Name: שיטת זיהוי כמותית למיקרו-רנא בכליה של מודל עכבר פגיעה כלייתית איסכמית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: למד שיטת זיהוי כמותית למיקרו-רנ"א בכליות עכברים עם פגיעה כלייתית איסכמית באמצעות PCR בזמן אמת. פרוטוקול זה מאפשר זיהוי ביומרקרים לדיאגנוסטיקה וטיפול בפגיעה כלייתית חריפה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kelly, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+renal+failure%3A+much+more+than+a+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Seminas+in+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Acute renal failure: much more than a kidney disease.</a> Seminas in Nephrology. 26 (2), 105-113 (2006).</li>
<li>Saikumar, J., Ramachandran, K., Vaidya, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+micromarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Noninvasive micromarkers.</a> Clinical Chemistry. 60 (9), 1158-1173 (2014).</li>
<li>Beermann, J., Piccoli, M. T., Viereck, J., Thum, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-coding+RNAs+in+Development+and+Disease%3A+Background%2C+Mechanisms%2C+and+Therapeutic+Approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Non-coding RNAs in Development and Disease: Background, Mechanisms, and Therapeutic Approaches.</a> Physiological Reviews. 96 (4), 1297-1325 (2016).</li>
<li>Yang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+and+validation+of+extracellular%2Fcirculating+microRNAs+during+idiopathic+pulmonary+fibrosis+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Discovery and validation of extracellular/circulating microRNAs during idiopathic pulmonary fibrosis disease progression.</a> Gene. 562 (1), 138-144 (2015).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+miR-126+is+a+potential+biomarker+to+predict+the+onset+of+type+2+diabetes+mellitus+in+susceptible+individuals%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Circulating miR-126 is a potential biomarker to predict the onset of type 2 diabetes mellitus in susceptible individuals.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 463 (1-2), 60-63 (2015).</li>
<li>Zhong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-21+is+a+key+therapeutic+target+for+renal+injury+in+a+mouse+model+of+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">miR-21 is a key therapeutic target for renal injury in a mouse model of type 2 diabetes.</a> Diabetologia. 56 (3), 663-674 (2013).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+urinary+cell-free+microRNA-214+as+a+diagnostic+and+prognostic+biomarker+in+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downregulation of urinary cell-free microRNA-214 as a diagnostic and prognostic biomarker in bladder cancer.</a> Journal of Surgical Oncology. 111 (8), 992-999 (2015).</li>
<li>Morishita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+expression+profiling+in+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Research%3A+The+Journal+of+Laboratory+and+Clinial+Medicine%22%5BJournal%5D)">MicroRNA expression profiling in peritoneal fibrosis.</a> Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinial Medicine. 169, 47-66 (2016).</li>
<li>Morse, S. M., Shaw, G., Larner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+mRNA+and+protein+extraction+from+the+same+experimental+sample+using+a+commercially+available+column-based+RNA+preparation+kit%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Concurrent mRNA and protein extraction from the same experimental sample using a commercially available column-based RNA preparation kit.</a> BioTechniques. 40 (1), 54-58 (2006).</li>
