Name: בידוד פונקציונלי של יחידות מנוע יחיד של שריר גסטרו-קסטרונומיוס חולדה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-12-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 54 s
Description: למדו לבודד פונקציונלית יחידות מנוע בודדות בשריר הגסטרוקנמיוס התיכון של עכברוש באמצעות גירוי חשמלי. שיטה זו מאפשרת רישום כוח התכווצות ופוטנציאלי פעולה לחקר פיזיולוגיה עצבית-שרירית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מרכז המחקר הלאומי הפולני 2018/31/B/NZ7/01028.

כל ההליכים צריכים להיות מאושרים על ידי ועדת האתיקה המקומית ולדבוק בהנחיות האיחוד האירופי בנושא טיפול בבעלי חיים, כמו גם בחוק הלאום להגנה על בעלי חיים.
הערה: כל נסיוה המעורב בהליך זה חייב להיות מאומן בהליכים כירורגיים בסיסיים וחייב לקבל רישיון תקף לביצוע ניסויים בבעלי חיים.
1. הרדמה
<ol><li>להרדים את העכברוש עם הזרקת תוך-אפרטונל של נתרן פנטוברביטל (מנה ראשונית של 60מ"ג-ק"ג -1).</li>
	<li>לאחר כ-5 דקות, בדקו את עומק ההרדמה על-ידי צביטת האוזן או ההתכה עם מרטוטים קהים. עבור לשלבים הבאים של הפרוטוקול רק כאשר לא נצפתה פעולת רפלקס.</li>
	<li>במהלך הניתוח, לבדוק את פעולות רפלקס החיה כל 10-15 דקות ולהשלים הרדמה אם החיה מגיבה צביטה עם תנועה (בדרך כלל, 10 מג·ק"ג -1·h-1 נתרן פנטוברביטל, IP).</li>
</ol>2. כירורגיה
<ol><li>הכן את החיה להליך הניתוח על ידי גילוח הפרווה מעל הגב השמאלי מהעקב עד הירך (החלק הראשון, בידוד שרירים ועצבים), האחורי הימני מהעקב עד הירך (החלק השני, אלקטרודה הקרקע), ואת הישבן מהזנב לחלקי בית החזה (החלק השלישי, כריתת למינקט). חיטוי אינו נחוץ בשל אופיו החריף של הניסוי.<ol>
<li>מניחים את העכברוש על בטנו על משטח חימום (37°C ± 1°C.</li>
	</ol>
</li>
	<li>כריתת למינקט<ol>
<li>באמצעות מספריים חדות, לחתוך את העור לאורך עמוד השדרה מsacrum עד חוליות בית החזה.</li>
		<li>הפרד את העור מהשרירים הבסיסיים.</li>
		<li>באמצעות מספריים קצה בוטה, לחתוך את שריר longissimus משני צידי תיבות העצה ותהליכים ספיניים המותניים.</li>
		<li>זהה את חוליית S1 כמקטע הנמוך ביותר. באמצעות מספריים חדות קהות, גזור והסר את התהליכים הספיניים מ-L6 ל-L2. לאחר מכן, באמצעות rongeurs בסדר, להסיר את התהליכים הרוחביים L6-L2 ולבצע כריתת למינציה מעל L6 – L2 קטעים (תהליכים רוחביים הראשון, אז למינה, להתחיל עם קטע חוליות L6) כדי לחשוף את קטעי המותניים של חוט השדרה מכוסה על ידי מאטר דורה. היזהרו לא לחתוך את עצם העצם ואת L1 תהליך ספיני, אשר ישמש כמקום קיבעון עבור אי-תנועה של בעלי חיים.</li>
		<li>באמצעות מספריים חדות, לחתוך את חוט השדרה (שבר סיבתי שלה) ואת השורשים גב וגחוני ברמת קטע חוליות L2, בגבול העליון של כריתת למינקטום. מניחים חתיכות קטנות של קצף ג'ל מיובש כדי להפסיק לדמם. לאחר מכן, מניחים צמר גפן דק וספוג תמיסת מלח מעל מקטעי חוט השדרה החשופים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בידוד של שריר גסטרו-קסטרונומיוס ומדיאלי ועצביו<ol>
<li>באמצעות מספריים חדים קהים, לעשות חתך אורכי בצד האחורי של האיבר האחורי השמאלי, מגיד אכילס עד הירך.</li>
		<li>אחז בעור בעזרת המכריחים והפרד את העור מהשרירים הבסיסיים משני צידי החתך.</li>
		<li>אתר את הפוסה popliteal בחלק האחורי של מפרק הברך, אשר מכוסה על ידי שריר femoris שרירי. באמצעות מספריים, לעשות חתך בין החלק הקדמי והחלק האחורי של השריר הזה.</li>
		<li>נעים כלפי מעלה, חותכים את שני ראשי שרירי הירך כל הדרך עד לירך כדי לחשוף את עצב הירך.</li>
		<li>באמצעות מרטפים קהים ומספריים, להפריד את החוץ מהראש המדל של שריר גסטרוקנמיוס ולחתוך את החדרה דיסטלית (גיד אכילס) של שריר גסטרוקנמיוס מדיאלי. לשמר את רסיס גיד אכילס זמן רב ככל האפשר על מנת להשתמש בו כדי להתחבר מתמר הכוח.</li>
