Name: הקלטות אלקטרוג בעכברים מונערים באמצעות הפניה II (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: למד פרוטוקול אלקטרוקרדיוגרם רגיש לעכברים קטנים, כולל נאונטים, לחקר קרדיולוגי ותרופתי. שיטה פשוטה, מהירה וזולה לסקר תרופות ושינויים גנטיים בחיות מעבדה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי תוכניות מחקר בסיסיות המדע המנוהלים על ידי הקרן הלאומית למחקר של קוריאה (NRF) (2015R1C1A2A01052419 ו 2018R1D1A1B07042484).

כל ההליכים בעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המקומית לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, קיונג הי אוניברסיטת (מספר רשיון: ח'ASP (SE)-18-108) ו-תאמו את ארה ב המכונים הלאומיים של מדריך בריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה.
1. בעלי חיים ניסיוניים
<ol><li>שמור את כל העכברים (39 עכברים, Balb/c, זכר, 7 \ u20129 שבועות בן) במתקן ללא פתוגן לפי המדריך לטיפול ולשימוש של חיות מעבדה.</li>
	<li>שמרו על העכברים על מחזור מהיר/כהה בטמפרטורה של 12 שעות, עם גישה חופשית למזון ולמים.</li>
</ol>2. הכנת הרדמה
הערה: tribromoethanol משמש על ידי שילובים קטמין ו isofלוריאן, על בסיס היציבות של קצב הלב ואת השגות של אקו קרדיוגרפיה ב tribromoethanol-מורדם בעכברים1,5,6
<ol><li>הפוך פתרון מניות של 2, 2, 2-tribromoethanol בריכוז של 1 גרם לאלכוהול ניטריט שלישוני 1. חם ב 40 \ u201245 ° c עבור 24 שעות ביממה חנות ב 4 ° c עבור 12 חודשים.</li>
	<li>עבור פתרון העבודה, לדלל 0.5 mL של פתרון מניות 19.5 mL של תמיסת מלח (0.9% הנאל) ל 25 מ"ג/mL. חמים ב-40 \ u201245 ° c במשך 1 h. חנות ב 4 ° צ' עבור 1 חודש.</li>
</ol>3. התקנת מערכת א. א.
<ol><li>הקפד להגדיר את המערכת כך שאין רעש או רטט בתוך 2 מ ' מאז אותות אק ג בעכבר רגישים לרעש ותנועה סביבתיים.</li>
	<li>הכן את התקנת החומרה: מערכת רכישת נתונים, מגבר ביולוגי ומחשב המותקן עם תוכנה לניתוח נתוני א. א.<ol>
<li>חבר את מערכת רכישת הנתונים לרשת החשמל (AC) באמצעות כבל החשמל.</li>
		<li>חבר את מערכת רכישת הנתונים למחשב באמצעות כבל USB.</li>
		<li>חבר את פלט האות בלוח האחורי של מגבר הביו לקלט אנלוגי בלוח הקדמי של מערכת רכישת הנתונים באמצעות כבל.</li>
		<li>חבר את הפלט I2c של מערכת רכישת נתונים לכניסת i2c של מגבר ביולוגי באמצעות כבל i2c.</li>
		<li>חבר את כבל מגבר ביולוגי תלת-מוביל לשקע הקלט בן 6 הפינים בלוח הקדמי של מגבר הביו.</li>
		<li>הפעל את מערכת רכישת הנתונים באמצעות המתג שבלוח האחורי. הערה: בקצרה, האותות מוגברים באמצעות מגבר ביולוגי ונרשמים באמצעות מערכת ממוחשבת לרכישת נתונים וניתוח באמצעות הגדרות הערוץ הבא: קצב דגימה של 2 קאראט/s, טווח של 20 mV והגדרת מסנן של 200 Hz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>פתח את תוכנת הניתוח והגדר אותה לרכישת נתוני אק ג.<ol>
<li>עבור לתוכנית ההתקנה | הגדרות הערוץ. הגדר את קצב הדגימה ל-2 ק/s. הגדר את הטווח ל-20 mV. הגדר את מגבר הקלט ל-200 Hz של מעבר נמוך.</li>
		<li>עבור לניתוח א | . הגדרותאק ג בחר "עכבר" בהגדרות הקבועות מראש של איתור וניתוח.</li>
		<li>בחלונית ' חישוב ממוצע ', בחרו לשרשר N (לדוגמה, 4 פעימות או 60 s) מחזורי לב רצופים לאות ממוצע יחיד עבור חישוב ממוצע של תצוגה ותצוגת טבלה.</li>