<li>Mestdagh, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+quantitative+miRNA+expression+platforms+in+the+microRNA+quality+control+%28miRQC%29+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Evaluation of quantitative miRNA expression platforms in the microRNA quality control (miRQC) study.</a> Nature Methods. 11 (8), 809-815 (2014).</li>
<li>Bustin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MIQE+guidelines%3A+minimum+information+for+publication+of+quantitative+real-time+PCR+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments.</a> Clinical Chemistry. 55 (4), 611-622 (2009).</li>
<li>Jonas, S., Izaurralde, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+molecular+understanding+of+microRNA-mediated+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Towards a molecular understanding of microRNA-mediated gene silencing.</a> Nature Reviews. Genetics. 16 (7), 421-433 (2015).</li>
<li>Ichii, O., Horino, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs+associated+with+the+development+of+kidney+diseases+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs associated with the development of kidney diseases in humans and animals.</a> Journal of Toxicologic Pathology. 31 (1), 23-34 (2018).</li>
<li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+of+miRNA-17-5p%2C+miRNA-21+and+miRNA-106a+level+during+rat+kidney+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Changes of miRNA-17-5p, miRNA-21 and miRNA-106a level during rat kidney ischemia-reperfusion injury.</a> Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 95 (19), 1488-1492 (2015).</li>
<li>Saikumar, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression%2C+circulation%2C+and+excretion+profile+of+microRNA-21%2C+-155%2C+and+-18a+following+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+Sciences%3A+an+Official+Journal+of+the+Society+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Expression, circulation, and excretion profile of microRNA-21, -155, and -18a following acute kidney injury.</a> Toxicological Sciences: an Official Journal of the Society of Toxicology. 129 (2), 256-267 (2012).</li>
<li>Li, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-21+in+the+pathogenesis+of+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+%26+Cell%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-21 in the pathogenesis of acute kidney injury.</a> Protein & Cell. 4 (11), 813-819 (2013).</li>
<li>Zhou, J., Chen, H., Fan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+the+expression+profile+of+non-coding+RNAs+involved+in+ischemia%2Freperfusion-induced+acute+kidney+injury+in+mice+using+RNA+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of the expression profile of non-coding RNAs involved in ischemia/reperfusion-induced acute kidney injury in mice using RNA sequencing.</a> Oncotarget. 8 (59), 100196-100215 (2017).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+expression+profile+by+next-generation+sequencing+in+a+novel+rat+model+of+contrast-induced+acute+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">MicroRNA expression profile by next-generation sequencing in a novel rat model of contrast-induced acute kidney injury.</a> Annals of Translational Medicine. 7 (8), 178(2019).</li>
<li>Colbert, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model-specific+role+of+microRNA-223+as+a+mediator+of+kidney+injury+during+experimental+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Renal+Physiology%22%5BJournal%5D)">A model-specific role of microRNA-223 as a mediator of kidney injury during experimental sepsis.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 313 (2), 553-559 (2017).</li>
<li>Delbridge, M. S., Shrestha, B. M., Raftery, A. T., El Nahas, A. M., Haylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+body+temperature+in+a+rat+model+of+renal+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">The effect of body temperature in a rat model of renal ischemia-reperfusion injury.</a> Transplantation Proceedings. 39 (10), 2983-2985 (2007).</li>