		<li>זהה את העצב הגסטרו-קסטרונומי (MG) המדל. באמצעות המקציצות ומספריים, לחתוך את כל בטחונות הנותרים של עצב הירך, כולל בטחונות שרירי אחוריים ו semitendinosus. השאר את כלי הדם של האספקה לגסטרו-קונומיוס המדל שלם.</li>
		<li>להשחיל קשירה לא אלסטית דרך גיד אכילס ו לעשות שלושה קשרים.</li>
		<li>מניחים חתיכת צמר גפן ספוגה בתמיסת מלח מתחת לעצב ולשריר החשופים.</li>
		<li>באמצעות מכריחים משונן, לסגור את העור מעל האזור המופעל.</li>
		<li>באמצעות מספריים חדות, לעשות חתך 2 ס"מ בעור רקמת חיבור הבסיסית לאורך הצד הקדמי של האיבר האחורי השמאלי עבור השתקה עם מהדק מתכת (3.1.6.).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. הכנה להקלטה וגירוי
<ol><li>עמוד חוליות קיבעון רגל וסידורי שרירים<ol>
<li>באמצעות מלחצי פלדה, לתקן את האיבר האחורי השמאלי על ידי לשים את המלחציים על השוקה.</li>
		<li>מניחים את החולדה במסגרת מתכווננת בהתאמה אישית (חוט נחושת מבודד, 1 מ"מ), משכו את מגני העור סביב כריתת ה למינקטור באמצעות ארבע ליגטורות ותפרו את העור למסגרת כדי ליצור בריכה לשמן פרפין (גודל של כ-50 מ"מ x 50 מ"מ) מעל חוט השדרה החשוף.</li>
		<li>באמצעות משקולת #55 מקציצות, להרים את מאטר דורה בצומת של חוט השדרה, לחתוך אותו caudally עד עצם העצם ולמשוך אותו.</li>
		<li>באמצעות מוט זכוכית קהה, שורשים נפרדים שמאלה וימין גב וגהוני ברמות רצופות, דואג לא לפגוע בהם.</li>
		<li>מלאו את הבריכה מעל חוט השדרה בשמן פרפין חם (37°C), המכסה את השורשים החשופים של גיחוך הגב.</li>
		<li>מניחים את החולדה על לוח האלומיניום בהזמנה אישית (אורך 260 מ"מ, רוחב 120 מ"מ, גובה 80 מ"מ) עם בריכה (אורך 135 מ"מ, רוחב 100 מ"מ, עומק 45 מ"מ) עבור האחוריים שלו המחוברים למערכת החימום בלולאה סגורה. הצלחת היא מקום שבו החיה תהיה משותקת והניסוי יבוצע.</li>
		<li>תקן את המלחציים על המוט האחורי השמאלי עם מוט המתכת כדי לשתק את ההינדימב.</li>
		<li>לתקן את עמוד החוליות על ידי הצבת מהדקי פלדה על עצם העצם ואת חוליית L1 כדי לשתק את גוף החי ולחסל את החפצים בהקלטות כוח הקשורות תנועות נשימה.</li>
		<li>חבר את שריר הגסטרו-קסטרונומיה השמאלי עם הקשירה הלא-אלסטית לתמר הכוח (עם תאימות של 50 μm/250 mN, טווח מדידה 0-1000 mN) דרך גיד אכילס.</li>
		<li>למלא את התא לאחוריים עם חם (37 ° C) שמן פרפין כדי לכסות את שריר גסטרוקנמיוס מדיאלי ולשמור על טמפרטורת השמן ב 37 ° C ± 1 ° C באמצעות בדיקת הטמפרטורה והמערכת האוטומטית.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מיקום אלקטרודות עבור פוטנציאל פעולה הקלטה וגירוי<ol>
<li>הכנס אלקטרודה חוט כסף דו קוטבית דרך החלק האמצעי של שריר גסטרו-קסטרונומיוס מדיאלי, ניצב לציר הארוך שלו. שמור על מרחק של כ-5 מ"מ בין שתי האלקטרודות הממוקמות לאורך ציר ארוך של השריר. אלקטרודות אלה ישמשו לתיעוד פוטנציאל פעולה של יחידה מוטורית (MUAPs). חבר את האלקטרודות למפרר הרעש הנמוך.</li>
		<li>למתוח את השריר המופעל למתח פסיבי של 100 mN, נשלט על ידי מתמר כוח. עבור חולדה גסטרו-קסטרונומיוס מתיחה זו MUs של שלושה סוגים לפתח את כוח עוויתהגבוה ביותר 15.</li>
		<li>באמצעות מספריים חדות, לעשות חתך 2 ס"מ בעור של האיבר האחורי הימני ולהכניס אלקטרודה חוט כסף כדי לשמש אלקטרודה התייחסות.</li>
		<li>מניחים ומסדרים לוח מתכת מבודד בהזמנה אישית (גודל 30 מ"מ x 13 מ"מ) מעל שורשי עמוד השדרה החשופים. לשים זוגות שמאליים של שורשים גחוניים ודום (L4, L5 ו L6) על הצלחת.</li>
		<li>מוסיפים תמיסת מלח לבריכה שנוצרה על ידי העור סביב כריתת ה למינקט. רמת תמיסת מלח צריכה להיות מתחת לצלחת המבודדת.</li>