		<li>בחלונית QTc, בחר בשיטת "בזלת", המוגדרת כערך מתוקן לקצב הלב של מרווח QT: QTc = QT/(RR/100)0.5, RR מרווח = 60/פעימות לב7.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. מדידת אק ג
<ol><li>הניחו עכבר בקנה מידה מדויק והקליטו את משקלו.</li>
	<li>לגרום הרדמה בעכבר על ידי הזרקת הצפק (כיתה) הזרקה של פתרון עובד של triרומטוזיס (18 מ ל של פתרון עבודה למשקל הגוף ק"ג (b.w.)).</li>
	<li>מניחים עכבר מורדם במצב פרקדן. ודא שהעכבר מורדם לחלוטין (פחות מ-2 דקות).</li>
	<li>הכנס את האלקטרודות עם מחטים אקופונקטורה תת-עורי לימין ושמאל forelimbs שמאל על פי התוכנית המובילה השנייה ג ' אק ולתקן אותם עם קלטת (איור 1). ודא כי העומק והמיקום של האלקטרודות המווספת עקביים במהלך הניסויים.</li>
	<li>חבר את הקצוות האחרים של האלקטרודות על-ידי לחיצה עליהם לשלושת מחברי ההצמדה בקצה השני של חוטי העופרת של כבל מגבר ביולוגי תלת-מוביל.</li>
	<li>הכנס תרופות (כלפי) 3 דקות לאחר העברת ההרדמה (איור 2).</li>
	<li>התחל להקליט את ה -10 דקות לאחר הזרקת הרדמה. לאחר השלמת ההקלטה, השתמש בנתוני ה-א מ-12 עד 17 דקות לאחר הזרקת הרדמה לצורך ניתוח.</li>
	<li>בסוף פגישת ההקלטה של א. א., הסר בזהירות את האלקטרודות.</li>
</ol>5. בדיקת נתוני א
<ol><li>עבור לניתוח א | חישוב ממוצע של תצוגה ולהבטיח שהתוכנה תזהה כראוי את ההתחלה והסיום של גל ה-P, מתחם QRS ו-T בפעימות בודדות. במידת הצורך, תיקון ידני של גלי ומרווחי זמן אלה אפשרי על-ידי הזזת סמנים שאינם במקומם למיקומים המתאימים. הערה: כפי שמתואר באיור 3A, מרווח יחסי הציבור משתרע על תחילתה של גל ה-P של מתחם ה-qrs (החסר ברובו גל Q בעכבר). המשך QRS משתרע מתחילתה של גל Q (בעיקר גל R ב-א עכבר) עד סוף הגל S. מרווח QT כוללת את התחלתה של גל Q (בעיקר גל R ב-א עכבר) עד סוף גל T. שימו לב למשך הזמן הקצר והיעדר גל Q ומקטע ST ב-אק ג ביחס ל-א. ק. האנושי8.</li>
	<li>עבור לניתוח א | תצוגת טבלה ובחירה בנתוני ה-א שזוהו כהלכה על-ידי בדיקת פעימות בודדות בחלון ' חישוב בממוצע תצוגה '. הערה: איור 3 מראה מספר דוגמאות של אותות העכבר בפועל. איור 3A מייצג אות רגיל מסוג פראי כי זוהה כראוי לגבי גל P, מורכבות qrs, ו T גל. מבחר ממוחשב של גלי PQRS יכול לגרום מוטעה שגוי, כגון באיור 3B אות רגיל סוג פראי כי מניעת התחלתה של הגל P. באיור 3C אות אק ג שעושה בלתי מבוקר את הקצה של מתחם qrs, והתוצאה היא אומדן יתר של משך qrs. באיור 3D אות אק ג שעושה בלתי מבוקר את הקצה של מתחם qrs, וכתוצאה מכך הערכה של מורכבות qrs בשל גל דו-משמעי ואיור 3d אות א עם גל בלתי מזוהים. ללא הוצאה לאור או תיקונים ידניים, ניתן להתגבר על מרווחי PQRS או להמעיט בערכו. הקפד לבחור את אותות ה-א שזוהו כראוי ואת האותות שאינם מפספסים את פסגות היעד. כתוצאה מכך, מקרים כאלה, כולל B, C, D, ו-E (איור 3), אינם נכללים בהערכת הפרמטרים של א. א. באופן מדויק.</li>
	<li>בחר את נתוני ה-א של הריבית בתצוגת טבלה והעתק/הדבק אותם לקובץ גיליון אלקטרוני.</li>
</ol>6. אנליזה סטטיסטית
<ol><li>בצע את הניתוח הסטטיסטי באמצעות תוכנית סטטיסטיקה. לנתח את הנתונים עם התנאים הניסיוניים עיוור. בצע מבחן t-Test של סטודנט, מאן-ויטני U-מבחן להשוואות 2 קבוצות. המספרים בכל אחד מהספרות מציינים את מספר העכברים המשמשים עבור כל קבוצה. דווח על התוצאות כממוצע ± SEM.</li>
	<li>שקול הבדלים עם p < 0.05 על ידי U-test כדי להיות משמעותי סטטיסטית: *, p < 0.05; * *, p < 0.01; ו * * *, p < 0.005 לעומת שולטת בהתאמה.</li>
</ol>