<li>Dallas, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+levels+assessed+by+oligonucleotide+microarray+analysis+and+quantitative+real-time+RT-PCR+--+how+well+do+they+correlate%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Gene expression levels assessed by oligonucleotide microarray analysis and quantitative real-time RT-PCR -- how well do they correlate.</a> BMC Genomics. 6, 59(2005).</li>
<li>Rockett, J. C., Hellmann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confirming+microarray+data--is+it+really+necessary%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics%22%5BJournal%5D)">Confirming microarray data--is it really necessary.</a> Genomics. 83 (4), 541-549 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>פינצטה מחודדת עם קצה כפוף ללא וו</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>MA-47</td><td></td></tr><tr><td>מאגר RLT</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td>מאגר כביסה 1</td></tr><tr><td>מאגר כביסה RWT</td><td>Qiagen</td><td>1067933</td><td>2</td></tr><tr><td>עכברי C57B6</td><td>SLC</td><td>לא להקצות</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עם שיניים</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>MA-49</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים ללא שיניים</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>MA-48-1</td><td></td></tr><tr><td>קליפים המוסטטיים</td><td>Natsume Seisakusho</td><td>KN&minus; 353</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp אופטי 96 באר צלחת תגובה עבור qRT-PCR</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>4316813</td><td>96 באר צלחת תגובה</td></tr><tr><td>מיקרו אמפ סרט דבק אופטי</td><td>תרמו פישר</td><td>4311971</td><td>מדעי סרט דבק לצלחת תגובה 96 באר</td></tr><tr><td>miRNA-132-3p פריימר</td><td>Qiagen</td><td>MS00003458</td><td>5'UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG</td></tr><tr><td>miRNA-17-5p פריימר</td><td>Qiagen</td><td>MS00029274</td><td>5'CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG</td></tr><tr><td>miRNA-18a-5p פריימר</td><td>Qiagen</td><td>MS00031514</td><td>5'UAAGGUGCAUCUAGCAGAUAG</td></tr><tr><td>miRNA-212-3p פריימר</td><td>Qiagen</td><td>MS00003815</td><td>5'UAACAGUCUCCAGUCACGGCC</td></tr><tr><td>miRNA-21a-5p פריימר</td><td>Qiagen</td><td>MS00009079</td><td>5'UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA</td></tr><tr><td>miRNA-223-3p פריימר</td><td>Qiagen</td><td>MS00003871</td><td>5'UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA</td></tr><tr><td>miRNA-574-5p פריימר</td><td>Qiagen</td><td>MS00043617</td><td>5'UGAGUGUGUGUGUGUGUGUGUGU</td></tr><tr><td>miRNeasy מיני ערכת</td><td>Qiagen</td><td>217004</td> עמוד <td>סיבוב מבוסס קרום סיליקה</td></tr><tr><td>miScript II RT ערכת</td><td>Qiagen</td><td>218161</td><td></td></tr><tr><td>miScript SYBR ערכת PCR ירוקה</td><td>Qiagen</td><td>218073</td><td></td></tr><tr><td>QIA מגרסה</td><td>Qiagen</td><td>79654</td><td>מערכת גריסה ביופולימר במיקרו צנטריפוגה ספין עמוד</td></tr><tr><td>QIAzol מגיב ליזה</td><td>Qiagen</td><td>79306</td><td>מגיב ליזה מבוסס פנול/גואנידין</td></tr><tr><td>QuantStudio 12K Flex Flex מערכת PCR בזמן אמת</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4472380</td><td>מכשיר PCR בזמן אמת</td></tr><tr><td>QuantStudio 12K Flex תוכנה גרסה 1.2.1.</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4472380</td><td>תוכנת מכשיר PCR בזמן אמת</td></tr><tr><td>RNU6-2 פריימר</td><td>Qiagen</td><td></td><td>MS00033740 מספריים כירורגיות לא נחשפו</td></tr><tr><td></td><td>Natsume Seisakusho</td><td>B-2</td><td></td></tr><tr><td>כלי דם קליפ אפליקציה</td><td>VITALITEC</td><td>1621420</td><td></td></tr></tbody></table>