		<li>מניחים חוט כסף מגרה אלקטרודה (שני חוטי כסף, 0.5 מ"מ קוטר, אורך 50 מ"מ) על שורשי עמוד השדרה החשופים, מניחים מוט חיובי 3 מ"מ מעל הצלחת בשמן, ואילו הקוטב השלילי בתמיסת מלח (נוסף לבריכה, מתחת לצלחת) ולהתחבר למגרה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. הקלטות יחידת מנוע
<ol><li>מגרה עם פולסים מלבניים חשמליים (משך 0.1 ms, משרעת עד 0.5 V), בחר את השורשים הפתחיים (L4, L5 ו- L6); גירוי שורש גחני מעורר התכווצות של השרירים ואילו אין השפעה כזו עבור שורשי גב. לחסל שורשי גב מהצלחת. עבור גסטרו-קסטרונומיוס המדל, רוב האקסונים נמצאים בשורש הגה-5 L5.</li>
	<li>באמצעות זוג מקצות דומונט #55 ומשקפיים מגדילים, לפצל שורשי גחם L5 או L4 לתוך חבילות עדינות מאוד של אקסונים (לתפוס את הקצה החתוך של rootlet גחם עם שני מקציות ולקלף את השורשים בנפרד); למקם אחת מחבילות אלה על אלקטרודה חוט כסף ולעורר (0.1 ms פולסים מלבניים של משרעת עד 0.5 V) כדי להשיג פעילות של MU יחיד. תמיכה מוצקה (מוט מתכת) שימושית מאוד לטיפול בחבילות דקות של אקסונים, אשר יכול לשמש כתמיכה ביד לשימוש במרטים. שים לב גם שיש צורך במקור אור נוסף.</li>
	<li>על ידי הגדלת עוצמת הגירוי בהדרגה, לזהות MU יחיד על בסיס הדמות "הכל או אף אחד" של התכווצות עווית וגירוי פוטנציאלי פעולה. בדוק בקפידה את הפעילות המעוררת בגירוי סביב הסף.<ol>
<li>כאשר יותר מMU אחד הוא מתכווץ בשריר למד והגדלת הרמה של הכוח, כמו גם הגדלת משרעת או שינוי צורה של פוטנציאל הפעולה גלויים, לחזור לשלב 4.2 ולחלק את החבילה של אקסונים שוב. שים לב כי ההתועבוסות החזקות ביותר ב- gastrocnemius חולדה מדיאלי יש כ 70 פעמים כוח עווית גדול יותר מאשר החלשים ביותר וכאשר MU חזק מאוד הוא עוויתות השני, MU חלש לא יכול להיות ברור. שים לב גם כי כמה MUs יש סיבי השריר שלהם ממוקם מתוך אזור ההקלטה של האלקטרודה והם אינם גלויים אלקטרומיוגרמה; במקרה כזה שינויים במשרעת הגירוי עשויים להשפיע על הכוח אך לא בפוטנציאל פעולה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לעורר יחידה מוטורית עם פרוטוקול גירוי הכרחי למטרת ניסוי. לקבלת פרוטוקול גירוי בסיסי הדרוש לחישוב כל המאפיינים הבסיסיים של כיווץ יחידת מנוע ופוטנציאל פעולה, כלול את הפעולות הבאות.<ol>
<li>כלול 5 גירויים ב- 1 הרץ (5 עוויתות בודדות מוקלטות בממוצע; ממוצע הוא ביטול רעש, וזה חשוב במיוחד עבור MUs החלש ביותר).</li>
		<li>כלול סדרה של גירויים בתדרים 10, 20, 30, 40, 50, 60, 75, 100 ו- 150 הרץ עם משך של 500 ms (הקלטות אלה מאפשרות חישוב של קשרי תדר הכוח, הכוח הטטני המרבי ב- 150 הרץ, כמו גם את ה-sag ב- 20-40 הרץ).</li>
		<li>כלול את מבחן העייפות (tetani עורר על ידי רכבות של 14 גירויים בתדר 40 הרץ, חוזר בכל שנייה במשך 4 דקות).</li>
		<li>כלול מרווחי זמן של 10 שניות לפחות בין כל רכיבי הפרוטוקול לעיל.</li>
		<li>חזור על התהליך עם יחידות מנוע מבודדות רצופות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לסיים את הניסוי ולהמתת סד החיה באמצעות ניהול תוך-אפרטוניאלי של מנה קטלנית של נתרן פנטוברביטל (180 מ"ג-ק"ג-1).</li>
</ol>5. מכשיר אלקטרוני
הערה: תוכנית המחשב המותאמת אישית שולטת בממריץ, ומספקת את האפשרות ליצור תבניות גירוי משתנות, כולל אלה שצוינו בשלב 4.4. התוכנית משתפת פעולה עם ממיר אנלוגי לדיגיטלי (לפחות 10 kHz עבור MUAP והקלטות כוח).
<ol><li>חבר את מגן ה-AC למחשב באמצעות הממיר האנלוגי-לדיגיטלי ובמקביל לאוסצילוסקופ.</li>
	<li>חבר את מתמר הכוח למחשב באמצעות הממיר האנלוגי-לדיגיטלי ובמקביל לאוסצילוסקופ. השתמש מתמר כוח כדי לשלוט בכוח שריר פסיבי במהלך הניסוי. שים לב כי במהלך הניסוי, הכוח הפסיבי עשוי להקטין; לכן, יש צורך להגדיל את אורך השריר כדי לשמור על כוח שריר פסיבי קבוע.</li>
</ol>