<ol><li>Ho, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+rate+and+electrocardiography+monitoring+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Heart rate and electrocardiography monitoring in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 1, 123-139 (2011).</li>
<li>Vatner, S. F., Takagi, G., Asai, K., Shannon, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+physiology+in+mice%3A+Conscious+measurements+and+effects+of+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Physiology+in+the+Genetically+Engineered+Mouse%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular physiology in mice: Conscious measurements and effects of anesthesia.</a> Cardiovascular Physiology in the Genetically Engineered Mouse. , 257-275 (2002).</li>
<li>Cesarovic, N., Jirkof, P., Rettich, A., Arras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+radiotelemetry+transmitters+yielding+data+on+ecg%2C+heart+rate%2C+core+body+temperature+and+activity+in+free-moving+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Implantation of radiotelemetry transmitters yielding data on ecg, heart rate, core body temperature and activity in free-moving laboratory mice.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (57), (2011).</li>
<li>Chu, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+non-invasively+recording+electrocardiograms+in+conscious+mice%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Physiology%22%5BJournal%5D)">Method for non-invasively recording electrocardiograms in conscious mice.</a> BMC Physiology. 1, 6(2001).</li>
<li>Kim, M. J., Lim, J. E., Oh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+non-invasive+method+for+electrocardiogram+recording+in+mouse+using+lead+ii%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Science+Letters%22%5BJournal%5D)">Validation of non-invasive method for electrocardiogram recording in mouse using lead ii.</a> Biomedical Science Letters. 21, 135-143 (2015).</li>
<li>Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthesia+on+cardiac+function+during+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 282 (6), 2134-2140 (2002).</li>
<li>Mitchell, G. F., Jeron, A., Koren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+heart+rate+and+q-t+interval+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of heart rate and q-t interval in the conscious mouse.</a> The American Journal of Physiology. 274 (3), 747-751 (1998).</li>
<li>Farraj, A. K., Hazari, M. S., Cascio, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+the+small+rodent+electrocardiogram+in+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicological+sciences+%3A+an+official+journal+of+the+Society+of+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The utility of the small rodent electrocardiogram in toxicology.</a> Toxicological sciences : an official journal of the Society of Toxicology. 121 (1), 11-30 (2011).</li>
<li>Gehrmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+parasympathetic+heart+rate+control+in+mice+with+a+reduction+of+functional+g+protein+betagamma-subunits%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Impaired parasympathetic heart rate control in mice with a reduction of functional g protein betagamma-subunits.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 282 (2), 445-456 (2002).</li>
<li>Chu, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrocardiographic+findings+in+mdx+mice%3A+A+cardiac+phenotype+of+duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+%26+Nerve%22%5BJournal%5D)">Electrocardiographic findings in mdx mice: A cardiac phenotype of duchenne muscular dystrophy.</a> Muscle & Nerve. 26 (4), 513-519 (2002).</li>
<li>Merentie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+ecg+findings+in+aging%2C+with+conduction+system+affecting+drugs+and+in+cardiac+pathologies%3A+Development+and+validation+of+ecg+analysis+algorithm+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Mouse ecg findings in aging, with conduction system affecting drugs and in cardiac pathologies: Development and validation of ecg analysis algorithm in mice.</a> Physiological Reports. 3 (12), (2015).</li>
<li>Calvillo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propranolol+prevents+life-threatening+arrhythmias+in+lqt3+transgenic+mice%3A+Implications+for+the+clinical+management+of+lqt3+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm+%3A+the+Official+Journal+of+the+Heart+Rhythm+Society%22%5BJournal%5D)">Propranolol prevents life-threatening arrhythmias in lqt3 transgenic mice: Implications for the clinical management of lqt3 patients.</a> Heart Rhythm : the Official Journal of the Heart Rhythm Society. 11 (1), 126-132 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+atrial+arrhythmogenicity+and+altered+ca%282%2B%29+homeostasis+in+murine+ryr2-p2328s+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Acute atrial arrhythmogenicity and altered ca(2+) homeostasis in murine ryr2-p2328s hearts.</a> Cardiovascular Research. 89 (4), 794-804 (2011).</li>
<li>Kmecova, J., Klimas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+rate+correction+of+the+qt+duration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Heart rate correction of the qt duration in rats.</a> European Journal of Pharmacology. 641 (2-3), 187-192 (2010).</li>
<li>Kim, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Garem1+regulates+the+pr+interval+on+electrocardiograms%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">Garem1 regulates the pr interval on electrocardiograms.</a> Journal of Human Genetics. 63 (3), 297-307 (2018).</li>
<li>Nam, J. M., Lim, J. E., Ha, T. W., Oh, B., Kang, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac-specific+inactivation+of+prdm16+effects+cardiac+conduction+abnormalities+and+cardiomyopathy-associated+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Cardiac-specific inactivation of prdm16 effects cardiac conduction abnormalities and cardiomyopathy-associated phenotypes.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 318 (4), 764-777 (2020).</li>
<li>Knollmann, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoproterenol+exacerbates+a+long+qt+phenotype+in+kcnq1-deficient+neonatal+mice%3A+Possible+roles+for+human-like+kcnq1+isoform+1+and+slow+delayed+rectifier+k%2B+current%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Isoproterenol exacerbates a long qt phenotype in kcnq1-deficient neonatal mice: Possible roles for human-like kcnq1 isoform 1 and slow delayed rectifier k+ current.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 310 (1), 311-318 (2004).</li>
</ol>

