצפו במודל זה כוללים התנהגויות חד צדדיות או מעורבות. במהלך התקופה ההיפוקסית, תת-קבוצה של עכברים מציגה בדרך כלל פעילות התקפים לא כפייתית, שבמהלכה הגורים חסרי תנועה עם פעילות התקפים מתמשכת ב-EEG. בניתוח זה, הפעילות הבסיסית הייתה דומה לרקע שתואר קודם לכן בגורי עכברים P 10.

לאחר התדיינות משפטית ולפני תחילת ההיפוקסיה, תת-קבוצה של עכברים הפגינו התקפים עוויתיים. בעקבות השראת היפוקסיה, משרעת הרקע על ה-EEG הצטמצמה. והוצגו התפרצויות לסירוגין של פריקות גלי ספייק, ואחריהם דיכוי.

העכברים הפגינו התקפים אלקטרוגרפיים שהגיחו מרקע מודחק כפריקות גלי ספייק קצביות שהתקדמו להיות מורכבות ותכופות יותר עם גלי ספייק פוליס. במהלך היפוקסיה, ניתוח ספקטרוגרמה של כוח בולט באסימטריות בין ההמיספרה האיסכמית והנגדית. ההמיספרה האיסכמית מציגה דפוס דיכוי פרץ, וחצי הכדור הנגדי מציג רקע מודחק.

במהלך חמצון מחדש והתאוששות, תת-קבוצה של עכברים ממשיכה לסבול מהתקפים במהלך שארית תקופת הרישום. רקע ה-EEG מדוכא בהשוואה לנקודת ההתחלה לאחר היפוקסיה עם התאוששות הדרגתית שנצפתה במהלך תקופת הרישום שלאחר ההיפוקסיה. כאשר עובדים עם גורים יילודים, דיוק הוא המפתח.

בנוסף, יש להקדיש תשומת לב מיוחדת להחזרת הגורים לאם בקבוצות לאחר ההליכים הכירורגיים. ניתן להשתמש באלקטרואנצפלוגרפיה בווידאו בגורים יילודים בשילוב עם היסטופתולוגיה, הדמיה והתנהגות כדי לבחון את ההשפעה של התקפי יילודים על ניתוח פציעה ותוצאות התנהגותיות.