<ol><li>Burke, R. E., Levine, D. N., Tsairis, P., Zajac, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+types+and+histochemical+profiles+in+motor+units+of+the+cat+gastrocnemius%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Physiological types and histochemical profiles in motor units of the cat gastrocnemius.</a> Journal of Physiology. 234, 723-748 (1973).</li>
<li>Celichowski, J., Drzymała-Celichowska, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+number+of+motor+units+in+the+medial+gastrocnemius+muscle+of+male+and+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The number of motor units in the medial gastrocnemius muscle of male and female rats.</a> Journal of Physiology and Pharmacology. 58, 821-828 (2007).</li>
<li>Grottel, K., Celichowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Division+of+motor+units+in+medial+gastrocnemius+muscle+of+the+rat+in+light+of+variability+of+their+principal+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurobiologiae+Experimentalis%22%5BJournal%5D)">Division of motor units in medial gastrocnemius muscle of the rat in light of variability of their principal properties.</a> Acta Neurobiologiae Experimentalis. 50, 571-588 (1990).</li>
<li>Celichowski, J., Krutki, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variability+and+plasticity+of+motor+unit+properties+in+mammalian+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Biocybernetics+and+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Variability and plasticity of motor unit properties in mammalian skeletal muscle.</a> Biocybernetics and Biomedical Engineering. 32 (4), 33-45 (2012).</li>
<li>Gardiner, P. F., Olha, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+and+electromyographic+characteristics+of+rat+plantaris+motor+unit+types+during+fatigue+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Contractile and electromyographic characteristics of rat plantaris motor unit types during fatigue in situ.</a> Journal of Physiology. 385, 13-34 (1987).</li>
<li>Drzymała-Celichowska, H., Kaczmarek, P., Krutki, P., Celichowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Summation+of+slow+motor+unit+forces+at+constant+and+variable+interpulse+intervals+in+rat+soleus+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Electromyography+and+Kinesiology%22%5BJournal%5D)">Summation of slow motor unit forces at constant and variable interpulse intervals in rat soleus muscle.</a> Journal of Electromyography and Kinesiology. 30, 1-8 (2016).</li>
<li>Krutki, P., Celichowski, J., Łochyński, D., Pogrzebna, M., Mrówczyński, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecies+differences+of+motor+units+properties+in+the+medial+gastrocnemius+muscle+of+cat+and+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+Italiennes+de+Biologie%22%5BJournal%5D)">Interspecies differences of motor units properties in the medial gastrocnemius muscle of cat and rat.</a> Archives Italiennes de Biologie. 144, 11-23 (2006).</li>
<li>Burke, R. E., Rudomin, P., Zajac, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+activation+history+on+tension+production+by+individual+muscle+units%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The effect of activation history on tension production by individual muscle units.</a> Brain Research. 109, 515-529 (1976).</li>
<li>Celichowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+the+regulation+of+motor+unit+contraction+in+the+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying the regulation of motor unit contraction in the skeletal muscle.</a> Journal of Physiology and Pharmacology. 51, 17-33 (2000).</li>
<li>Burke, R. E., Levine, D. N., Salcman, M., Tsairis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+units+in+cat+soleus+muscle%3A+physiological%2C+histochemical+and+morphological+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Motor units in cat soleus muscle: physiological, histochemical and morphological characteristics.</a> Journal of Physiology. 238, 503-514 (1974).</li>
<li>Milner-Brown, H. S., Stein, R. B., Yemm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contractile+properties+of+human+motor+units+during+voluntary+isometric+contractions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The contractile properties of human motor units during voluntary isometric contractions.</a> Journal of Physiology. 228, 285-306 (1973).</li>
<li>Taylor, A., Stephens, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+human+motor+unit+contractions+by+controlled+intramuscular+microstimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Study of human motor unit contractions by controlled intramuscular microstimulation.</a> Brain Research. 117, 331-335 (1976).</li>
<li>Westling, G., Johansson, R. S., Thomas, C. K., Bigland-Ritchie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+contractile+and+electrical+properties+of+single+human+thenar+motor+units+in+response+to+intraneural+motor-axon+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of contractile and electrical properties of single human thenar motor units in response to intraneural motor-axon stimulation.</a> Journal of Neurophysiology. 64, 1331-1338 (1990).</li>
<li>Burke, R. E. Motor units: anatomy, physiology and functional organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBurke%2C+RE+%22APS+Handbook+of+Physiology+Series%2C+Section+1%2C+The+Nervous+System%22">APS Handbook of Physiology Series, Section 1, The Nervous System</a>. 11, part 1, Motor Control 345-422 (1981).</li>
<li>Celichowski, J., Grottel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dependence+of+the+twitch+course+of+medial+gastrocnemius+muscle+of+the+rat+and+its+motor+units+on+stretching+of+the+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+Italiennes+de+Biologie%22%5BJournal%5D)">The dependence of the twitch course of medial gastrocnemius muscle of the rat and its motor units on stretching of the muscle.</a> Archives Italiennes de Biologie. 130, 315-325 (1992).</li>
<li>Celichowski, J., Grottel, K., Bichler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+the+profile+of+unfused+tetani+of+fast+motor+units+with+respect+to+their+resistance+to+fatigue+in+the+rat+medial+gastrocnemius+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Muscle+Research+and+Cell+Motility%22%5BJournal%5D)">Differences in the profile of unfused tetani of fast motor units with respect to their resistance to fatigue in the rat medial gastrocnemius muscle.</a> Journal of Muscle Research and Cell Motility. 20, 681-685 (1999).</li>
<li>Krutki, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Division+of+motor+units+into+fast+and+slow+on+the+basis+of+profile+of+20+Hz+unfused+tetanus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Division of motor units into fast and slow on the basis of profile of 20 Hz unfused tetanus.</a> Journal of Physiology and Pharmacology. 59, 353-363 (2008).</li>
<li>Drzymała-Celichowska, H., Krutki, P., Celichowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Summation+of+motor+unit+forces+in+the+rat+medial+gastrocnemius+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Electromyography+and+Kinesiology%22%5BJournal%5D)">Summation of motor unit forces in the rat medial gastrocnemius muscle.</a> Journal of Electromyography and Kinesiology. 20, 599-607 (2010).</li>
<li>Kaczmarek, P., Celichowski, J., Drzymała-Celichowska, H., Kasiński, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+image+of+motor+unit+architecture+in+the+mechanomyographic+signal+during+single+motor+unit+contraction.+In+vivo+and+simulation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Electromyography+and+Kinesiology%22%5BJournal%5D)">The image of motor unit architecture in the mechanomyographic signal during single motor unit contraction. In vivo and simulation study.</a> Journal of Electromyography and Kinesiology. 19, 553-563 (2009).</li>
<li>Celichowski, J., Krutki, P., Bichler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+conduction+velocity+of+motor+units+of+rat%27s+medial+gastrocnemius+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+%28Paris%29%22%5BJournal%5D)">Axonal conduction velocity of motor units of rat's medial gastrocnemius muscle.</a> Journal of Physiology (Paris). 90, 75-78 (1996).</li>
</ol>