אין קונפליקטים של עניין, פיננסיים או אחרים, מוצהר על ידי המחברים.

קיימים מספר שלבים קריטיים בפרוטוקול. הסביבה המקיפה צריכה להיות חופשית מרעש ורטט. יש להוסיף את אלקטרודות ה-אק ע מתחת לעור באופן עקבי ובעקביות, ששלב הכניסה דורש ניסויים ראשוניים עד שהחוקר מנוסה באופן טכני. עוד, הרדמה צריך להיות מוכן ומאוחסן כראוי ומשמש במינון הנכון. לבסוף, הגלים של PQRS צריכים להיות ממוקמים כראוי בפעימות אק ג בודדים בחלון ממוצע תצוגה.
המחקרים שלנו כללו בדיקות של סמים. עם זאת, אם משמיטים בדיקות פרמקולוגית, השלב 4.7 יכול להיות משתנה על-ידי התחלת ההקלטה 5 דקות לאחר הזרקת ההרדמה, ונ...

האלקטרוקרדיולוגית, מבחן המודד את הפעילות החשמלית של פעימות הלב, הוא כלי רב ערך להערכת מערכת ההולכה הלב. הפרמטרים הנמדדים על-ידי ה-אק ג כוללים קצב לב, מרווח זמן יחסי ציבור, משך QRS, ו-QT מרווח. בקצרה, מרווח יחסי ציבור תואם את הזמן הנדרש עבור דחף חשמלי לנוע מן הצומת פרפור באמצעות הצומת מלוח לסיבים Purkinje; QRS משך הוא הזמן של depolarization חדרית להתרחש דרך מערכת Purkinje ושריר הלב החדרית; ו-QT מרווח הוא משך הזמן של repolarization חדרית.
הקלטות אק ג בעכברים סייעו לחוקרים לבחון את תפקוד הלב ולקבוע את המנגנונים הפיסיולוגיים והפתופיזילוגיים של פנוטיפים לב, כגון הפרעה בקצב הלב, פרפור פרוזדורי, ואי ספיקת לב. רוב מחקר לב וכלי דם יש מחקרים מהונדסים גנטית מודלים העכבר. לעתים קרובות הוא מאתגר להשיג נתונים משמעותיים על הקלטות א מ עכברים קטנים כי כבר מניפולציות גנטית.
קיימות מספר שיטות לביצוע ECGs בעכברים1. מחקרים מראים כי הקלטות א בעלי חיים מודע מעדיפים על בעלי חיים מורדם כאשר הדבר אפשרי מאז השפעות ההרדמה על תפקוד הלב כבר מבוססת היטב2. שני פרוטוקולים שהקליטו את א. ג. בעכברים מודעים הם של הערה1. מערכת רדיוטלמטריה אק היא התקן הזהב לניטור מתמשך לטווח ארוך של א. ב. עכברים מודעים1,3. למרות הכוח שלהם להיות מוקלט במצב מודע, מדידות רדיוטלמטריה ביחד יש מספר מגבלות, כולל הוצאות גבוהות עבור ההתקנה ועל השתל, הדרישה של מפעיל מנוסה מאוד, תקופת ייצוב של מעל 1 שבוע, הצורך בעכברים גדולים (> 20 g), ורכישת רק קצה אחד של הקלטתא 1. מערכת אחרת המשתמשת אלקטרודות מוליך בגודל כפה מוטבע בפלטפורמה מאפשר הקלטות אק בעכברים מודעים ללא