שיטת זיהוי כמותית למיקרו-רנ"א בכליה של מודל עכבר פגיעה כלייתית איסכמית

A Quantitative Detection Method for MicroRNAs in the Kidney of an Ischemic Kidney Injury Mouse Model

כאן, פרופיל ביטוי ה-miRNA בעכברי AKI נחקר. פרופיל ביטוי ה-miRNA נחקר באיברים ורקמות שונות בעכברים. MiRNAs הם מווסתים חשובים לאחר שעתוק וכעת נחקרים בהרחבה באפיון של מגוון מחלות, כולל AKI. ל-MiRNAs יש פוטנציאל לסייע בהבהרת מצבים פתולוגיים ולהיות מיושמים לטיפול ב-AKI12. הגורמים העיקריים ל-AKI הם IRI, עלבון נפרוטוקסי ואלח דם. IRI של הכליה מהווה את אחד מגורמי הסיכון העיקריים להתפתחות AKI. דווח על miRNA רבים המעורבים ב-AKI13.
מחקר זה חקר miRNAs שמשתנים...

MicroRNAs (miRNAs) are involved in various disease states and are effective biomarkers for the early diagnosis of diseases and treatment in mice. However, ...

ביטוי שונה של מיקרו-רנ"א ב-AKI עשוי להיות שימושי לסמן ביולוגי ולטיפול. פרוטוקול זה פשוט ומשיג תוצאות קבועות בין מעבדות. IRI של הכליה מייצג את אחד מגורמי הסיכון העיקריים ל-AKI. כימות מיקרו-רנ"א שמשתנים על ידי IRI מוביל לאבחנה. מיקרו-רנ"א מטוהרים מדגימת כליה מוחלים על מערכת אחרת. עקוב בקפידה אחר היפותרמיה, לחות מעיים ועומק ההרדמה לאורך כל ההליך. הסיבה לכך היא שישנן טכניקות ידניות רבות שצריך להתרגל אליהן.[קריין] לאחר אישור חוסר תגובה לצביטה בבוהן, הנח את העכבר המורדם על משטח ניתוח מחומם במצב שכיבה. לאחר ביצוע חתך בטן בקו האמצע, השתמש בצמר גפן רטוב ב-PBS כדי לדחוף בעדינות את המעי לצד שמאל של חלל הבטן הנוסף כדי לחשוף את הכליה והשופכן הימני והשתמש במלקחיים זוויתיים כדי להרים את השופכן הימני. קשרו את השופכן בשני מקומות עם תפרים קלועים משי 4-0, והשאירו קשרים ארוכים יותר לתפר הקרוב יותר לכליה, וחתכו בין התפרים. החזיקו בזהירות את התפר שנותר, נתחו בבוטות את רקמת החיבור והשומן לאורך הכליה וזהו כלי דם שאינו עורקי הכליה או הוורידים המספקים דם לכליה הימנית. לקשור את כלי הדם, וכאשר הכליה הימנית נותקה מספיק, לקשור את וריד הכליה והעורק. בעזרת צמר גפן רטוב ב-PBS, דחפו בעדינות את המעי לכיוון הצד הימני של חלל הבטן הנוסף כדי לחשוף את הכליה השמאלית ולכסות את המעי בווילון לח. לאחר הכנת הכליה השמאלית כפי שהודגם, מהדק את עורק הכליה והווריד סנטימטר אחד מהכליה כדי לגרום לאיסכמיה של הכליה השמאלית. איסכמיה מוצלחת יכולה להיות מאושרת חזותית על ידי התכהות אחידה הדרגתית של רקמת הכליה. כאשר האיסכמיה מאומתת, החזר את רקמת המעי לחלל הבטן, הקפד להימנע מפיתול המעיים, וסגור ועטוף באופן זמני את עור הבטן. לאחר 25 עד 45 דקות, הסר את המהדק ואשר כי זרימת הדם וצבע הכליות משתפרים. לאחר אישור שהמעי אינו מעוות, יש להחדיר PBS תוך צפקי ולסגור את שריר הבטן והעור בשתי שכבות באמצעות תפרי ניילון 4-0. 