לסופרים אין ניגוד אינטרסים לחשוף.

אם מבוצע כראוי על ידי מדענים מנוסים, הרכיב הכירורגי של הפרוטוקול המתואר צריך להסתיים בתוך כשעתיים. יש לנקוט טיפול מיוחד כדי לשמור על מצבים פיזיולוגיים יציבים של בעל החיים במהלך הניתוח, במיוחד טמפרטורת הגוף ועומק של הרדמה, אשר צריך להיות נשלט באופן שיטתי על ידי הערכת פינה רפלקסים גמילה. לאחר הניתוח, ניתן יהיה לשמור על תנאי הקלטה יציבים למשך שש שעות לפחות.
ההליך הניסיוני המכריע מתחיל בפיצול שורש האוורור לנתביים דקים מאוד המובילים לבידוד של אקסון מנוע יחיד לשריר הנחקר. למעשה, סיבים דקים של שורשים...

יחידות מנוע (MUs) הן היחידות הפונקציונליות הקטנות ביותר של שרירי השלד. לכן, הבנת הפונקציה שלהם, פלסטיות ומאפיינים כיווץ, כמו גם את המנגנונים של ויסות הכוח שלהם, הוא חיוני להתקדמות בפיזיולוגיה שריר. המאפיינים ההתכווצות הבסיסיים של MUs ואת הפרופורציות של הסוגים הפיזיולוגיים שלהם תועדו עבור שרירים רבים, בעיקר השרירים האחוריים בבעלי חיים ניסיוניים. עם זאת, הן הפלסטיות של מאפייני MU ואת המנגנונים של ויסות כוח MU עדיין לא מובן במלואו.
העיקרון של השיטה המתוארת הוא השפלה נרחבת של שרירי הבטן למעט אחד נחקר כריתת למינקטום על חוליות המותניים על מנת להכין rootlets גחמני דק, כל אחד המכיל אחד "פונקציונלי" axon מנוע, מגורה חשמלית כדי להקליט את הכוח ואת פוטנציאל הפעולה של MU. באמצעות הטכניקה המתוארת במאמר זה, ניתן לבודד יותר ממחצית ההונו-ם של שריר גסטרו-קסטרונומיוס מדיאלי בניסוי מוצלח. גסטרוקנמיוס חולדה מדיאלי מורכב בממוצע 52 MUs (נקבות) או 57 MUs (זכרים) של שלושה סוגים פיזיולוגיים: S (איטי), FR (עמיד מהר) ו FF (ניתן לשומן מהיר)1,2,וישלהםתכונות התכווצות משתנה3. עבור ניסויים השוואת ערכי ממוצע עבור MUs בקבוצות בקרה וניסיוני, בידוד והקלטה של 10-30 MUs עבור כל אחת מקבוצות אלה נחוצים. באופן קריטי, תותבי משתמשים בודדים עשויים להיות נגישים לגירוי לפרקי זמן העולים על שעה אחת. יתר על כן, מאז טכניקה זו מאפשרת להקליט הן כוח MU ופוטנציאל פעולה, שיטה זו מתאימה ללימוד תופעות הקשורות לייצור כוח, הערכת ההשפעה של עייפות, והתבוננות ביחסים בין הכוח ופוטנציאל פעולה.
מחקרים קודמים אישרו כי MU מאפייני התכווצות הם פלסטיק, עשוי להיות מאופנן על ידי התערבויות רבות. ניסויים בטכניקה המתוארת כאן בוצעו על חולדה medial gastrocnemius4 או אחרים שרירי אחורי שלחולדה 5,6, כמו גם על שרירי חתול 7 ,בשיטהדומה של בידוד MU יחיד. סדרה נוספת של ניסויים באמצעות רכבות של גירויים נמסר במרווחי זמן בין-פולסים משתנים סיפק תצפיות לגבי תהליכי בקרה מוטורית, ואת התוצאות באופן כללי להפנות את תשומת הלב להיסטוריה של גירוי, כולל השפעות ניכרות של שינוי בקנה מידה הזמן של אפילו גירוי אחד, חיונילייצור כוח 8,9.
ניתן גם ללמוד שיטות דרכים חלופיות באמצעות שיטות חלופיות. ראשית, שיטה אחת היא גירוי ישיר של motoneurons. בורק השתמש בגירוי תאי של motoneurons בחתולים גסטרוקנמיוס ו סוליות עם מיקרואלקטרודות זכוכית המשמשות במקביל כדי לקבוע את המאפיינים האלקטרופיזיולוגיים שלנוירונים אלה 1,10. שיטות אחרות הוצעו ללמוד MUs בשרירים אנושיים, אשר דורשים התערבות נמוכה באופן משמעותי. עבור כל שיטות אלה, אלקטרודות מגרה והקלטות מוכנסים לתוך השריר או העצב, ואת הכוח נרשם מן האצבע או מן הרגל. הראשונה של שיטות אלה שימשה כדי ללמוד MUs בשריר הבין-תאי גב הראשון. עבור שריר זה, מתכווץ עם כוח נמוך, באלקטרומיוגרמה נרשם עם אלקטרודה מחט מוכנס לתוך השריר את פוטנציאל הפעולה של יחידה מוטורית פעילה אחת בלבד זוהו. לאחר מכן הרסיסים של כוח שריר נרשם במקביל ובעקבות כל פוטנציאל פעולה היו בממוצע (ספייק מופעל בממוצע). שיטה זו מאפשרת חילוץ של הכוח של יחידה מוטורית אחת משריר כוח השריר11. עם זאת, החולשה המתודולוגית של הליך זה היא כי אין כוח עווית אחד אלא שברים של התכווצויות טטינית היו בממוצע. ניתן גם ללמוד שיטות קוסמות אנושיות בשיטה השנייה של גירוי חשמלי תוך שרירי באמצעות אלקטרודההמוכנסת לשריר 12, המעוררת שבר של עץ סקסוני, המוביל להפעלה של יחידה מוטורית אחת. השיטה השלישית היא גירוי זעיר עם אלקטרודה מוכנסת לתוך העצב. כאשר האלקטרודה מפעילה רק אקסון מנוע אחד בעצב, רק יחידת מנוע אחת חוזה13. לשיטות האחרונות יש כמה מגבלות, כולל יציבות ואיכות ההקלטה, הגבלות אתיות וגישה לחומר הניסיוני. פרוטוקול זה נעשה שימוש נרחב בחתולים בשנות ה-70 וה-80וה-14.

