מודל השפעה קליפת המוח מבוקרת פרה-קלינית עבור דימום טראומטי, חבלה ודלקת עצבית

דימום אינטרפרנכימלי ודלקת עצבית המלווה בחבלה מוחית עלולים לגרום לפגיעה מוחית משנית חמורה. פרוטוקול זה מפרט מודל השפעה קליפתית מבוקרת עכבר (CCI) המאפשר לחוקרים לחקור דימום, קונטוזיה ותגובות חיסוניות פוסט-טראומטיות ולחקור טיפולים פוטנציאליים.

ניתן להשתמש במודל זה כדי לחקור את הפתולוגיות הקשורות לחבלה מוחית, כולל דימום תוך גולגולתי, רעילות ברזל, מוות נוירונים, פגיעה אקסונלית, גירעון נוירולוגי והדלקת העצבית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לשלוט בקלות בחומרת הנזק המוחי על ידי מניפולציה של הפרמטרים הביוכימיים כמו מהירות ומוות הפגיעה במכשיר ה-CCI. הפגיעה בהתנפצות קליפת המוח המוקדית הנגרמת על ידי CCI ניתנת לשחזור מאוד.

טכניקה סטריאוטקטית נכונה והליך הגולגולת הם גורמים עיקריים ביצירת פגיעה מוחית יציבה וניתנת לשחזור הנגרמת על ידי CCI. באופן כללי, חוקר חדש בהליך יתקשה לייצב את העכבר על המסגרת הסטריוטקסית ולבצע את הגולגולת המתאימה. מי שתדגים את ההליך תהיה גב' ג'יה שואן לין, טכנאית מעבדה מהמעבדה שלי.

התחל באישור היעדר רפלקס צביטה בבוהן אצל החיה כדי להבטיח שהיא מורדמת כראוי. לגלח את ראש העכבר בעזרת קוצץ חשמלי בכיוון זנב עד רוסטרלי. אבל אל תחתוך את השפם.

הנח את העכבר על המסגרת הסטריאוטקסית והכנס בזהירות את מוטות האוזניים לתעלות האוזניים, וודא שראש העכבר מיוצב על ידי שני מוטות האוזניים באופן שווה. שמור על הרדמה ב-1 עד 2% איזופלורן למשך הניתוח. מרחו ג'לי נפט על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות במהלך הניתוח.

לאחר מכן השתמש בצמר גפן סטרילי כדי לחטא את הראש המגולח עם בטדין ואחריו 70% אתנול. יש לתת 100 מיקרוליטר של 0.25% Bupivacaine תת עורי עם מחט אינסולין בגודל 31, ולעסות בעדינות את מקום ההזרקה לספיגה טובה יותר. בצע חתך אורכי לאורך קו האמצע בקרקפת בעזרת אזמל או מספריים.

לאחר מכן השתמש בהמוסטט כדי למשוך את העור לצד ימין. הניחו לגולגולת החשופה להתייבש למשך דקה אחת. לאחר מכן נקה את כל שאריות הדם והרקמות על הגולגולת בעזרת צמר גפן סטרילי.

בדקו שראש החיה ישר במישור האופקי וזהו את ציוני הדרך האנטומיים, ברגמה ולמבדה, וסמנו את שני המיקומים בעיפרון. ודא שראש החיה מפולס בכיוון הרוסטרלי-זנב על ידי מדידת קואורדינטות Z הן של ברגמה והן של למבדה. השתמש באותו הליך כדי למקם את הראש אופקית.

השתמש במחט אינסולין בקוטר 31 כדי לזהות את אתר כריתת הקרניקטומיה. הגדר את מקור ה-XY לברגמה והזז את המחט לרוחב שלושה מילימטרים ימינה. סמן עמדה זו כאתר כריתת קרניקטומיה וצייר עיגול בקוטר ארבעה מילימטרים על הגולגולת בעזרת עיפרון.

חותכים לאורך העיגול המתאר בעיפרון בעזרת מקדחה מיקרו מהירה עם הטרפין ליצירת חור פתוח בקוטר ארבעה מילימטרים. הסר את דש העצם בעזרת פינצטה ואחסן אותו במי מלח קרים כקרח, רגילים. שטפו בעדינות את החור במי מלח לפני הפעלת לחץ על פני המוח כדי לעצור את הדימום.

במכשיר CCI, הגדר את קצה הפגיעה המעוגל בקוטר 2.5 מילימטר לזווית של 22.5 מעלות. אפס את קצה הפגיעה למשטח הדוראלי, והגדר את פרמטרי ההשפעה על תיבת הבקרה למהירות של ארבעה מטרים לשנייה ועומק עיוות של שני מילימטרים. משוך את קצה המתכת.

שחרר את הבוכנה כדי ליצור פגיעה במוח. לאחר מכן הניחו צמר גפן סטרילי על האזור הפגוע כדי לעצור את הדימום. החלף את דש העצם ואבטח אותו במלט דנטלי.

סגור את הקרקפת עם דבק רקמות. הנח את העכבר מתחת למנורת החום בכלוב התאוששות נקי עם מצעים עד להתאוששות מלאה. טכניקה סטריאוטקטית נכונה והליך כריתת קרניקטומיה הם גורמים עיקריים ביצירת פגיעה מוחית יציבה וניתנת לשחזור הנגרמת על ידי CCI.

הליך אידיאלי לכריתת קרניקטומיה יגרום לפגיעה היסטולוגית מינימלית במוח המנותח בדמה. שינויים בנזק מוחי ואובדן קורפוס קלוסום נצפו בימים 1, 3, 7 ו-28 לאחר CCI. בנוסף, ניוון מוח חד צדדי בצד החבלה נראה ביום 28 לאחר CCI.

דלקת עצבית התגלתה על ידי מיקרוגליה מופעלת חיובית ל-Iba1 והצטברות מקרופאגים סביב גבול אזור החבלה. ניתן היה לזהות את הדימום התוך-פרנכימלי גם על ידי צביעה חיובית ל-Ly76 מהיום הראשון עד השביעי לאחר CCI. תערובת של תאי דם אדומים עם מורפולוגיה של תאים קרועים ושלמים נצפתה ביום השביעי לאחר CCI, מה שמרמז על כך שה-RBCs עברו ליזה בשלב זה.

תופעה זו עולה בקנה אחד עם התצפית כי ניתן היה לזהות שקיעת ברזל ברזל באזור החבלה בין הימים השביעי ל-28 לאחר CCI. מיקרוגליה ומקרופאגים מופעלים נצפו בסטריאטום הרחק מאתר החבלה בין הימים השלישי ל-28 לאחר CCI, מה שמעיד על פגיעות בקורפוס קלוסום ופגיעות סטריאטליות. טכניקה זו סוללת את הדרכים לחוקרים לחקור עוד יותר אינטראקציה של דלקת עצבית הנגרמת על ידי דימום מוחי באמצעות הבנת התגובה של תאי החיסון, כגון מיקרוגליה, לאחר חבלה בדימום.