הרדמה או שתלים1,4. מערכת זו שאינה פולשנית היא שיטה חלופית במצבים בהם מערכות רדיוטלמטריה אינן זמינות מאז יש לו יתרונות רבים: אין דרישה של טיפול כירורגי, אין צורך של הרדמה, עלות נמוכה לכל עכבר (רק ההתקנה הראשונית היא יקרה), זמן קצר למדידה, ומחיר סביר של neonates1,4. החיסרון העיקרי של מערכת זו הוא כי הוא אינו מתאים ניטור לטווח ארוך מתמשך1.
כאן אנו מציגים עוד שיטה זולה, פשוטה ומהירה של הקלטה בעכברים המדמדגים ומדגימים את תוקפו ורגישותו על ידי ביצוע אק ג לאחר המצור האוטונומי/גירוי של מערכת ההולכה הלב. אנו מציעים את שיטת א. א. לסינון ההשפעות של סוכני תרופתי, שינויים גנטיים ודגמי מחלות בעכברים.

<table><tbody><tr><td>2,2,2-tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402-25G</td><td>חומרי הרדמה, Avertin</td></tr><tr><td>Animal</td><td>Japan SLC, Inc., שיזואוקה, יפן</td><td></td><td>Balb/c עכברים, זכר, בן 7-9 שבועות</td></tr><tr><td>אטרופין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A0123</td><td>אנטגוניסט פאראסימפתטי</td></tr><tr><td>BioAmp</td><td>AD Instruments, בלה ויסטה, אוסטרליה</td><td>מגבר ביולוגי</td><td>ML132</td></tr><tr><td>Carbachol</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C4382</td><td>אגוניסט פאראסימפתטי</td></tr><tr><td>אלקטרודות עם מחטי דיקור סיני</td><td>DongBang Acupuncture Inc., Sungnam, Korea</td><td>DB106</td><td>0.20 x 15 מ"מ</td></tr><tr><td>איזופרנלין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I2760</td><td>אגוניסט סימפתטי</td></tr><tr><td>LabChart 8</td><td>AD Instruments, Bella Vista, אוסטרליה</td><td></td><td>תוכנת ניתוח נתונים</td></tr><tr><td>מזון עכבר</td><td>LabDiet, סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב</td><td>5L79</td><td>דיאטת עכבר</td></tr><tr><td>PowerLab 2/28</td><td>AD Instruments, בלה ויסטה, אוסטרליה</td><td></td><td>מערכת רכישת נתונים</td></tr><tr><td>Propranolol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0884</td><td>אנטגוניסט סימפתטי</td></tr><tr><td>תוכנית סטטיסטיקה SPSS SPSS תוכנית סטטיסטיקה</td><td>SPSS</td><td>SPSS 25.0</td><td></td></tr></tbody></table>