<table><tbody><tr><td>מתמר כוח</td><td>בהתאמה</td><td></td><td></td>אישית</tr><tr><td>מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>No. 11255-20</td><td>Dumont #55 עם שוקיים קלות ועדינות במיוחד</td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>No. 11150-10</td><td>Extra Fine Greafe Clinicps</td></tr><tr><td></td><td>Fine Science Tools</td><td>No. 11026-15</td><td>דפוס מיוחד לאחיזה מעולה</td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>Fine Science כלים</td><td>מס' 11023-10</td><td>דק 1x2 שיניים</td></tr><tr><td>מלקחיים</td><td>מדע עדין כלים</td><td>מס' 11251-20</td><td>דומונט #5</td></tr><tr><td>המוסטטים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>מס' 13003-10</td> יחידת בידוד <td>הרטמן</td></tr><tr><td></td><td>מכשירי דשא</td><td>S1U5A</td><td></td></tr><tr><td>רעש נמוך ביו-אמפלייפר</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>קוד הזמנה 74030</td><td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחט</td><td>בסדר כלי מדע</td><td>מס' 12503-15</td><td>עם לסתות טונגסטן קרביד</td></tr><tr><td>Rongeurs</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>מס' 16021-14</td><td>מספריים פרידמן-פירסון</td></tr><tr><td></td><td>כלי מדע עדינים</td><td>מס' 14101-14</td><td>ישר חד / קהה עם לולאות אצבעות גדולות</td></tr><tr><td>מספריים</td> כלי <td>מדע עדינים</td><td>מס' 14075-11</td> מספריים <td>קהים / קהים מעוקלים</td></tr><tr><td></td><td>כלי מדע עדינים</td><td>מס' 14084-08</td> מספריים <td>בון משובח</td></tr><tr><td></td><td>במיוחד כלי מדע עדינים</td><td>מס '15000-00</td><td>ישר, אידיאלי לחיתוך עצבים</td></tr><tr><td>מכשירי דשא</td><td>ממריץ</td><td>S88</td><td>ממריץ דופק מרובע פלט כפול</td></tr></tbody></table>

בידוד פונקציונלי של יחידות מנוע יחיד של שריר גסטרו-קסטרונומיוס חולדה

Functional Isolation of Single Motor Units of Rat Medial Gastrocnemius Muscle

עבודה זו מתארת בידוד פונקציונלי של יחידות מנוע (MUs), שיטה אלקטרופיזיולוגית סטנדרטית לקביעת מאפיינים של יחידות מנוע בשרירים האחוריים (כגון גסטרוקנמיוס מדיאלי, סוליה, או plantaris שריר) בחולדות ניסיוניות. מרכיב חיוני בשיטה הוא יישום של גירויים חשמליים מועברים לאקסון מנוע מבודד מהשורש הפתחי. הגירויים עשויים להימסר במרווחי זמן בין-פולסים קבועים או משתנים. שיטה זו מתאימה לניסויים בבעלי חיים בשלבי בגרות שונים (צעירים, מבוגרים או מבוגרים). יתר על כן, פרוטוקול זה יכול לשמש בניסויים ללמוד השתנות ו פלסטיות של יחידות מנוע ים עורר על ידי קשת גדולה של התערבויות. התוצאות של ניסויים אלה עשויים גם להגדיל את הידע הבסיסי בפיזיולוגיה שרירים ולהיות מתורגם ליישומים מעשיים. הליך זה מתמקד בהכנה הכירורגית להקלטה וגירוי של MUs, עם דגש על הצעדים הדרושים כדי להשיג יציבות הכנה ושחזור של תוצאות.

ניתן לחשב פרמטרים של התכווצויות של יחידות מוטוריות ופוטנציאל פעולה על בסיס הקלטות כאשר מובטחים תנאים יציבים של הקלטות. איור 1 מציג הקלטה מייצגת של עווית אחת של MU מהיר. העקבות העליונים מראים את פוטנציאל הפעולה של היחידה המוטורית. העיכוב בין אספקת גירוי והתחלה של פוטנציאל הפעולה של יחידת המנוע הוא בשל זמן מוליכות מהשורש הפתח לשריר. איור 2 מציג הקלטה מייצגת של כוח הטטנוס הבלתי מרוסן של MU מהיר ורכבת של פוטנציאל פעולה יחידה מוטורית.
<p class="jove_content" fo:k...

שיטה זו מאפשרת הקלטה של הכוח של התכווצויות עוויתות וטלטוניות ופוטנציאל פעולה בשלושה סוגים של יחידות מנוע בשריר גסטרוקנמיוס חולדה. הבידוד הפונקציונלי של יחידה מוטורית אחת מושרה על ידי גירוי חשמלי של האקסון.

This work outlines functional isolation of motor units (MUs), a standard electrophysiological method for determining characteristics of motor units in ...