24 שעות לאחר השראת פציעה איסכמית, פתח מחדש את חתך קו האמצע והשתמש במחט בגודל 27 כדי לאסוף את הדם מהווריד הנבוב התחתון. בצע חתך בקו האמצע בדופן החזה והכנס מחט בגודל 23 לחדר השמאלי. לאחר אישור זרימה חוזרת לתוך המחט, בצע חתך באונה הימנית של הכבד והזריק 20 מיליליטר PBS. הכבד ישתנה לאדום לוורוד, מה שמאשר שמספיק דם נוקז. השתמש במלקחיים ובמספריים כדי להסיר את הכליה השמאלית ולשטוף את הרקמה שנכרתה בכלי PBS. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להסיר את הפאשיה הכלייתית מבלי לייבש את הכליה וחתוך את הכליה לשניים לאורך קו האמצע האנכי. לטיהור מיקרו-RNA, הנח 30 מיליגרם מדגימת הכליה הקפואה לתוך הומוגנייזר זכוכית המכיל 700 מיקרוליטר של מגיב ליזה מבוסס פנילגואנידין על קרח וסובב לאט ושוב ושוב את העלי כדי להפוך את הדגימה להומוגניזציה מוחלטת. כאשר הרקמה נותקה לחלוטין, העבירו את הליזט ההומוגני למערכת גריסת הביופולימר בעמודת ספין מיקרו צנטריפוגה בצינור איסוף של שני מיליליטר ואספו את הדגימה לתחתית הצינור על ידי צנטריפוגה. העבירו את הליזאט לצינור מיקרו צנטריפוגה חדש המכיל 140 מיקרוליטר כלורופורם וערבבו את הצינור בהיפוך למשך 15 שניות כשהמכסה מהודק היטב. לאחר דגירה של שתיים עד שלוש דקות בטמפרטורת החדר, משקעים את הדגימה על ידי צנטריפוגה ומעבירים את הסופרנטנט לצינור מיקרו צנטריפוגה חדש המכיל פי 1.5 מנפח 100% אתנול מבלי להפריע לגלולה. מערבבים את הדגימה במשך חמש שניות על ידי מערבולת לפני העברת 700 מיקרוליטר מהדגימה לעמוד ספין מבוסס קרום סיליקה בצינור איסוף של שני מיליליטר. לאחר צנטריפוגה קצרה, השליכו את הזרימה ושטפו את הדגימה פעמיים עם 500 מיקרוליטר של מאגר כביסה 2 בעמודת סיבוב חדשה מבוססת קרום סיליקה לכל שטיפה כדי להסיר עקבות מלח. לאחר הכביסה השנייה, צנטריפוגה שוב את עמוד הסיבוב המבוסס על קרום סיליקה, ולאחר השלכת הזרימה, העבירו את העמודה לצינור איסוף חדש של 1.5 מיליליטר. הוסף 25 מיקרוליטר מים נטולי RNase לעמודה ודגר את הדגימה למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר לפני צנטריפוגה נוספת של הדגימה. לאחר מכן העבירו את האלויט המכיל מיקרו-רנ"א בנפח 25 מיקרוליטר לצינור מיקרו צנטריפוגה חדש. במחקר זה נחקרו שבעה מיקרו-רנ"א שהתבטאו בבני אדם שהיו מווסתים בכליות של עכברים עם פגיעה כלייתית חריפה. הרמות של שישה מהמיקרו-רנ"א נמצאו מוגברות באופן משמעותי בכליות של עכברים שנפגעו מאיסכמיה בהשוואה לאלו בעכברים מדומים באמצעות PCR כמותי בזמן אמת כפי שהודגם. רמות החנקן והקריאטינין בדם בסרום ונמק צינורי חריף היו גם הם מווסתים באופן משמעותי.הסמנים הביולוגיים לאבחון IRI וטיפול ספציפי ב-AKI נותרו לא ברורים. אני מקווה שמחקר המיקרו-רנ"א יתקדם ויתרום לאבחון ולטיפול ב-AKI.