הקלטות אלקטרוג בעכברים מונערים באמצעות הפניה ii

Electrocardiogram Recordings in Anesthetized Mice using Lead II

האלקטרוקרדיולוגית היא כלי רב ערך להערכת מערכת ההולכה הלב. מחקר בעלי חיים עזר ליצור מידע גנטי ותרופתי הרומן לגבי בדיקה חשמלית. עם זאת, הפיכת מדידות אלקטרוג בחיות קטנות בvivo, כגון עכברים, הייתה מאתגרת. למטרה זו, השתמשנו בשיטת הקלטה אלקטרולבית בעכברים מסוערים עם יתרונות רבים: זהו הליך פשוט מבחינה טכנית, הוא זול, יש זמן מדידה קצר, והוא במחיר סביר, אפילו בעכברים צעירים. למרות מגבלות השימוש בהרדמה, ניתן לבצע השוואות בין שליטה לקבוצות נסיוניות ברגישות מוגברת. התייחסו לעכברים עם אגוניסטים ואנטוניסטים של מערכת העצבים האוטונומית כדי לקבוע את תוקפו של פרוטוקול זה ולהשוות את התוצאות שלנו עם דוחות קודמים. פרוטוקול א. א שלנו זיהה שיעורי לב מוגברת ומרווחי QTc על הטיפול עם אטרופין, ירידה בשיעורי הלב ומרווחי QTc לאחר הטיפול carbachol, ושיעורי הלב גבוה יותר מרווחי QTc עם isoprenaline אבל לא לשים לב לשינוי בפרמטרים של א. א. בניהול של propranolol. תוצאות אלה נתמכות על-ידי דוחות קודמים, ומאשרים את האמינות של פרוטוקול זה. לפיכך, ניתן להשתמש בשיטה זו כגישת הקרנה להכנת מדידות אק ג שאחרת לא הייתה מנוסה עקב בעיות בעלות גבוהה ובקשיים טכניים.

ניסויים פרמקולוגיים
כדי לקבוע אם מידת ה-א פולשנית שלנו משקפת את השפעת האפנון האוטונומי על מערכת ההולכה הלב, עכברים רגילים של Balb/c היו מאותגרים עם אגוניסטים ואנטוניסטים של מערכת העצבים האוטונומית (ANS). אטרופין ו carbachol שימשו כדי להשפיע המצור האוטונומי הפאראסימפתטית וגירוי, בהתאמה, בעוד פרופראנולול ו isoprenaline היו מנוהלים לעורר המצור אוטונומית האוהדים, בהתאמה9.
קצב הלב עלה באופן משמעותי ב אטרופין-(p &lt; 0.05)...

אנו מציגים פרוטוקול א-א קל, זול, מהיר ובמחיר סביר בעכברים קטנים, וניתן לבצעו ברגישות מוגברת. אנו מציעים שיטה זו כגישה הקרנה עבור לימוד סוכני תרופתי, שינויים גנטיים, מודלים מחלות בעכברים.

הקלטות אלקטרוג בעכברים מונערים באמצעות הפניה II

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and ...