שיטה זו מאפשרת בידוד תפקודי של יחידות מוטוריות בודדות בטיפול בגושים של בעלי חיים ניסיוניים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הקלטת פוטנציאל כוח ופעולה של יחידות מוטוריות בודדות מסוג פיזיולוגי מזוהה. עוזר להדגים את ההליך יהיה פרופסור יאן Celichowski, ראש המחלקה לנוירוביולוגיה.התחל על ידי חיתוך העור לאורך עמוד השדרה, מן sacrum עד חוליות בית החזה, עם מספריים חדים קהה. זהה את חוליית S1 כמקטע הנמוך ביותר. ואז לחתוך ולהסיר את שרירי longissimus, ואת התהליכים ספינוס מ L6 כדי L2 חוליות.השתמש rongeurs בסדר כדי להסיר את התהליכים רוחביים מ L6 כדי L2, ולבצע כריתת למין מעל מקטעי L6 כדי L2 לחשוף את המקטעים המותניים של חוט השדרה מכוסה על ידי מאטר דורה. באמצעות מספריים חדים, לחתוך את חוט השדרה ואת שורשי הגב והגחון בקטע חוליות L2, רמה בגבול העליון של כריתת למין. מניחים חתיכות קטנות של קצף ג'ל יבש כדי לעצור את הדימום.לאחר מכן, השתמש במספריים חדים-קהים כדי להפוך חיבוק אורך בצד האחורי של האיבר האחורי השמאלי, מגיד אכילס לירך. אתר את האפוסה הפופליטית בחלק האחורי של מפרק הברך, אשר מכוסה על ידי שרירי הירך שריר, ולעשות בין החלק האחורי של שריר זה. נע כלפי מעלה, לחתוך את שני הראשים של שרירי femoris כל הדרך אל הירך כדי לחשוף את העצב הסיאטי.באמצעות מלקחיים קהים ומספריים, להפריד את מצד אחד מן הראש המדיאלי של שריר gastrocnemius, לחתוך את החדרה דיסטלית של שריר gastrocnemius המדיאלי. לזהות את gastrocnemius המדיאלי או עצב MG, ולאחר מכן להשתמש מלקחים ומספריים לחתוך את כל הערבויות הנותרות של העצב הסיאטי כולל בטחונות שרירי אחוריים ו semitendinosus. גידלו קשירה לא אלסטית דרך גיד אכילס ובצעו שלושה קשרים.ואז לעשות חתך של שני סנטימטרים בעור ואת רקמת החיבור הבסיסית לאורך הצד האחורי של האיבר האחורי השמאלי להתגייסות עם שבט אמצעי. לתקן את האיבר האחורי השמאלי על ידי לשים מהדק פלדה על השוקה. מניחים את החולדה במסגרת מתכווננת בהתאמה אישית.משוך את מדפים העור סביב כריתת למין עם ארבע ליגטורות. ולתפור אותם למסגרת כדי ליצור בריכה לשמן פרפין מעל חוט השדרה החשוף. השתמש במדפים של Dumont 55 כדי להרים את הדורא מאטר בצומת של חוט השדרה.ואז לחתוך אותו באופן סיבתי עד עצם sacral ולחזור בו. הפרד את שורשי הגב והגחון השמאליים והימין ברמות רצופות באמצעות מוט זכוכית קהה. ממלאים את הבריכה מעל חוט השדרה בשמן פרפין חם, המכסה את שורשי הגחון והדורסאליים החשופים.מניחים את החולדה על צלחת אלומיניום בהתאמה אישית עם בריכה עבור הגפיים האחוריות שלה, מחובר למערכת חימום לולאה סגורה. תקן את המהדק על האיבר האחורי השמאלי עם מוט המתכת כדי לשתק אותו. תקן את עמוד החוליות על ידי הצבת מהדקי פלדה בעצם המקרל ובחוליית L1.לאחר מכן לחבר את שריר gastrocnemius המדיאלי השמאלי עם קשירה לא אלסטית מתמר כוח דרך גיד אכילס. הכנס חוט כסף דו קוטבי או אלקטרודה דרך החלק האמצעי של השריר, בניצב לציר הארוך שלה, ולמלא את התא עבור גפיים אחוריות עם שמן פרפין חם כדי לכסות את שריר gastrocnemius המדיאל. למתוח את השריר המופעל למתח פסיבי של 100 מילינוטון, נשלט על ידי מתמר הכוח.לאחר מכן השתמש במספריים חדים-קהים כדי לבצע חתך של שני סנטימטרים בעור האיבר האחורי הימני, והכנס אלקטרודה חוט כסף שישמש כאלקטרודה התייחסות. מניחים ומתקנים לוח מתכת מבודד בהתאמה אישית מעל שורשי עמוד השדרה החשופים. שים זוגות שמאליים של שורשים גחוניים ודורסיים על הצלחת.ולהוסיף מלוחים לבריכה שנוצרה על ידי העור סביב כריתת למין. מניחים חוט כסף מגרה אלקטרודה מעל שורשי עמוד השדרה החשופים, ואז מניחים מוט חיובי שלושה מילימטרים מעל הצלחת בשמן, ואת הקוטב השלילי בתמיסת מלח. לעורר את השורשים הגחוני עם פולסים מלבניים חשמליים, מעורר התכווצות של השרירים.השתמש בזוג מלקחי Dumont 55 ומשקפיים מגדילים כדי לפצל שורשי גחון L5 או L4 לחבילות עדין מאוד של אקסונים. מניחים את אחת החבילות האלה על אלקטרודה חוט כסף לעורר אותו כדי לצפות בפעילות של יחידה מוטורית אחת. על ידי הגדלה הדרגתית של עוצמת הגירוי, לזהות יחידה מוטורית אחת על בסיס אופי all-or-none עורר של התכווצות עווית וגירוי פוטנציאלי פעולה.פרמטרים של התכווצויות יחידה מוטורית ופוטנציאל פעולה ניתן לחשב באמצעות הקלטות כאשר תנאים יציבים של הקלטות מבוטחים. הקלטה מייצגת של עווית אחת של יחידה מוטורית מהירה מוצגת כאן. המגשים העליונים מציגים את פוטנציאל הפעולה של היחידה המוטורית.העיכוב בין מסירת גירוי לבין תחילת פוטנציאל הפעולה של היחידה המוטורית נובע מזמן ההיצונה מהשורש הגחון לשריר. הקלטה מייצגת של כוח הטטנוס הבלתי מותך של יחידה מוטורית מהירה ורכבת של פוטנציאל פעולה של יחידה מוטורית מוצגים כאן יחד עם תנוחות הזמן של הגירויים המיושמים. לפני שתנסה הליך זה, יש לזכור כי פיצול השורש הגחוני לתוך סלילים דקים צריך קצת הכשרה וניסיון.