a-quantitative-detection-method-for-micrornas-kidney-an-ischemic

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מאמר זה מתאר בפרוטוקול הכלאה באתר מותאם לגילוי colormetric ביטוי microRNA בסעיפי כליות קבועים פורמלין.

MicroRNA<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה לרקמות כליה פורמלין קבועה

מודל העכבר של פגיעה חוזרת באיסכמיה כלייתית המתואר כאן מורכב מכריתת כליה ימנית המספקת רקמת בקרה והידוק של פדיקל הכליה השמאלי כדי לגרום לאיסכמיה הגורמת לפגיעה כלייתית חריפה. מודל זה משתמש בגישת לפרוטומיה בקו האמצע כאשר כל השלבים מבוצעים באמצעות חתך אחד.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

פרוטוקול זה מתאר של הכליה מלא עבודה מעלה כי צריך להתבצע במודלים של העכבר של מחלת glomerular. השיטות מאפשרים ניתוח פונקציונלי, מבניים מכניסטית מפורט של הפונקציה glomerular, אשר ניתן להחיל על כל הדגמים העכבר של המחלה glomerular.

הערכה של תפקוד כליות במודלים של העכבר של מחלת Glomerular

אנו מתארים שיטה להערכת ביטוי microRNA בכליות של עכברים עם חסימה חד צדדית שופכה (UUO) על ידי תגובת שרשרת פולימראז תמלול הפוך כמותי. פרוטוקול זה מתאים לחקר פרופילי ביטוי microRNA של כליה בעכברים עם UUO ובהקשר של תנאים פתולוגיים אחרים.

הערכת PCR בזמן אמת כמותית של ביטויי microRNA בכליות עכבר עם חסימה חד צדדית שופך

מיקרו-רנ"א מעורבים בפתוגנזה של נפרופתיה מסוג IgA. פיתחנו שיטה אמינה לאיתור רמות ביטוי מיקרו-רנ"א בכליות של עכבר נפרופתיה מסוג IgA (עכברי HIGA). שיטה חדשה זו תקל על בדיקת מעורבות miRNA בנפרופתיה מסוג IgA.

זיהוי ביטוי מיקרו-רנ"א בכליות של אימונוגלובולין עכברים נפרופתיים

אנו מציגים שיטה להערכת ביטוי מיקרו-רנ"א בכליות ובסרום של עכברים עם פגיעה כלייתית תלוית גיל על ידי תגובת שרשרת פולימראז כמותית של שעתוק הפוך.

הערכת תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת של ביטוי מיקרו-רנ"א בכליות ובסרום של עכברים עם פגיעה כלייתית תלוית גיל

כאן, אנו מספקים חיקויי miRNA אקסוגניים מסונתזים באופן מלאכותי לכליה באמצעות הזרקת וריד זנב של וקטור לא ויראלי וננו-חלקיקי פוליאתילנימין במספר מודלים של עכברים למחלות כליות. זה הוביל לביטוי יתר משמעותי של miRNA המטרה בכליה, וכתוצאה מכך עיכוב התקדמות של מחלת כליות במספר מודלים של עכברים.

העברה של miRNA אקסוגני מסונתז באופן מלאכותי לחקות לכליה באמצעות ננו-חלקיקי פוליאתילנימין במספר מודלים של עכברים למחלות כליות

מאמר זה מציג מודל CKD איסכמי המשתמש ב-IRI כלייתי חד-צדדי עם נפרקטומיה נגדית שבוצעה יום לפני איסוף הדגימה; פרוטוקול זה מאפשר הערכה פונקציונלית מבוססת סרום, הישרדות גבוהה ופתולוגיה של CKD ניתנת לשחזור ב-28 ו-42 ימים, ומספק פלטפורמה גמישה למחקרים מכניים והתערבותיים.

מודל העכבר של מעבר ממחלת כליות חריפה לכרונית שנגרם מאיסכמיה כליתית/פגיעה ברפרפוזיה

מערכת הדמיית ניגודיות בלייזר עם נקודות שימשה למעקב אחר השינויים בזרימת הדם המיקרו-כלי דם בכליה במהלך איסכמיה-ריפרפוזיה חד-צדדית לאחר כריתת הכליה הימנית בעכברים.

פרפוזיה מיקרווסקולרית במעקב באמצעות הדמיית ניגודיות בלייזר ספקל במהלך פגיעת איסכמיה-רפרפוזיה בכליה בעכברים

השתלה של איים מבודדים הוצע להיות טיפול פוטנציאלי עבור סוכרת מסוג 1. כאן אנו מתארים שיטה לבודד איים מהעכבר pancreata ואת השתלת אותם למרחב subcapsular של הכליה.

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

למד שיטת זיהוי כמותית למיקרו-רנ"א בכליות עכברים עם פגיעה כלייתית איסכמית באמצעות PCR בזמן אמת. פרוטוקול זה מאפשר זיהוי ביומרקרים לדיאגנוסטיקה וטיפול בפגיעה כלייתית חריפה.

שיטת זיהוי כמותית למיקרו-רנ"א בכליה של מודל עכבר פגיעה כלייתית איסכמית

גלה סרטונים נוספים