המשמעות של הפרוטוקול שלנו היא כי מדידת אלקטרוקרדיוגרמה יכולה להתבצע ברגישות רבה בעכבר קטן כי כבר מניפולציה גנטית או פרמקולוגית. הפרוטוקול הוא יתרון גם כך שהוא פשוט, מהיר, זול ורגיש. בנוסף, זה יכול להתבצע על עכברים קטנים, אפילו neonates.אנו מאמינים כי שיטה זו תתרום להבנת אזורים שלא נחקרו של הפרעות קצב באזור הלב וכלי הדם. הדגמת ההליך תהיה טה וונג הא מהמעבדה שלי. התחל על ידי פתיחת תוכנת הניתוח והגדרתה לרכישת נתוני א.ק.ג.עבור אל הגדרות התקנה וערוץ והגדר את קצב הדגימה ל- 2,000 דוגמאות לשניה. הגדר את הטווח ל-20 מילי-וולט ואת מגבר הקלט ל-200 הרץ של מעבר נמוך. לאחר מכן, עבור אל ניתוח א.ק.ג. והגדרות א.ק.ג. ולאחר מכן בחר עכבר בהגדרות הזיהוי והניתוח המוגדרות מראש.בלוח Averageing, בחר ל שרשור ומחזורי לב רצופים לאות ממוצע יחיד או לתצוגה ממוצעת ותצוגת טבלה. בחלונית QTc, בחר בשיטת Bazett, המוגדרת כערך תיקון הדובי של מרווח QT. מקם את העכבר בסולם הדיוק והקליט את משקלו.לאחר הבטחת כי העכבר הוא הרדמה כראוי להכניס אלקטרודות עם מחטי דיקור לתוך השיניים הימנית והשמאלית ואת hindlimb שמאל. ודא כי עומק אלקטרודה ומיקום עקביים לאורך כל הניסויים. חבר את הקצוות האחרים של האלקטרודות על ידי לחיצה עליהם לשלושת מחברי ההצמדה בקצה השני של חוטי העופרת של כבל שלושת המגברים הביולוגיים המובילים והזרק תרופות כשלוש דקות לאחר ההרדמה.10 דקות לאחר מתן הרדמה, להתחיל להקליט את הא.ק.ג. לאחר השלמת ההקלטה, השתמשו בנתונים של א.ק.ג בין 12 ל-17 דקות לאחר הזרקת הרדמה לניתוח. בסיום, הסר בזהירות את האלקטרודות.כדי לקבוע אם מדידת א.ק.ג לא פולשנית זו משקפת את השפעת האפנון האוטונומי על מערכת הולכת הלב, עכברי BALB/c רגילים אותגרו עם אגוניסטים ואנטגוניסטים של מערכת העצבים האוטונומית. בהשוואה לשליטה ברכב, קצב הלב עלה באופן משמעותי באטרופין ועכברים שטופלו איזופרנולין ונפלו עם קרבאכול. בנוסף, מרווח QTc עלה באטרופין ו isoprenaline טיפל בעכברים וירידה בעכברים שטופלו קרבכול.תצוגות תרשים מייצגות ותצוגות ממוצעות של אותות הא.ק.ג באטרופין, קרבכול ועכברים מטופלים ברכב מוצגים כאן. בעת ניסיון פרוטוקול זה, הדבר החשוב ביותר הוא להבטיח כי אלקטרודות א.ק.ג מוכנסים באופן מאובטח לאורך כל הניסוי. בצע מספר ניסויים ראשוניים עד שאותות הא.ק.ג. יציבים ועקביים.הפרסומים הקודמים שלנו עם עכברים אישרו וריאציות א.ק.ג. שדווחו במחקרים גנטיים בבני אדם, התומכים בתועלת של שיטה זו בתחומים מחקר לב וכלי דם כגון הפרעות קצב.

electrocardiogram-recordings-in-anesthetized-mice-using-lead-ii

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

גירוי חשמלי מתוכנת מספק את היכולת לקבוע תכונות ההולכה של הלב, ואת האפשרות להשפיע ולסיים הפרעות בקצב הלב באמצעות פרוטוקולים שונים לצעוד. באמצעות קטטר transvenous, הקלטות intracardiac electrogram ניתן להשיג אצל עכברים הבאים מתוכנת פרוטוקולים גירוי חשמלי לזהות מצעים arrhythmogenic.

גירוי חשמלי מתוכנת עכברים

אקו Transthoracic מציעה שיטה לא פולשנית להערכת תפקוד הלב בעכברים. שילוב של אולטראסאונד דופלר שיטות הדמיה ניתן להשתמש כדי להשיג מדידות ממדי של הלב ואת זרימת הדם intracardiac, אשר יחדיו מספקים הערכה של הסיסטולי והדיאסטולי לב וביצועים.

אקו Transthoracic ב עכברים

Telemetric א.ק.ג. התפתחה ככלי חיוני להערכת במודלים של בעלי חיים על הפרעות בקצב הלב או מוות קרדיאלי פתאומי. כאן, אנו מציגים מדריך בשלבים להקלטות telemetric א.ק.ג. עבור היישום לניטור ארוך טווח א.ק.ג. אמבולטורי בעכברים.