functional-isolation-single-motor-units-rat-medial-gastrocnemius

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מיו מכני ניתוח בשרירי השלד מבודדת

סרטון זה מדגים את ההכנה וההליכים דרושים כדי ללמוד את תגובות ההתכווצות של שריר הכנת הגסטרוקנמיוס המדיאלי החולדה...

נהלים לעכברוש<em&gt; באתר</em&gt; מאפייני התכווצות שרירי שלד

אנו מתארים שיטה ישירה למדידת כוח שרירים, כוח שרירים, התכווצות וקינטיקה עיפנות של שרירי שלד מבודדים...

הערכת Vivo לשעבר של התכווצות, ועיפנות Alternans בשרירי שלד מבודדים

סרטון זה מדגים את הבידוד של מיופיברים בודדים משריר מורין Extensor Digitorum Longus (EDL) שנקטף. ניתן לגדל את המיופיברים המבודדים בתרבית כדי לחקור את פעילות תאי הגזע הקשורים למיופייבר.

בידוד מיופייבר: טכניקה להשגת מיופייבר יחיד משריר Extensor Digitorum Longus (EDL) של עכבר שנקצר

בידוד והתרבות של myofibers הוא תקן...

בידוד ותרבות של Myofibers פרט ותאי הלווין שלהם משרירי שלד למבוגרים

מודל חיתוך רוחב העצב הטיביאלי הוא מודל נסבל היטב, אימות, ושחזור של ניוון שרירים שלד. הפרוטוקול כירורגית המודל מתואר והפגין בC57Black6 עכברים.

חיתוך רוחב עצב הטיביאלי - מודל סטנדרטי לניוון שרירים שלד מושרה denervation בעכברים

כאן, אנו מציעים שיטה ביעילות להשיג סיבי שריר בודד בשלב מוקדם לאחר לידה התפתחותית מ homozygous מוטציה Lamin δ 8-11 מודל העכבר, מודל חמור מאוד עבור השרירים נייל-דרייפוס ניוון שרירים (edmd).

בידוד ותרבות בודדים מודל מורנה של קבצי נייל-דרייפוס ניוון שרירים בתחילת לאחר לידה פיתוח

היכולת לזהות במדויק רכיבי צומת נוירו-שרירית חיונית להערכת שינויים בארכיטקטורה שלה בגלל תהליכים פתולוגיים או התפתחותיים. כאן אנו מציגים תיאור מלא של שיטה פשוטה כדי להשיג תמונות באיכות גבוהה של צמתים neuromuscular הר כולו שניתן להשתמש בהם כדי לבצע מדידות כמותיות.

ניתוח של סיבי שריר שלד יחיד עבור ניתוחים אימונופלואורסצנטיים ומורפומטריים של צמתים נוירו-שריריים בהר שלם

כאן, אנו מתארים שיטה מפורטת לבידוד המיטוכונדריה משריר השלד של העכבר ואת הניתוח הבא של נשימה על ידי שיעור צריכת חמצן (OCR) באמצעות בדיקות respirometric מבוססות מיקרופלט. צינור זה יכול להיות מיושם כדי לחקור את ההשפעות של התערבויות סביבתיות או גנטיות מרובות על חילוף החומרים המיטוכונדריאלי.

בידוד המיטוכונדריה משריר שלד העכבר לבדיקות ספירומטריות

אנו מתארים פרוטוקול לקבלת סיבים מנותקים אנזימטית באורכים וסוגים שונים משישה שרירים של עכברים בוגרים: שלושה מהם כבר תוארו (flexor digitorum brevis, extensor digitorum longus, soleus) ושלושה מהם נותקו בהצלחה בפעם הראשונה (extensor hallucis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

סיבי שריר שלד שלמים קצרים, בינוניים וארוכים המתקבלים על ידי דיסוציאציה אנזימטית של שישה שרירי גפיים אחוריות של עכברים: Beyond Flexor Digitorum Brevis

פרוטוקול זה מתאר את בידוד סיבי שריר יחיד שלמים מהסולאוס החמצוני ואת הקמת תרביות מיובלסט מטוהרות מאוד שמקורן בסיבים אלו. ההליך האופטימלי מניב באופן אמין כ-300–500 סיבי מיו שלמים לכל עכבר, ומאפשר ניתוחים מולקולריים ותאים במורד הזרם.

מבחן בידוד סיב יחיד להערכת התנהגות סיבי מיו חמצונית

למדו לבודד פונקציונלית יחידות מנוע בודדות בשריר הגסטרוקנמיוס התיכון של עכברוש באמצעות גירוי חשמלי. שיטה זו מאפשרת רישום כוח התכווצות ופוטנציאלי פעולה לחקר פיזיולוגיה עצבית-שרירית.

בידוד פונקציונלי של יחידות מנוע יחיד של שריר גסטרו-קסטרונומיוס חולדה

גלה סרטונים נוספים