רישום א.ק.ג. אמבולטורי ב עכברים

סרטון זה מדגים הקלטה in vivo של פוטנציאל שדה מקומי (LFP) מאזורי M2 דו-צדדיים במוח העכבר. עכבר מורדם מאובטח ומוכן להליך. כדי להקליט LFPs, הכנס מיקרואלקטרודות לקואורדינטות המטרה של אזורי M2 הדו-צדדיים, האחראים על תנועות מוטוריות מורכבות.

רישום פוטנציאל שדה מקומי משתי ההמיספרות של מוח העכבר

מקור: Jensen, V. N., et al. מדידה חוזרת של פעילות שרירי הנשימה ואוורור במודלים של עכברים של מחלות עצב-שריר. J. Vis. Exp. (2017). סרטון זה מדגים את השיטה להקלטת אותות פלתיסמוגרפיה ואלקטרומיוגרפיה בו זמנית במודל עכבר ALS הנע בחופשיות. ההליך כולל שימוש באלקטרודות מושתלות ומשדר כדי ללכוד את פעילות השרירים, לצד תא פלתיסמוגרפיה לניטור דפוסי נשימה, כדי לחקור את תפקידם של שרירי העזר בעכבר ALS.

פלתיסמוגרפיה ורישום אלקטרומיוגרפיה בו זמנית במודל עכבר ALS

במהלך ניתוח איסכמיה/רפרפוזיה של שריר הלב בעכברים, מיקום נכון של הקשירה החוסמת מאושר בדרך כלל על ידי תצפית גלויה של חיוורון שריר הלב. כאן, שיטה לאישור אלקטרוקרדיוגרפי של איסכמיה ורפרפוזיה, להשלמת חיוורון שריר הלב שנצפה, מודגמת בעכברי C57Bl/6 זכרים.

אישור של שריר לב איסכמיה ופציעת reperfusion בעכברים באמצעות אלקטרוקרדיוגרפיה Pad Surface

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול כדי להקליט את המוח ואת הלב אותות ביו בעכברים באמצעות וידאו בו זמנית, אלקטרואנצפלוגרם (EEG) ולאחר אלקטרוקרדיוגרם (א). אנו מתארים גם שיטות כדי לנתח את הקלטות EEG-א וכתוצאה מכך התקפים, כוח ספקטרלי EEG, תפקוד הלב של השתנות קצב הלב.

סימולטני וידאו-EEG-אק ג ניטור כדי לזהות Neurocardiac בתפקוד במודלים של העכבר של אפילפסיה

כאן אנו מציגים פרוטוקול שלב אחר שלב לגישה חצי אוטומטית לניתוח נתוני אלקטרוקרדיוגרפיה ארוכת טווח (ECG) עבור פרמטרים בסיסיים של א.ק.ג. והפרעות קצב נפוצות. הנתונים מתקבלים על ידי משדרי טלמטריה מושתלים בעכברים חיים וערים ומנותחים באמצעות פונמה ומודולי הניתוח שלה.

ניתוח הקלטות אלקטרוקרדיוגרפיה ארוכות טווח לאיתור הפרעות קצב בעכברים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר אופטימיזציה של פרמטרים ניסיוניים בעת שימוש בקצב פרוזדורים טרנס-ווסגיאלי כדי להעריך רגישות לפרפור פרוזדורים בעכברים.

אופטימיזציה של קצב פרוזדורים טרנס-ווסגיאלי להערכת רגישות לפרפור פרוזדורים בעכברים

הפרוטוקול מתאר את המתודולוגיה של רישום חוץ-תאי בקליפת המוח המוטורית (MC) כדי לחשוף תכונות אלקטרופיזיולוגיות חוץ-תאיות בעכברים מודעים הנעים בחופשיות, כמו גם ניתוח נתונים של פוטנציאלי שדה מקומיים (LFPs) וקוצים, אשר שימושי להערכת הפעילות העצבית ברשת העומדת בבסיס התנהגויות מעניינות.

הקלטה חוץ-תאית רב-ערוצית בעכברים הנעים בחופשיות

למד פרוטוקול אלקטרוקרדיוגרם רגיש לעכברים קטנים, כולל נאונטים, לחקר קרדיולוגי ותרופתי. שיטה פשוטה, מהירה וזולה לסקר תרופות ושינויים גנטיים בחיות מעבדה.

הקלטות אלקטרוג בעכברים מונערים באמצעות הפניה II

גלה סרטונים נוספים